过氧化氢致H9c2大鼠心肌细胞DNA损伤作用

目的 研究不同浓度过氧化氢(H2O2)对H9c2大鼠心肌细胞DNA损伤及诱导细胞凋亡的作用.方法 H9c2心肌细胞处理组分别暴露于50,100,200,400μmol/L H2O2中1,3,6,12,24 h后,采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;采用丫啶橙/溴乙锭(AO/EB)双染技术观察细胞凋亡;利用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)观察细胞DNA损伤.结果 H2O2可以引起H9c2心肌细胞损伤,随时间呈剂量效应关系(P<0.05),其中24 h,400μmol/L剂量组细胞存活率最低达40.6%.H2O2可诱导H9c2心肌细胞出现凋亡并观察到明显的凋亡形态学的改变,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中6 h时,100 μmol/L剂量组细胞凋亡最明显,凋亡率达22.2%.H2O2可引起H9c2心肌细胞DNA损伤,且损伤随剂量增加而增大(P<0.01),以400 μmol/L剂量组最为明显,细胞DNA损伤率可达64.0%.结论 H2O2造成H9c2心肌细胞氧化损伤和DNA损伤,随着其暴露剂量和时间的不同表现为凋亡和坏死.     

铅致大鼠心肌细胞损伤中蛋白激酶C对缝隙连接蛋白43表达的调控作用

目的 研究醋酸铅染毒大鼠心肌细胞株（H9c2）后蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）、缝隙连接蛋白43（connexin 43，Cx43）及其磷酸化蛋白的表达变化，探讨心肌损伤过程中PKC对Cx43的调控作用。方法 （1）将对数生长期H9c2随机分组，以醋酸铅0、5、10、20 μmol/L梯度浓度处理细胞12 h。（2）将对数生长期H9c2细胞随机分为对照组、醋酸铅组、醋酸铅＋佛波酯（phorbol 12-myristate 13-acetate，PMA）组和PMA组。PMA预处理后的醋酸铅+PMA组、醋酸铅组细胞均给予10 μmol/L醋酸铅染毒12 h，PMA组不予染毒。（3）检测各组H9c2细胞培养上清乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）活性；采用蛋白质印迹法（Western blot）检测各组H9c2细胞内Cx43、PKC蛋白相对表达含量及s368位点的Cx43磷酸化水平。结果 10、20 μmol/L醋酸铅染毒的H9c2细胞存活率较对照组明显降低（P<0.05）；10、20 μmol/L醋酸铅组H9c2细胞培养液LDH活性较对照组显著升高（P<0.05）；5、10、20 μmol/L醋酸铅组Cx43、p-Cx43s368、PKC蛋白相对表达含量与对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05），且呈浓度依赖性降低；20 μmol/L醋酸铅组p-Cx43/Cx43显著低于对照组（P<0.05）。与对照组相比，醋酸铅组、醋酸铅+PMA组H9c2细胞培养液LDH活性显著升高（P<0.05），醋酸铅+PMA组细胞培养液LDH活性显著低于醋酸铅组（P<0.05）。与对照组相比，醋酸铅组、醋酸铅+PMA组细胞内Cx43蛋白相对表达含量降低，差异均有统计学意义（P<0.05）；醋酸铅+PMA组Cx43蛋白相对表达含量显著高于醋酸铅组（P<0.01）。结论 铅致心肌细胞损伤机制可能与PKC、Cx43及其磷酸化蛋白表达降低有关，PKC信号通路对Cx43表达具有调控作用。     

miR-137靶向下调SETD7表达对缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激的影响研究

目的探讨miR-137对缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤的作用及其机制。方法心肌细胞H9C2分为空白组、缺氧复氧组、缺氧复氧组+miR-con、缺氧复氧+miR-137组、缺氧复氧+miR-137+pcDNA组、缺氧复氧+miR-137+pcDNA-SETD7组。qPCR检测H9C2细胞中miR-137和SETD7 mRNA表达,Western blot检测SETD7、Cyclin D1、Cleaved Caspase-3蛋白表达,MTT法检测细胞增殖,比色法检测LDH、MDA水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,TargetScan预测结合双荧光素酶报告实验分析miR-137和SETD7的靶向关系。结果缺氧复氧明显降低H9C2细胞中miR-137、Cyclin D1表达量和细胞存活率(P<0.05),显著提高SETD7 mRNA及蛋白水平、LDH活性、MDA含量、Cleaved Caspase-3蛋白水平和细胞凋亡率(P<0.05)。上调miR-137表达促进缺氧复氧处理H9C2细胞内miR-137、Cyclin D1表达量和细胞存活率(P<0.05),明显降低SETD7蛋白、LDH、MDA、Cleaved Caspase-3水平和细胞凋亡率(P<0.05)。miR-137靶向调控SETD7表达。过表达SETD7部分逆转miR-137保护缺氧复氧处理H9C2细胞的作用。结论 miR-137通过靶向下调SETD7表达来促进缺氧复氧处理的心肌细胞增殖并抑制细胞凋亡,保护缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激损伤。     

薯蓣皂甙对缺氧心肌细胞肌钙蛋白和细胞内游离钙离子浓度的影响

目的探讨薯蓣皂甙对缺氧心肌细胞的保护作用。方法离体心肌细胞培养基础上制备心肌细胞缺氧模型,随机分为3组:正常对照组,缺氧损伤组和薯蓣皂甙组。分别测定各组细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和肌钙蛋白I(cTnI)的含量以及心肌细胞内游离钙离子的浓度(FURA2/AM荧光探针法)。结果缺氧损伤组心肌细胞培养液中的LDH(7.225±1.129u/L)和cTnI的含量(0.851±0.149μg/m l)以及心肌细胞内游离钙离子的浓度(716.15±164.11 n mol/L)均较正常对照组显著上升(P均<0.01),经薯蓣皂甙干预后LDH(4.534±0.872u/L)和cTnI(0.682±0.091μg/m l)的水平以及心肌细胞内游离钙离子的浓度(479.99±57.94 n mol/L)均较损伤组显著降低(P均<0.01)。结论薯蓣皂甙可以保护缺氧损伤的心肌细胞,其作用可能与降低细胞内钙超负荷有关。     

不同剂量亚砷酸钠暴露不同时间对HaCaT细胞活性氧的影响

目的 探索不同剂量亚砷酸钠暴露不同时间对诱导人永生化角质形成(HaCaT)细胞活性氧(ROS)产生的影响以及低剂量亚砷酸钠预处理HaCaT细胞对诱导ROS水平改变的时间效应.方法 设未预处理组[分别加入终浓度为0(对照)、0.15、0.6、2.5、10 μmol/L的亚砷酸钠染毒8、24、72 h]和预处理8h组(加入0.15μmol/L亚砷酸钠预处理8h后,加入10 μmol/L亚砷酸钠染毒8h)及预处理24 h组(加入0.15 μmol/L亚砷酸钠预处理24 h后,加入10 μmol/L亚砷酸钠染毒8h).利用2’,7’-二乙酰二氯荧光素(DCFH-DA)通过流式细胞仪检测细胞内ROS水平.结果 与对照组比较,各浓度亚砷酸钠染毒8h和0.6、2.5、10μmol/L亚砷酸钠染毒24 h及0.6、2.5 μmol/L亚砷酸钠染毒72 h后HaCaT细胞内ROS水平均较高,而0.15、10μmol/L亚砷酸钠染毒72 h后HaCaT细胞内ROS水平均较低,差异有统计学意义(P＜0.05).亚砷酸钠染毒8h时,HaCaT细胞内ROS水平达到峰值;之后,低剂量(0.15、0.6 μmol/L)亚砷酸钠染毒组HaCaT细胞内ROS水平于24 h下降,72 h有所回升,而高剂量(≥2.5 μmol/L)亚砷酸钠染毒组HaCaT细胞内ROS水平则呈持续下降.预处理8h组HaCaT细胞内ROS水平高于预处理24h组,差异均有统计学意义(P＜0.05);与10 μmol/L亚砷酸钠染毒未预处理HaCaT细胞8h组比较,预处理8h组HaCaT细胞内ROS水平较高,预处理24 h组HaCaT细胞内ROS水平较低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 HaCaT细胞急性暴露于亚砷酸钠后能够引起HaCaT细胞内ROS产生增加,而不同剂量亚砷酸钠暴露诱导HaCaT细胞ROS水平的改变与暴露时间密切相关,且低剂量亚砷酸钠暴露对HaCaT细胞产生的适应性反应可能取决于其作用时间.     

溴氰菊酯对PC12细胞活性氧生成的影响

目的 研究溴氰菊酯(DM)对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞活性氧(ROS)生成的影响.方法 对培养的PC12细胞分别进行处理:(1)终浓度为0、10和100 μmol/L的DM分别处理PC12细胞1、6和12 h(两因素析凶设计);(2)终浓度为0、10和100;μmol/L的DM分别处理PC12细胞1、6、24h或24、48 h;(3)PC12细胞分别在终浓度为10mmol/L乙酰半胱氨酸(NAC)预处理2 h、终浓度为500 μmol/L的DL-甲硫氨酸磺酰亚胺(BSO)及终浓度为40 μmol/L的叔丁基对苯二酚(tBHQ)预处理16 h,再给予10 μmol/LDM作用6ho所有处理结束时,用2',7'-二氯荧光黄双乙酸酯(DCFH-DA)探针法测定细胞ROS含量.结果 DM诱导ROS生成呈剂量和时间效应关系.10 μmol/L DM处理组PC12细胞增加ROS的DCF荧光强度,是溶剂对照组的2.24倍,差异有统计学意义(P<0.01).而分别用NAC、BSO及tBHQ预先处理PC12细胞均能明显降低DM所增加的ROS,分别是DM组的22%、62%、38%.差异均有统计学意义(P<0.05).结论 DM能诱导PC12细胞ROS生成增高,胞内巯基水平和抗氧化功能降低可能是ROS生成增高的影响因素.     

心肌细胞钙调节与心力衰竭

钙离子在心肌细胞的功能与代谢活动中发挥着关键性的调节作用.静息状态下,心肌细胞内游离Ca2+浓度约0.1 μmol/L,心肌收缩时,胞浆游离Ca2+浓度可达10 μmol/L.胞浆游离Ca2+浓度随着心动周期的变化是依靠胞膜和胞内多个钙转运系统的共同调节来维持的,钙转运失常可引起心功能障碍甚至心力衰竭.本文着重介绍心肌细胞钙转运的调节机制及其在心力衰竭时的变化.     

H2O2诱导建立HTR-8/SVneo胎盘滋养细胞氧化应激模型

目的通过观察不同浓度过氧化氢(H2O2)对人胎盘滋养层细胞HTR-8/SVneo处理不同时间后的氧化应激状态,探讨建立H2O2诱导HTR-8/SVneo胎盘滋养细胞氧化损伤模型的最佳条件。方法2017年11月至2018年2月于西安交通大学第一附属医院进行实验研究。将HTR-8/SVneo细胞实验组分别给予不同终浓度的H2O2(50、150、300、500μmol/L),同时设立对照组,相同实验条件下分别继续培养1、3、6、12h,随后对此进行细胞存活率、细胞形态学观察,对超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化氢酶(CAT)测定,流式细胞仪分析活性氧自由基(ROS)水平和细胞凋亡的水平。结果与对照组比较,300μmol/L 3h经H2O2处理后可降低HTR-8/SVneo细胞的存活率(P=0.00<0.01),而且提高了LDH的释放,促使了SOD、CAT活性的下降和MDA含量的增加(P=0.00<0.01)。300μmol/L3h经H2O2处理后增加了细胞的凋亡率(P=0.00<0.01)及细胞内ROS水平(P=0.00<0.01)。同时,300μmol/L3h经H2O2处理后可明显促进细胞的形态学改变。结论通过H2O2可以成功建立HTR-8/SVneo氧化应激损伤细胞模型,最佳实验条件为300μmol/L H2O2处理3h。     

活性氧在氯化镉诱导的小鼠睾丸间质细胞凋亡中的作用

目的 探究活性氧(reactive oxygen species, ROS)在氯化镉(cadmium chloride, CdCl₂)诱导的睾丸间质细胞毒性中的潜在作用及机制。方法 以不同浓度CdCl₂(0、5和10μmol/L)染毒小鼠睾丸间质TM3细胞24 h。CCK-8法检测CdCl₂对TM3细胞活性的影响;Hoechst33342染色法检测凋亡小体;DCFH-DA探针法检测TM3细胞ROS水平;1 mmol/L N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine, NAC)预处理1 h后用10μmol/L CdCl₂染毒TM3细胞24 h, Western blot检测细胞内促凋亡蛋白Caspase-9和cleaved Caspase-3的表达水平;RT-qPCR检测细胞内抗凋亡基因Bcl-2以及促凋亡基因Caspase-9和Caspase-3 mRNA表达水平。结果 CdCl₂染毒细胞24 h后,TM3细胞活力降低且凋亡小体数量增加。10μmol/L CdCl<...     

人外周血淋巴细胞体外乙酸铅染毒后氧化应激损伤研究

目的 研究乙酸铅染毒人外周血淋巴细胞致氧化应激与DNA氧化损伤情况。
方法 分别用浓度为0 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L和80 μmol/L的乙酸铅染毒人外周血淋巴细胞6 h、12 h、24 h, 应用2', 7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色分析和流式细胞仪检测染毒后细胞内活性氧类(ROS)水平, 高度水溶性四唑盐(WST-1)法检测染毒后细胞内总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性, 酶联免疫吸附测定法(ELISA)试剂盒检测染毒后细胞8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平, 并对ROS、T-SOD、8-OHdG三指标间的关系进行相关性分析。
结果 乙酸铅染毒6 h后, 各染毒组人外周血淋巴细胞ROS水平均高于对照组, 差异有统计学意义(P < 0.01);20 μmol/L染毒组人外周血淋巴细胞T-SOD和8-OHdG水平与对照组相比, 差异无统计学意义(P>0.05), 而40 μmol/L和80 μmol/L染毒组人外周血淋巴细胞T-SOD和8-OHdG水平均高于对照组, 差异有统计学意义(P < 0.01)。乙酸铅染毒12 h和24 h后, 各染毒组人外周血淋巴细胞ROS、T-SOD和8-OHdG水平均高于对照组, 差异有统计学意义(P < 0.01)。相关性分析显示, 细胞内ROS含量与T-SOD活性呈负相关(r_{6 h}=-0.865、r_{12 h}=-0.890、r_{24 h}=-0.801, P < 0.01), 与8-OHdG含量呈正相关(r_{6 h}=0.840、r_{12 h}=0.829、r_{24 h}=0.866, P < 0.01)。
结论 乙酸铅染毒人外周血淋巴细胞后会诱导细胞ROS生成, 抑制细胞内抗氧化酶SOD活性, 造成人外周血淋巴细胞氧化应激状态增强和DNA氧化性损伤。
     

MK801抑制乐果诱导的大鼠皮层神经元凋亡的作用研究

目的通过应用N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体非竞争性拮抗剂MK801探讨兴奋性氨基酸神经递质在乐果诱导的新生大鼠皮层神经元凋亡中发挥的作用。方法在纯化的新生鼠皮层神经元中,加入终浓度为100μmol/L的乐果,并用50和100μmol/L NMDA受体非竞争性拮抗剂MK801对100μmol/L乐果染毒组进行干预。染毒后48小时收获细胞,TUNEL染色检测神经元凋亡情况;HPLC-FLD方法测定细胞内兴奋性氨基酸递质含量,RT-PCR检测NMDA受体NR2B亚基mRNA表达的变化,荧光探针DCFH-DA试剂盒检测细胞内活性氧水平。结果在纯化培养的皮层神经元中,100μmol/L乐果染毒48h后,与对照组相比,Tunel染色强度为对照组1.40倍(P<0.01);兴奋性氨基酸的含量均上升(P<0.01);细胞内ROS水平逐渐增高为对照组的2.47倍(P<0.01)。对100μmol/L乐果染毒组给予50和100μmol/L MK801干预后,高剂量干预组凋亡减少为干预前的79.6%(P<0.01),EAA含量下降(P<0.01);细胞内ROS水平下降为干预前的88.9%和74.8%(P<0.01),但仍远高于对照组细胞内活性氧水平(P<0.01);NR2B mRNA表达上升为干预前的1.59和2.22倍(P<0.01),显著高于对照组水平(P<0.01)。结论兴奋性氨基酸递质和细胞内活性氧共同参与乐果诱导的神经元凋亡。NMDA受体阻断剂MK801不仅能减少活性氧的生成并能降低神经元兴奋性氨基酸含量,从而减少乐果诱导的神经元凋亡。     

普罗布考、厄贝沙坦对人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤的保护作用及PAI-1含量的影响

目的探讨抗氧化剂普罗布考、AT1受体拮抗剂厄贝沙坦对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤及PAI-1含量的影响。方法采用H2O(2100μmol/L)制作氧化应激损伤的细胞模型,给予不同浓度普罗布考、厄贝沙坦预孵育细胞:(1)空白对照组;(2)H2O2组;(3)Pro1组:H2O2+普罗布考(2.5μmol/L);(4)Pro2组:H2O2+普罗布考(5μmol/L);(5)Pro3组:H2O2+普罗布考(10μmol/L);(6)Irb1组:H2O2+厄贝沙坦(2.5μmol/L);(7)Irb2组:H2O2+厄贝沙坦(5μmol/L);(8)Irb3组:H2O2+厄贝沙坦(10μmol/L);(9)Pro3+Irb3组:H2O2+普罗布考(10μmol/L)+厄贝沙坦(10μmol/L)。用MTT法检测普罗布考及厄贝沙坦对HUVEC氧化损伤的影响;用ELISA方法测定培养液中PAI-1含量。结果 MTT:空白对照组、Pro2组、Pro3组、Irb3组、Pro3+Irb3组吸光度值高于H2O2组(空白对照组、Pro2组、Pro3组、Pro3+Irb3组P0.01,Irb3组P0.05);空白对照组、Irb1组、Irb2组和Irb3组培养液中PAI-1均高于H2O2组(空白对照组、Irb2组、Irb3组P0.01;Irb1组P0.05);与Pro+Irb组比较,H2O2组、Pro3组细胞培养液中PAI-1水平均较高(P0.01)。结论普罗布考和厄贝沙坦可通过不同机制减轻氧化应激对HUVEC的影响,从而对血管内皮细胞产生保护作用;二者在改善氧化应激引起的PAI-1水平升高方面存在一定的协同作用。     

miR-7在心肌细胞缺氧复氧模型中的表达及对心肌细胞凋亡的影响

目的探讨miR-7在心肌细胞缺氧复氧模型中的表达及对心肌细胞凋亡的影响。方法构建心肌细胞缺氧复氧模型,RT-PCR检测心肌细胞中miR-7的表达水平。心肌细胞转染miR-7模拟物和抑制物,RT-PCR检测转染效果。流式细胞术检测miR-7模拟物和抑制物对缺氧复氧心肌细胞凋亡的影响,试剂盒检测细胞中乳酸盐脱氢酶(LDH)水平,Western blot检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白水平。结果缺氧复氧心肌细胞模型中miR-7的表达水平明显高于正常培养的心肌细胞(P<0.01)。miR-7模拟物能够提高心肌细胞中miR-7的表达水平,而miR-7抑制物能够抑制心肌细胞中miR-7的表达。miR-7模拟物能够降低缺氧复氧心肌细胞的凋亡率和细胞中cleaved caspase-3表达,抑制心肌细胞分泌LDH,促进细胞中p-Akt的表达。miR-7抑制物能够促进缺氧复氧心肌细胞凋亡和细胞中cleaved caspase-3表达,促进心肌细胞分泌LDH,抑制细胞中p-Akt的表达。结论 miR-7在心肌细胞缺氧复氧模型中表达升高。miR-7能够降低缺氧复氧心肌细胞凋亡,干扰miR-7表达能够促进缺氧复氧心肌细胞凋亡,作用机制可能与Akt信号通路有关。     

槲皮素拮抗酒精性肝损伤中胆红素的介导效应

目的探讨槲皮素诱导Ⅰ型血红素氧合酶(heme Oxygenase-1,HO-1)及其代谢产物胆红素对肝细胞酒精性氧化损伤的保护效应。方法二步胶原酶灌注技术分离培养SD大鼠原代肝细胞,在孵以200 mmol乙醇建立酒精性肝细胞氧化损伤模型的同时,加入槲皮素(100μmol)、hemin(20μmol)等及不同剂量(2-100μmol)的胆红素干预24 h后,检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力及谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)及氧自由基(ROS)水平及培养基中总胆红素水平。结果槲皮素明显抑制了乙醇孵育后细胞MDA和ROS水平的升高,有效维持了细胞内GSH水平和SOD活力;加入外源性胆红素也显示出相同的保护效应,且具有一定的剂量依赖性;锌原卟啉IX(ZnPP-IX)则明显抑制了上述槲皮素的保护效应。结论槲皮素诱导HO-1对酒精所致大鼠原代肝细胞氧化损伤具有保护作用,其机制与HO-1的代谢产物之一胆红素有关。     

辛伐他汀下调OX—LDL诱导的NRK52E细胞LOX-1表达和ROS生成

目的 探讨辛伐他汀对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的NRK52E细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体（lectin-like ox-LDL receptor,LOX-1）表达和活性氧生成的作用.方法 体外培养NRK-52E,同步化后分为三组：（1）空白对照组（NRK52E细胞＋0μg/ml ox-LDL）;（2） ox-LDL组（NRK52E细胞＋50 μg/ml ox-LDL）;（3）辛伐他汀组（NRK52E细胞＋10μmol/L辛伐他汀＋50 μg/mlox-LDL）,用Western blot测定LOX-1蛋白表达,激光共聚焦检测ROS的表达.结果 （1）正常NRK52E细胞表达LOX-1非常低,50 μg/ml ox-LDL明显刺激NRK52E细胞表达LOX-1增加6.80倍,加用10 μmol/L辛伐他汀后,ox-LDL刺激的NRK52E细胞LOX-1表达降低65％;（2）正常NRK52E细胞内ROS生成很少,50 μg/ml ox-LDL可明显刺激NRK52E细胞内ROS生成增多了4.86倍,加用10μmol/L辛伐他汀后,ox-LDL刺激的NRK52E细胞ROS生成减少60％.结论 辛伐他汀可下调ox-LDL诱导的NRK52E细胞LOX-1表达和ROS生成,从而保护肾脏.     

PCB153对PBDE-47致SH-SY5Y细胞氧化应激和8-羟基脱氧鸟苷含量的影响

目的探讨PCB153和PBDE-47单独及联合染毒对SH-SY5Y细胞氧化应激及8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量的影响。方法设DMSO溶剂对照组,1、5、10μmol/LPBDE-47(低、中、高)单独染毒组和与5μmol/LPCB153联合染毒组及相应的抗氧化剂组(N-乙酰-L-半胱氨酸NAC100μmol/L),分别对SH-SY5Y细胞染毒24h。用荧光染料DCFH-DA标记法和高效液相色谱-电化学技术(HPLC-ECD)分别检测细胞内活性氧(ROS)水平和8-OHdG的含量。结果随着染毒剂量的增加,PBDE-47单独染毒组ROS水平有逐渐增高的趋势,但与对照组及其相应的PCB153联合组相比,ROS水平无明显差异(P>0.05)。中、高联合染毒组ROS水平与对照组相比显著增加(P<0.05),并显著高于相应的单独剂量染毒组(P<0.05),加入抗氧化剂后细胞内ROS水平明显下降(P<0.05),细胞内ROS水平与PBDE-47染毒剂量呈现剂量-效应关系;高剂量PBDE-47单独染毒组和中、高剂量联合染毒组8-OHdG的含量与对照组相比均有明显的增加(P<0.05),高剂量联合染毒组8-OHdG含量明显高于相应的单独染毒组(P<0.05),加入抗氧化剂后其细胞内8-OHdG含量明显下降(P<0.05)。细胞内ROS水平与8-OHdG含量呈正相关关系(r=0.895)。结论一定剂量的PBDE-47可致DNA氧化损伤,PCB153可增加PBDE-47对SH-SY5Y细胞DNA的氧化损伤作用,提示活性氧在PBDE-47致DNA损伤方面发挥了重要作用。     

Effect of docosahexaenoic acid on hypoxia/reoxygenation injury in human coronary arterial smooth muscle cells

Purpose

Hypoxia and reoxygenation (H/R) occur in a wide variety of important clinical conditions such as myocardial infarction. H/R injury is a complex phenomenon involving not only intracellular damage processes but also an injurious inflammatory response. Docosahexaenoic acid (DHA), an n-3 polyunsaturated fatty acid, has long been proved to be protective against several types of cardiovascular disease. However, its beneficial effect during H/R is inconclusive. In this study, we employed an in vitro model to examine whether DHA is protective against H/R-induced cell damage in human coronary artery smooth muscle cells (HCASMCs).

Methods

HCASMCs in the absence or presence of DHA (1, 3, 10, and 30?μM) were subjected to control or H/R treatment using a modular incubator chamber to create hypoxic condition. Cell viability was evaluated by MTT assay. Spectrophotometric and spectrofluorometric assays were used to measure the generation of nitric oxide (NO) and reactive oxygen species (ROS), respectively. Inflammatory cytokines were determined by enzyme-linked immunosorbent assay. Intracellular calcium mobilization was estimated microfluorimetrically using calcium indicator dye, fura 2-acetomethyl ester.

Results

Hypoxia/reoxygenation caused significant injury in cultured HCASMCs. DHA at low concentrations (1, 3, and 10?μM) did not afford protection, whereas at 30?μM, it caused deleterious effects, presumably by enhancing the production of NO, ROS, IL-1β, and IL-6 and altering the intracellular calcium dynamics.

Conclusions

Our results do not support the protective function of DHA in H/R-injured coronary arterial smooth muscle cells.     

tBHQ对无机砷致人皮肤角质细胞损伤保护作用

目的探讨叔丁基对苯二酚(tBHQ)对亚砷酸钠(NaAsO2)致人皮肤角质细胞系HaCaT细胞损伤的保护作用。方法用Alamar Blue还原法检测细胞活力,用荧光探针2’,7’-二乙酰二氯荧光素(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)的生成,用硫代巴比妥酸(TBA)法检测细胞内过氧化脂质降解产物丙二醛(MDA)的生成。结果NaAsO2(25、50μmol/L)单独处理后,各组细胞活力明显下降(P<0.01),分别为82%和59%;细胞经tBHQ(25、50μmol/L)预处理后,tBHQ 25μmol/L组细胞活力分别恢复至(101.44±1.63)%和(92.06±9.95)%,tBHQ 50μmol/L组细胞活力分别恢复至(98.88±2.03)%和(91.12±7.87)%;NaAsO2(25、50μmol/L)单独处理后,各组细胞内ROS水平明显上升(P<0.01),分别为对照组的1.64和3.86倍;细胞经tBHQ(25、50μmol/L)预处理后,tBHQ 25μmol/L组ROS水平分别下降为对照组的0.95和1.87倍,tBHQ 50μmol/L组ROS水平分别下降为对照组的0.79和1.69倍;NaAsO2(25、50μmol/L)单独处理后,细胞内MDA含量明显上升(P<0.01),分别为2.28、2.96 nmol/(mgμprot);细胞经tBHQ(25、50μmol/L)预处理后,tBHQ 25μmol/L组MDA含量分别下降为2.05、2.43 nmol/(mgμprot),tBHQ 50μmol/L组MDA含量分别下降为2.10、2.60 nmol/(mg.prot)。结论 tBHQ对无机砷致人皮肤角质细胞损伤具有保护作用,且具有一定的剂量-反应关系。     

活性氧在P，P’-DDE诱导大鼠睾丸支持细胞凋亡中的作用

[目的]研究活性氧在2,2-双-（对氯苯基）-1,1-二氯乙稀（P,P’-DDE）诱导大鼠睾丸支持细胞凋亡中的作用。[方法]从大鼠睾丸组织中分离支持细胞进行离体原代培养3d,用0、10、30、50μmol／L的p,p＇-DDE及加有300μmol／L的抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）的P,P’-DDE（50μmol／L）继续培养24h,应用流式细胞仪测定细胞内活性氧（ROS）水平、线粒体膜势能（Aym）、凋亡发生率。[结果]50μmol／L的P,P’-DDE可以诱导支持细胞ROS显著升高,10、30、50μmol／LP,P’-DDE处理组的线粒体膜势能下降,30、50μmol／L的P,P’-DDE可以诱导支持细胞凋亡,与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）;NAC有效抑制了ROS升高,削弱线粒体膜势能下降,减少了凋亡发生率,与50μmol／L的P,P’-DDE处理组相比,差异有显著意义（P〈0．05）。[结论]P,P’-DDE可以诱导大鼠睾丸支持细胞凋亡,ROS产生可能是其重要原因之一。