淫羊藿与nHAC/PLA促进兔颌骨缺损修复的实验研究

目的 动态观察补肾中药淫羊藿与纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸(nHAC/PLA)以及两者共同作用在兔下颌骨缺损修复中的作用.方法 制备16只兔双侧下颌骨10mm×8mm贯穿性骨缺损模型,随机分为对照组与淫羊藿组,两组左侧缺损区不添加材料,右侧缺损处添加活性材料(nHAC/PLA),术后2、4、8、12周处死动物,分别从大体、影像学、扫描电镜、组织学方面进行观察.结果 影像学观察淫羊藿组双侧、对照组右侧2、4、8、12周缺损区密度均高于对照组左侧.电镜观察可见淫羊藿组右侧、对照组右侧各时间点骨缺损区边界新骨形成均优于左侧,淫羊藿组成骨量较对照组多.组织学观察可见淫羊藿组左侧、对照组右侧、淫羊藿组右侧各时间点骨缺损区新骨形成均优于对照组左侧,新生骨及新生血管的量增多,骨成熟度高.随着时间延长,淫羊藿组右侧、对照组右侧有大量骨样组织长入活性材料,残留材料逐渐被活跃生长的骨组织包围并替代.结论 淫羊藿在骨缺损修复期间有良好的成骨作用,nHAC/PLA复合材料在体内试验过程中,具有良好的生物相容性和骨传导性,作为框架材料可以引导再生骨向缺损内生长,两者复合有望应用于临床骨缺损修复.     

组织工程骨修复兔下颌骨缺损的实验研究

目的:探讨以兔骨髓基质细胞(BMSCs)为种子细胞、纳米羟基磷灰石/胶原(nHAC)为支架材料、兔自体富血小板血浆(PRP)为生长因子,构建组织工程骨修复兔下颌骨缺损能力。方法:兔下颌骨体部15mm×15mm全层骨缺损分别采取:A组,组织工程骨;B组,自体髂骨;C组,单纯nHAC材料;D组,对照组修复。术后1、3、6个月行放射性核素骨检测、骨密度测定及组织学观察。结果:放射性核素骨检测:术后1、3个月,A、B组成骨代谢能力明显优于C、D组,术后6个月时,各组之间骨代谢能力无明显差异;骨密度测定:A、B、C组骨缺损区域骨密度逐渐增加明显高于D组,术后3个月A组、B组骨密度较C组明显提高;组织学检查:A组术后1个月可见小片状类骨质出现,nHAC开始降解,术后3个月时新生骨成大片状结构,术后6个月nHAC几乎全部降解,缺损由骨组织修复,其成骨量与B组无明显差异却明显大于C组,D组仅为纤维组织修复。结论:本实验构建的组织工程骨修复颌骨缺损能力与自体髂骨相似而强于单独使用nHAC,且nHAC材料于体内可完全降解,因此BMSCs与nHAC及自体PRP复合所构建的组织工程骨是一种良好的骨缺损替代材料。     

BMSCs/PRF复合载蛇床子素支架材料修复兔下颌骨缺损的实验研究

目的：探讨BMSCs/PRF复合载蛇床子素支架材料修复兔下颌骨缺损的实验研究的可行性。方法：36只新西兰大白兔随机分为3组,每组12只,双侧下颌骨制备缺损模型。A组植入BMSCs/PRF复合载蛇床子素支架材料;B组植入BMSCs复合载蛇床子素支架材料,C组单植入纳米羟基磷灰石支架材料。分别于术后2、4、8、12周处死实验动物,制备组织标本,行大体观察、影像学分析、HE染色、扫描电镜检测,并对影像学分析值及成骨情况加以评价,对分析数据结果使用SPSS17.0统计软件进行分析,P〈0.05有统计意义。结果：影像学检查及组织学染色显示A组骨缺损处愈合程度,成骨速度及其质量明显优于B组C组;扫描电镜显示A组该复合材料与组织相容性好,无炎症刺激反应;统计牙CT分析数据及新生骨面积,A组的成骨情况明显优于B组与C组（P〈0.05）。结论：BMSCs/PRF复合载蛇床子素支架材料有明显骨诱导作用,是一种新型复合材料,可望成为临床应用中修复颌骨缺损的新型材料。     

RhBMP-2与D、L-乳酸复合物修复兔下颌骨缺损的实验研究

目的:将聚D、L鄄乳酸(PDLLA)为载体的RhBMP(骨形成蛋白)鄄2缓释系统用于下颌骨缺损的修复,评价其降解缓释特性和诱导成骨作用。方法:低温下制备RhBMP鄄2缓释系统,并将其用于兔下颌骨缺损动物模型的骨缺损修复,设单纯载体材料置入和空白对照组。分别于第2、4、8、12及24周处死动物,取下标本作大体观察、X线片、常规组织学检查和四环素双标记硬组织切片观察,采用Freemax图象分析处理软件计算骨矿化沉积速度。结果:早期在植入物周围组织均存在非特异性炎症反应;4周时炎症反应已明显减轻。4、8、12周时试验组的骨矿化沉积速度分别为1.88、1.4、1.2μm/d,明显优于单纯载体组(P<0.05),但是PDLLA组也存在一定的成骨活性。结论:经物理方法复合的BMP/PDLLA植入物具有良好的生物相容性和诱导成骨能力,其修复颌骨缺损具有较好的效果和临床应用前景。     

bFGF复合NNB无机骨修复兔下颌骨缺损的实验研究

目的研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与天然型无机骨(NNB)复合人工骨修复兔下颌骨缺损的效果,以期为临床提供一种较为理想的骨替代材料.方法在30只成年新西兰兔双侧下颌骨下缘形成15mm×6mm全层骨膜骨质缺损,每一缺损作为一个实验单位,术后3周、6周、12周取材行大体标本、X片观察,并对HE染色切片行计算机定量分析.结果复合骨与NNB相比,同期成骨量大;6周时复合骨成骨面积尚不如自体骨,而12周时已接近自体骨水平,空白缺损则始终未能修复.结论复合骨生物相容性好,效果明显优于NNB,远期与自体骨相似,是一种较为理想的骨替代材料.     

富血小板血浆复合自体松质骨微粒修复兔下颌骨缺损的实验研究

目的探讨富血小板血浆和自体松质骨微粒复合物在颌骨缺损修复中的作用。方法在21只兔双侧下颌骨缺损模型中,按照完全随机化原则,一侧选用富血小板血浆和自体松质骨微粒复合物修复骨缺损,作为实验组;另一侧单纯以松质骨微粒修复,作为对照组。术后2、4、8周,分别处死7只实验动物,分别对标本进行大体、X线摄片、组织病理切片镜下观察。根据Lane—Sandhu骨移植X线片评分标准和骨移植组织学评分法,对X线检查结果和组织学病理切片镜下观察结果进行量化和统计学处理。结果实验组和对照组手术创口均一期愈合。术后不同时期,实验组新生血管的量、新生纤维组织、新生骨质均较对照组多。实验组和对照组评分结果有显著性差异。结论富血小板血浆能够促进颌骨缺损的愈合和成骨;富血小板血浆复合自体松质骨微粒可用于颌骨缺损修复。     

聚乳酸-脱钙冻干胚胎骨修复下颌骨缺损的实验研究

胚胎骨移植免疫原性低 ,爬行替代快 ,兼备骨诱导活性 ;聚乳酸 (ｐｏｌｙｌａｃｔｉｃａｃｉｄ ,ＰＬＡ)膜可体内降解 ,骨引导活性可靠 ,但单独应用均存在一定不足。我们将ＰＬＡ膜和脱钙冻干胚胎骨 (ｄｅｍｉｎｅｒａｌｉｚｅｄｆｒｅｅｚｅ ｄｒｉｅｄｆｅｔａｌｂｏｎｅ ,ＤＦＤＦＢ)复合修复兔下颌骨缺损 ,探讨ＰＬＡ ＤＦＤＦＢ的骨修复效果。1.材料和方法 :(1)ＰＬＡ膜 :分子量 190 0 0 ,厚 2 0 0 μｍ ,孔径 <5 μｍ。(2 )ＤＦＤＦＢ制备 :取孕 2 8ｄ胎兔四肢骨 ,剪成 1～ 2ｍｍ骨粒。 2 5℃下 1∶1氯仿 甲醇脱脂 ,浸入 2℃ 2ｍｏｌ/…     

用数字纱布复合富血小板血浆修复颌骨缺损的临床研究

36例颌骨缺损患者随机分成实验组和对照组,实验组18例颌骨缺损患者用自体富血小板血浆+数字纱布充填骨腔,对照组术后骨腔放置数字纱布。比较2组术后6个月颌骨缺损区骨密度的变化。结果显示,术后6个月颌骨缺损区骨密度的变化,实验组优于对照组。这表明用数字纱布复合富血小板血浆应用于颌骨缺损患者,有利于骨组织的生长。     

骨膜原位成骨促进兔下颌骨缺损修复的研究

目的动态观察并验证骨膜在骨缺损修复过程中的作用。方法12只6个月龄新西兰大白兔随机分为去除骨膜组和保留骨膜组,每组6只,均制备下颌骨体10mm×8mm全层骨缺损,术后2周、4周、8周每组处死2只动物,标本行肉眼、X线、扫描电镜及组织学观察,计算缺损区新骨面积,两组间行独立样本t检验。结果X线、扫描电镜及组织学结果显示,第4、8周时保留骨膜组的成骨速度、新骨量及骨密度均优于去除骨膜组,第2周时两组间差异不明显。保留骨膜组后期出现少量中央成骨,去除骨膜组整个观察期间主要为边缘成骨。第2周时两组间新骨生成面积无明显差异,第4、8周时差异有统计学意义。结论保留骨膜能促进成骨,手术1个月后骨膜成骨的效果更明显。     

天然骨无机材料修复颌骨缺损的临床研究

目的:观察天然多孔骨无机材料修复颌骨囊肿术后缺损的临床效果及适用范围。方法:对33例颌骨囊肿 术后缺损(体积≤4.2cm3)的病例随机分成二组,分别用天然多孔骨无机材料充填和血块充填植入颌骨缺损区。术 后随访1个月、3个月、6个月分别X线片动态比较其密度变化。结果:天然骨无机材料充填组1个月后骨密度增 高,3个月后趋近正常骨密度,颌骨缺损区修复速度明显比血块充填组快。结论:天然多孔骨无机材料在骨缺损区 植入时有引导骨再生的作用,对缺损区促进早期形成有功能性的、成熟的骨组织作用,是一种较为理想的修复骨缺 损的材料,适用范围一般为缺损区体积≤4.2cm3。     

纳米羟基磷灰石复合胶原/聚乳酸材料与骨髓基质细胞体外复合的实验研究

目的了解兔BMSCs与nHAC/PLA材料在体外共培养时细胞与材料复合的情况,进一步验证nHAC/PLA材料作为骨组织工程支架材料的可行性。方法将兔BMSCs与nHAC/PLA材料在体外复合共培养,通过倒置显微镜、扫描电镜观察细胞与材料的复合情况,用MTT法及碱性磷酸酶活性检测法检测材料对细胞增殖、分化的影响。结果BMSCs可以在nHAC/PLA材料表面及孔洞中良好地粘附、迁移、增殖和分化,复合培养5天后nHAC/PLA材料对BMSCs的增殖及分化表现出一定的促进作用。结论nHAC/PLA材料可以作为BMSCs良好的载体。     

Onlay bone augmentation on mouse calvarial bone using a hydroxyapatite/collagen composite material with total blood or platelet-rich plasma

ObjectiveThe aim of this study was to assess newly formed onlay bone on mouse calvarial bone using a new artificial bone material, a hydroxyapatite/collagen composite, with total blood or platelet-rich plasma.DesignThe hydroxyapatite/collagen composite material with normal saline, total blood or platelet-rich plasma was transplanted on mouse calvarial bone. The mice were sacrificed and the specimens were harvested four weeks after surgery. The newly formed bone area was measured on hematoxylin and eosin stained specimens using Image J software.ResultsThe hydroxyapatite/collagen composite materials with total blood or platelet-rich plasma induced a significantly greater amount of newly formed bone than that with normal saline. Moreover, bone marrow was observed four weeks after surgery in the transplanted materials with total blood or platelet-rich plasma but not with normal saline. However, there were no significant differences in the amount of newly formed bone between materials used with total blood versus platelet-rich plasma.ConclusionsThe hydroxyapatite/collagen composite material was valid for onlay bone augmentation and this material should be soaked in total blood or platelet-rich plasma prior to transplantation.     

纳米羟基磷灰石复合胶原/聚乳酸材料复合兔骨髓基质细胞异位成骨的实验研究

目的：观察nHAC/PLA复合兔BMSCs的异位成骨能力.方法：通过负压吸附使BMSCs与nHAC/PLA材料复合,将nHAC/PLA＋自体BMSCs、自体BMSCs、nHAC/PLA材料分别植入新西兰兔背部肌袋内,术后4、8周通过大体、组织学观察来研究其异位成骨能力.结果：自体BMSCs组与nHAC/PLA材料组在新西兰兔背部肌袋内均无骨质形成,nHAC/PLA＋自体BMSCs组8周时有大量较成熟的骨质形成,同时材料本身部分吸收.结论：通过负压吸附的方法制备出的nHAC/PLA＋自体BMSCs具有良好的异位成骨能力.     

纳米羟基磷灰石胶原骨植入治疗根分叉病变的临床研究

目的 探讨纳米羟基磷灰石胶原骨植入治疗根分叉病变的临床疗效。方法 对60例根分叉病变患者施行根分叉刮治术,并植入纳米羟基磷灰石胶原骨,观察其疗效。对所得数据进行配对t检验。结果 牙周袋深度减少2.93mm,附着丧失平均获得1.35mm,牙龈出血指数减少1.62,经检验均有显著性差异。结论 纳米羟基磷灰石胶原骨植入对治疗根分叉病变有一定临床价值。     

纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸材料复合自体骨髓基质细胞修复犬下颌骨节段性缺损的实验研究

目的观察多孔块状纳米羟基磷灰石／胶原／聚乳酸材料（nHAC／PLA）作为支架与自体骨髓基质细胞（BMSCs）复合对大动物承力骨节段性缺损的修复能力,并探讨合适的术中固定方法,为临床应用提供实验依据。方法将多孔块状nHAC／PLA加工成3．0cm×2．0cm×1．0em的长方体状。体外培养犬髂骨来源的BMSCs,经过BrdU标记及成骨诱导后,与nHAC／PLA复合,并植人犬下颌骨3．Ocm长的节段性缺损处,经过6个月的饲养,通过影像学和组织形态学观察修复骨缺损的能力。并通过免疫组织化学的方法检测种子细胞的归宿。同时设自体髂骨移植组及单纯材料植入组作为对照。结果术后6个月,下颌骨缺损区被nHAC／PLA＋BMSCs复合形成的组织工程骨完全修复,形态恢复良好,大量成熟的骨组织充满缺损区的全层,材料大部分被吸收。从免疫组织化学染色结果看,组织工程骨细胞来源于种子细胞BMSCs。用钛重建板和微型钛板联合固定或单纯用钛重建板固定都可行。结论nHAC／PLA作为支架材料与自体BMSCs复合形成的组织工程骨可以修复大动物承力骨较大的节段性缺损,并可直接用钛重建板对其进行固定。     

纳米晶羟基磷灰石复合胶原材料在拔牙创修复中的作用

目的:探讨纳米晶羟基磷灰石复合胶原材料(nHAC)在拔牙创修复中的作用。方法:拔除12只成年狗两侧下颌第二及第三切牙,并去除牙槽间隔,一侧随即植入nHAC,对侧植入致密多晶羟基磷灰石微粒人工骨(HA)作为对照。于植入后4、8、12周分别取材,采用99mTc MDP核素骨显像、组织学观察、图像分析等方法比较两种植入材料在牙槽窝中的骨修复能力。结果:nHAC植入牙槽骨后,材料被逐渐降解吸收,新骨不断生成,12周后植入材料几乎完全被成熟的骨组织取代;图像分析结果显示不同时间nHAC组新骨形成的比值显著高于HA组(P<0.01);4、8、12周nHAC组浓聚程度均高于HA组。结论:nHAC在修复拔牙创缺损时比HA效果更好,是一种较为理想的骨替代材料。     

Choukroun's platelet-rich fibrin (PRF) stimulates in vitro proliferation and differentiation of human oral bone mesenchymal stem cell in a dose-dependent way

Background

Choukroun's platelet-rich fibrin (PRF) is an autologous leukocyte- and platelet-rich fibrin biomaterial. The purpose of this study was to analyse the in vitro effects of PRF on human bone mesenchymal stem cells (BMSC), harvested in the oral cavity after preimplant endosteal stimulation.

Materials and methods

BMSCs from primary cultures were cultivated with or without a PRF membrane originating from the same donor as for the cells, in proliferation or osteoblastic differentiation conditions. After 7 days, the PRF membranes were removed. A series of cultures were performed using 2 PRF membranes, in order to measure the dose-dependent effect. Cell counts, cytotoxicity tests, alkaline phosphatase (ALP) activity quantification, Von Kossa staining and mineralisation nodules counts were performed at 3, 7, 14, 21 and 28 days. A last independent series was carried on up to 14 days, for a morphological scanning electron microscope (SEM) observation.

Results

PRF generated a significant stimulation of the BMSC proliferation and differentiation throughout the experimental period. This effect was dose-dependent during the first weeks in normal conditions, and during the whole experimentation in differentiation conditions. The cultures without PRF in differentiation conditions did not rise above the degree of differentiation of the cultures in normal conditions with 1 or 2 PRF up to the 14th and 28th day, respectively. The SEM culture analysis at day 14 allowed to show the mineralisation nodules which were more numerous and more structured in the groups with PRF compared to the control groups.

Discussion and conclusions

This double contradictory proliferation/differentiation result may be due to the numerous components of PRF, particularly the presence of leukocytes: any culture with PRF is in fact a coculture with leukocytes. It could be the source of differential geographic regulation processes within the culture. The combination of oral BMSC and PRF might offer many potential clinical and biotechnological applications, and deserves new studies.     

Effects of platelet-rich plasma on bone healing in combination with autogenous bone and bone substitutes in critical-size defects. An animal experiment

OBJECTIVES: An animal study was carried out to investigate the influence of platelet-rich plasma (PRP) on the regeneration of bony defects. MATERIAL AND METHODS: Critical-size defects in the forehead region of a mini-pig were filled with randomly distributed combinations of autogenous bone, tricalcium-phosphate granules (CeraSorb), bovine spongious blocks (BioOss) and a bovine bone inducing collagenous sponge (Colloss) with and without PRP in two preparations (Cusasan, 3i). The animals were killed after 2, 4 and 12 weeks. The specimens were evaluated microradiographically and immunohistologically. RESULTS: Autologous bone (38 +/- 9.9%) and Colloss (52.6 +/- 4.0%) showed the highest remineralization rates at 2 weeks. The initial high expression of BMP-2 in the Colloss-group gives evidence of an early initiation of bony regeneration. At 2 weeks PRP ad modum 3i was able to enhance bone healing significantly (P=0.028) only when applied in combination with autogenous bone (62.8 +/- 1.6%). Four weeks after surgery, both PRP preparations did no longer increase bony regeneration in the autogenous groups. The osteoconductive effect of Bio-Oss (38.7 +/- 5.5%) and CeraSorb (41+/-4.9%) was remarkable as well 4 weeks after surgery. Nevertheless, the addition of PRP hardly influenced bony regeneration, ceramic degradation or cytokine expression when bone substitutes were applied. At 12 weeks, the level of reossification had adjusted similarly in all groups. CONCLUSION: PRP did not add additional benefit when xenogenic bone substitutes were used. However, a significant effect on bone regeneration was found in the autogenous group initially when PRP is added.