己酮可可碱对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的保护作用及其机制

目的观察己酮可可碱(PTX)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型肾间质纤维化的作用及其机制。方法假手术组(A);模型组(B);依那普利组(C);PTX组(D);PTX和依那普利组(E)。术后第3、7和14天随机处死每组中的5只;测肾组织匀浆中羟脯氨酸浓度,计算胶原/肾重比;免疫组化技术测:CD34(计数肾小管周围毛细血管指数(PCI))、VEGF、BMP-7、TGF-β1、NF-κB、TIMP-1表达量并观察肾病理改变。结果B组胶原/肾重比高于另外4组。PCI B组第7天(D7)低于其他各组,VEGF表达D14 B组低于D和E组(P均<0.05)。B组D7 BMP-7表达低于3个治疗组;NF-κB:各时间点B组高于其他各组(P均<0.05),TGF-β1 D14 E组低于C组(P<0.05),TIMP-1表达D3和D7 B组高于3个治疗组(P均<0.05)。结论PTX通过维护肾间质微血管系统完整,改善肾间质血供;增加抗纤维化因子、抑制促纤维化因子的表达,减轻肾间质纤维化而保护肾脏,其疗效与依那普利相当。     

Smad泛素化调节因子2在输尿管梗阻大鼠肾间质损伤中的作用

目的探讨Smad泛素化调节因子2（Smurf2）在输尿管梗阻大鼠（UUO）肾间质损伤中的作用及其机制。方法以Wistar大鼠UUO为模型，采用病理染色、RT-PCR和Western印迹方法检测。结果（1）随着梗阻时间延长，肾间质炎性细胞浸润指数、纤维化指数逐渐加重，Smurf2 mRNA和蛋白、Smad2 mRNA和蛋白逐渐上调（P〈0．01）；TGF-β1mRNA在IJUO后第7天达高峰，此后逐渐下降，但仍明显高于假手术组（P〈0．01）。（2）Smurf2 mRNA和蛋白质与肾间质纤维化指数呈正相关（r=0、911，0．964，P〈0．01），与肾间质炎性细胞浸润指数无相关，与Smad2 mRNA和蛋白呈正相关（r=0．975，0．979，P〈0．01）。结论Smurf2在UUO大鼠肾组织中表达明显增强，它可能通过介导TGF．B1／Smad通路的活化而参与了肾问质纤维化的形成。     

补体C5aR受体在UUO大鼠模型肾组织中的表达

目的动态检测单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾组织中补体C5a受体（C5aR）的表达变化,从而探讨其在肾小管间质纤维化发展中的可能作用机制。方法将36只雄性SD大鼠随机分为UUO组及假手术（SOR）组,每组18只,UUO组行左侧输尿管梗阻术,SOR组仅游离左侧输尿管不结扎。术后第5、10、15天分别处死每组中6只大鼠,取左肾行HE和Masson染色,并用免疫组化检测肾组织C5aR的表达,RT-PCR检测C5aR的基因表达情况。结果UUO组第5天肾小管扩张,小管间质细胞部分变性,梗阻后第10天小管间质细胞可见坏死,间质纤维增多,第15天可见弥漫的肾小管基底膜增厚皱缩,纤维化明显,UUO组间质损伤指数与肾纤维化程度在术后不同时间点显著高于SOR组（P〈0．01）。免疫组化结果显示：SOR组大鼠肾组织中仅有少量C5aR表达,UUO组术后第5、10及15天C5aR表达[（7．94±2．67）IOD,（12．39±2．64）IOD,（13．37±0．98）IOD]显著高于对应时间点的SOR组[（4．50±2．32）IOD,（5．69±1．73）IOD,（4．30±1．45）IOD]（P〈0．05,P〈0．01）,术后第10天明显高于第5天（P〈0．01）,而从第10天到第15天仅稍有增高。C5aRmRNA在UUO组从术后第5天到第10天梗阻侧肾脏C5aRmRNA表达明显增多（0．10±0．02到0．34±0．10）,而从第10天到第15天表达未见明显增多,甚至有降低的趋势（第15天为0．32±0．06）。结论实验大鼠梗阻侧肾组织中C5aR的表达在早期随着梗阻时间延长而上调,晚期则增多缓慢,其基因水平表达情况同蛋白基本一致,提示C5aR可能在肾脏局部通过与循环系统中的C5a结合在肾间质纤维化早期起作用。     

参附对单侧尿路梗阻大鼠肾脏白介素18表达的影响

目的研究单侧尿路梗阻后大鼠肾脏白介素18（IL-18）的表达及中药参附对其的影响。方法采用单侧输尿管结扎（UUO）制造梗阻性肾病模型,将56只大鼠随机分为对照组（假手术组）、手术组（UUO组）和治疗组（UUO＋参附）,术后7、14d观察肾组织病理改变,检测肾组织中IL—18的表达。结果与对照组相比,手术组肾间质出现了明显的纤维化,IL-18的表达在术后第7天明显增加,第14天表达更强,与手术组相比,治疗组肾间质纤维化明显减轻,而治疗组与手术组同一时闽点相比较,IL-18的表达均有所降低,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论参附可以下调肾组织IL-18的表达,减轻肾小管-间质纤维化,发挥肾保护作用。     

前列腺素E1对输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化及转化生长因子β1mRNA表达的影响

目的：探讨前列腺素E1（PGE1）拮抗肾间质纤维化的作用。方法：建立单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾小管间质病变模型，应用原位杂交、病理形态学观察、生化分析等技术，研究PGE1用药后肾组织中转化生长因子β1（TGFβ1）mRNA的表达，肾小管间质病变及羟脯氨酸含量的变化。结果：大鼠UUO术后3d，肾间质水肿、单个核细胞浸润；14d后肾小管萎缩，间质纤维增生，间质面积增宽，伴随肾皮质中羟脯氨酸含量升高及TGFβ1mRNAg表达增多。后者的峰值出现先于羟脯氨酸峰值及间质面积增宽。PGE1可下调TGFβ1mRNA表达及羟脯氨酸含量，抑制间质中单个核细胞浸润。结论：PGE1改善UUO大鼠肾间质纤维化的原因至少与抑制单个核细胞浸润及TGFβ1mRNA表达有关。     

霉酚酸酯对UUO大鼠肾间质TGF-β1和CTGF表达的影响

目的 通过动态观察霉酚酸酯(MMF)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型肾间质转化生长因子-β1(TGF-β1)、磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)、结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响,探讨MMF延缓肾间质纤维化进展的可能机制.方法 54只雄性SD大鼠随机分为假手术组(SOR组)、UUO组和MMF组,各组分别于术后第7、14、21天处死6只.HE、PAS和Masson染色观察肾间质损伤指数的变化,免疫组织化学染色观察TGF-β1、p-Smad2/3、CTGF和Ⅳ型胶原在肾间质中的蛋白表达,RT-PCR观察TGF-β1和CTGF在肾组织中的mRNA表达.结果 UUO组肾间质损伤指数均显著高于SOR组(P＜0.01),MMF组与UUO组比均显著降低(第7、14天P＜0.01;第21天P＜0.05);UUO组Ⅳ型胶原、TGF-β1蛋白和mRNA、p-Smad2/3、CTGF蛋白和mRNA的表迭均显著高于SOR组(P＜0.01),MMF组与UUO组比均显著降低(P＜0.01).结论 在UUO模型中,MMF可通过下调TGF-β1、CTGF在肾间质中的表达抑制肾间质纤维化;MMF对TGF-β1依赖性Smad信号通路的抑制可能参与了下调CTGF的表达.     

绞股蓝总皂甙对梗阻性肾病大鼠TGF-β/Smad信号通路及CTGF表达的影响

目的研究单侧输尿管结扎大鼠(UUO)肾组织中结缔组织生长因子(CTGF)、Smad7表达与肾间质纤维化之间的关系,以及绞股蓝总皂甙(GPs)对Smad7、CTGF的影响。方法采用UUO大鼠模型,将大鼠随机分为3组:假手术组、模型组、GPs组。假手术组和模型组仅给予标准饲料30 g,GPs组于术前3 d至术后14 d每天给予GPs 200 mg.kg-1.d-1灌胃,分别于第3、7、14 d处死各组大鼠。免疫组化法检测各组肾组织CTGF和Smad7的表达;RT-PCR方法检测各组Smad7 mRNA、CTGF mRNA含量;Masson染色评定各组肾小管间质损害程度。结果模型组CTGF的表达及肾小管间质损伤指数明显高于假手术组(P<0.01),而Smad7表达明显低于假手术组(P<0.01);GPs组CTGF及肾小管间质损伤指数随治疗时间降低,第7天下降最明显,而Smad7表达随时间增高,第7天升至最高。与模型组相比,各时间段均有显著差异(P<0.01)。结论UUO大鼠肾组织中CTGF的表达可能通过TGF-β/Smad信号通道进行调节;绞股蓝总皂甙可以通过上调Smad7的表达来抑制结缔组织生长因子表达,进而遏制肾纤维化的进展。     

黄芪对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的作用研究

[目的]观察黄芪(AM)对单侧输尿管梗阻(UUO)所致大鼠肾小管间质纤维化的影响,初步探讨其抗纤维化分子作用机制.[方法]48只SD大鼠随机分为假手术(Sham)、 UUO组和UUO 黄芪治疗组(AM)、 UUO 氯沙坦治疗组(ARB).在造模后7、14d处死动物,观察肾脏病理改变.采用免疫组化方法检测肾组织中纤连蛋白(FN)和胶原I (col I)表达.用实时荧光定量RT-PCR检测大鼠FN mRNA和col I mRNA表达量.[结果]与假手术组相比,UUO术后大鼠肾脏病理损害进行性加重,FN和col I表达显著增高(P<0.05);AM治疗后可明显减轻UUO大鼠肾组织的肾小管损伤及肾间质纤维化,使UUO大鼠肾组织中高表达的FN和col I明显降低(P<0.05),与ARB作用相似(P>0.05).[结论]黄芪可能通过抑制肾小管间质细胞外基质积聚,减轻和改善UUO大鼠肾间质纤维化.     

p21和p53在肾间质纤维化大鼠中表达的研究

目的动态观察p21和p53在单侧输尿管梗阻肾间质纤维化大鼠模型中的表达,以及依那普利对其表达的调节。方法将SD大鼠随机分为假手术组（SOR组）、单侧输尿管结扎组（UUO组）和依那普利治疗组（EnT组）,每组30只。用Masson染色的方法动态观察梗阻侧肾脏病理变化,用RT—PCR的方法检测梗阻肾皮质p21mRNA和p53mRNA的变化;并观察依那普利对肾皮质p21和p53表达的调节。结果在UUO大鼠模型早期,肾皮质p21mRNA和p53mRNA的表达即有明显增高,随着梗阻时间的延长,p21和p53的表达逐渐增强,二者具备相关性;依那普利能明显抑制p21和p53的表达。结论p21和p53在UUO大鼠肾皮质呈高表达,依那普利可抑制其表达。p21可能通过p53参与介导了。肾小管间质纤维化的发病过程。     

霉酚酸酯对UUO大鼠肾间质MCP-1和TGF-β1表达的影响

目的通过霉酚酸酯（MMF）干预UUO大鼠模型，动态观察单核细胞趋化因子（MCP-1）、TGF-β1在梗阻侧肾组织中的表达。方法54只雄性SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组和MMF治疗组。于术后第7天、14天、21天每组分别处死6只大鼠。免疫组织化学染色观察MCP-1和TGF-β1在肾间质中的表达。结果在正常肾间质中，MCP-1和TGF-β1均只有少量表达，两者在UUO模型组中的表达均显著增高，MMF治疗组各时间点与相应UUO模型组比均有不同程度降低。结论MMF能部分延缓UUO模型肾间质纤维化的进展，可能与其早期下调MCP-1在肾间质中的表达抑制炎症反应，进而抑制致纤维化的关键因子TGF-β1表达有关。     

黄芪对单侧输尿管梗阻大鼠肝细胞生长因子和转化生长因子β1的调控

目的动态观察黄芪(AM)对单侧输尿管梗阻(UUO)所致肾小管间质纤维化大鼠肝细胞生长因子(HGF)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法54只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和模型+黄芪治疗组。在造模后第3、7和14天处死动物,观察肾脏病理改变。采用免疫组化方法检测肾组织中TGF-β1、HGF表达。用实时荧光定量RT-PCR检测大鼠HGF mRNA和TGF-β1mRNA表达量。用Western blot检测大鼠HGF和TGF-β1蛋白表达量。结果与假手术组相比,各时间点的模型组大鼠肾脏病理损害进行性加重,黄芪治疗后可明显减轻模型组大鼠的肾小管损伤及肾间质纤维化程度(P<0.05)。随着梗阻时间的延长,模型组大鼠肾组织TGF-β1表达逐渐增加;HGF表达呈现先升高后下降的表达规律,在UUO术后第7天达高峰,此后大幅回落;与模型组各对应时间点比较,黄芪治疗后可使肾组织中的HGF表达显著增高,TGF-β1表达明显降低(P<0.05)。结论黄芪可能通过诱导HGF表达上调及抑制TGF-β1表达,减轻肾间质纤维化。     

参麦注射液对肾间质纤维化大鼠氧化应激作用研究

目的探讨参麦注射液在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化进程中的可能作用。方法成年SD大鼠54只,随机分为假手术组、模型组和参麦治疗组。假手术组仅完成开腹过程,不结扎输尿管;模型组和参麦治疗组行左侧输尿管结扎术,术后参麦治疗组每天腹腔注射参麦注射液3ml/(kg.d),假手术组与模型组则每天腹腔注射等量生理盐水。各组分别于实验的d7、d14、d21处死动物6只,取左肾组织行HE染色和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组化检查,并测定梗阻侧肾组织中SOD和MDA含量。结果与模型组比较,参麦治疗组肾小管间质病理改变明显减轻,肾间质α-SMA表达减少;肾组织中SOD活性增加,MDA含量下降。结论参麦注射液可通过减少氧化应激,减少肾间质α-SMA表达而抑制肾间质纤维化进程。     

当归注射液与血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对大鼠残肾模型微血管保护作用比较

目的探讨当归对大鼠残肾模型中肾脏新生血管形成的干预作用，及与缬沙坦治疗作用相比较。方法通过SD大鼠5／6肾切除建立慢性肾功能衰竭动物模型，设假手术组6只，生理盐水对照组6只，当归治疗组7只，缬沙坦治疗组6只，当归加缬沙坦治疗组6只。12周后采集血样、24h尿样及肾组织，常规病理检查判断肾小球硬化和肾小管间质损害程度；采用免疫组化染色技术，分析浸润肾组织巨噬细胞数，毛细血管密度和增生内皮细胞数。结果与假手术组相比，生理盐水对照组肾功能下降，肾间质纤维化明显，肾小球毛细血管指数（GCI）和肾小管周毛细血管指数（PCI）均显著低于假手术组（P〈0．01）。当归、缬沙坦、当归加缬沙坦治疗能显著增加肾小球和肾间质毛细血管数目（P〈0.01），并能延缓肾功能恶化、肾间质纤维化，其中GCI和PCI密度与肌酐清除率（CCr）、间质纤维化程度密切相关。并且当归不降低肾小球滤过率。与缬沙坦合用还可避免单独使用缬沙坦时CCr降低。结论当归能改善大鼠残肾模型新生血管形成和增加毛细血管密度，与缬沙坦有类似治疗作用。     

桂枝茯苓胶囊对肾小管间质纤维化大鼠骨调素和CD44表达的影响

目的观察桂枝茯苓胶囊对小管间质纤维化（TIF）大鼠OPN和CD44表达的影响。方法利用SD大鼠行单侧输尿管梗阻（UUO）诱导建立TIF动物模型，72只SD大鼠随机分为假手术组（24只）、模型组（24只）和预防组（24只）。预防组接受桂枝茯苓胶囊管理（500mg·k^-1·d^-1），模型组、假手术组则以等体积生理盐水。3组分别于实验第7、14和21天3个时间点收获动物各8只。检测上述时间点各组动物肾脏小管损伤、间质炎症细胞浸润和纤维化等肾脏组织病理学变化特点。采用免疫组化观察和评价OPN／CD44在梗阻肾中表达以及桂枝茯苓胶囊对OPN／CD44表达的影响。结果梗阻肾在上述三个时间点小管间质损伤呈进行性加重。免疫组化结果显示OPN／CD44在TIF中呈高表达，且随着TIF的进展不断上升。桂枝茯苓胶囊可以降低OPN／CD44在TIF中的表达，与模型组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。OPN／CD44在TIF中的表达同小管间质损伤程度呈正相关（r=0．78，0．77．P〈0．01）。结论桂枝茯苓胶囊部分通过下调OPN／CD44在梗阻肾中的表达，起到延缓小管间质纤维化进展的作用。     

Mast Cells and Fibrosis on Testicular Biopsies in Male Infertility

Testicular dysfunction correlates with increased testicular mast cells. Mast cells can activate fibroblasts and promote collagen synthesis. The aim of the study was to examine testicular mast cells containing tryptase, and the relationship between mast cells and different fibrosis stages of interstitium and peritubular region of testes. Testicular biopsies obtained from 33 infertile men were assigned to 2 groups: normal spermatogenesis ( n = 10) and defective spermatogenesis ( n = 23). Total, interstitial, and peritubular mast cells were examined immunohistochemically using antihuman tryptase. The fibrosis stage was evaluated using vimentin and alpha-smooth muscle actin. The ratio of tubules with sclerosis to total tubules was also calculated. In all cases, mast cells were mainly localized in the interstitium. The number of total mast cells was significantly higher in defective spermatogenesis than in normal spermatogenesis ( p =. 048). In both groups, interstitial mast cells were higher than peritubular mast cells. However, the increase in peritubular region was much higher than the increase in interstitium. Total, peritubular, and interstitialmast cell counts were not different from each other, according to the changing fibrosis stages. Total and interstitial mast cells were significantly higher in the cases with sclerosing seminiferous tubules than in the cases with no sclerosis ( p =. 04 and p =. 024, respectively). The mast cells and the mast cell product tryptase could be involved in the etiology of defective spermatogenesis, especially whenever the last stage (tubular hyalinization and sclerosis) takes place.     

纤维化淤胆性肝炎肝组织基质金属蛋白酶1及金属蛋白酶组织抑制因子1的表达

目的观察纤维化淤胆性肝炎(FCH)患者肝组织基质金属蛋白酶1(MMP1)和金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP1)的表达以及胶原蛋白的沉积,从胶原降解的角度探讨FCH肝纤维化的发病机制。方法肾移植术后乙型肝病毒(HBV)相关性FCH肝组织标本9例,正常肝组织标本5例作对照。用免疫组化方法检测肝组织MMP1、TIMP1及I、III型胶原的表达。结果与对照组比较,FCH组的MMP1、TIMP1及I、III型胶原蛋白表达显著增加,肝组织I、III型胶原蛋白表达与TIMP1/MMP1比值呈正相关。结论肾移植术后HBV相关性FCH患者肝纤维化的发生与金属蛋白酶抑制因子增加,间质胶原蛋白的分解降低有关。     

Angiotensin converting enzyme inhibitors mitigate collagen synthesis induced by a single dose of radiation to the whole thorax

Our long-term goal is to use angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitors to mitigate the increase in lung collagen synthesis that is induced by irradiation to the lung, which could result from accidental exposure or radiological terrorism. Rats (WAG/RijCmcr) were given a single dose of 13 Gy (dose rate of 1.43 Gy/min) of X-irradiation to the thorax. Three structurally-different ACE inhibitors, captopril, enalapril and fosinopril were provided in drinking water beginning 1 week after irradiation. Rats that survived acute pneumonitis (at 6-12 weeks) were evaluated monthly for synthesis of lung collagen. Other endpoints included breathing rate, wet to dry lung weight ratio, and analysis of lung structure. Treatment with captopril (145-207 mg/m(2)/day) or enalapril (19-28 mg/m(2)/day), but not fosinopril (19-28 mg/m(2)/day), decreased morbidity from acute pneumonitis. Lung collagen in the surviving irradiated rats was increased over that of controls by 7 months after irradiation. This increase in collagen synthesis was not observed in rats treated with any of the three ACE inhibitors. Analysis of the lung morphology at 7 months supports the efficacy of ACE inhibitors against radiation-induced fibrosis. The effectiveness of fosinopril against fibrosis, but not against acute pneumonitis, suggests that pulmonary fibrosis may not be a simple consequence of injury during acute pneumonitis. In summary, three structurally-different ACE inhibitors mitigate the increase in collagen synthesis 7 months following irradiation of the whole thorax and do so, even when therapy is started one week after irradiation.