消癌解毒方对H22荷瘤小鼠基因表达谱的影响

目的 通过对H22荷瘤小鼠肿瘤组织基因表达谱的检测,探讨消癌解毒方抗肿瘤的作用机制。方法 H22荷瘤小鼠随机分为空白对照组,消癌解毒方低、中、高剂量组和顺铂组。应用基因芯片技术,检测各组H22荷瘤小鼠肿瘤组织的差异表达基因;应用pathway分析,找出与消癌解毒方抗癌机制相关的信号通路和基因,并针对趋化因子信号通路进行分析。结果 消癌解毒方能显著影响多个与肿瘤生长、凋亡和免疫相关的信号通路,并能下调趋化因子信号通路中CCL3、CXCL2等基因的表达。结论 消癌解毒方可能通过影响趋化因子信号通路中的某些基因的表达来发挥抗肿瘤生长和侵袭的作用。     

消癌解毒方对H22瘤荷小鼠 miRNAs表达谱的影响

目的通过对H22荷瘤小鼠肿瘤组织微小核糖核酸(miRNAs)表达谱的检测,探讨消癌解毒方抗肝癌的作用机制。方法将50只H22荷瘤小鼠随机分为模型组,消癌解毒方低剂量组、中剂量组、高剂量组和顺铂组,每组10只。应用病理组织学技术,检测各组H22荷瘤小鼠肿瘤组织光镜下的差异表现。应用miRNA芯片技术,检测各组H22荷瘤小鼠肿瘤组织差异表达miRNAs。应用统计学方法分析,找出与消癌解毒方作用机制相关的差异miRNAs。结果病理组织学检查结果显示,随着消癌解毒方剂量的增加,病理性核分裂像减少,癌细胞减小,抗癌效果增强。根据miRNA芯片的分析结果,消癌解毒方对H22瘤荷小鼠肿瘤组织内一些特异miRNAs如miR-1298-5p、miR-874-3p、miR-721、miR-298-5 p、miR-551 b-5 p、miR-346-5 p、miR-105表达显著上调;miR-24-3 p、miR-3963、miR-127-3 p、miR-434-5 p、miR-1187、miR-468-3 p、miR-221-5 p、miR-6695-5 p表达显著下调。结论消癌解毒方可能通过调控多种miRNAs的表达来发挥其抗肿瘤的作用。     

消癌解毒方对H22荷瘤小鼠移植瘤的抗肿瘤作用机制

目的:通过消癌解毒方(XAJD)对H22荷瘤小鼠移植瘤肿瘤组织全基因组芯片的检测以及对相关蛋白的表达影响,探讨其抑制肿瘤的作用机制。方法:ICR小鼠随机分组,接种H22荷瘤小鼠腹水,移植瘤模型成功后,将模型小鼠随机分为空白组,XAJD低、中、高剂量组(10,30,90 g·kg~(-1)·d~(-1)),顺铂组(1 mg·kg~(-1)·d~(-1))。给药结束,动物处死并取各组动物瘤体组织,无菌生理盐水洗去血渍,称重,计算肿瘤抑制率,取部分新鲜瘤体组织进行全基因组表达谱芯片检测,部分瘤体组织用实时荧光定量PCR(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测其相关mRNA及蛋白表达。结果:与空白组比较,消癌解毒方低、中、高剂量能够显著降低移植瘤瘤重(P0.05),消癌解毒方中剂量组与顺铂组效果优于消癌解毒方低、高剂量组(P0.01),抑瘤率分别达42.8%,58.6%;全基因组芯片检测分析发现,基质金属蛋白酶家族(matrix metalloproteinases,MMPs)和组织金属蛋白酶抑制剂(tissueinhibitor of metalloproteinase,TIMPs)相关蛋白在消癌解毒方不同剂量组中均发生了明显的改变。Real-time PCR,Western blot检测显示,与空白组比较,MMP-9 mRNA及蛋白在消癌解毒方低、中、高剂量组及顺铂组中表达均显著降低(P0.01),MMP~(-1)2 mRNA及蛋白在消癌解毒方中、高剂量组及顺铂组中表达均显著降低(P0.01),TIMP2 mRNA及蛋白在消癌解毒方中、高剂量组及顺铂组中表达均明显升高(P0.05)。结论:消癌解毒方能够抑制H22荷瘤小鼠移植瘤生长,可通过抑制MMPs相关蛋白的表达,降低肿瘤的转移和复发可能是其抗癌机制之一。     

消癌解毒方对H22荷瘤小鼠外周血清转化生长因子β1的影响

目的:观察周仲瑛教授"癌毒"理论指导下经长期临床实践的有效抗癌方药——消癌解毒方的抗肿瘤作用机理。方法:将ICR小鼠60只随机分为空白组,模型组(生理盐水灌胃),消癌解毒方低、中、高剂量组(灌胃),顺铂组(腹腔注射),每组10只。除空白组外,其余5组均于小鼠右腋皮下接种传代培养的H22细胞。用药10天后,眼眶取血测定小鼠外周血清转化生长因子β1(TGF—β1)水平。结果:与模型组相比,空白组,消癌解毒方中、高剂量组,顺铂组外周血清TGF-β1水平显著降低(P<0.05或P<0.01);中药高剂量组和顺铂组外周血清TGF-β1水平无统计学差异(P>0.05)。结论:消癌解毒方能降低H22荷瘤小鼠外周血清TGF—β1的水平,这可能是该方发挥抗癌作用的途径之一。     

消癌解毒方抑制H22小鼠肿瘤生长及促凋亡的实验研究

观察国医大师周仲瑛教授"癌毒"理论指导下经长期临床实践的有效抗癌方药-消癌解毒方对H22小鼠肿瘤生长及细胞凋亡的影响,初步分析该方抗癌机理。方法:建立H22小鼠模型,分模型组,消癌解毒中药(高、中、低剂量)组,西药(顺铂)对照组,分别检测各组抑瘤率;流式细胞仪检测各组肿瘤细胞凋亡率;ELISA法检测各组外周血IL-6的表达。结果:与模型组比较,消癌解毒方各组、顺铂组能明显抑制实体瘤重、促进肿瘤细胞凋亡、显著降低血清IL-6水平(P<0.05,P<0.01),中药中剂量组与西药组比较无统计学意义。结论:消癌解毒方能抑制H22小鼠实体瘤的生长,促进肿瘤细胞凋亡,抑制IL-6的产生和表达可能是其抗癌作用机制之一。     

扶正消瘤方对H_(22)荷瘤小鼠抑癌及其化疗减毒作用

目的考察扶正消瘤方(人参、黄芪、猪苓等)抗肝癌作用及其减轻环磷酰胺引起的毒性。方法 ICR小鼠采用右前肢皮下接种造H_(22)荷瘤模型,灌胃给予扶正消瘤方后,检测生命延长率、瘤重、抑瘤率、T淋巴细胞增殖率、血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平。H_(22)荷瘤小鼠腹腔注射环磷酰胺(50 mg/kg),测定扶正消瘤方给药后血液学指标、血清溶血素水平及抗体形成细胞数。结果扶正消瘤方可明显抑制肿瘤生长,升高血清SOD活性,减少MDA水平,促进T淋巴细胞增殖。而且,它还能拮抗环磷酰胺引起的白细胞及血小板数量下降,并升高抗体形成细胞数。结论扶正消瘤方具有良好的抗肝癌作用,并能减轻化疗所致的毒性,可能与增强机体抗氧化和免疫能力有关。     

消癌解毒方对肝癌细胞株H22凋亡及Survivin表达的影响

目的:研究消癌解毒方对肝癌细胞株H22凋亡及Survivin表达的影响,探讨其可能的抗癌机制。方法:建立小鼠H22移植瘤模型,分对照组和XJR低、中、高剂量(10、30、90g/kg)组及顺铂(0.001g/kg)组进行治疗,流式细胞术检测各组移植瘤细胞周期及凋亡率,Western blot法检测H22移植瘤细胞Survivin蛋白表达。结果:消癌解毒方各剂量组和顺铂阳性对照组的小鼠平均凋亡率均高于模型组小鼠平均凋亡率。二者比较,差异均具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。FCM细胞周期显示,与模型组比较,消癌解毒方中剂量组和顺铂阳性对照组细胞G0/G1期比例相对增加,P<0.05,差别具有统计学意义,S期及G2从期比例相对下降,细胞周期于G0/G1期发生阻滞,P<0.05,差别具有统计学意义。Western blot法检测各组Survivin蛋白表达结果与模型组相比,各组Survivin蛋白表达均有下降趋势,其中DDP阳性对照组Survivin蛋白表达降低最明显,消癌解毒方10mg/kg低剂组、90mg/kg高剂组和30mg/kg中剂组Survivin蛋白表达也依次降低。结论:消癌解毒方能促进肿瘤细胞凋亡,抑制Survivin蛋白表达,是其抗癌作用机制之一。     

消癌解毒方联合顺铂通过调控组蛋白去甲基化酶抑制4T1荷瘤小鼠肿瘤生长

目的:观察消癌解毒方联合顺铂抑制4T1荷瘤小鼠肿瘤生长的作用及机制。方法:BALB/c小鼠皮下接种4T1乳腺癌细胞形成荷瘤模型,分别单独给予顺铂(2 mg·kg-1)、消癌解毒方(1×104mg·kg-1)及两者联合用药进行治疗,给药期间称量并记录小鼠体质量和瘤体积,15 d后脱颈处死,剥离并称量瘤块质量,计算抑瘤率,苏木素-伊红(HE)染色观察心、肝、脾、肾和瘤块的病理情况,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)观察肿瘤细胞凋亡情况并统计凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤组织中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),组蛋白去甲基化酶1(LSD1),组蛋白H3(Histone H3),组蛋白H3第4位赖氨酸二甲基化(Histone H3K4me2),组蛋白H3第9位赖氨酸二甲基化(Histone H3K9me2)的表达水平。结果:与模型组相比,顺铂给药组小鼠体质量均有下降,其中消癌解毒方+顺铂组较单用顺铂组体质量增加(P0.01);消癌解毒方+顺铂较单用顺铂更能缩小移植瘤体积,提高抑瘤率(P0.01);更明显提高了肿瘤细胞凋亡率(P0.05,P0.01);更明显下调肿瘤组织Bcl-2表达水平,上调Bax表达水平(P0.05,P0.01);各给药组均能下调LSD1蛋白的表达,增加组蛋白H3K4,H3K9的二甲基化,消癌解毒方+顺铂组作用最为明显(P0.05,P0.01)。结论:消癌解毒方+顺铂用药对于4T1荷瘤小鼠抑瘤作用明显,其机制可能与下调组蛋白去甲基化酶水平有关。     

鳖甲煎丸对H22荷瘤小鼠肿瘤血管抑制作用的研究

目的:研究鳖甲煎丸对H22荷瘤小鼠肿瘤血管的抑制作用。方法:建立H22荷瘤小鼠动物模型,随机分成四组:鳖甲煎丸高剂量组、鳖甲煎丸低剂量组、阴性对照组、环磷酰胺组。连续用药15 d。第15天处死小鼠,固定瘤块,HE染色,光镜观察并计算各组荷瘤小鼠肿瘤的微血管计数(MDC);用免疫组织化学方法检测各组荷瘤小鼠肿瘤组织的血管内皮生长因子(VEGF)及其表达强度。结果:鳖甲煎丸对H22荷瘤小鼠肿瘤组织的MDC及VEGF有显著抑制作用。结论:鳖甲煎丸抑瘤作用机制之一可能是通过抑制肿瘤组织的血管生成实现的。     

消癌解毒方体内抑瘤作用机制研究

目的:探讨消癌解毒方体内抗肿瘤作用的可能机制。方法:对荷瘤小鼠(H22肿瘤细胞株)用消癌解毒方煎剂剂量灌胃,观察光镜及电镜下肿瘤组织、细胞的形态,测定基质金属蛋白酶(MMP-2)含量。结果:消癌解毒方中剂量组凋亡细胞数量最大,并且所有消癌解毒方组中凋亡细胞除出现凋亡细胞一般的形态学改变,胞浆中可见大量吞饮空泡;消癌解毒方低剂量组外周血MMP-2水平显著降低(P<0.05),有统计学意义。结论:消癌解毒方对肿瘤抑制作用可能与其诱导肿瘤细胞凋亡,抑制MMP-2活性有关。     

补肾化瘀解毒方对小鼠肝癌H22的抑瘤增效作用

目的:探讨补肾化瘀解毒方水煎液对肿瘤的抑制和化疗的协同增效作用.方法:选择小鼠移植性肝癌H22为模型,分别观察补肾化瘀解毒方水煎液单用以及与顺铂(DDP)联合应用时的抑瘤率.结果:补肾化瘀解毒方水煎液对小鼠移植性肝癌H22有显著的抑制作用(P＜0.05),并能增强DDP对小鼠肝癌H22的抑瘤作用,但无统计学差异.结论:补肾化瘀解毒方水煎液对小鼠移植性肝癌有抑制作用,对化疗药物DDP有一定的协同增效作用.     

化积止痛巴布剂穴位贴敷配合益气化积方内服对H22荷瘤小鼠镇痛作用的影响

目的观察化积止痛巴布剂穴贴配合益气化积方内服对H22荷瘤小鼠镇痛作用的影响,探讨其作用机理。方法昆明种雌性小鼠50只,随机分为空白组、模型组、药物组、穴贴组、药物加穴贴组。空白组灌服生理盐水并穴贴无药涂膏,不接种瘤株;其余各组接种瘤株后,模型组灌服生理盐水并穴贴无药涂膏;药物组灌服中药益气化积方并穴贴无药涂膏;穴贴组灌服生理盐水并穴贴化积止痛巴布剂;药物加穴贴组灌服中药益气化积方并穴贴化积止痛巴布剂;连续用药14d。末次用药后30min,测定小鼠痛阈值,并计算痛阈提高百分率。结果药物加穴贴组、药物组及穴贴组能够不同程度提高小鼠的痛阈值和痛阈提高百分率,其中药物加穴贴组及药物组的痛阈与空白组和给药前的痛阈比较均具有明显变化（P〈0．01）。结论化积止痛巴布剂穴贴配合益气化积方内服能增加H22荷瘤小鼠的痛阈值及提高痛阈百分率。     

理冲汤加减联合5-氟尿嘧啶对H22荷瘤小鼠移植瘤上皮间质转化的影响

目的:探讨理冲汤加减联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对H22荷瘤小鼠皮下移植瘤上皮间质转化(EMT)的影响。方法:构建小鼠移植性肝癌模型。成瘤后,将其随机分为空白组,5-FU组(5-FU,2. 5 mg·kg-1),理冲汤加减联合5-FU组(5-FU+理冲汤加减组),理冲汤加减组(理冲汤加减25 g·kg-1),每组10只。观察理冲汤加减对小鼠皮下移植瘤的作用及与5-FU合用的效果;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组瘤体中EMT相关基因上皮型钙黏蛋白(E-cadherin),神经型钙黏蛋白(N-cadherin),锌指转录因子Snail,Twist mRNA表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组瘤体内EMT相关蛋白E-cadherin,N-cadherin,Snail,波形蛋白(Vimentin)的表达。结果:5-FU组,5-FU+理冲汤加减组,理冲汤加减组的抑瘤率分别为59. 18%,84. 42%,10. 39%,均能抑制肝癌移植瘤的生长,且5-FU+理冲汤加减组抑瘤率显著高于5-FU组(P 0. 01)。胸腺指数、脾指数显示,5-FU+理冲汤加减组胸腺指数与脾指数均高于5-FU组(P 0. 05,P 0. 01)。PCR显示,与空白组比较,5-FU组,5-FU+理冲汤加减组E-cadherin的表达上调,N-cadherin,Snail,Twist的表达下调(P 0. 05,P 0. 01);与5-FU组比较,5-FU+理冲汤加减组E-cadherin的表达上调,N-cadherin,Snail,Twist的表达下调(P 0. 05,P 0. 01)。Western blot显示,与空白组比较,5-FU组,5-FU+理冲汤加减组,理冲汤加减组E-cadherin的表达上调,N-cadherin,Snail,Vimentin的表达下调(P 0. 05,P 0. 01);与5-FU组比较,5-FU+理冲汤加减组E-cadherin的表达上调,N-cadherin,Snail,Vimentin的表达下调(P 0. 05,P 0. 01)。结论:理冲汤加减与5-FU单独和联合使用均对肝癌小鼠移植瘤的生长有抑制作用,且两药合用能增强化疗效果,且一定程度上抑制了5-FU的毒性,其机制可能与对肝癌EMT的抑制有关。     

消癌解毒方抗肿瘤作用的实验研究

目的 观察周仲瑛教授"癌毒"理论指导下经长期临床实践的有效抗癌方药--消癌解毒方的抗肿瘤作用.方法 采用体内试验以荷瘤小鼠实体瘤重、抑瘤率为实验指标评价消癌解毒方对S_(180)移植性肉瘤的抑制作用;以荷瘤小鼠存活时间为实验指标评价消癌解毒方对H_(22)移植性腹水癌的抑制作用.结果 消癌解毒方能明显抑制实体瘤重,并延长荷瘤小鼠存活时间.结论消癌解毒方对S_(180)、H_(22)诱发的移植性肿瘤具有一定的抑制作用.     

合欢皮总皂苷对H22荷瘤小鼠细胞免疫功能的影响

目的:观察合欢皮总皂苷对H22荷瘤小鼠CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群、细胞因子白细胞介素-2(IL-2)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,凋亡诱导因子(Fas),凋亡诱导因子配体(Fas L)和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的影响,探讨其对细胞免疫功能的干预机制。方法:昆明种小鼠60只随机分为正常组、模型组、环磷酰胺组、合欢皮总皂苷高、中、低剂量组,建立小鼠H22荷瘤模型。给药组分别按环磷酰胺20 mg·kg-1·d-1,合欢皮总皂苷4,2,1 mg·kg-1·d-1ip,连续治疗11 d后,检测抑瘤率,血清IL-2,TNF-α水平,免疫组化染色检测肿瘤细胞Fas,Fas L和PCNA蛋白的表达;苏木素-伊红(HE)染色观察肿瘤组织形态。结果:与模型组比较,合欢皮总皂苷高、中、低剂量组小鼠移植瘤的平均质量均显著下降(P0.05,P0.01),合欢皮总皂苷中剂量组能明显提高CD4+T细胞,CD8+T细胞数量(P0.05,P0.01),对CD4+/CD8+无影响,合欢皮总皂苷中、高剂量组IL-2水平明显上升(P0.05),TNF-α水平无变化,合欢皮总皂苷各剂量组Fas L,PCNA蛋白表达显著降低(P0.01),中、高剂量组Fas表达水平显著升高(P0.01)。结论:合欢皮总皂苷能够调节细胞免疫功能,其机制可能与其上调CD4+,CD8+T细胞亚群,促进IL-2分泌,提高Fas蛋白表达并抑制Fas L,PCNA蛋白表达有关。     

消癌解毒方联合FEC化疗对乳腺癌患者临床疗效的影响

目的:观察消癌解毒方联合氟尿嘧啶+表柔比星+环磷酰胺(5-FU+EPI+CTX,FEC)化疗方案对乳腺癌患者的免疫功能、肿瘤指标、中医证候积分、不良反应发生情况的影响。方法:将60例乳腺癌患者随机分为研究组和对照组,研究组进行FEC(CTX 0. 6 g·m~(-2),d1,EPI 100 mg·m~(-2),d1,5-FU 0. 5 g·m~(-2),d1)方案化疗,同时服用消癌解毒方制剂,连续服用2个周期,对照组单纯进行FEC方案化疗。2个周期后分析并比较两组的免疫功能、肿瘤指标、中医证候评分、不良反应发生情况的差异。结果:治疗前两组免疫指标相当,治疗后研究组免疫指标优于对照组(P 0. 05);治疗前两组患者癌胚抗原(CEA)和糖类抗原153(CA153)水平比较差异无统计学意义,与本组治疗前比较,治疗后两组CEA,CA153水平均明显下降,且研究组下降幅度更为明显(P 0. 05);两组治疗前胸胁不适、潮热盗汗、急躁易怒、口干口苦、睡眠积分比较差异无统计学意义,与本组治疗前比较,治疗后研究组中医证候积分低于对照组(P 0. 05);研究组患者不良反应发生率均低于对照组(P 0. 05)。结论:消癌解毒方联合FEC化疗能提高患者的免疫能力和临床疗效,改善患者的临床症状。     

消癌解毒方诱导人肝癌SMMC-7721细胞miRNA表达变化

目的:探讨消癌解毒方对人肝癌SMMC-7721细胞增殖及微小核糖核酸(microRNA,miR)-25-3p,miR-29a-5p,miR-122-3p,miR-124-3p,miR-182-5p表达谱的影响。方法:将12只雄性大耳白兔随机分为4组,分别为消癌解毒方高、中、低剂量(15.12,7.56,3.78 g·kg-1)组和空白组,各组分别给予消癌解毒方及生理盐水灌胃4 d。4 d后于颈动脉中取血清并配制培养基。用消癌解毒方(15.12,7.56,3.78 g·kg-1)含药血清及空白血清的培养基处理人肝癌细胞株SMMC-7721,噻唑蓝(MTT)比色法检测肿瘤细胞增殖活性、实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(Real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)法验证人肝癌细胞SMMC-7721中miR-25-3p,miR-29a-5p,miR-122-3p,miR-124-3p和miR-182-5p的表达水平。结果:经过12,24,48 h后,消癌解毒方(15.12,7.56,3.78 g·kg-1)含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖均存在抑制作用。随着消癌解毒方含药血清浓度的增加,其对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的抑制率也相应增加。其中高剂量组含药血清的抑制效果最好,其干预12,48 h的吸光度A较同期空白组明显降低(P0.05)。高剂量组干预24 h A比同期空白组显著降低(P0.01),该组抑制率为42.86%。Real-time PCR证实消癌解毒方(15.12,7.56,3.78 g·kg-1)含药血清的培养基能诱导miR-25-3p,miR-182-5p表达下调,诱导miR-29a-5p,miR-122-3p,miR-124-3p表达上调。且高剂量组的调控作用较空白组更显著(P0.01)。结论:消癌解毒方可能通过诱导miRNA表达谱的改变而参与抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖作用,但其具体机制仍有待进一步研究。     

益气活血解毒方对肾癌小鼠免疫功能调节作用机制的研究

目的：通过研究“益气活血解毒方”对动物细胞免疫CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞数量、CD4^＋／CD8^＋的比值及血清中IFN-γ的作用变化,探索其抗癌免疫作用机制。方法：以莪术、龙葵、白芍等药为基础制定益气活血解毒方,将30只BALB／c小鼠制备荷肾癌鼠模型,随机分为生理盐水空白对照组、氟尿嘧啶实验对照组、益气活血解毒方治疗组,对三组荷瘤小鼠进行血清IFN-γ含量检测、荷瘤小鼠脾T细胞亚群检测（CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞数量、CD4^＋／CD8^＋的比值）,做统计学分析。结果：与氟尿嘧啶和生理盐水对比,益气活血解毒方能够促进荷瘤小鼠外周血中IFN-γ的分泌,提高荷瘤小鼠脾脏中CD4^＋T细胞亚群和CD8^＋T细胞亚群的百分比和CD4^＋／CD8^＋比值,差别有显著性意义。结论：“益气活血解毒方”通过促进荷瘤小鼠外周血中IFN-γ的分泌及提高荷瘤小鼠脾脏中CD4^＋T细胞亚群和CD8^＋T细胞亚群数量,调节荷瘤小鼠免疫功能,抑制肿瘤生长。