紫杉醇通过上调TAP-1,TAP-2以及消除调节性T细胞逆转肺癌免疫逃逸

背景与目的化疗是否可以逆转肿瘤的免疫逃逸尚未得到肯定的回答。本研究旨在探讨紫杉醇类抗肿瘤药物紫杉醇参与逆转肺部肿瘤细胞免疫逃逸的机制。方法体外实验应用流式单抗TAP-1、TAP-2检测分析3LL细胞株(Lewis肺腺癌细胞)和经紫杉醇5×10-8mol/L处理的3LL细胞株抗原肽转运体(transporters associated with antigen processing,TAP)的表达;体内实验中,3LL细胞经尾静脉注射成瘤,8d后化疗组小鼠腹腔内注射紫杉醇:0.0125mg/只;对照组小鼠腹腔内注射生理盐水;设立空白对照组;21d后取各组小鼠的肺部组织,制备单细胞悬液,流式三染法检测调节性T细胞(Regulatory T cells,Treg)。结果经紫杉醇处理的3LL细胞高表达TAP-1(5.68%±0.65%)和TAP-2(89.54%±4.8%),明显高于3LL细胞组TAP-1(1.93%±0.25%)和TAP-2(67.78%±5.08%)的表达(P分别为0.006和0.036);体内实验中:荷瘤小鼠肺部肿瘤中Treg细胞的表达(25.46%±2.23%)明显高于正常对照组的小鼠(12.4...     

CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg细胞调控肿瘤免疫抑制微环境的研究进展

目的： CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞（ Treg ）是肿瘤免疫抑制微环境的主要组成部分,其在肿瘤的免疫抑制微环境中分泌IL－10、IL－35、TGF－β1和FGL2等细胞因子发挥免疫抑制作用。Treg细胞抑制CD4＋T、CD8＋T淋巴细胞和NK细胞,进而抑制特异性抗肿瘤免疫反应使肿瘤细胞更容易逃避免疫监视。进一步研究Treg细胞在肿瘤免疫中的作用机制,对深入了解恶性肿瘤的发病机制及免疫治疗具有重要的理论意义。此外,Treg细胞及其分泌的细胞因子在肿瘤治疗和预后评估等方面也具有广阔的临床应用前景。     

曲酸对γ射线照射致小鼠Treg/Th17比例失衡的影响

目的： 观察曲酸(KA)对4 Gy γ射线照射所致小鼠Treg/Th17细胞比例失衡的影响,以期为KA的辐射免疫损伤防护机制研究提供新思路。方法：C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、照射组、KA低剂量组和KA高剂量组。KA低、高剂量组小鼠分别于照射前27 h皮下注射75、300 mg/kg KA。照射组及KA低、高剂量组小鼠接受4 Gy γ射线一次性全身照射,对照组行假照射。照射后检测外周血白细胞(WBC)数量、脾脏/胸腺指数及脾脏调节性T细胞(Treg细胞)和Th17细胞比例的改变。结果：与对照组比较,4 Gy γ射线照射后,小鼠外周血WBC计数显著降低(P<0.05或P<0.01),KA高剂量组WBC计数至照后19 d恢复正常,而照射组及KA低剂量未恢复。γ射线照射后,照射组及KA低、高剂量组小鼠胸腺及脾脏指数均显著降低(P均<0.01),但KA高剂量组的胸腺及脾脏指数明显高于照射组(P均<0.01)。照后4 d,照射组与KA高剂量组脾脏Treg细胞比例显著高于对照组(P均<0.01)。照射组Th17细胞比例亦显著增高,而KA高剂量组Th17比例却显著低于照射组(P<0.05),使得Treg/Th17比值在照后4 d明显增高,导致Treg/Th17平衡向Treg方向明显偏移。结论：适当剂量的KA预防给药能明显减轻γ射线照射所致的免疫损伤,并能抑制照射所致的Th17细胞比例增高,导致Treg/Th17平衡向Treg细胞方向偏移。表明KA可抑制照射所引起的炎性反应,从而减轻机体的炎症性损伤,发挥有效的保护作用。     

食管癌及其区域淋巴结组织树突状突细胞与Th1/Th2细胞因子表达的研究

目的:检测食管癌组织及其区域淋巴结中树突状淋细胞(DC)及Th1/Th2细胞因子的表达,探讨食管癌发生及与免疫逃逸的关系.方法:采用流式细胞术检测57例食管癌组织、癌旁组织,16例食管炎性组织,62枚区域淋巴结中DC CD1a、CD83及共刺激因子CD80、CD86的表达,ELISA法检测组织匀浆中Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ,Th2型细胞因子IL-4、IL-10的水平.结果:57例食管癌组织中CD1A、CD83、CD80及CD86的表达分别为7.34±1.59、2.87±0.55、5.75±1.06和27.34±7.21,显著低于炎性、正常和癌旁组织;癌组织中IL-2、IFN-γ表达水平分别为8.94±1.72、9.34±2.16,低于炎性、正常和癌旁组织;IL-4、IL-10的水平分别为5.24±0.35、5.3±1.02,高于炎性、正常和癌旁组织(P<0.05,P<0.01).区域淋巴结组织中CD1A、CD83、CD80及CD86的表达在有转移癌者明显低于无转移癌者;IL-2、IFN-γ表达水平降低;IL-4、IL-10的水平增高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论:食管肿瘤组织和区域淋巴结内DC的减少及Th1/Th2失调,可能是食管肿瘤发生免疫逃逸的原因.     

肿瘤免疫中Treg细胞与趋化因子及受体的研究进展

近年来的研究发现,趋化因子系统和调节性T细胞在肿瘤发生、发展及转移中发挥重要作用。作为一种免疫抑制性调节细胞,CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,以下简称Treg细胞)在体内通过多种途径发挥抑制效应性T细胞增殖,在诱导机体对肿瘤的免疫耐受和免疫逃逸中发挥关键作用。肿瘤可以通过多种途径来引导调节性T细胞在肿瘤局部的聚集和维持,其中最重要的一种方式为肿瘤细胞表面高表达趋化因子。现将近年来国内外对趋化因子及受体(特别是趋化因子受体5)与Treg细胞关系的研究进行综述。     

人淋巴瘤细胞Jurkat通过Fas/FasL途径抑制人肺癌细胞A549的免疫逃逸

背景与目的 当机体发生肿瘤时,肿瘤细胞可以多种方式逃避免疫系统的监控而分裂生长,这就是肿瘤的免疫逃逸.研究表明,肿瘤细胞自身凋亡减少以及机体免疫细胞凋亡增加是肿瘤免疫逃逸的重要机制.Fas/FasL系统是介导凋亡的重要分子体系,本研究旨在通过观察人淋巴瘤细胞株Jurkat诱导人肺癌细胞株A549凋亡过程中凋亡信号分子Fas、FasL及casPase-8表达的改变,从而探讨Fas/FasL途径在肺癌细胞免疫逃逸中的作用.方法 人肺癌细胞株A549与人淋巴瘤细胞株Jurkat以不同比例分别进行共同培养,采用台盼蓝拒染法检测两种细胞存活率;流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测两种细胞的凋亡率;Western blot技术检测A549细胞中Fas、FasL及caspase-8蛋白表达水平.结果 随着Jurkat/A549细胞比例逐渐增大,A549细胞的凋亡率明显增加,Jurkat细胞凋亡率显著减少;同时A549细胞中Fas及casPase-8蛋白的表达水平明显上调,而对FasL蛋白的表达水平无明显影响.结论 Jurkat细胞可能通过Fas/FasL途径介导了人肺癌细胞株A549的凋亡,从而抑制了A549细胞的免疫逃逸.     

封闭B7-H1分子对肿瘤浸润树突状细胞介导T细胞免疫功能的影响

目的:研究肿瘤浸润树突状细胞（tumorinfiltrating dendritic cell,TIDC）及脾脏树突状细胞（splenic dendritic cell,SDC）表面B7H1、B71、B72分子的表达情况;探讨封闭TIDC及SDC表面B7H1分子对其介导T细胞免疫功能的影响。方法： CD11c磁珠阳性分选法提取荷瘤小鼠的TIDC及SDC,流式细胞术检测其表面B7H1、B71、B72分子的表达情况。TIDC及SDC作为刺激细胞,脾脏T细胞作为反应细胞行混合淋巴细胞反应,同时加入B7H1抗体或其对照抗体,XTT比色法检测T细胞增殖指数,ELISA法检测T细胞分泌IL10的量。〖HT5W〗结果：〖HT5"SS〗B71及B72分子在TIDC表面的表达水平显著低于SDC（P<001）;B7H1分子在TIDC及SDC表面皆中度表达,表达水平无明显差异（P>0.05）。TIDC刺激T细胞增殖能力显著低于SDC,且诱导T细胞分泌更多的IL10。封闭DC表面B7H1分子后,TIDC刺激T细胞增殖能力显著提高（P<0.01）,且诱导T细胞分泌IL10的量明显减少（P<0.01）;SDC刺激T细胞增殖能力及诱导T细胞分泌IL10的量无明显变化（P>0.05）。结论：封闭DC表面的B7H1分子能显著提高TIDC活化T细胞的能力,可能解除TIDC介导的肿瘤免疫抑制     

CIN宫颈组织中Treg细胞和Th1/Th2细胞因子的表达及意义

目的探讨宫颈上皮内瘤变（CIN）宫颈组织中Treg细胞和Th1/Th2细胞因子的表达及其临床意义。方法对189例妇女行HPV检测、宫颈TCT检查及宫颈活检后行CIN病变分级,应用Q-PCR、流式细胞术,检测各组患者宫颈组织中IL-2、IL-4、IFN-γ、IL-10、IL-12的含量和Treg细胞表达。结果 81例良性病变、60例CINⅠ、27例CINⅡ和21例CINⅢ患者中高危型HPV感染例数分别为17（21%）、25（42%）、24（89%）和20（95%）例。良性病变、CINⅠ、CINⅡ和CINⅢ宫颈组织中,Treg细胞占CD4＋T细胞的比例随病变程度增加而增加、IL-10表达水平逐渐上升、IFN-γ表达水平逐渐下降（P〈0.05）,IL-2、IL-12及IL-4的表达水平在4组患者中无明显差别。结论 CIN患者宫颈黏膜中Th1/Th2平衡向Th2方向漂移,Treg细胞表达增强,下调机体抗HPV感染和抗肿瘤免疫反应,促进CIN病变的进行性发展。     

TNF-β和IL-4诱生的新型效应性T细胞亚群Th9

T细胞亚群的研究一直是免疫学研究的重点和热点,目前已知的主要有4个功能亚群,包括传统的Th1和Th2,及近几年发现的调节性T细胞(Treg)和Th17.Th1细胞由白细胞介素-12(IL-12)诱导,分泌IL-2和γ干扰素(IFN-γ),介导细胞免疫,清除胞内寄生菌和病毒;Th2细胞由IL-4诱导,分泌IL-4、IL-5和IL-13,介导体液免疫,清除胞外寄生菌和寄生虫;Treg细胞由转录生长因子-β(TGF-β)诱导,分泌TGF-β和IL-10,介导免疫耐受,抑制抗肿瘤免疫;Th17细胞由TGF-β和IL-6诱导,分泌IL-17、IL-17E和IL-22,介导自身免疫性疾病和组织炎症.那么,机体是否还存在其他的功能性T细胞亚群呢?2008年12月Nat Immunol发表了两篇文章,同时报道了一个由TGF-β和IL-4诱导的分泌IL-9和IL-10的新型效应性T细胞亚群.     

表观遗传修饰介导抑制SOSTDC1表达促进宫颈癌细胞的恶性生物学行为

目的：探究含硬化蛋白域蛋白1（SOSTDC1）对宫颈癌细胞恶性生物学行为的调控及其分子机制。方法：收集2020年8 月至2022 年5 月间在福建省肿瘤医院活检或手术切除的53 例宫颈癌组织和相应的癌旁组织标本,免疫组化法检测SOSTDC1 蛋白在宫颈癌组织及相应癌旁组织中的表达,qPCR 法检测正常宫颈细胞、宫颈癌细胞中SOSTDC1 mRNA 表达;将SOSTDC1 过表达慢病毒（OE-sostdc1）和对照空病毒（NC）感染宫颈癌细胞SiHa 及CaSki,将其分为SiHa-OE-sostdc1、SiHa-NC、CaSki-OE-sostdc1、CaSki-NC 组,采用WST-1法、细胞集落形成实验、Transwell 实验和WB法检测转染各组SiHa 及CaSki 细胞的增殖、集落形成、迁移和侵袭能力和BMP、Wnt/β-catenin 信号途径相关蛋白及上皮-间充质转化（EMT）相关蛋白的表达。用DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂2''-脱氧胞苷（5''-Aza-CdR）处理宫颈癌细胞后采用qPCR和WB法检测SOSTDC1 mRNA及蛋白的表达变化,用甲基化特异性PCR（MSP）检测5 例配对宫颈癌组织与癌旁组织中SOSTDC1 基因启动子区甲基化水平,同时qPCR 检测其SOSTDC1 mRNA水平。结果：与癌旁组织比较,SOSTDC1蛋白在宫颈癌组织中呈低表达（P<0.01）,且与淋巴结转移与FIGO分期有关联（均P<0.05）;与正常宫颈HUCEC细胞比较,SOSTDC1 mRNA 在宫颈癌C33A、HeLa、SiHa、CaSki 细胞中均呈低表达（均P<0.01）。过表达SOSTDC1显著抑制SiHa 及CaSki 细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.05）。WB法结果检测显示,过表达SOSTDC1 显著抑制 SiHa 及 CaSki 细胞中磷酸化 Smad、Dvl2/3、β -catenin、VIM、N-cadherin、Snail 蛋白的表达（均P<0.05）,5''-Aza-CdR 处理后的SiHa 及CaSki 细胞中SOSTDC1 mRNA和蛋白水平均显著增加（均P<0.05）,MSP检测结果显示,相较于癌旁组织,宫颈癌组织中SOSTDC1基因启动子区呈高度甲基化,且SOSTDC1 mRNA水平降低（P<0.01）。结论：SOSTDC1在宫颈癌组织中呈低表达且与肿瘤的恶性进展关联,其表达下调与其基因启动子区高度甲基化有关,过表达SOSTDC1 可能通过阻断BMP及Wnt/β-catenin信号通路从而抑制SiHa、CaSki细胞的增殖、侵袭和迁移能力。     

封闭B7-H1分子对肿瘤浸润树突状细胞介导T细胞免疫功能的影响

目的: 研究肿瘤浸润树突状细胞(tumor-infiltrating dendritic cell,TIDC)及脾脏树突状细胞(splenic dendritic cell,SDC)表面B7-H1、B7-1、B7-2分子的表达情况;探讨封闭TIDC及SDC表面B7-H1分子对其介导T细胞免疫功能的影响.方法:CD11c磁珠阳性分选法提取荷瘤小鼠的TIDC及SDC,流式细胞术检测其表面B7-H1、B7-1、B7-2分子的表达情况.TIDC及SDC作为刺激细胞,脾脏T细胞作为反应细胞行混合淋巴细胞反应,同时加入B7-H1抗体或其对照抗体,XTT比色法检测T细胞增殖指数,ELISA法检测T细胞分泌IL-10的量.结果:B7-1及B7-2分子在TIDC表面的表达水平显著低于SDC(P<0.01);B7-H1分子在TIDC及SDC表面皆中度表达,表达水平无明显差异(P>0.05).TIDC刺激T细胞增殖能力显著低于SDC,且诱导T细胞分泌更多的IL-10.封闭DC表面B7-H1分子后,TIDC刺激T细胞增殖能力显著提高(P<0.01),且诱导T细胞分泌IL-10的量明显减少(P<0.01);SDC刺激T细胞增殖能力及诱导T细胞分泌IL-10的量无明显变化(P>0.05).结论:封闭DC表面的B7-H1分子能显著提高TIDC活化T细胞的能力,可能解除TIDC介导的肿瘤免疫抑制.     

鼻NK/T细胞淋巴瘤的免疫表型和细胞毒颗粒蛋白的表达及其意义

目的 观察鼻NK／T细胞淋巴瘤的免疫表型和细胞毒颗粒蛋白的表达及其意义：方法：采用DAKOEn Vision两步法在44例鼻NK／T细胞淋巴瘤病例中检测CD3、CD20、CD43、CD45、CD45RO、CD56、CD57和CD79α等8种常用淋巴细胞表面标记物和3种细胞毒颗粒蛋白TIA-1、Granzyme-B、perforjn的表达，观察和分析检测结果，并与发生在相同部位的其他常见恶性淋巴瘤的检测结果进行比较分析。结果：44例鼻NK／T细胞淋巴瘤均表达CD45；CD3阳性率为43％，阳性定位在细胞质；CD56、CD43和CD45RO的阳性率分别为52％、45％和52％，CD20、CD79α和CD57均为阴性。TIA-1、Granzyme-B和perfoljn的阳性率分别为100％、93％和95％，对照组的23例鼻腔和鼻咽T、B细胞淋巴瘤中均不表达。结论：鼻NK／T细胞淋巴瘤的免疫表型不一致，并非所有病例显示CD56阳性，石蜡切片中CD3的阳性定位与通常的外周T细胞淋巴瘤不同。细胞毒性颗粒蛋白在肿瘤细胞中的高表达，提示它们可能为NK细胞来源。细胞毒性颗粒蛋白是鼻NK／T细胞淋巴瘤诊断和鉴别诊断重要标志。     

C-藻蓝蛋白抑制TGF-β1诱导的宫颈癌Caski细胞上皮-间充质转化

目的：探究C-藻蓝蛋白（C-phycocyanin,C-PC）对转化生长因子β1（transforming growth factor beta 1,TGF-β1）诱导的 宫颈癌Caski细胞上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）的影响。方法：根据处理方法不同将Caski细胞分为 3组即10 ng/ml TGF-β1处理组、 10 ng/ml TGF-β1+300 μg/ml C-PC共处理组和对照组（未加药处理）,处理24 h后观察细胞的形态 变化;采用划痕实验及Transwell实验分别检测TGF-β1和C-PC对Caski细胞迁移和侵袭的影响;Western blotting方法检测C-PC 对TGF-β1诱导的Caski细胞上皮表型标志蛋白E-cadherin、间质表型标志蛋白N-cadherin表达水平的影响;qPCR 法检测间质表 型相关锌指转录因子Snail、Zeb1、Twist mRNA的表达。结果：TGF-β1处理组Caski细胞失去原有的上皮表型的特征, 而TGF-β 1+C-PC共处理组细胞保持正常的上皮表型的特征;TGF-β1处理组Caski细胞的迁移率[（60.0±1.4） % vs（33.5±2.2） %、（40.0± 2.8） %, 均P<0.05]和侵袭穿膜细胞数[（108.2±6.2）vs（25.2±3.1）、（39.8±5.4）个, 均P<0.01]较共处理组和对照组显著升高;与对照 组相比,TGF-β1处理组Caski细胞中E-cadherin表达显著降低（P<0.05）,Twist、Snail、Zeb1的mRNA表达水平显著升高（P<0.01）, 而加入C-PC共处理可逆转上述改变（P<0.05或P<0.01）,同时显著降低N-cadherin的蛋白表达水平（均P<0.05）。结论：C-PC处 理能够抑制TGF-β1诱导的Caski细胞侵袭转移能力进而影响EMT过程,其机制可能与C-PC处理降低Twist、Snail、Zeb1的 mRNA表达有关。     

IDO和CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在肿瘤免疫逃逸中相互作用的研究进展

肿瘤可以通过多种方式逃逸机体免疫系统的监控。吲哚胺-2,3双加氧酶（indoleamine．2,3-dioxygenase,IDO）和CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋ regulatory Tcells,Tregs）是近些年在肿瘤免疫逃逸领域中备受关注的两个重要因素。两者相互作用在肿瘤免疫逃逸机制中起着尤为关键的作用,已引起众多研究者的关注。本文就IDO及Tregs在肿瘤免疫逃逸中的作用以及两者之间的相互关系等方面的研究进展作一综述。     

调控TGF-β1/Smad4通路对宫颈癌SiHa细胞自噬基因LC3的影响

目的:探究调控TGF-β1/Smad4通路对宫颈癌SiHa细胞自噬基因LC3的影响。方法:取对数生长期的宫颈癌SiHa细胞加入不同浓度的TGF-β1和SIS3干预24小时后收取细胞,采用实时荧光定量PCR法及免疫印迹法检测自噬基因LC3在mRNA水平及蛋白水平上的表达量变化。结果:不同浓度的TGF-β1作用SiHa细胞24小时后,随TGF-β1浓度升高,LC3 mRNA及蛋白的表达量逐渐增高（P＜0.05）。不同浓度的SIS3作用SiHa细胞24小时后,随SIS3浓度升高,LC3 mRNA及蛋白的表达量逐渐降低（P＜0.05）。结论:外源性的TGF-β1/Smad4通路激活剂TGF-β1可使宫颈癌SiHa细胞自噬蛋白LC3 mRNA和蛋白表达量升高,诱导宫颈癌SiHa细胞发生自噬;外源性的TGF-β1/Smad4通路抑制剂SIS3可使宫颈癌SiHa细胞自噬蛋白LC3 mRNA和蛋白表达量降低,抑制宫颈癌SiHa细胞发生自噬;且随TGF-β1和SIS3浓度的增加,LC3的表达量出现变化,具有一定的浓度依赖性。     

晚期非小细胞肺癌合并慢性阻塞性肺疾病患者Th1/Th2及Th17/Treg与PD-1抑制剂治疗效果的关系

目的探讨晚期非小细胞肺癌(NSCLC)合并慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血辅助性T细胞1/辅助性T细胞2(Th1/Th2)、辅助性T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)与程序性死亡受体1(PD-1)抑制剂疗效的关系。方法回顾性分析苏州大学附属苏州九院2021年4月至2022年9月收治的107例晚期NSCLC合并COPD患者的临床资料。患者均接受PD-1抑制剂治疗, 根据临床疗效将患者分为疾病控制组(82例)和疾病进展组(25例)。对比两组患者治疗前Th1/Th2、Th17/Treg及临床资料, 采用logistic回归分析患者PD-1抑制剂疗效的影响独立因素。结果治疗前疾病控制组Th1/Th2、Th17/Treg均高于疾病进展组(12.49±1.14比7.04±1.06, t=21.26, P<0.001;0.14±0.03比0.09±0.04, t=6.72, P<0.001)。与疾病控制组相比, 疾病进展组TNM分期Ⅳ期、存在淋巴结转移和脑转移患者比例均更高(均P<0.01)。多因素logistic回归分析结果显示, 治疗前Th1/Th2(OR=0....     

姜黄素通过PI3K/AKT/mTOR通路抑制TGF-β1诱导的肺癌细胞上皮间质转化

摘 要：［目的］ 探讨姜黄素对TGF-β诱导的肺癌A549细胞上皮间质转化、侵袭转移的影响及其可能的机制。［方法］ 通过转化生长因子TGF-β1诱导肺癌细胞株A549发生上皮间质转化;利用不同浓度姜黄素干预由TGF-β1诱导的肺癌 A549细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化,细胞划痕实验、Transwell 侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力变化,Western blot法检测上皮表型标记蛋白E-cadherin和间质表型标记蛋白N-cadherin、Vimentin的表达及PI3K/AKT/mTOR信号通路中AKT、mTOR磷酸化的情况,并利用PI3K抑制剂LY290004、mTOR抑制剂Rapamycin通过上述方法对姜黄素的作用进行印证。［结果］ 与对照组相比,姜黄素显著增加A549细胞E-cadherin的表达,抑制N-cadherin和Vimentin蛋白及TGF-β1刺激p-AKT和p-mTOR的表达,且呈明显的剂量—时间依赖关系;同时抑制TGF-β诱导的侵袭迁移。［结论］ 姜黄素可通过PI3K/AKT/mTOR通路明显抑制TGF-β1诱导的肺癌A549细胞上皮间质转化,降低其侵袭迁移能力。