一测多评法测定川芎中7种成分含量

目的:建立一测多评法(QAMS)测定川芎中绿原酸、川芎嗪、阿魏酸、洋川芎内酯A、正丁基苯酞、Z-藁本内酯、欧当归内酯A 7种成分的含量,并验证该法在川芎质量控制中应用的可行性。方法:以结构稳定的阿魏酸为内参物,确定其余6种化学成分的相对校正因子(fk/s),实现一测多评;同时采用外标法测定各化学成分的含量,比较其与QAMS法的差异。结果:确定了6种化学成分的相对校正因子(fk/s);6批川芎中7种成分QAMS法与外标法测定值间无显著差异。结论:QAMS法能准确地分析川芎中7种化学成分的含量,可用于川芎中多指标质量控制。     

基于HPLC多指标成分测定及指纹图谱多模式识别的不同产地不同品种当归质量差异分析

目的 建立当归Angelicae sinensis的HPLC指纹图谱并测定其主要有效成分的含量,结合多种化学计量学分析,确定不同产地不同品种(岷归1号、岷归2号)当归差异成分,为当归药材质量控制提供参考。方法 采用HPLC法建立不同品种当归的指纹图谱,并对指标成分进行含量测定。采用相似度评价、聚类分析(cluster analysis,CA)、因子分析、主成分分析(principal component analysis,PCA)、正交偏最小二乘法判别分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA)、Fisher线性判别分析进行数据分析。结果 HPLC指纹图谱共标定了不同品种当归中的16个共有峰,指认出绿原酸、阿魏酸、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、阿魏酸松柏酯、藁本内酯、丁烯基苯酞8个色谱峰。岷县产区当归的2个品种当归间存在差异的成分是绿原酸(P<0.01)、洋川芎内酯I(P<0.01)、洋川芎内酯H(P<0.01)、藁本内酯(P<0.01)和丁烯基苯酞(P<0.05),渭源产区的是洋川芎内酯I(P<0.01)、洋川芎内酯H(P<0.01)、洋川芎内酯A(P<0.01)、藁本内酯(P<0.01);临洮产区的是绿原酸(P<0.01)、阿魏酸(P<0.01)、阿魏酸松柏酯(P<0.01)、丁烯基苯酞(P<0.05);通渭产区的是阿魏酸(P<0.01)、洋川芎内酯H(P<0.05)、洋川芎内酯A(P<0.05)、藁本内酯(P<0.01)。结论 建立的HPLC指纹图谱结合含量测定、CA、因子分析、PCA、OPLS-DA分析可以客观、全面、有效地确定不同产地不同品种当归中主要有效成分的差异,可为当归品种鉴别及质量控制提供有力支撑。     

高效液相色谱法同时测定还脑益聪方中5种川芎成分含量

目的 建立还脑益聪方中阿魏酸、洋川芎内酯I、洋川芎内酯A、藁苯内酯和欧当归内酯A 5种成分含量测定方法,探究其物质基础。方法 采用高效液相色谱法,色谱柱AgilentExtend-C₁₈(4.6 mm×250 mm, 5μm);流动相：甲醇(A),0.3%磷酸溶液(B),乙腈(C);流速：1m L/min;柱温：30℃;检测波长：280nm。结果 还脑益聪方中川芎的5种化学成分均被检测到,建立的方法无阴性干扰,5种成分均达到良好的分离效果,标准曲线线性范围良好。结论 该方法简便稳定,重复性好,可用于还脑益聪方中川芎成分的定量检测,为还脑益聪方治疗AD的物质基础提供依据。     

当归根部中主要有效成分的动态积累和转化研究

目的 分析当归Angelica sinensis中阿魏酸和藁本内酯等主要有效成分在其根部的积累规律和转化机制。方法 采用HPLC法测定不同生长期当归根部中阿魏酸、阿魏酸松柏酯和藁本内酯等8种苯酞类挥发油成分的含量,结合体外转化研究成果进行分析。结果 阿魏酸和阿魏酸松柏酯含量从苗期到根膨大期沿着相同的方向不断增加,而从根膨大期到收获期分别逐渐降低和升高,朝2个相反的方向变化,提示在当归体内可能存在阿魏酸和松柏醇转化为阿魏酸松柏酯的过程。藁本内酯和5种转化产物含量总体随生长期呈现上升趋势,尤其从根膨大期到成药期增长速度极快,符合成药期特性;藁本内酯含量远远大于其他6种苯酞类转化产物洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、阿魏酸松柏酯、洋川芎内酯A、正丁基苯酞、欧当归内酯的含量,提示在当归活体内藁本内酯的转化程度不高,具体转化机制有待进一步研究。结论 阿魏酸和藁本内酯在不同生长期具有不同的积累和转化规律,可为当归药材生产、炮制和质量评价提供理论支持。     

基于HPLC指纹图谱和多成分含量测定的辽藁本质量评价研究

目的 建立辽藁本的HPLC指纹图谱及多成分含量测定方法.方法采用Thermo AcclaimTM 120 C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);以乙腈(A)-0.1％甲酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0mL/min;检测波长280 nm;柱温为30℃,同时测定15批辽藁本指纹图谱及相关成分...     

基于一测多评法的当归药材质量控制研究

目的 建立一测多评法（quantitative analysis of multi-components by a single marker，QAMS）同时测定当归中阿魏酸、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、阿魏酸松柏酯、藁本内酯和丁烯基苯酞的含量。方法 采用Waters X-Select CSH色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以0.085%磷酸-水溶液（A）-乙腈（B）为流动相，梯度洗脱，体积流量1.0 mL/min，柱温40 ℃，检测波长265 nm。结果 在线性范围内各成分线性良好（R²＞0.999）。以藁本内酯为内标，阿魏酸、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、阿魏酸松柏酯和丁烯基苯酞的相对校正因子分别为1.073 4、0.564 8、0.468 1、0.926 2、1.083 5；同时采用外标法测定这6个成分的含量，将2种方法进行分析比较，结果没有明显差异。结论 建立了当归药材中阿魏酸、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、阿魏酸松柏酯、藁本内酯和丁烯基苯酞6个成分的QAMS法，该法可用于当归的质量控制。     

近红外光谱法快速测定山银花中四种有机酸

目的：建立近红外光谱（Near-Infrared Spectroscopy,NIR）快速检测山银花提取过程中四种有机酸含量的方法。方法：采集山银花NIR图谱,以高效液相色谱法为参考方法测定绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B和异绿原酸C的含量。采用偏最小二乘法（Partial Least square,PLS）建立定量校正模型。结果：校正模型中绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B和异绿原酸C的相关系数R分别为0.997 6、0.997 0、0.979 2、0.998 9,内部交叉验证均方根误差（RMSECV）分别为0.039 4、0.014 4、0.007 3、0.007 8;预测结果中上述成分对应的相关系数分别为0.892 0、0.827 9、0.878 4、0.995 1,预测均方根误差（RMSEP）分别为0.045 0、0.013 5、0.007 8、0.008 0,相对预测 偏差（RSEP）分别为0.351 0%、0.018 0%、0.040 0%、0.005 7%。结论：所建近红外检测方法快速、准确,可用于山 银花四种有机酸的快速检测。     

近红外漫反射光谱法快速测定当归中正丁基苯酞含量

目的建立近红外光谱(NIR)定量模型快速测定当归中正丁基苯酞含量的方法。方法采集甘肃及云南14个县级主产区的145批当归样本,将全归阴干,以反相高效液相色谱二极管阵列检测器(RP-HPLC-DAD)测定的正丁基苯酞含量为化学参考值,以积分球漫反射方式扫描NIR,采用偏最小二乘(PLS)法在7415~4056 cm-1波数范围建立定量校正模型。结果所建模型对校正集样品的预测值和真实值之间的相关系数(Rc)、校正均方差(RMSEC)、预测均方差(RMSEP)、交叉验证相关系数(Rcv)、交叉验证均方差(RMSECV)和平均预测回收率分别为0.976 7、0.614 3、0.706 5、0.897 8、1.155 4和102.08%。结论该模型的预测结果准确、可靠,可用于当归中正丁基苯酞含量的快速测定。     

UPLC法同时测定佛手散水煎剂中4种药效成分含量

目的:建立同时测定佛手散水煎剂中阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、洋川芎内酯A和藁本内酯含量的UPLC方法。方法:采用Eclipse plus C₁₈色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.8μm),流动相为甲醇-0.2%乙酸水体系梯度洗脱,流速0.2 ml/min,检测波长280 nm,进样量5μl。结果:阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、洋川芎内酯A和藁本内酯分别在11.97～382.90μg/ml、9.83～314.50μg/ml、3.04～97.21μg/ml、0.86～27.62μg/ml内与峰面积呈良好的线性关系;精密度、重复性和稳定性良好;回收率分别为100.47%、98.18%、96.56%和98.98%。结论:所建立的UPLC法简便、准确、精密度高,适用于测定佛手散水煎剂中阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、洋川芎内酯A及藁本内酯的含量,可为复方佛手散水煎剂的质量控制提供科学依据。     

近红外光谱法快速测定升麻中异阿魏酸含量

目的采用近红外光谱技术,建立快速测定升麻中异阿魏酸含量的方法。方法以高效液相色谱法测定异阿魏酸的含量,运用近红外技术采集54份升麻样品的光谱图,经过标准正态变换(SNV)和二阶导数的光谱预处理方法,采用偏最小二乘回归(PLS)方法建立升麻中异阿魏酸含量测定的近红外定量模型,并验证已建立的定量模型。结果模型的相关系数(R)为0.983 76,校正均方差(RMSEC)为0.004 67,预测误差均方根(RMSEP)为0.026 7。结论该方法简便高效,实验建立的模型性能较好,对升麻中异阿魏酸含量的预测准确可靠。     

基于质量标志物的当归血管舒张功效的近红外快速评价

目的基于当归Ca2+拮抗作用的质量标志物(Q-marker),建立一种利用近红外光谱快速评价当归扩血管功效的方法。方法采用UPLC/Q-TOF结合Ca2+双荧光报告系统对当归药材的Ca2+拮抗成分进行谱效筛选,并通过细胞和离体实验评价确立Q-marker。对多批药材中的Q-marker进行含量分析,并获取其近红外光谱,建立其近红外拟合算法。将当归提取物的整体Ca2+拮抗活性与Q-marker的含量相关联构建量效拟合函数。结果研究发现藁本内酯(X1)和欧当归内酯A(X2)具有明显的Ca2+拮抗作用,且其含量波动与当归提取物的整体活性(Y)的变化相吻合,确认其为Q-marker。经非线性回归分析,确认其量效关系符合下列函数方程:Y=31.257 9 X1+381.352 0 X2-248.979 0 X1X2+18.482 2。所优化的近红外检测方法,其预测值与真实值展示了良好的相关性。结论整合Q-marker研究结果,确立了当归血管舒张作用的Q-marker,以及其与当归药材整体活性之间的非线性关系,并利用近红外光谱技术实现了当归药材血管扩张功效的快速评价,为中药品质的快速分析提供新的解决方案。     

当归肌动蛋白基因片段的克隆及序列分析

目的 对当归肌动蛋白(Actin)基因进行克隆及序列分析.方法 根据已经克隆的植物Actin基因的保守序列设计一对简并性引物,以当归根部总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增Actin基因片段并连接到pMD19-T载体上,阳性克隆经PCR检测后进行测序.结果 得到一段598 bp的序列,序列分析表明,该片段编码198个氨基酸,与高等植物Actin基因核苷酸序列同源性在83％以上,与其他肌动蛋白氨基酸序列同源性达94％以上.结论 首次从当归中克隆出了Actin基因,为有效利用该基因奠定了基础.     

当归的形态变化特征与物质积累进程

目的 通过研究当归成药期的形态变化特征及物质积累进程,为当归的规范化种植提供参考。方法 以当归为材料进行田间试验,定期取样并测定茎叶性状,根部性状,根部浸出物、挥发油、有机酸、多糖、阿魏酸和Z-藁本内酯质量分数等。结果 株高、叶数和叶鲜/干质量在成药期呈先升高后降低的趋势,根长、根粗和根鲜/干质量在成药期呈升高的趋势,浸出物、挥发油、有机酸、多糖、阿魏酸和Z-藁本内酯的质量分数和总量在成药期均呈升高的趋势。结论 茎叶生物量的积累进程快于根部生物量,且浸出物、挥发油、有机酸、多糖、阿魏酸和Z-藁本内酯的积累进程从属于根部生物量。     

基于ITS2序列鉴别道地药材岷县当归及其混伪品

目的利用核糖体r RNA基因内转录间隔区(ITS2)序列,对甘肃道地药材岷县当归(岷归)及其混伪品和近缘属药材进行鉴定分析。方法对供试材料ITS2序列进行PCR并双向测序,所得序列经Codon Code Aligner校对拼接后,利用MEGA 6.0对序列进行分析比对,计算种内、种间遗传距离,利用邻接法(NJ)构建系统聚类树,并应用ITS2数据库网站预测其ITS2二级结构。结果经PCR扩增测序,15份甘肃栽培当归与标准样品岷归1号序列比对无差异,序列长度230 bp,GC含量为55.46%,37份当归混伪品与近缘属药材ITS2序列长度为228～233 bp,GC含量为51.53%～65.65%。岷归与混伪品、近缘属药材共53条序列中共检测到变异位点220个,保守位点10个,信息位点213个。根据K2P遗传距离计算,岷县当归种内遗传距离明显小于种间遗传距离,基于ITS2序列构建的NJ树和网站预测的ITS2二级结构,均能将岷归与其混伪品和近缘属药材区分。结论 ITS2序列可作为当归鉴定的DNA条形码,为当归市场的健康可持续发展提供有效的技术手段。     

当归咖啡酸-O-甲基转移酶基因克隆和序列分析

目的克隆当归Angelica sinensis咖啡酸-O-甲基转移酶(caffeic acid O-methyltransferases,COMT)编码基因全长c DNA,并对序列进行生物信息学分析。方法提取当归叶片总RNA为c DNA合成模板,利用同源克隆结合c DNA末端快速扩增(RACE)技术克隆当归COMT全长c DNA,并利用NCBI、Ex PASy网站上的Blast N、Blast P、ORF Finder、Compute PI/Mw、Prot Scale、PROSITE、SWISS-MODEL等序列在线分析工具和MEGA、DNAMAN生物信息学软件对序列进行分析。结果获得COMT全长c DNA序列,并在Gen Bank注册(登录号KP188587)。序列分析表明,克隆的c DNA全长为1 436 bp,其中包括5’-UTR(76 bp)和3’-UTR(362 bp),含有1个1 098 bp的完整开放阅读框(opening reading frame,ORF),编码365个氨基酸的多肽链;预测蛋白质相对分子质量为40 230,理论等电点(p I)为5.43;无信号肽,具有典型的II型氧甲基转移酶结构域SAM_OMT_II。结论首次克隆当归COMT基因全长c DNA,为当归COMT基因功能研究和当归阿魏酸生物合成与调控的机制研究奠定基础。     

离子辐射选育当归新品种安全性评价

目的对离子辐射选育当归新品种进行安全性评价。方法采用气相色谱法测定有机氯类农药残留量;电感耦合等离子体质谱法测定Pb、Cd、Cu含量;测汞仪测定Hg含量;原子荧光法测定As含量。以总灰分、酸不溶性灰分、重金属及有害元素含量为指标,利用灰色关联度法,结合小鼠急性毒性实验,对样品安全性进行综合评价。结果辐射选育当归新品种岷归3号、岷归4号药材中有机氯类农药残留量、重金属和有害元素含量符合《中华人民共和国药用植物及制剂进出口绿色行业标准》规定。灰色关联度法对样品安全性进行综合评价表明,岷归3号、岷归4号整体安全性优于其他样品。当归不同部位对重金属及有害元素的富集程度不同,归头对重金属Pb、Cd、Cu的富集程度较高,归尾对重金属As、Hg的富集程度较高,归身对重金属的富集程度相对较低。小鼠急性毒性实验未测得ig给药小鼠半数致死量(LD50),而小鼠对其最大耐受量为120 g/kg,相当于临床成人(60 kg)最大用量的480倍。结论当归辐射选育品种药材无明显毒性,临床常用量安全可行。     

海拔对当归中阿魏酸量的影响及关键因子分析

目的 在不同海拔进行当归Angelica sinensis生态适应性实验,探索影响当归阿魏酸积累的关键因子.方法 通过田间实验测定当归阿魏酸量的变化和生理生化指标、光合参数、生态因子.结果 当归根中阿魏酸量随海拔升高而增加,且海拔2780m处理比海拔2360m处理高14.5％,差异显著(P＜0.05).分析影响当归阿魏酸积累的关键因子表明,降雨量(r=0.8988)和温度(r=-0.7991)是关键生态因子,可溶性糖(r=-0.9749)和超氧化物歧化酶(SOD)(r=-0.8408)是关键生理生化因子,湿度(r=0.9699)和光合活性辐射(r=0.9467)是关键光合参数因子.结论 适当升高种植海拔,增加降雨量和湿度,降低温度和可溶性糖量均有利于当归中阿魏酸的转化积累.