低频超声体外诱导C6胶质瘤细胞凋亡的研究

目的 应用低频超声辐照体外培养的C6胶质瘤细胞,探讨低频超声对肿瘤细胞的影响.方法 应用不同强度(10%～100%)的低频超声(1 MHz,20 s)作用于体外培养的C6细胞,采用MTT法检测光密度(OD)值,计算超声辐照后C6细胞的生长率,应用TUNEL法观察C6细胞的凋亡形态及计算细胞凋亡率.结果 低频超声辐照体外培养的C6胶质瘤细胞后,在超声强度<50%范围内,随超声强度增加C6细胞的生长率显著下降,细胞形态出现核浓缩和核碎裂等凋亡改变,细胞凋亡率随超声辐照强度增加而增加;当超声强度>50%时,C6细胞的生长率和凋亡率不随超声强度增加而改变.C6胶质瘤细胞凋亡率与生长率显著负相关.结论 低频超声辐照能够在体外诱导C6胶质瘤细胞凋亡.     

白藜芦醇抑制C6细胞生长与诱导细胞凋亡的实验研究

目的探讨白藜芦醇（Res）在体外抑制胶质瘤C6细胞生长并诱导其调亡的作用。方法采用不同浓度的Res处理C6细胞,通过MTT法检测Res对C6细胞生长增殖的抑制作用,流式细胞技术检测Res作用后的细胞周期分布变化及诱导细胞凋亡情况,电镜下观察Res作用后的细胞超微结构的改变。结果Res能抑制C6细胞的生长增殖,并呈时间浓度依赖性;同时Res能影响C6细胞的细胞周期分布,使细胞阻滞于G1期;Res可以诱导C6细胞发生调亡的改变;经Res处理的C6细胞可出现细胞超微结构的改变。结论Res明显抑制C6细胞生长并诱导其发生凋亡和细胞周期改变。     

江浙蝮蛇毒对体外培养人滑膜细胞凋亡的影响

目的 探讨江浙腹蛇毒 (AHV) 诱导类风湿性关节炎 (RA) 患者滑膜细胞凋亡的作用及对相关蛋白 Caspase-3 表达的影响。方法 AHV 处理培养的滑膜细胞后，采用 MTT 比色法检测 AHV 对滑膜细胞增殖的抑制作用，并采用流式细胞仪 (FCM) 检测细胞凋亡率，以免疫组织化学法检测 Caspase-3 蛋白的表达。结果 MTT 的检测结果显示 5 μg/mL AHV 处理组滑膜细胞增殖抑制率达 67.2%，且与时间、剂量具有正相关关系 (P＜0.05)，AHV 体外作用滑膜细胞 24 h 的 IC₅₀ 为 3.508 μg/mL。流式细胞仪结果显示，与对照组相比，AHV 各剂量组凋亡率明显增加 (P＜0.05)，并与剂量呈正相关。AHV 体外作用滑膜细胞 24 h 时出现了明显的 Caspase-3 蛋白表达，其蛋白表达率明显高于对照组。结论 AHV 对滑膜细胞具有较强的增殖抑制作用，细胞凋亡率明显增加可能与 AHV 诱导滑膜细胞 Caspase-3 活化相关。     

TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的研究TRAIL对胃癌细胞株MKN28细胞体外诱导凋亡的作用及机制,并研究此过程中Caspase-3的表达规律及与凋亡效应的相关性。方法培养细胞,MTT法分析细胞增殖抑制率及细胞存活率,流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期,细胞免疫组化检测细胞Caspase-3的表达水平,AO/EB染色观察凋亡细胞。结果 TRAIL可明显抑制MKN28细胞的增殖,并可诱导细胞的凋亡。细胞阻滞于G0/G1期,Caspase-3在MKN28细胞中低表达,经TRAIL处理细胞后高表达。AO/EB染色后可见典型细胞凋亡特征。结论 TRAIL可诱导MKN28细胞株的凋亡,并呈剂量依赖性。TRAIL通过上调Caspase-3的表达,阻滞细胞周期,诱导MKN28细胞的凋亡。     

131I近距离放射对C6胶质瘤细胞杀伤的实验研究

目的 探讨131I近距离放射杀伤培养C6胶质瘤细胞的有效剂量率及有效剂量,指导治疗计划.方法 将负载活度60mCi 131I的放疗囊置于距离培养的C6胶质瘤细胞5mm、30mm处照射,持续72h/次,每隔4d用Annexin V-FITC/PI双染、流式细胞术以及克隆形成率法检测照射后C6胶质瘤细胞的凋亡率和细胞存活分数.结果 照射72h后能诱导部分瘤细胞凋亡,凋亡率可达16.42％±1.66％;瘤细胞存在增殖性死亡现象;瘤细胞存活分数在72h照射后下降,最低为59.0％±2.39％;在131I近距离放射时,较低剂量率(＜400mGy/h)情况下,也可诱发C6胶质瘤细胞凋亡.在剂量率186.6-677.8mGy/h区间,随剂量率加大凋亡率反而减小.诱导瘤细胞凋亡的有效吸收剂量率应≥47.64-61.65mGy/h,72h累计吸收剂量≥3.9Gy.结论 放疗囊负载131I近距离照射72h后可诱发C6胶质瘤细胞部分凋亡,瘤细胞存活分数下降.诱导C6胶质瘤细胞凋亡的有效剂量率应≥47.64-61.65mGy/h,72h有效累计吸收剂量≥3.9Gy.     

Caspase-3 mRNA在胃癌中的表达及其与细胞凋亡的关系

目的:通过观察Caspase-3mRNA在胃癌组织、非典型增生组织及正常胃粘膜中的表达,探讨Caspase-3及其所介导的细胞凋亡在胃癌发病中的作用。方法:应用原位杂交法和TUNEL染色法检测75例胃癌组织、68例癌旁非典型增生组织和10例正常胃粘膜组织中Caspase-3mRNA的表达和上述组织的凋亡指数。结果:Caspase-3mRNA在胃癌组织和非典型增生组织中的阳性率(38.67％、20.59％)显著低于正常胃粘膜(60％);TUNEL染色证实,胃癌及非典型增生组织的凋亡指数显著低于正常胃粘膜(P<0.05),Caspase-3mRNA阳性组的凋亡指数显著高于阴性组(P<0.05)。结论:由Caspase-3及其所介导的细胞凋亡与胃癌的发生和演进有关。     

苦参碱体外促进肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨苦参碱体外促进肿瘤细胞凋亡及其作用机制。方法将浓度为0.2 mg/ml、0.4 mg/ml、0.6 mg/ml的苦参碱作用于卵巢癌细胞株A21-2和骨肉瘤细胞株MG63,利用倒置相差显微镜观察不同浓度苦参碱作用后细胞的形态变化;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡周期、Caspase-3蛋白的表达。结果倒置相差显微镜观察表明,苦参碱能抑制MG63细胞和A21-2细胞的增殖;FCM分析发现,苦参碱与细胞作用72h后,C_0/G_1期前出现凋亡峰,与对照组比较,观察组不同浓度下凋亡率升高(P<0.01),且随浓度升高,凋亡率亦增高,差异有统计学意义(P<0.05),FCM分析显示,与对照组比较,观察组不同浓度下Caspase-3蛋白表达升高(P<0.01),且随浓度升高,Caspase-3蛋白表达亦升高,差异有统计学意义(P<005)。结论苦参碱能明显抑制A21-2细胞和MG63细胞的增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与促进Caspase-3蛋白的表达有关。     

人参皂甙Rh2对C6胶质瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用

观察人参皂甙Ｒｈ２对Ｃ６胶质瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用,并在分析分子水平探讨其作用机理,方法：细胞计数法检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡。结果：①Ｒｈ２２,４．８μＭＯＬ／ｌ对Ｃ６胶质瘤细胞有增殖抑制作用,且呈明显量效关系;②Ｒｈ２作用７２ｈ后,４μｍｏｌ／Ｌ浓度对Ｃ６胶质瘤细胞诱导凋亡作用最为明显;③Ｒｈ２作用后,Ｇ０／Ｇ１期细胞百分率明显下降,而Ｓ期细胞百分率显著增加。,结论：     

乌骨藤粗提物对大鼠胶质瘤C6细胞的体外实验研究

目的 观察乌骨藤粗提取物(MTE)不同组分对大鼠C6胶质瘤细胞增殖情况的影响,探讨其作用机制.方法 采用新型四氮唑盐法(MTS)检测MTE的Fr1、Fr2、Fr3组分对C6细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测Fr2对C6细胞凋亡和周期的影响;采用荧光定量PCR(qPCR)技术检测不同浓度Fr2对C6细胞的Bax、Bcl-2表达的影响.结果 MTE的Fr1、Fr2、Fr3均能显著抑制C6细胞的增殖(JP＜0.05),与阳性对照组5-氟尿嘧啶(5-FU)相比抑制率也较高(P＜0.05),其半数抑制浓度分别为:60.32、52.30、83.83 μ g/ml.经80、160 u g/ml的Fr2处理24 h后,可有效促进C6细胞早期和晚期凋亡(P＜0.05),其周期被阻滞在G2期;Fr2相同方式处理后,C6细胞中Bax表达水平分别提高到(124.80±7.68)％和(380.30±6 91)％;Bcl-2表达水平分别降低到(84.20±3.10)％和(34.20±4.80)％(P＜0.05).结论 MTE能够显著抑制C6胶质瘤细胞的增殖,其中主要有效成分Fr2能够诱导C6细胞发生G2期周期阻滞,并通过影响Bax和Bcl-2的表达,促进其凋亡.     

槲皮素对大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖调控的作用

目的：研究类黄酮化合物槲皮素（quercetin,QUE）对体外培养的大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖调控的作用。方法：按QUE浓度分成10、25、50、75及100 μmol·L^-15个处理组和空白对照组（生理盐水）及溶剂对照组（二甲亚砜）,大鼠脑胶质瘤C6细胞在RPMI 1640培养基中生长达1×10⁶·mL^-1后,在96孔板中分别加入上述浓度的QUE继续培养,每组设3复孔,作用24、48及72 h,采用MTT比色法检测QUE对大鼠脑胶质瘤C6细胞的增殖抑制情况,流式细胞术（FCM）对50及100 μmol·L^-1的QUE作用48 h的大鼠脑胶质瘤C6细胞进行周期分析,免疫组化法检测50 μmol·L^-1的QUE作用48 h 的p53和bcl-2基因产物。结果：与空白对照组比较,QUE处理组随药物浓度增加和作用时间的延长,A值减小(P<0.05),对C6细胞的增殖抑制作用增强,使停滞在G₀／G₁期的细胞增加(P<0.01),而S和G₂/M期细胞减少(P<0.05)。P53蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达减少。结论：QUE对C6细胞增殖抑制作用具有浓度、时间依赖性,通过P53蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达减少诱导细胞凋亡来实现。     

苯乙酸对胶质瘤C6细胞凋亡的影响及其机制

目的：观察苯乙酸(PA)对胶质瘤C6细胞凋亡的影响及机制,为其临床应用提供理论基础。方法：体外培养胶质瘤C6细胞经PA诱导分化后,TUNEL检测细胞凋亡,免疫细胞化学检测bcl-2、bax和caspase-3蛋白表达。结果： PA 0(对照)、2.5和5.0 mmol•L^-1分别作用C6细胞24 h后,细胞凋亡率(%)分别为2.5±0.2、10.3±0.5和20.6±1.1;作用72 h后,细胞凋亡率(%)分别为2.7±0.3、24.9±0.7和42.0±1.7,随PA浓度和作用时间的增加,细胞凋亡率增加,不同浓度和不同作用时间细胞凋亡率组间比较差异均有显著性（P<0.05）。在C6细胞中,bcl-2、bax和caspase-3的表达水平分别为0.275±0.022、0.21±0.019和0.149±0.004,PA 5.0 mmol•L^-1作用72 h后表达水平分别为0.244±0.024、0.399±0.030和0.206±0.033。PA作用前后bcl-2表达水平比较差异无显著性（P>0.05）,bax和caspase-3表达水平差异均有显著性（P<0.01）。结论：PA对胶质瘤C6细胞具有诱导凋亡作用,并呈时间及剂量依赖性;PA诱导凋亡的机制与bax和caspase-3表达上调有关。     

葡萄糖调节蛋白75基因对H2O2诱导的C6胶质瘤细胞氧化应激性损伤有保护作用

目的:研究葡萄糖调节蛋白75(grp75)基因对H2O2诱导的C6胶质瘤细胞氧化应激性损伤的保护作用.方法:以grp75基因瞬时转染C6胶质瘤细胞,以H2O2作为氧化应激刺激物,建立细胞损伤模型,运用MTT、LDH、苔盼兰拒染、细胞周期流式细胞术(FCM)和凋亡小体方法观察grp75对H2O2引起的C6细胞氧化应激性损伤的影响.结果:grp75转染组C6细胞在H2O2(0.1 mmol/L,24 h)刺激后MTT增加、LDH活性降低,细胞凋亡明显抑制,与空载体转染组相比有显著差异.结论:grp75基因对H2O2引起的C6细胞氧化应激性损伤有保护作用.     

p38MAPK gene transfection induced the apoptosis of rat glioma cells C6

Thephosphorylationanddephosphorylationofproteinisoneofthemostimportantmechanismsofcellularsignaltransduction.Theconjugationofphos-phoricacidresiduesandspecificaminoacidresiduesofproteiniscatalyzedbyproteinkinases.Seriesofproteinkinasesandtheirphosphorylationmakeupthecascadereactionofsignaltransduction.Mitogen-activatedproteinkinase(MAPK)signalpathwayisahotpointinrecentyears.Ithasbeenidentifiedthat4signalpathwaysareineukaryoticcells:extracellularsignal-regulatedproteinkinase(ERK)，c-JunN-te…     

旁分泌形式作用的人AngiostatinK(1-3)抑制大鼠C6脑胶质瘤的研究

目的：研究人AK(1-3)[Angiostatin Kringle(1-3)]对大鼠C6脑胶质瘤的抑瘤效应．方法：利用基因转染的方法获得重组人AK(1-3)基因的C6胶质瘤细胞；以细胞增殖试验及免疫组化等方法检测转染细胞株是否表达了具有生物活性的人AK(1-3)．正常大鼠C6脑胶质瘤模型作对照，研究转染细胞株在大鼠脑内的致瘤性．脑组织切片进行Ⅷ因子染色．结果：大鼠C6胶质瘤细胞稳定表达的人AK(1-3)，在体外明显抑制牛主动脉内皮细胞的增殖；在体内明显抑制了大鼠C6脑胶质瘤的生长．试验组脑切片内仅见显微瘤灶，Ⅷ因子染色少见新生毛细血管．结论：旁分泌形式作用于大鼠C6脑胶质瘤内血管内皮细胞的人AK(1-3)可明显抑制肿瘤的血管生成，进而抑制肿瘤的生长和转移。     

西兰花多肽对C6胶质瘤细胞的诱导凋亡作用

目的：研究西兰花多肽对大鼠C6胶质瘤细胞生长的影响,初步探讨西兰花多肽对肿瘤细胞的诱导凋亡作用。方法：提取、分离及纯化西兰花多肽;培养大鼠C6胶质瘤细胞,用不同剂量（0、0.01、0.10、1.00和10.00 mg•L^-1）西兰花多肽作用24 、48和72 h后,应用倒置显微镜观察细胞凋亡情况,MTT方法检测药物作用后细胞的生长情况。结果：西兰花粗多肽有4个主要洗脱峰,其中第2峰收集液多肽（组分Ⅱ）含量最高,用于后续活性研究。西兰花多肽作用大鼠C6胶质瘤细胞后,倒置显微镜下观察到明显的凋亡小体,尤其以西兰花多肽10.00 mg•L^-1组最为明显。MTT结果,药物作用48 h时,西兰花多肽10 mg•L^-1组细胞增殖活性（0.127±0.011）明显降低,与对照组（0.501±0.035）比较差异有统计学意义（P<0.01）。药物作用72 h时,西兰花多肽各剂量组均表现为对细胞的抑制作用,与对照组（0.753±0.022）比较,细胞增殖活性西兰花多肽1.00 mg•L-1组（0.583±0.082）和10.00 mg•L^-1组（0.073±0.001）明显降低（P<0.01）。结论：西兰花多肽可诱导C6胶质瘤细胞发生凋亡反应,并且随着药物剂量升高和作用时间延长,凋亡效应增强,提示西兰花多肽具有良好的诱导肿瘤细胞凋亡的作用。     

Apoptin对C6胶质瘤细胞凋亡的诱导作用

目的：探索apoptin对C6胶质瘤细胞凋亡的诱导作用。 方法：构建荷C6胶质瘤Wistar大鼠的肿瘤模型,随机分为荷瘤对照组、化疗对照组和pvVP3组,给予不同的药物,通过超微结构分析、TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡率,观察apoptin诱导C6胶质瘤细胞的凋亡情况。 结果：pvVP3组肿瘤细胞异染色质边集,细胞核固缩,凋亡小体形成,而荷瘤对照组则未见明显凋亡改变。TUNEL法检测肿瘤细胞pvVP3组凋亡率为51.11%,明显高于荷瘤对照组(28.96%)(P<0.01)。 结论：apoptin能够诱导C6胶质瘤细胞凋亡。     

大鼠脑C6胶质瘤组织的1H磁共振波谱

目的采用高场强高分辨磁共振波谱仪在体观察正常大鼠脑组织及种植C6胶质瘤的代谢及生化改变,以评价高分辨1H磁共振波谱在大鼠脑肿瘤模型中的应用价值. 方法将20只体质量200～250 g左右的Wister大鼠分为两组. 正常组:5只;肿瘤组15只,在右尾状核接种C6细胞. 肿瘤组动态观察MR平扫及动态增强扫描的改变,并于接种C6细胞后15～20 d采用点分辨波谱法(PRESS: point resolved spectroscopy)行1H磁共振波谱检测. 结果正常组脑组织1H波谱可检出N-乙酰门冬氨酸(NAA),胆碱类化合物(Cho),肌酸和磷酸肌酸(Cr+PCr)、谷氨酸和谷胺酰胺(Glu+Gln),脂质(Lip),乳酸(Lac). C6胶质瘤NAA较正常组明显降低,NAA/Cho较正常组明显降低(P<0.01),NAA/Cr较正常组也明显下降(P<0.01),Cho/Cr明显升高(P<0.05),Lac升高. 结论高场强磁共振波谱仪可以准确观察在体大鼠脑组织及C6胶质瘤的1H磁共振波谱. 高分辨1H磁共振波谱的改变早于MRI形态改变,能够对肿瘤的早期代谢及生化改变进行监测.     

吗啡对培养大鼠胶质细胞瘤C6细胞增殖的抑制作用

目的:探讨吗啡对神经系统细胞的影响及作用机理.方法:应用基因克隆技术克隆大鼠增殖细胞核抗原(PCNA)的cDNA基因片段,并应用逆转录PCR技术研究了吗啡对大鼠胶质细胞瘤C6细胞PCNA基因表达的影响.结果:0.1、1.0 mg.L-1 吗啡作用于大鼠C6细胞24 h后,PCNA mRNA相对含量明显下降,且剂量越高PCNA mRNA相对含量越低.结论:吗啡对正常生长的大鼠C6细胞的增殖具有一定的抑制作用,其机理可能是通过抑制大鼠C6细胞PCNA的转录过程,使PCNA转录水平降低,从而抑制细胞核酸合成代谢.     

2-甲氧基雌二醇对大鼠神经元及C6胶质瘤细胞增殖与凋亡的影响

目的：探讨2-甲氧基雌二醇(2-methoxyestradiol,2-ME)对大鼠神经元及C6胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法：将神经元及C6胶质瘤细胞分为对照组和实验组,实验组按2-ME浓度不同分为1、5、10、15μmol/L 4个亚组。2-ME作用于大鼠神经元及C6胶质瘤细胞不同时间后,采用MTT法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,并在光镜及电镜下观察其形态学变化。结果：C6胶质瘤细胞经2-ME作用后细胞活性受到抑制,呈现时间变量依赖性,各亚组与对照组差异具有统计学意义(P<0.05)。2-ME可诱导C6胶质瘤细胞凋亡,各亚组与对照组差异具有统计学意义(P<0.05);可使C6胶质瘤细胞G₁及S期细胞减少,G₂期细胞增多,一定范围内呈现剂量依赖性,各亚组与对照组差异具有统计学意义(P<0.05)。神经元经药物作后,各亚组与对照组细胞活性差异无统计学意义。结论：2-ME可抑制C6胶质瘤细胞生长,诱导C6胶质瘤细胞凋亡,而对正常神经元无影响。