靶向survivin基因的小干扰RNA对食管癌细胞Eca-109 化疗敏感性的影响

目的 利用RNAi (RNA interference, RNAi) 技术抑制食管癌Eca-109细胞survivin基因表达,观察survivin基因沉默后对Eca-109细胞化疗敏感性的影响。方法 构建靶向survivin基因特定序列的小干扰RNA(small interference RNA, siRNA)真核表达载体并转染Eca-109细胞,筛选得到稳定转染的survivin干扰组细胞Eca-109 /si-survivin,同时设转染无关干扰质粒的Eca-109细胞为阴性对照组,未转染的Eca-109细胞为空白对照组;通过Western Blot法检测干扰前后survivin基因沉默抑制效果;随后将各组细胞与不同浓度的氟尿嘧啶(5-Fu)作用,MTT法检测各组细胞对5-Fu的半数抑制浓度(IC₅₀),流式细胞仪分析各组细胞的凋亡率。结果 干扰组Eca-109 /si-survivin细胞survivin蛋白表达水平(18.75±3.12)较阴性对照组Eca-109 /si-control(44.17±3.15)及空白对照组Eca-109 (46.20±2.62)明显下调(P<0.05);联合应用5-Fu的Eca-109 /si-survivin干扰组细胞IC₅₀为(18.75±1.53)mg·L-1,显著低于空白对照组(39.65±1.75)mg·L-1和阴性对照组(38.95±1.34)mg·L-1,差异具有统计学意义(P<0.05);联合应用5-Fu的Eca-109 /si-survivin干扰组细胞凋亡率为(37.35±1.52)%,明显高于空白对照组(11.26±1.21)%和阴性对照组(12.34±1.32)%,差异具有显著性(P<0. 05)。 结论 靶向survivin的siRNA能特异性沉默survivin基因表达,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,并增强人食管癌Eca-109细胞对5-Fu的化疗敏感性。     

Cyclin L2在化疗诱导肝癌细胞凋亡中的作用

目的探讨cyclin L2基因在化疗药物顺铂（DDP）、5-氟尿嘧啶（5-FU）和多西紫杉醇（Doc）诱导的肝癌细胞凋亡中的作用。方法用肝癌SMMC7721细胞株进行培养传代,MTT试验检测DDP、5-FU和Doe不同药物浓度对肝癌细胞生长的抑制作用,以及cyclin L2转染及反义转染后对该细胞生长抑制作用的影响。用流式细胞术定量检测细胞凋亡。结果不同浓度DDP、5-FU和Doc对肝癌细胞生长均有明显的浓度依赖性抑制作用。细胞凋亡率和cyclinL2基因表达率成正相关。在5-FU和DDP作用下,cyclin L2转染组凋亡率均高于对照组（P〈0．01）,反义转染组细胞凋亡率低于对照组（P〉0．05）。结论Cyclin L2基因在化疗药物诱导肝癌细胞凋亡中起重要作用。     

靶向沉默SSBP1基因对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移的影响

目的 观察靶向沉默线粒体单链DNA结合蛋白(SSBP1)基因对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移的影响.方法 设计并构建靶向SSBP1 基因的特异性siRNA,采用脂质体介导瞬时转染肝癌HepG2细胞,细胞分3组:对照组、空白转染组、转染组.Real time-PCR和Western-blot检测靶向干扰后SSBP1 mRNA和蛋白表达变化.CCK-8法检测细胞增殖.流式细胞仪检测细胞周期、凋亡率及线粒体膜电位.划痕实验及Transwell 侵袭实验检测细胞侵袭转移能力.Western-blot检测增殖、侵袭转移相关基因蛋白表达状况.结果 SSBP1 siRNA能够显著抑制SSBP1 mRNA和蛋白表达.与对照组和空白转染组比较,转染SSBP1 siRNA后HepG2细胞增殖能力、G2期和S期细胞比例、线粒体膜电位明显降低,G1期细胞比例、细胞凋亡率明显升高(P<0.05);同时细胞增殖相关基因PCNA、凋亡抑制基因Bcl-2、转移相关基因MMP-9蛋白表达显著下调,凋亡诱导基因Bax蛋白表达显著上调(P<0.05).结论 靶向沉默SSBP1基因能够通过线粒体途径抑制肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移,并诱导其凋亡.     

survivin基因在化疗药物诱导的肺癌细胞凋亡中的作用

目的　探讨survivin基因在化疗药物顺铂 (DDP)和足叶乙苷 (VP16 )诱导的肺癌细胞凋亡中的作用。方法　用肺腺癌A5 4 9细胞株进行培养传代 ,MTT试验检测DDP和VP16不同药物浓度对肺癌细胞生长的抑制作用 ,实验分为 :DDP、VP16和对照组。DDP和VP16组的肺癌细胞又分为高浓度和低浓度化疗药物处理组。用逆转率PCR检测sur vivin基因的表达。同时利用流式细胞术定量检测细胞凋亡。结果　不同浓度VP16和DDP对肺癌细胞生长均有明显的抑制作用 ,并有浓度和时间的依赖性。化疗药物组细胞凋亡率和survivin基因表达抑制率高于对照组 ,也有时间依赖性。结论　survivin基因的抑制在DDP和VP16诱导肺癌细胞凋亡中起重要作用     

Reg Ⅳ基因对5-FU干预结直肠癌LoVo细胞增殖、凋亡的影响

目的 观察Reg Ⅳ基因对5-FU干预结直肠癌LoVo细胞增殖、凋亡的影响.方法 构建重组质粒pcDNA3.1-RegⅣ并转染LoVo细胞,RT-PCR和细胞免疫组化检测转染前后细胞中Reg Ⅳ基因的mRNA和蛋白表达.终浓度80 μmol/L的5-FU干预细胞48 h后,MTT检测细胞的增殖活性.平板克隆实验观察细胞的克隆形成能力.FCM检测细胞凋亡.结果 LoVo细胞不表达Reg Ⅳ基因,转染后的LoVo/RegⅣ细胞高表达RegⅣ.5-FU干预后,未转染组(LoVo)和空转质粒组(LoVo/空载)细胞增殖活性、克隆形成能力较RegⅣ转染组(LoVo/RegⅣ)明显降低(P<0.05),细胞凋亡率较RegⅣ转染组明显升高(P<0.05).结论 RegⅣ基因表达可能降低5-FU抑制LoVo细胞的增殖活性及克隆形成能力,并能抑制5-FU诱导LoVo细胞凋亡的作用.Reg Ⅳ基因可能是患者对5-FU化疗产生抗药性的标志及导致临床化疗失败的原因之一.     

抑制IGF2基因的siRNA表达载体对肝癌Huh-7细胞增殖的抑制作用

目的:研究抑制人胰岛素样生长因子2(IGF2)基因的siRNA表达载体对肝癌Huh-7细胞增殖的抑制作用。方法:将重组人甲胎蛋白(hAFP)和人端粒酶逆转录酶(hTERT)双启动子调控抑制IGF2基因的siRNA表达载体pGL3-h AFP-hTERT-siRNA3(简称siRNA3)转染Huh-7细胞和正常肝L-02细胞,另设阴性对照(载体p GL3-hAFP-hTERT)组和空白对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测各组细胞转染48 h后IGF2 mRNA表达;酶标仪检测转染0、24、48、72 h后的细胞活性;流式细胞仪检测转染48h后细胞周期、细胞凋亡;Western blot法检测细胞IGF2、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白(Cyclin)E2、Cyclin D2、Cdc2、Bcl-2蛋白表达水平。结果:与阴性对照组和空白对照组比较,转染siRNA3的Huh-7细胞中IGF2 mRNA表达明显减弱,转染48、72 h后Huh-7细胞活性明显降低,G1期Huh-7细胞明显增加,S期Huh-7细胞明显减少;Huh-7细胞早期、晚期及总凋亡百分比均明显增加,IGF2、PCNA、Cyclin E2、Cyclin D2、Cdc2和Bcl-2蛋白表达均明显减弱,以上差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。转染siRNA3表达载体的L-02细胞上述指标均无明显变化(P>0.05)。结论:重组hAFP和hTERT双启动子调控针对IGF2基因的siRNA可特异性抑制Huh-7细胞IGF2表达及细胞增殖,其可能与下调IGF2 mRNA及蛋白表达,进而引起细胞增殖相关基因PCNA、细胞周期调控相关基因Cyclin E2、Cyclin D2、Cdc2及细胞凋亡调控相关基因Bcl-2蛋白表达下调有关。     

人生长激素对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨人生长激素对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖和凋亡的影响。方法:建立乳腺癌裸鼠移植瘤模型,将40只裸鼠随机分为:对照组、重组人生长激素(rhGH)组、5-氟尿嘧啶(5-FU)组和rhGH+5-FU组,各组腹腔注射给药,2周后观察各组药物对肿瘤生长的影响。分别采用MTT法和免疫组化检测肿瘤细胞增殖,TUNEI法检测移植瘤组织的细胞凋亡。结果:5-FU组和rhGH+5-FU组的肿瘤质量、PI及S期的人乳腺癌细胞数均明显小于对照组(P<0.01),AI、G0/G1期人乳腺癌细胞数均明显大于对照组(P<0.05或P<0.01);rhGH+5-FU组的PI及G2M期人乳腺癌细胞数均明显小于5-FU组(P<0.05)。结论:人生长激素在体内对人乳腺癌细胞既无明显的增殖作用,也无明显的凋亡作用,但与5-FU联用后能增强化疗对MCF-7乳腺癌细胞的效果,且具有协同作用。     

二甲双胍增强子宫内膜癌顺铂化疗敏感性及其可能机制

目的探讨二甲双胍(Met)增强子宫内膜癌顺铂(DDP)化疗敏感性及其可能机制。方法体外培养子宫内膜癌Ishikawa细胞,采用不同浓度的Met和DDP单药或联合用药处理。MTT检测各组细胞的增殖活性,流式细胞术检测两药单用及合用对Ishikawa细胞凋亡和周期的影响,Western blot法检测药物干预后子宫内膜癌细胞内胰岛素生长因子1(IGF-1)和雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达量的变化。结果 Met呈浓度和时间依赖性增强DDP对Ishikawa细胞增殖的抑制(P<0.05)。与Met或DDP单药组比较,联合用药组细胞的凋亡率高(P<0.05),Ishikawa细胞中G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例降低,IGF-1和mTOR蛋白表达水平下降(P<0.05)。结论 Met不仅能对子宫内膜癌细胞的增殖产生抑制作用,同时也可以增强DDP对子宫内膜癌化疗的敏感性,其作用机制可能与Met降低IGF-1和mTOR的表达有关。     

姜黄素固体脂质纳米粒单用或与顺铂联用对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用研究

目的:研究姜黄素固体脂质纳米粒(Cur-SLN)单用或与顺铂(DDP)联用对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用。方法:单用试验,分组为空白对照组、Cur组、Cur-SLN组(均以Cur计,终浓度为10、20、40、60、80μmo·lL-1);联用试验,分组为空白对照组、DDP组、DDP+Cur组及DDP+Cur-SLN组,各组DDP终浓度为1、2、3、4、5μmo·lL-1,Cur终浓度均为10μmo·lL-1,检测上述各组分别对SKOV3细胞作用24、48、72h后细胞的生长抑制率。另设立空白对照组、DDP组、Cur组、Cur-SLN组、DDP+Cur组及DDP+Cur-SLN组(DDP终浓度均为2.5μmo·lL-1,Cur终浓度均为10μmo·lL-1),检测各组对SKOV3细胞作用24h后细胞凋亡率及细胞周期调控因子Cyclin E、CDK2的表达。结果:相同浓度下,与Cur组比较,Cur-SLN组作用不同时间后细胞生长抑制率均明显升高(P<0.05);与DDP组比较,DDP+Cur组和DDP+Cur-SLN组细胞生长抑制率均明显升高(P<0.05),且DDP+Cur-SLN组明显高于DDP+Cur组(P<0.05);与空白对照组比较,5个药物组细胞阻滞主要发生在G2期,细胞凋亡率和Cyclin E、CDK2表达均明显升高(P<0.05或P<0.01),且DDP+Cur-SLN组明显高于其他组(P<0.05)。结论:Cur-SLN对人卵巢癌SKOV3细胞有明显的生长抑制及促凋亡作用,且与DDP联用有协同效果。     

Bcl-XL siRNA对人胃腺癌MGC-803细胞药物敏感性的影响

目的:研究靶向Bcl-XL基因的小干扰RNA对胃腺癌MGC-803细胞Bcl-XL基因表达的作用及对药物敏感性的影响。方法:构建的Bcl-XLsiRNA载体或阴性siRNA并稳定转染到胃癌MGC-803细胞,G418抗生素筛选阳性克隆,克隆扩大培养,免疫荧光观察细胞蛋白表达。用不同浓度的5-FU或DADS处理稳定转染细胞,MTT观察细胞增殖的变化。用一种浓度的5-FU或DADS处理稳定转染细胞,流式细胞术观察亚G1细胞的比例。结果:免疫荧光结果表明,Bcl-XLsiRNA稳定转染组细胞中Bcl-XL蛋白的表达比阴性siRNA稳定转染组细胞Bcl-XL基因的表达均有明显的降低。当不同浓度的5-FU(13、130、1 300、13 000 mg.L-1)或DADS(20、35、50mg.L-1)处理细胞24 h后,MTT结果表明Bcl-XLsiR-NA细胞组A570吸光度值较阴性siRNA细胞组和未转染对照明显降低,细胞生长抑制率明显增高。5-FU或DADS药物的IC50值在Bcl-XLsiRNA细胞组有明显降低。使用5-FU(130 mg.L-1)或DADS(50mg.L-1)处理细胞24 h后,流式结果表明,Bcl-XL-siRNA细胞组较阴性siRNA和正常对照细胞组亚G1细胞比例有明显增高。结论:Bcl-XL siRNA下调了MGC-803细胞Bcl-XL基因的表达;Bcl-XLsiRNA能够促进MGC-803细胞凋亡,增强细胞对化疗药物的敏感性。