原发性肝癌生长抑素受体 mRNA表达的研究

我们采用逆转录聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)检测 39例原发性肝癌癌组织中 5个亚型的生长抑素受体 (ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＳＳＴＲ)ｍＲＮＡ的表达 ,现报告如下。资料与方法1.资料 :本组共 39例 ,男 34例 ,女 5例 ,年龄 32～ 75岁 ,其中肝细胞癌 38例 ,胆管细胞癌 1例。所有病例均经病理学证实。另取 10例患者的肝组织作为正常对照 (肝血管瘤5例 ,肝脏局限性结节性增生 3例 ,肝胆管结石 2例 )。2 .试剂 :总ＲＮＡ提取试剂 (美国Ｐｒｏｍａｇｏ公司 ) ,特异性引物和ＲＴ ＰＣＲ试剂 (日本宝生物公司 ,大连 )。3 .实验方…     

肝硬化大鼠肝组织生长抑素受体亚型mRNA表达的研究

目的 研究在大鼠肝硬化门静脉高压症形成过程中，肝组织生长抑素５种受体亚型ｍＲＮＡ的表达变化。方法 将大鼠３０只随机分为对照组，急性坏死组和肝硬化组。提取样本肝组织总ＲＮＡ，进行逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）后，琼脂糖凝胶电泳条带经过计算机图像分析处理，检测大鼠生长抑素受体亚型ｍＲＮＡ的表达。结果 正常肝组织中ｒＳＳＴＲ４ ｒＳＳＴＲ１，ｒＳＳＴＲ５的ｍＲＮＡ表达量均明显高于ｒＳＳＴＲ３，ｒＳ     

肝细胞肝癌中生长抑素受体2/5的表达研究

目的观察生长抑素受体(SSTR)-2/5在人原发性肝细胞肝癌及癌旁组织的表达,探讨其临床意义。方法选择2008年2月至2010年7月期间在天津市第一中心医院住院手术治疗的22例肝细胞肝癌患者,切取病理组织,采用免疫组化和实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法检测SSTR-2/5在肝癌及癌旁组织中的表达,并比较其与临床病理参数的关系。结果癌旁组织和肝癌组织中SSTR-2/5均呈阳性表达;肝癌组织SSTR-2/5表达明显低于癌旁肝硬化组织〔SSTR-2mRNA(RQ值):1.89±0.74比2.54±0.80,SSTR-5mRNA(RQ值):3.61±1.66比6.78±4.27;SSTR-2蛋白:68.2%(12/22)比95.5%(21/22),SSTR-2/5蛋白均为95.5%(21/22);均P<0.05〕。全部患者术后平均无瘤生存期为27.3个月,SSTR-2/5高表达组较低表达组无瘤生存期延长(log-rank=4.08,P=0.043)。结论 SSTR低表达预后相对较差,SSTR表达的表征可以被用来作为评估肝癌预后的有用参数。     

生长抑素通过调节生长抑素受体和Cmet表达抑制肝癌生长

目的 观察生长抑素(SST)对Bel7402肝癌细胞株增殖侵袭黏附能力和对裸鼠种植瘤生长的影响，并对SST抑瘤机制进行一定的探索。方法 以噻唑蓝(MTT)法测量SST、对Be17402细胞增殖的影响，光镜下观察细胞形态的变化。以细胞迁移实验和黏附实验观察细胞侵袭和黏附能力的影响。以流式细胞仪检测细胞表面肝细胞生长因子受体Cmet和生长抑素受体2(SSTR2)的表达和细胞周期的影响。以裸鼠人肝癌转移模型为材料，观察SST对种植瘤生长的影响。以免疫组织化学观察SSTR2和Cmet的表达影响。结果SST处理的7402细胞增殖能力和细胞形态无明显改变，细胞的侵袭和黏附能力明显下降，细胞生长静止期(G0／G1)的比例显著增加，但未见凋亡峰，细胞表面Cmet的表达明显受抑，但SSTR2的表达增加，裸鼠人肝癌种植瘤在SST治疗后生长受到明显抑制，免疫组织化学也可见种植瘤内SS TR2表达增加，而Cmet的表达明显受抑制。结论 SST通过与SSTR起作用抑制肝癌的生长。减少Cmet的表达是SST起作用的重要方式。此外，长期的SST治疗可以上调SSTR2的表达，加大SST抑制肝癌的效果，但短期的处理反而诱导SSTR2的脱敏和抑瘤效果下降。     

人肝细胞癌中雌激素受体及其亚型的表达与临床意义

目的研究雌激素受体(estrogen receptor,ER)、ERα和ERβ在肝细胞癌(hepatocellu-lar carcinoma,HCC)中的表达水平及与肝细胞癌的生物学特征的关系。方法用免疫组织化学方法检测肝细胞癌33例及24例非肝癌组织中ER、ERα和ERβ的表达。结果肝细胞癌组织中ER的阳性表达率明显低于正常肝组织,有显著性差异。其中,男性病人中ER的阳性表达率明显低于正常肝组织,而女性病人与正常肝组织相比较ER的阳性表达率无显著性差异。ER、ERβ阳性的肝癌多为小肝癌(肿瘤直径≤5cm)、单结节、病理分级EdmondsonⅠ～Ⅱ级。结论肝癌的发生、发展及生物学特性可能与肝癌组织中ER、ERβ的阳性表达降低、变异或缺失有关,男性肝癌组织中的ER较易发生变异或缺失。     

人肝癌细胞系MHCC97中趋化因子差异表达研究

目的 检测人肝癌细胞系MHCC97-L和MHCC97-H中趋化因子的mRNA表达水平,了解不同转移潜能的癌细胞系在组成性表达趋化因子方面的异同,寻找影响癌细胞生长、侵袭和转移的关键性趋化因子。方法 收获不加任何刺激的转移性由低到高的人肝癌细胞MHCC97-L和MHCC97-H。AGPC法提取总RNA,以持家基因GAPDH为对照,逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)分析C、CC、CXC和CX3C族趋化因子代表的XCL1(Ltn)、CCL5(RANTES)、CXCL8(IL-8)、CX3CL1(Fkn)等的mRNA水平。结果 代表不同家族的4种趋化因子基因在两种细胞系中均呈组成性表达,但XCL1和CCL5在两种细胞系中的表达差异有显著性(P=0.021,P=0.042)。结论 肝癌细胞可组成性地表达目前所知的4个家族的趋化因子,其表达水平可因癌细胞的转移潜能不同而异,提示具有不同结构特征的趋化因子可能以自分泌或旁分泌方式参与癌细胞生长及转移的调节,进一步阐明这些趋化因子产生的意义及其调控机制是有必要的。     

CCR1趋化因子受体在人肝癌组织中表达及其临床意义

目的了解CCRl趋化因子受体在人肝癌组织中表达分布情况，探讨其表达水平与临床病理特性的关系。方法采用RT-PCR、免疫组化、Western blot技术检测45例肝癌组织及相应癌旁肝组织CCRl趋化因子受体表达及分布情况，并分析其表达水平与临床病理特性的关系。结果RT-PCR、Western blot在肝癌组织及相应癌旁肝组织中均可以检测到CCR1趋化因子受体mRNA及蛋白，肝癌组织表达水平高于癌旁肝组织。免疫组化显示CCR1趋化因子受体主要表达于肝癌细胞膜。CCR1mRNA表达水平与病人性别、年龄、血清AFP水平、肿瘤大小、分期无明显相关性，而与肿瘤是否有包膜（t=2．305，P〈0．05）、门静脉浸润显著相关（t=3．004，P〈0．01）。无门静脉浸润的肝癌组织中，47．4％免疫组化染色强度为＋＋～＋＋＋，而有门静脉浸润的肝癌组织中，80．8％染色强度为＋＋～＋＋＋，两者比较差异具有显著意义（X^2=5．511，P〈0．05）。结论肝癌细胞表达CCR1趋化因子受体，其表达水平与肝癌侵袭性尤其是门静脉浸润相关，有望成为判断肝癌侵袭性及预后的指标。     

原发性肝癌尿激酶和尿激酶受体表达的研究

目的　研究肝癌尿激酶和尿激酶受体的表达 ,探讨肝癌侵袭和转移分子机制。方法　应用酶联免疫吸附试验 (ELISA)和放射配基结合试验分析 12例肝癌及癌旁组织中尿激酶和尿激酶受体的表达。结果　肝癌组织中尿激酶水平为 (777± 5 86 ) pmol/g蛋白 ,细胞表面尿激酶受体数量为(6 49± 2 2 3) pmol/ g蛋白 ,均显著高于癌旁组织 [(84± 5 7)pmol/ g蛋白和 (72± 30 ) pmol/g蛋白 ,P <0 .0 1];肝癌细胞尿激酶与尿激酶受体的高亲和力 (0 .33± 0 .18)比癌旁组织 (6 .6 3± 2 .17)更高 (P <0 .0 1)。结论　肝癌组织中尿激酶与尿激酶受体过量表达 ,这可能在肝癌的侵袭和转移过程中起重要作用。     

肿瘤坏死因子受体6在肝癌组织及肝癌细胞系中的表达研究

目的 探讨肿瘤坏死因子受体6(TR-6)蛋白在原发性肝细胞癌(HCC)组织芯片及肝癌细胞系中的表达及临床意义. 方法 利用125例HCC、48例癌旁、89例非癌肝组织构建组织微阵列.应用免疫组织化学法检测组织芯片和5种肝癌细胞系中TR-6蛋白的表达水平,并分析其与HCC临床病理特征的关系.结果 (1)组织微阵列利用率为96.56%(253/262);(2)HCC组织中的TR-6蛋白的阳性率为73.33%(88/120),明显高于癌旁的54.17%(26/48,)(χ2=5.755,P=0.016)及非癌组织的29.41%(25/85,χ2=38.801,P=0.000).癌旁组织中的TR-6蛋白阳性率明显高于非癌组织(χ2=7.952,P=0.005).5种肝癌细胞系均有TR-6蛋白的表达,而癌旁肝细胞系QSG-7701及正常肝细胞系HL-7702均无表达;(3)HCC中临床TNM分期Ⅰ、Ⅱ期TR-6阳性率61.76%(42/68)明显低于Ⅲ、Ⅳ期88.46%(46/52,χ2=10.739,P=0.001);(4)HCC中无转移组TR-6阳性率58.82%(20/34)明显低于转移组96.67%(29/30,χ2=19.858,P=0.000);(5)TR-6表达率在AFP≥400μg/L组为80.82%(59/73)、有门静脉癌栓组91.30%(42/46)、包膜浸润组84.34%(70/83)和多个肿瘤结节组89.13%(41/46)分别高于AFP＜400μg/L组的61.70%(29/47,χ2=5.345,P=0.021)、无门静脉癌栓组的62.16%(46/74,χ2=12.319,P=0.000)、无包膜浸润组的48.65%(18/37,χ2=16.668,P=0.000)及单个肿瘤结节组的63.51%(47/74,χ2=9.519,P=0.002).(6)TR-6表达与年龄、性别、肿瘤分化程度、有无肝硬化及肿瘤直径无关.结论检测TR-6蛋白指标有助于HCC的诊断和判断患者预后.     

人肝细胞性肝癌性激素受体的表达

目的：研究人肝细胞性肝癌组织、癌旁组织和正常肝组织中雄激素受体（AR）和雌激素受体（ER）的表达水平及分布规律。方法：应用单克隆抗体免疫组化法检测50例肝细胞性肝癌标本的肿瘤组织、癌旁组织和10例肝内胆管结石的肝组织中AR和ER的表达情况。结果：在肝癌组织、癌旁组织和肝内胆管结石的肝组织中，AR的阳性表达率分别为30％、8％和0％，除癌组织显著高于癌旁组织外（P＜0．01），其它各组无显著性差异（P＞0．05）；ER的阳性表达率分别为12％、10％和20％，在三组中均无显著性差异（P＞0．05），在所有阳性片中，AR和ER的标记指数（LI）均＜25。结论：AR和ER在肝细胞性肝癌组织中的表达率很低。     

AG1024对肝癌细胞系增殖与凋亡的影响

目的 探讨胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF-IR)酪氨酸激酶阻断剂AG1024(3-溴-5-叔丁基-4-羟基苯叉苹果酸腈)对人肝癌癌细胞的增殖抑制作用和凋亡诱导作用.方法 采用MTY、流式细胞术、细胞侵袭实验、RT-PCR和Western blot等方法检测在不同浓度(0～40 μmol/L)的AG1024作用下,人肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721的细胞形态学及分子生物学特性的改变.结果 MTT检测显示,AG1024剂量依赖性地抑制肝癌细胞的增殖.流式细胞术提示,AG1024明显促进肝癌细胞的凋亡.Transwell小室侵袭实验显示,AG1024能明显抑制肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721的侵袭能力,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR结果显示,肝癌细胞中IGF-IR呈高表达,不同浓度AG1024作用后,剂量依赖性地增加细胞色素C的表达.Western blotting结果显示,AG1024降低胞外途径信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)的磷酸化水平,下调procaspase-3的表达,而总ERK保持不变.结论 AG1024阻断胰岛素样生长因子1型受体,从而阻断其下游的信号传导途径,抑制肝癌细胞的增生,诱导凋亡.     

高转移潜能肝癌细胞株中凋亡相关蛋白的表达及意义

目的 探讨肝癌细胞转移潜能与凋亡敏感性之间的关系.方法 观察不同转移潜能的肝癌细胞株在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及依托泊苷(Etoposide)的作用下的凋亡发生率及Caspase3的活化,Western blot检测bcl-2及IAP家族蛋白在不同转移潜能肝癌细胞株中的表达.结果 TNF-α(10μg/L)作用后48 h,高转移潜能肝癌细胞株HCCLM3及转移能力最弱的肝癌细胞株SMMC-7721的凋亡率分别为(91.3±6.5)%及(58.8±2.3)%,MHCC97L细胞的凋亡率则位于两者之间(P≤0.01).Etoposide(250 μmol/L)作用后48 h,HCCLM3、MHCC97L及SMMC-772的凋亡发生率分别为(27.0±4.0)%、(34.6±3.8)%及(84.5±1.1)%(P≤0.01).3种细胞株中Caspase3的活性也有明显差异.bcl-2及IAP家族蛋白表达研究中发现XIAP的表达与肝癌细胞的转移潜能成梯度相关.结论 高转移潜能肝癌细胞株耐受多种凋亡刺激,可能与XIAP的过度表达相关.     

马钱子碱抗肝细胞癌作用的实验研究

目的 探讨马钱子碱抗肝细胞癌的作用及其机制.方法 体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,加入不同浓度的马钱子碱(2.5～400μg/ml),细胞培养72 h,MTT法测定细胞生长抑制率.Western blotting和荧光定量RT-PCR技术分别测定培养24、48、72 h肝癌细胞PCNA、Cyclin D1、FAS基因mRNA和蛋白表达.结果 随着马钱子碱用量逐渐增加,对人肝癌细胞SMMC-7721生长抑制作用增强,马钱子碱用量为320 μg/ml时对肝癌细胞生长抑制率接近100%.马钱子碱作用肝癌细胞24 h与作用48 h相比,Fas蛋白和mRNA表达差异无统计学意义(分别F=2.547,1.582,均P＞0.05),作用72 h时差异有统计学意义(分别F=1.036,1.137,均P＜0.05);PCNA和Cyclin D1的mRNA和蛋白表达各时间点差异无统计学意义(PCNA分别F=3.612,2.174,3.029;Cyclin D1分别F=2.361,2.915,1.976,均P＞0.05).结论 马钱子碱抑制肝癌细胞生长,可能通过肝癌细胞FAS基因和蛋白表达增加,诱导肝癌细胞凋亡发挥抑制作用,而与PCNA和Cyclin D1作用无关.

Abstract：

Objective To study the effect of brucine on the growth of a hepatocellular carcinoma cell line in vitro. Methods Brucine was added into a liver cancer cell line of SMMC-7721 in vitro, at drug concentration of brucine from 2. 5 μg/ml to 400 μg/ml. The inhibition rate of cell growth was measured by MTT technique after the cells were cultured for 72 hours. The protein and mRNA expression of PCNA,cyclin D1 and FAS were respectively assayed with Western blotting and fluorescent quantitation RT-PCR techniques at 24, 48, 72 h. Results The inhibition rate of liver cancer cell was near 100% when the brucine concentration was at 320 μg/ml. The protein and mRNA expression of FAS were of no significant difference at 24 h vs 48 h ( seperately F = 2. 547,1. 582, all P ＞ 0. 05 ), and significant difference existed at 24 h vs 72 h( seperately F = 1. 036, 1. 137, all P ＜ 0. 05 ). The protein and mRNA expression of PCNA,Cyclin D1 were of no significant difference between various time period( seperately PCNA F = 3.612,2. 174,3.029;Cyclin D1 F=2.361,2.915,1.976,all P＞0.05). Conclusions Brucine inhibits the growth of liver cancer cells, by inducing increased apoptosis of the cells probably through FAS overexpression.     

Genistein调节肝癌细胞PTEN和survivin蛋白表达的实验研究

目的探讨genistein对肝癌HepG2细胞株PTEN和survivin蛋白表达的影响及在诱导凋亡中的作用。方法以肝癌HepG2细胞培养72 h为对照组,实验各组以60μmol／L的genistein作用于HepG2细胞不同时间后,应用同位素试剂盒检测细胞IP3含量,Western-blotting分析细胞PTEN和survivin蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果对照组IP3含量为(29．2±0．6)pmol／106 cells,PTEN蛋白与内参Actin蛋白灰度和面积之积的比值V-PTEN／V-actin为0．12±0．001, survivin蛋白与内参actin蛋白灰度和面积之积的比值V-survivin／V-actin为0．63±0．06,细胞凋亡率为2．6％±0．1％。Genistein作用于肝癌Hep G2细胞12 h、24 h、48 h、72 h后IP3分别为(12．0±1．4) pmol／106cells、(7．5±0．8)pmol／106cells、(5．6±0．5)pmol／106cells、(3．3±0．6)pmol／106cells; V-PTEN／V-actin分别为13．13±0．20、19．17±1．09、28．51±2．18、41．12±3．80;V-survivin／V-actin分别为0．36±0．13、0．33±0．03、0．23±0．04、0．18±0．04;细胞凋亡率分别为2．7％±0．2％、7．4％±0．5％、20．5％±2．0％、30．7％±1．6％。与对照组相比,genistein作用于肝癌Hep G2细胞12 h后各时相IP3和survivin蛋白显著降低,24 h后各时相细胞凋亡率显著增高。结论Genistein能减少IP3生成,上调PTEN基因表达,下调survivin基因表达,诱导肝癌细胞凋亡。     

骨桥蛋白在不同转移潜能肝癌细胞系及肝癌组织中表达意义

目的 研究不同转移潜能人肝癌细胞系及其肝癌组织中骨桥蛋白(OPN)表达情况,分析OPN表达与肝癌细胞侵袭转移潜能、肝癌术后复发转移的关系.方法 应用细胞免疫组化、半定量RT-PCR、Western Blot和ELISA检测不同转移潜能人肝癌细胞系SMMC-7721、MHCC97-L和HCCLM6 OPN表达情况.应用组织芯片、免疫组化检测200例肝癌组织中OPN表达.结果 OPN表达水平随着肝癌细胞侵袭转移潜能增加逐渐升高.肝癌组织中OPN表达与病人性别、年龄、血清AFP水平、肿瘤大小、有无包膜、细胞分化以及肝门淋巴结转移无明显相关性.而与肝癌TNM分期、门静脉癌栓和术后复发转移发生有明显相关(P<0.05).术后有复发转移病人的肝癌组织中66%表达OPN,而术后无复发转移病人的肝癌组织中仅37%表达OPN,两者比较差异具有显著性(P<0.05).结论 OPN表达与肝癌细胞细胞系侵袭转移潜能密切相关.肝癌组织中OPN表达可能是预测肝癌术后是否发生复发转移指标.     

DLL4和血管内皮生长因子在肝细胞癌的表达及其在肿瘤血管生成的作用

目的 探讨Delta样配体(DLL4)及血管内皮生长因子(VEGF)在肝细胞癌中的表达及其与血管生成的关系.方法 免疫组织化学法检测75例肝细胞癌(HCC)中DLL4和VEGF的表达,用CD34进行微血管内皮细胞染色,计算微血管密度(MVD),分析其相关性.结果 DLL4和VEGF表达在HCC组明显高于肝硬化组和正常肝组(P＜0.01),与HCC的临床病理学分级相关(P＜0.01),HCC组中的CD34表达与DLL4的表达呈明显负相关(P＜0.05,r=-0.778);与VEGF的表达呈明显正相关(P＜0.05,r=0.747),32例共表达DLL4和VECF蛋白者,其平均微血管数(19.70±5.82)个/HP,明显高于非共表达组(7.60±2.12)个/HP(P＜0.01).结论 DLL4、VEGF在肝细胞癌血管生成中可能起重要作用.     

奥曲肽对二乙基亚硝胺诱导的大鼠肝癌的影响

目的 研究生长抑素类似物奥曲肽(oetreotide,OCT)抑制大鼠诱导肝癌形成的效果及其机制.方法 用二乙基亚硝胺溶液(DENA)诱导大鼠肝癌模型,随机分成OCT治疗组和对照组,观察两组大鼠存活情况和肝癌发生率,用免疫组化和半定量RT-PCR的方法检测肝脏和肝癌组织中生长抑素受体2(somatostatin receptor 2,SSTR2)蛋白和Mrna的水平.结果 OCT组的存活率70.0%(7/10)明显高于对照组30.0%(6/20)(x2=4.344,P＜0.05);DENA喂养16周的诱癌率,OCT组(0%,0/10)低于对照组(30.0%,6/20),但两组比较差异无统计学意义(X2=3.750,P＞0.05);DENA喂养22周的诱癌率,OCT组(22.2%,2/9)显著低于对照组(83.3%,10/12)(X2=7.843,P＜0.01).SSTR2mRNA和蛋白表达随肝硬化加重而增加,DENA喂养16周时最强,DENA喂养22周时明显下降,肝癌内的表达更低于周边组织(分别F=35.010和13.386,均P＜0.01);OCT治疗组DENA喂养8周和16周后的SSTR2mRNA和蛋白水平均近似于对照组,但DENA喂养22周时两者的水平均无明显下降,明显高于同期对照组(分别t=2.806和4.498,均P＜0.05).结论 OCT能有效地抑制大鼠肝癌的形成,并减少诱癌大鼠的死亡率,SSTR2表达的维持可能是OCT发挥作用的关键.     

TSA对人肝癌细胞株E-cadherin启动子区甲基化及表达的影响

目的 探讨去乙酰化转移酶抑制剂TSA对人肝癌SMMC-7721细胞株E-cadherin基因(E-cad)启动子区甲基化及其表达的影响.方法 TSA(300 nm/L)处理人肝癌SMMC-7721细胞,MTT法、TUNEL染色法分别检测细胞生长抑制及凋亡情况,甲基化特异性的PCR(methylation-specificPCR,MSP)检测处理前后E-cad启动子区CpG岛甲基化状态;Western blot检测处理前后E-cad及DNMT3b表达水平的变化.结果 TSA能抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长并诱导其发生凋亡,与对照组相比,实验组细胞生长抑制率为21.85%,对照组细胞凋亡率为(4.69±0.56)%,实验组凋亡率为(14.94±0.91)%,与对照组相比,凋亡细胞明显增多(P=0.000).用药前E-cad启动子区CpG岛为甲基化状态,E-cad蛋白表达阴性.TSA处理后E-cad启动子区CpG岛发牛脱甲基化,E-cad蛋白恢复表达.TSA亦导致DNMT3b的表达水平降低. 结论去乙酰化转移酶抑制剂TSA能抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长,并可诱导其发生凋亡,逆转E-cad基因启动子区的甲基化状态,并恢复该基因表达.TSA有可能通过DNMT3b发挥脱甲基化作用.     

全反式维甲酸对肝癌细胞株细胞连接蛋白基因表达的影响

目的观察全反式维甲酸（all-trans retinoic acid,ATRA）对肝癌细胞株CX26、CX32和CX43基因表达的影响.方法体外培养肝癌细胞株SMMC-7721和BEL-7404.分别用常规培养基和含ATRA（10-5 mol/L）的培养基培养两种细胞,在ATRA处理后的24、48、72 h提取细胞总mRNA.采用RT-PCR方法检测CX26、CX32、CX43基因的表达.结果用常规培养基培养的SMMC-7721细胞不表达CX26 mRNA和CX32 mRNA,但是经ATRA培养48 h开始出现CX26 mRNA的表达,经ATRA培养72 h后出现CX32 mRNA的表达.常规培养的BEL-7404细胞没有CX26 mRNA和CX32mRNA的表达,但是经ATRA培养48 h开始出现CX26 mRNA和CX32 mRNA的表达.两种肝癌细胞株在经ATRA处理前后均有CX43 mRNA的表达.结论全反式维甲酸能够在转录水平上调CX26、CX32基因在肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7404中的表达.     

上皮间质转化相关蛋白在肝细胞肝癌组织中的表达鉴定及其小分子RNA表达谱的研究

目的 检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)及其相应小分子RNA(miRNA)在原发性肝细胞肝癌(HCC)中的表达.方法 免疫组织化学检测32例HCC组织中E-cadherin和vimentin的表达,分析其与临床病理资料的关系.应用miRNA芯片筛选HCC转移相关差异表达miRNAs.选取部分差异表达miRNAs以实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法进行验证,利用在线靶基因预测软件对其靶基因进行预测.结果 E-cadherin在转移、低分化/未分化、大于3 cm组中的阳性表达率分别为25.0%(2/8)、35.7%(5/14)、52.9%(9/17),vimentin在上述三组的阳性表达率分别为87.5%(7/8)、71.4%(10/14)、52.9%(9/17).E-cadherin表达下调、vimentin表达上调与HCC分化(低分化/未分化)和转移明显相关(P＜0.05),而与其大小无关.miRNA芯片筛选获得36个HCC转移相关miRNAs(8个上调,28个下调).在E-cadherin(-)/vimentin(+)转移HCC中,miR-21、miR-221的表达(2.22±1.79、2.36±1.05)明显高于E-cadherin (+)/vimentin(-)无转移HCC(4.35±1.90、3.90±1.23,P＜0.05);miR-199a、miR-126的表达(4.42±0.61、3.62±0.54)明显低于E-cadherin(+)/vimentin(-)无转移HCC(2.43±0.85、2.54±1.10,P＜0.05).结论 E-cadherin(-)/vimentin(+)转移HCC与E-cadherin(+)/vimentin(-)无转移HCC的miRNA明显差异表达,其中部分差异表达miRNAs可能通过调控上皮间质转化相关分子的表达参与HCC的转移.

Abstract：

Objective To detect the expression of E-cadherin and vimentin, and their corresponding microRNAs (miRNAs) in primary heptocellular carcinoma (HCC). Methods The expression of E-cadherin and vimentin in 32 cases of HCC tissues was examined by using immunohistochemistry, and the relationship between the expression and clinicopathology was analyzed. miRNA array was used to investigate the differentially expressed miRNAs between E-cadherin ( - )/vimentin ( + ) metastasis HCC and E-cadherin ( + )/vimentin ( - ) no-metastasis HCC. Real-time polymerase chain reaction (PCR) was applied to verify the reliability of miRNA array results. We predicted target genes of the four miRNAs by combination anticipated algorithms. Results The positive rate of E-cadherin in the metastasis, poor/no differentiation, ＞3 cm groups was 25.0% (2/8), 35.7% (5/14), 52. 9% (9/17) respectively, and that of vimentin was 87.5% (7/8), 71.4% (10/14), 52.9% (9/17)respectively. The low expression of E-cadherin and high expression of vimentin in HCC was significantly correlated with metastasis and poor differentiation of HCC (P＜0. 05). miRNA array showed that 8 miRNAs were up-regulated and 28 miRNAs were down-regulated in E-cadherin ( - )/vimentin ( + ) metastasis HCC. The expression levels of miR-21 and miR-221 in E-cadherin ( - )/vimentin ( + ) metastasis HCC were 2. 22 ± 1.79 and 2. 36 ±1.05, significantly higher than those in E-cadherin ( + )/vimentin ( - ) no-metastasis HCC (4. 35 ±1.90, 3.90 ± 1.23,P＜0.05). The expression levels of miR-126 and miR-199a in E-cadherin (-)/vimentin ( + ) metastasis HCC were 4. 42 ± 0. 61 and 3.62 ± 0. 54, notably lower than those in E-cadherin ( +)/vimentin (-) no-metastasis HCC (2.43±0.85, 2.54±-1.10,P＜0.05). Conclusion miRNA differential expression profile of E-cadherin ( - )/vimentin ( + ) HCC was obtained, and some of miRNAs may play a role in metastasis of HCC by regulating epithelial to mesenchymal transition.