深圳市首例中央空调冷却塔水嗜肺军团菌分离及鉴定报告

1976年美国费城爆发军团菌病(Lesionnairs’Diease LD)。我国从1982年南京军区总医院首次报道以来，已连续发生多起LD的集团发病，有10多个省市报告了LD的散发病例。已从医院、宾馆、影院的空调冷却塔水、锅炉房排气管冷凝水中分离到军团菌。北京市1997～1999年对四星级、五星级大饭店空调冷却塔水军团菌污染现况进行调查，所调查的14家饭店污染率高达85．7％，检测的38个冷却塔阳性率高达55．3％。2003年9月，在调查一起群体性发热事件过程中，我们采用分离培养及PCR方法在某公司写字楼中央空调冷却塔水中检测到1株嗜肺军团菌。现报告如下。     

19株嗜肺军团菌的分离和常规鉴定

军团菌广泛分布于水及其相关的环境中,主要通过冷热水供应和空调系统污染空气感染于人。我们在两年内对7间宾馆和影剧院的17个空调冷却塔,分4批采集水样65份,检出嗜肺军团菌(Legionella Pneumophila,简称:LP.)19株,其分离方法和常规鉴定结果如下:     

公共场所集中空调冷却水与嗜肺军团菌污染关系

军团菌病是由军团菌,尤其是嗜肺军团菌引发的肺部感染.人工水源如空调冷却水系统、冷热水管道系统、人工喷泉等均可检出军团菌.当空调冷却塔直接暴露在环境中,其运行过程中会产生细小的含菌气溶胶.人在正常呼吸时,有可能吸入气溶胶而引发军团菌感染.西班牙[1]、瑞典[2]、日本[3]等国均有关于空调冷却水系统作为传染源引发社区或医院获得性军团菌病感染的案例,南昌[4]、马鞍山[5]等十多个省市也有有关公共场所军团菌污染的相关报道.集中空调冷却水系统已被认为是军团菌病的主要源头.为分析冷却水水质与嗜肺军团菌污染之间的关系,于2009年7月对上海市100家公共场所集中空调冷却水部分水质指标及水中嗜肺军团菌污染情况进行调查,现将结果报告如下.     

聚合酶链反应检测空调冷却水中的嗜肺军团菌DNA

目的: 检测中央空调系统冷却水的嗜肺军团菌污染状况。方法: 建立了嗜肺军团菌MIP基因DNA的PCR检测方法,并对中央空调冷却水进行了嗜肺军团菌DNA的检测, 同时使用了BYCE培养基进行标本的军团菌分离培养。结果:在所有30 个受测系统水样中, 有12 (40% ) 个嗜肺军团菌DNA检测阳性, 与此同时只有6 个嗜肺军团菌经BYCE培养基培养阳性, 两种方法敏感性差别有统计学意义 (P< 0.05)。结论: 中央空调冷却水中嗜肺军团菌的污染有相当的普遍性     

广州市荔湾区公共场所集中空调冷却水嗜肺军团菌污染状况调查

目的了解广州市荔湾区公共场所集中空调冷却水嗜肺军团菌污染状况,为预防控制军团菌病提供科学依据。方法于2010--2013年对辖区内有集中空调通风系统的各类公共场所冷却水塔水采样检测嗜肺军团菌,并对检测出的嗜肺军团菌进行血清分型;另对其中28家公共场所作相关因素的卫生管理状况现场与问卷调查。结果共采集了荔湾区37家公共场所空调冷却水45份,其中19份水样检出21株嗜肺军团菌,水样检出率为42．2％（19／45）;37家公共场所空调冷却水中有18家检出嗜肺军团菌,总检出率为48．6％（18／37）;21株嗜肺军团菌以血清1型（LP1）为主,占57．1％（12／21）,其次LP4、LP12、LP13、LP14血清型各2株、LP11血清型1株,同一份水样中检出不同血清型（LP12和LP14）的水样有2份。相关卫生管理调查发现经营单位的系统卫生检查和清洗记录、空气过滤网／器定期清洗、冷却水塔定期消毒、风管系统清洗等项目的合格率较低,合格率分别为25．0％（7／28）、53．6％（15／28）、10．7％（3／28）、7．1％（2／28）。结论广州市荔湾区公共场所集中空调冷却水嗜肺军团菌污染较为严重,且经营单位规范管理不到位。应加强对公共场所集中空调通风系统卫生监督管理。     

泰州市116份公共场所集中空调冷却水嗜肺军团菌监测结果

目的 为了解泰州市公共场所集中空调冷却水中嗜肺军团菌污染状况,为军团病的防控提供数据。方法 于2013-2015年采集了泰州市公共场所集中空调冷却水116份,进行了嗜肺军团菌分离培养,同时进行嗜肺军团菌核酸检测。结果 116份冷却水样本中26份分离培养出嗜肺军团菌,检出率为22.4%,荧光PCR法嗜肺军团菌核酸检测结果31份核酸阳性,检出率为26.7%。宾馆(饭店)、商场(超市)冷却水样中分离培养检出率分别为19.7%、27.5%,荧光PCR法嗜肺军团菌核酸阳性检出率分别为22.3%、35.0%。结论 泰州公共场所的集中空调冷却水嗜肺军团菌污染情况严重,已对长期在此环境下工作人群健康构成潜在威胁。     

从肺炎病人血液中分离到一株嗜肺军团菌

从肺炎病人血液中分离到一株嗜肺军团菌宫仕梅，万超群，任红宇，卢锡华，李晓荧，肖彩云军团菌广泛存在于自然环境中，是一种条件致病菌，可引起以肺炎为主的多系统损伤性疾病。我国自８０年代初发现有军团病的爆发流行，并陆续分离到军团菌［１～４］．我们对首都医科大...     

从致死性肺炎病人分离的嗜肺军团菌14型

有两株可疑军团菌,一株是从死后病人的肺组织分离到的;另一株从支气管抽吸物分离到。其生长、生理和遗传学的特征表明它属于嗜肺军团菌,经血清学试验证明这两株菌同属于一种新的血清型——14型。目前美国流行的嗜肺军团菌种包括13个血清型,所有的这些血清型均能引起人患肺     

杭州市区公共场所空调冷却水中嗜肺军团菌的调查和分析

目的：了解杭州市公共场所大型中央空调冷却水中嗜肺军团菌的污染情况及主要血清型。方法：于2005年9月～10月，采集杭州市13家商场和宾馆、2家医院和1家福利中心等中央空调冷却塔冷却水29件，应用GVPC、BCYE、BCY培养基进行嗜肺军团菌分离培养、进行血清分型及种特异性PCR鉴定。结果：冷却塔冷却水中嗜肺军团菌的污染率达到44．83％（13／29），共分离到嗜肺军团菌16株（有2份水样中同时检出二个血清型以上菌株，其中一份有Lp1、Lp2、Lp3三个血清型，另一份有Lp3及未定型二个血清型）。血清型以LP1为主达37．50％（6／16）。结论：杭州市公共场所大型中央率调冷却水中嗜肺军团菌检出率较高，对市民健康构成了威胁。     

集中空调冷却水中嗜肺军团菌污染状况与防控措施

目的了解上海市金山区集中空调冷却水中嗜肺军团菌污染状况,探讨其有效防控措施。方法选取金山区安装开放式冷却塔的集中空调使用单位16家,现场调查冷却水消毒情况,并于2012年5—10月,每月采集冷却水样1次,进行嗜肺军团菌的培养与检测。结果金山区集中空调冷却水中嗜肺军团菌检出率为26.2%,血清型以LP1型为主,占68.2%。7、8、9月,空调冷却水中嗜肺军团菌检出率较高,分别为43.8%、37.5%、50%。在不做消毒处理、人工定期消毒和机械持续加药消毒的情况下,空调冷却水中嗜肺军团菌的检出率分别为58.3%、26.7%和0%。结论金山区集中空调冷却水存在一定程度嗜肺军团菌污染,当前以人工定期投药为主的水处理措施并不能解决嗜肺军团菌污染问题,建议采取持续消毒措施防控嗜肺军团菌的孳生。     

漂白粉杀灭嗜肺军团菌及其影响因素的实验研究

目的：研究漂白粉杀灭嗜肺军团菌效果及其影响因素。方法：应用悬液定量杀菌试验观察漂白粉溶液对嗜肺军团菌的杀灭作用及温度、PH值、有机物对其杀菌效果的影响，以空气人工喷菌消毒试验观察漂白粉气雾对空气中嗜肺军团菌的杀灭作用。结果：有效氯含量500mg/L、1000mg/L漂白粉溶液对嗜肺军团菌作用1min杀灭率为100％，有效氯含量100mg/L、250mg/L漂白粉溶液分别对嗜肺军团菌作用10min,5min，杀灭率均为100％。杀菌作用随温度升高、PH降低而增强，因有机物存在而减弱。有效氯含量4mg/L的漂白粉气雾对空气中嗜肺军团菌作用40 min，杀灭率为100％，结论：漂白粉可用于杀灭水环境和空气中的嗜肺军团菌。     

2007年上海市部分嗜肺军团菌血清1型菌株PFGE分型研究

[目的]研究2007年上海市公共场所部分空调冷却塔水中分离出来的嗜肺军团菌1型（L01）的基因特征。[方法]从空调冷却塔水中检测到26株Lp1嗜肺军团菌后,使用脉冲场凝胶电泳（pulsed－field gel electrophorefiifl,PFGE）技术对酶切后的L01军团菌全染色体DNA进行电泳获得指纹图谱,并用BioNumerics软件对其进行聚类分析。[结果]26株LO1军团菌可分为15个PFGE型。菌株间相似性系数在30．00％～100．00％之间不等,大部分菌株的PFGE型别差异明显,无优势型别。大部分PFGE型别的菌株来源场所单一;而大部分同一场所来源的军团菌菌株为相同的PFGE型。[结论]2007年上海市公共场所部分空调冷却塔水中分离出来的Lp1军团菌呈现基因多样性。     

Isolation of Legionella pneumophila from the UOEH cooling tower

Twelve samples of water taken from the cooling tower of UOEH were examined for the presence of microorganisms belonging to the genus Legionella by using a new selective medium, Wadowsky-Yee-Okuda (WYO) medium. Three samples contained this organism and they were identified as Legionella pneumophila from their biochemical properties. Among the three contaminated samples, two yielded L. pneumophila serogroup 1 and 3, and the other contained only L. pneumophila serogroup 1. One of the samples of the contaminated cooling tower water was treated with sodium hypochlorite as a disinfectant, indicating that this agent is probably not effective in eliminating L. pneumophila from cooling tower water at that concentration. An effective method of disinfection for Legionella spp. in the cooling tower must be developed to prevent infection in the hospital.     

嗜肺性军团杆菌培养基(BALM)的研究

蓝藻培养液能促进嗜肺性军团杆菌的生长,将此培养滤液适量加入参照硝酸铁培养基配方用国产试剂自制的基础培养基(LM)中,制成蓝藻培养基(BALM)。嗜肺性军团杆菌第6血清型标准株在BALM上形成菌落的能力优于BCYE;第1血清型标准株在两种培养基上的菌落形成能力较接近。从临床标本中分离NANJ-1株的结果表明,该菌株在BALM上的生长时间、菌落大小优于BCYE和其他几种培养基。     

Isolation and identification of Legionella pneumophila from material reclamation facilities

Sampling points at a material reclamation facility (MRF) were monitored over three months for the presence of Legionella spp. A number of different Legionellae were isolated and typed to identify L. pneumophila serogroup 1, the serotype which is the most common human pathogen. Phenotypic methods resulted in a total of 61 presumptive isolates of Legionella spp. Using latex agglutination, 26 out of the 61 were identified as L. pneumophila serogroup 1, 23 as L. pneumophila serogroups 2–14, and the remaining 12 were Legionella spp. However, on typing using pulse field gel electrophoresis, the 26 L. pneumophila serotype 1 isolates were a diverse group of 25 PFGE types with none persisting in the environment over time. This diversity suggests that there are a number of contamination sources for this important human pathogen in the MRF environment which constitute a risk to health for operatives in these facilities.     

空调冷却水军团菌微生态环境与繁殖传播研究

目的研究含氯消毒剂不能持久控制空调冷却塔水中军团菌繁殖、传播的原因,为寻找持久、稳固控制军团菌的方法提供依据.方法定期跟踪调查7个大型中央空调冷却塔水中军团菌消长情况及其有机物、细菌、藻类构成;模拟空调冷却塔环境条件,构建藻类减少和藻类增加2种不同的军团菌生态模型,观察军团菌在不同微生态环境中的繁殖速率,同时检测空气中的军团菌.结果空调冷却塔水中军团菌数与水中总有机碳、硝酸盐氮及藻体数(主要是绿藻门中的盘星藻、四棘藻和蓝藻门中的地中尖头藻这类体积较大的藻类)成正比,含氯消毒剂不能持久杀灭军团菌.军团菌在模拟的最佳空调冷却塔水环境(藻类增加模型)中,繁殖速率可达1 h增加1倍,并随藻体数增加维持指数生长状态;在模拟藻类减少空调冷却塔水环境中,加入军团菌液1 h后,军团菌数也可增加1倍,但以后繁殖速率越来越低,3 d后军团菌数为藻类增加生态模型的1/160.当水中军团菌数达4.2×104/ml时,在空气中可检测到军团菌.结论军团菌在20℃以下的空调冷却水中不是处于休眠状态,而是处于失活状态.军团菌的繁殖速率和持续时间主要与空调冷却水中的藻体种类及数量密切相关,其次与总有机碳、硝酸盐氮有关.改变军团菌的微生态环境,去除冷却水中的藻类,阻断军团菌在空调冷却塔之间的相互传播,是预防和控制军团菌病爆发流行的根本措施.     

Isolation of Legionella species/serogroups from water cooling systems compared with potable water systems in Spanish healthcare facilities

Surveillance of Legionella spp. in hospital water systems was performed in forty-four inpatient healthcare facilities in Spain during 2005-2006. A total of 2,341 samples were collected: 470 from cooling systems (cooling towers) and 1,871 from potable water systems. The latter included 211 from cold-water tanks and 260 from hot-water tanks, totalling 471 from central water reservoirs 136 from showers, 1,172 from unfiltered taps and 92 from filtered taps, totalling 1,400 from peripheral points. Temperature, chlorine levels and the presence of Legionella spp. were determined. In all, 373 (15.9%) samples yielded Legionella spp. Significantly higher isolation rates were obtained from cooling towers (23.8%) versus cold- and hot-water tanks (approximately 4.7%), due to the significantly higher number of samples positive for serogroup 1 (19.4 vs 0.9-3.5%). In potable water systems, no differences were found between central water tanks and showers, but significant differences in isolation rates between central water tanks and unfiltered taps were observed (4.7 vs 19.6%) due to differences in non-serogroup 1 L. pneumophila. Filters significantly decreased isolation rates of these serotypes (11 vs 0%). Some seasonal differences were noted, with higher isolation rates in summer for legionella serogroup 1 in cooling systems and for L. pneumophila serogroups 2-14 in potable water systems. In regression models, higher temperatures were associated with colonisation in cooling systems, while lower chlorine levels were associated with colonisation in potable water systems.     

公共场所环境军团菌监测与查询系统的设计与应用

为长期、连续、系统的对公共场所环境军团菌监测数据进行管理,提供简洁友好的查询界面,本研究构建了公共场所环境军团菌监测与查询系统。该系统可以将各地公共场所环境军团菌相关监测数据及时上传到系统中,利用系统对数据进行科学管理、分析和共享,从而提高工作效率,是后续搭建预警系统的基础。同时本研究的设计思路和方法能为构建公共卫生领域其它监测查询信息系统提供借鉴思路。     

北京市售酸奶中益生菌的分离鉴定及耐药性检测

目的对北京市售酸奶中添加的益生菌种类及浓度、益生菌酸奶分离株对6种抗生素(青霉素、氨苄青霉素、庆大霉素、万古霉素、克林霉素及红霉素)的耐药性进行检测。方法采用直接稀释法分离酸奶样品中的益生菌并进行活菌计数,对分离到的菌株进行革兰染色和生化反应鉴定,同时采用肉汤稀释法测定分离菌株对6种抗生素的最小抑菌浓度。结果用MRS培养基、(36±1)℃、厌氧培养条件下从31种北京市售酸奶样品中共分离出52株菌,其中革兰氏阳性杆菌37株,革兰阳性球菌15株。生化反应鉴定结果将52株菌分为乳酸杆菌和嗜热链球菌2大类共6个种;活菌计数结果显示,12份样品(38.7%)中益生菌计数低于国家标准规定的1×106cfu/ml(g);19份样品(61.3%)中活菌计数符合国家标准规定;所有酸奶样品分离菌株对青霉素,氨苄青霉素均敏感,而对庆大霉素的敏感性较低,1株菌对克林霉素和红霉素耐药,4株菌对万古霉素耐药。结论采集的北京市售酸奶样品大部分产品中添加的益生菌种类及活菌数符合国家标准规定,部分产品生产用菌种对一种或多种抗生素耐药。