ICP-MS法研究不同青黛和雄黄配伍组方对大鼠体内砷吸收的影响

目的:观察青黄散中青黛和雄黄剂量配比对体内砷变化的影响规律,为进一步研究青黄散在治疗白血病中量效关系提供理论基础。方法:以大鼠为研究对象,随机分为3组,分别以不同配伍的青黄散组方,青黛∶雄黄分别为7∶3组、8∶2组、9∶1组,其中3组中雄黄的剂量保持一致,每组5只,分别单次灌胃不同配比的青黄散混悬液,于服药后不同时间点采血,采用ICP-MS测得血中砷元素浓度,并计算主要药动学参数。结果:与其他组比较,9∶1组方青黄散,在大鼠体内其Cmax显著升高、AUC显著增加。结论:青黄散中青黛比例的增加能促进大鼠体内砷的吸收程度。     

桂枝附子含药血清对类风湿关节炎模型的影响

目的通过液质联用(LC-MS)技术分析桂枝附子温通经脉配伍灌胃后胶原关节炎(CIA)大鼠的血清移行成分,考察桂枝附子含药血清对类风湿关节炎模型的影响。方法选取雄性Wistar大鼠25只随机取6只分为正常组、桂枝附子组,每组3只,其余大鼠采用Ⅱ型胶原造模。将造模成功的6只CIA大鼠随机平均分为模型组、造模桂枝附子组,每组3只。予20倍给药剂量的桂枝附子配伍灌胃给药,正常组和模型组大鼠予生理盐水灌胃,60 min后经肝门静脉取血,采用甲醇沉淀法处理血清,予LC-MS技术对其进行分析。通过将含药血清与相同条件下测定的模型组血清、正常组血清、供试品以及对照品图谱比较,分析大鼠给药后血清中的移行成分。结果桂枝附子组含药血清中产生了10个移行成分,均为代谢产物;造模桂枝附子组含药血清产生了25个移行成分,其中8个为原形成分,17个为代谢产物。结论造模后大鼠的含药血清中移行成分明显增加,成分浓度也较高。由此可见,CIA大鼠病理模型选择性的吸收了桂枝附子含药学清中的成分,从基础层面探讨中医"有是病用是药"理论。     

六神丸诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的:从细胞凋亡角度探讨六神丸治疗白血病的机理,为临床应用提供依据。方法:分别制备六神丸乙醇提取剂和六神丸含药血清,用MTT法检测六神丸对HL-60细胞增殖的抑制作用,吉姆萨染色观察细胞凋亡的形态学变化,原位末端标记(POD)法检测细胞凋亡现象。结果:六神丸乙醇提取剂对HL-60细胞的增殖有明显的抑制作用,且呈现浓度依赖关系;中剂量组所得六神丸含药血清对HL-60细胞增殖的抑制作用优于低剂量组和高剂量组。吉姆萨染色显示六神丸乙醇提取剂和六神丸含药血清处理过的HL-60细胞均出现典型的凋亡形态。原位末端标记表明,六神丸乙醇提取剂诱导HL-60细胞凋亡在一定范围内呈现时间-浓度依赖关系;六神丸含药血清诱导HL-60细胞凋亡作用优于As_2O_3血清组和空白血清组(P<0.01)。结论:六神丸体外诱导HL-60细胞凋亡可能是六神丸治疗白血病的作用机制之一。     

青黄散治疗白血病的研究

白血病的病因,不外有害的物理、化学、生物学的因素,这些因素中医统称为邪毒。邪毒入血伤髓,产生血瘀,瘀血不去,新血不生,因而出现贫血、发热、骨痛、肝脾淋巴结肿大、骨髓有核细胞及幼稚细胞增多、舌质紫暗、皮肤瘀斑等症状和体征。病因治疗应当解毒化瘀。笔者从《景岳全书》、《世医得效方》、《奇效良方》等古人医籍的解毒章节中,找到用青黛、雄黄组成的青黄散有解毒化瘀功效,自60年代开始我科即用青黄散治疗白血病。青黛味咸性寒,入肝经,可消肿散瘀、凉血解毒。成分含靛蓝、靛玉红、蛋白质、鞣酸及无机盐等。雄黄味辛温,可解百毒,消积聚…     

补骨脂-肉豆蔻药对含药血清指纹图谱研究

目的建立补骨脂-肉豆蔻药对含药血清指纹图谱并分析补骨脂-肉豆蔻药对的入血成分。方法对20只SD大鼠分别ig 10个不同批次的补骨脂-肉豆蔻药对提取物,采用UPLC法比较体外供试品、含药血清和空白血清指纹图谱,分析其入血成分。结果测定给药后入血成分并建立UPLC指纹图谱,标出13个共有峰(相似度均在0.90以上),其中10个峰来源于体外供试品中原型成分,3个峰为代谢产物。结论首次采用血清药物化学方法,建立了补骨脂-肉豆蔻药对血清指纹图谱,反映补骨脂-肉豆蔻药对口服给药吸收入血情况,为其体内药效物质研究奠定基础。     

柴胡疏肝散含药血清对NG108-15神经元多靶点干预的药物化学研究

目的:探索中药复方柴胡疏肝散配伍对神经元多靶点作用的物质基础和化学机制.方法:采用高效液相色谱对该复方含药血清、水煎剂和含药血清对NG108-15神经元细胞株干预后细胞内药物成分进行检测.结果:在血清和NG108-15神经元细胞中发现多种柴胡疏肝散水煎剂原型成分和移形成分.结论:实验证明柴胡疏肝散含药血清进入NG108-15细胞内部的药物有效成分有多种,符合霰弹靶点理论.     

益气养阴方对急性白血病细胞HL-60增殖和细胞形态的影响

目的:观察益气养阴方对急性白血病细胞HL-60增殖和细胞形态的影响。方法:制备益气养阴方含药血清,并设立对照组、低、中、高剂量含药血清,对急性白血病细胞HL-60进行培养。利用MTT比色检验法、Wright-Gimsa染色检测法分别检测细胞增殖和细胞形态变化。结果:与对照组比较,益气养阴方对HL-60细胞有一定抑制作用(P0.01);低剂量组HL-60细胞形态变化不明显,中剂量组少数细胞出现变化,高剂量组变化最明显。结论:益气养阴方能够抑制急性白血病细胞HL-60增殖和诱导白血病细胞分化。     

开心散含药血清对Aβ_(1-42)损伤的神经干细胞增殖和分化能力的影响

目的:探讨开心散含药血清对人β淀粉样蛋白1-42(Aβ_(1-42))损伤的神经干细胞(NSCs)增殖和分化能力的影响。方法:取6月龄C57BL/6小鼠40只,分成4组,空白组给予0.9%氯化钠溶液,其他组分别给予开心散水煎液12、24、48 g·kg~(-1)制备含药血清。原代培养新生C57BL/6小鼠海马NSCs,采用Aβ_(1-42)孵育24 h诱导NSCs的阿尔茨海默病(AD)细胞模型。细胞分为5组,分别为对照组、模型组及开心散含药血清高、中、低剂量组。对照组和模型组给予10%空白血清,给药组分别给予10%的开心散48、24、12 g·kg~(-1)组含药血清;CCK-8法检测NSCs活力;免疫荧光法(IF)检测增殖条件下Ki67阳性细胞数量,分化条件下胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、中分子量神经丝蛋白(NF-M)和硫酸软骨素蛋白多糖2(NG2)阳性细胞数量及占比。结果:与模型组比较,各组开心散含药血清均能提高Aβ_(1-42)损伤的NSCs存活率,增加Ki67阳性细胞数量,并增加NF-M阳性细胞占比。结论:开心散含药血清能够提高Aβ_(1-42)损伤的NSCs的存活率,拮抗NSCs增殖和分化能力的异常。     

柴胡疏肝散入血成分的初步研究

目的探讨柴胡疏肝散入血成分,为研究中药复方的作用机制奠定基础。方法取正常饲养未灌药10只雄性SD大鼠的血清作为空白血清,取10只灌胃柴胡疏肝散雄性SD大鼠的血清作为含药血清,另取柴胡疏肝散水煎剂作为对照品,对上述样品进行超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)法检测,结合中药化学成分数据库及相关文献,定性分析柴胡疏肝散入血成分。结果含药血清中检测出49种入血原型成分,这些化学成分主要来源于川芎、陈皮、白芍、枳壳和甘草。结论柴胡疏肝散的入血成分是各组方药味配伍后共同作用的结果。     

杜仲的血清药物化学研究

目的对杜仲Eucommia ulmoides进行血清药物化学研究。方法采用UHPLC-Q-TOF-MS技术,通过比较杜仲提取物、给药组及空白组大鼠血清的指纹图谱,确定口服杜仲提取物后大鼠血中移行成分。结果给药组大鼠血清指纹图谱与空白组血清指纹图谱对比有明显不同。含药血清中出现7个移行成分,与杜仲提取物指纹图谱在相同保留时间出峰,为原型成分。采用对照品对照,确定5个色谱峰所表征的化学成分为原型吸收入血成分,依次为京尼平苷酸、原儿茶酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇单葡萄糖苷。通过查阅文献,推断了2个色谱峰所表征的化学成分可能为1-羟基松脂醇二葡萄糖苷、杜仲醇。结论血中移行成分可能为杜仲的体内直接作用物质,为明确杜仲药效物质基础提供了科学依据。     

基于“蛋白质相互作用网络-分子对接技术-体外实验”三维模式分析青黛对慢性粒细胞白血病的作用机制

目的：在慢性粒细胞白血病（CML）蛋白质相互作用网络构建与分子对接技术指导体外实验模式构建下,探讨青黛干预CML K562细胞的有效分子学机制。方法：使用在线人类孟德尔遗传数据库（OMIM）筛选CML相关基因,String 10.0用于进一步文本挖掘并构建CML可视化蛋白质相互作用网络,将互作数据读入Cytoscape 3.4.0,通过插件CentiScaPe 2.1实现网络拓扑分析;青黛活性小分子物质从第三方数据库获取,Chemoffice 8.0与Sybyl 8.1对其再构建、优化,得到青黛小分子配体结构库,通过Surflex-Dock模块与受体靶点进行分子对接,打分后得到关键靶标。随后针对其进行实验验证,通过噻唑蓝（MTT）比色法检测空白组（无药血清）与试验组（10%,20%和30%含药血清）在24,48,72 h时对K562细胞的增殖抑制率,利用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测两面神激酶（JAK）2蛋白的表达情况。结果：构建了由425个节点（蛋白质）和2 799条边（相互作用）组成的蛋白质相互作用网络,分析得出关键靶标JAK2。研究表明青黛能抑制K562细胞的增殖并能降低JAK2蛋白的表达。结论：CML是一个受多基因调控的复杂疾病,JAK2很可能是其关键节点,而青黛的有效成分靛玉红可通过降低JAK2的表达来干预K562细胞增殖。     

青黛镇痛、抗炎药效学研究

目的:观察不同给药方式下青黛的镇痛、抗炎作用。方法:分别采用ig和外涂两种给药途径,用药4 d。动物分为空白对照组,阳性药组以及青黛治疗组(600,300,150 mg·kg-1 ig 3个剂量;外涂青黛给药剂量为小鼠400 mg/只、大鼠500 mg/只)。以热板法和小鼠扭体法观察青黛的镇痛作用;以二甲苯致小鼠耳廓肿胀法、大鼠棉球肉芽肿法观察青黛的抗炎作用。结果:ig给药,青黛对热板所致的小鼠疼痛可使痛阈提高达47%,醋酸致小鼠疼痛的扭体减少达40%,与空白组比较差异显著(P<0.05或P<0.01);对急性炎症模型耳廓肿胀抑制率为48%,与空白组比较抗炎作用显著(P<0.05),对亚急性炎症模型作用不明显;外涂给药,对热板法致的小鼠疼痛有显著镇痛作用(P<0.01),对醋酸所致的小鼠扭体反应影响不明显,对急性、亚急性炎症模型均有明显抗炎作用(P<0.01)。结论:结果提示青黛内服、外用均有一定的镇痛、抗炎作用;不同给药途径对于不同疼痛、炎症模型的影响表现出一定的差异性。     

青黛通过影响GPR41/43信号通路调控溃疡性结肠炎大鼠Treg/Th17免疫平衡的机制研究

目的探讨青黛通过影响GPR41/43信号通路调控溃疡性结肠炎大鼠Treg/Th17免疫平衡的机制。方法将24只健康的SPF级雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组与青黛组。模型组和青黛组大鼠自由饮用4.5%DSS溶液以制备结肠炎模型,空白组自由饮用去离子水作为对照,同时青黛组大鼠给予青黛(600 mg/kg)灌胃,模型组、空白组大鼠给予去离子水处理,每天观察大鼠一般情况,记录体质量、粪便性状,检测粪便潜血,计算疾病活动指数,干预7 d,麻醉后处死大鼠,取血及结肠组织。RT-qPCR法检测结肠RORγt mRNA、Foxp3mRNA的表达;Western Blotting法检测结肠GPR41、GPR43、RORγt、Foxp3蛋白的含量,ELISA法检测血清IL-10、IL-17水平。结果与空白组相比,DSS诱导的结肠炎大鼠结肠GPR41、GPR43、FOXP3,血清IL-10的表达明显降低(P <0.05或P <0.01),结肠RORγt、血清IL-17表达明显升高(P <0.05或P <0.01);青黛干预后,大鼠结肠GPR41、GPR43、FOXP3、FOXP3 m RNA,血清IL-10的表达较模型组明显升高(P <0.05或P <0.01),结肠RORγt、RORγt mRNA、血清IL-17表达较模型组明显降低(P <0.05)。结论青黛能够上调GPR41、GPR43的表达,进而调节Treg/Th17免疫平衡治疗溃疡性结肠炎。     

连续式泡沫浮选分离青黛的研究

目的 研究连续式泡沫浮选分离青黛最佳工艺条件.方法 以青黛中靛蓝质量分数和回收率为指标,对捕收区高度、泡沫层高度、冲洗水速率、给料速率、充气速率进行了单因素考察,研究其对连续式泡沫浮选青黛的影响效果并优化其工艺参数.结果 捕收区高度为1.5m,泡沫层高度为30cm,给料速率为0.1 cm/s,冲洗水速率为0.01 cm/s,充气速率为1.5cm/s,在此条件下青黛浮选回收率可达75%以上,靛蓝质量分数在5.0%以上.结论 连续式泡沫浮选分离青黛工艺稳定可行,为中试放大提供了一定依据.     

基于色度分析原理的青黛有效成分含量与其色度值的相关性分析

目的:研究青黛粉末外观颜色及其提取液颜色与靛蓝、靛玉红含量的相关性。方法:采用HPLC法测定27批青黛中靛蓝、靛玉红的含量,采用分光测色仪测定青黛粉末及提取液的色度值L~*,a~*,b~*。运用SPSS 20.0软件对青黛有效成分含量与其色度值进行相关性及多元线性回归分析。结果:感官评定青黛粉末外观颜色结果表明,随着粉末颜色加深,分光测色仪测定粉末和提取液的明亮度(L~*)降低、红-绿色度(a~*)升高。相关性分析表明,靛蓝含量与青黛粉末L~*呈负相关(P0.01),相关性系数为-0.520;与a~*呈正相关(P0.01),相关性系数为0.567。靛玉红含量与青黛粉末、提取液的L~*呈负相关(P0.01),相关性系数分别为-0.635,-0.580;与a~*呈正相关(P0.01),相关性系数分别为0.706,0.493。结论:青黛粉末外观颜色较深者,其靛蓝、靛玉红含量较高;青黛粉末L~*,a~*与靛蓝、靛玉红含量的相关性比提取液的相关性大;青黛粉末颜色与靛蓝、靛玉红含量具有显著相关性,为青黛快速鉴别方法提供参考依据;采用分光测色仪测定青黛色度值的方法具有稳定性、科学性和可靠性。     

青黛膏治疗流行性腮腺炎临床研究

目的：探讨青黛膏治疗流行性腮腺炎的临床疗效。方法：100例患者随机分为治疗组50例和对照组50例,治疗组用贴敷青黛膏（方药组成：青黛、乳香、没药、琥珀、松香、樟脑、冰片、黄蜡）,配合口服双黄连口服液治疗,对照组单纯口服双黄连口服液治疗。观察两组用药3 d后有效率。结果：治疗组50例,有效率为94%,对照组50例,有效率为84%。经统计学处理,治疗组疗效明显优于对照组,组间比较有显著差异（P〈0.05）。结论：青黛膏治疗流行性腮腺炎有显著疗效。     

对11种青黛的质量考察

目的：对目前市场上青黛药材进行质量考察。方法：采用薄层色谱法，紫外分光光度法等对其进行定性。定量分析。结果：目前市场上青黛的质量存在较大差异。青黛中靛蓝的含量最高达3.12% ，最低仅为1.29%。结论：应进一步规范青黛的生产工艺，完善质量标准，严把质量关。     

红藤方对体外培养的大鼠子宫内膜细胞生长特性的影响

[目的]探讨红藤方对大鼠子宫内膜细胞生长特性的影响.[方法]选用SD成熟雌性大鼠建立大鼠子宫内膜细胞培养模型.用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度不同处理方式的红藤颗粒剂含药血清作用24、48、72和96 h后对大鼠子宫内膜细胞生长的影响,用达那唑含药培养液作阳性对照.[结果]不同浓度含药血清培养大鼠子宫内膜细胞相应时间后,细胞的增殖活性随含药血清浓度升高而降低,呈明显的剂量依赖性,随作用时间延长而降低,具有明显的时间依赖性.[结论]红藤方颗粒剂可显著抑制大鼠体外培养的内膜细胞的生长.     

青黛中靛玉红提取方法的研究

目的:探讨从青黛提取较高纯度靛玉红单体的方法。方法:用乙酸乙酯从青黛中提取靛玉红,然后比较提取液在硅胶柱和氧化铝柱的行为。结果:选用硅胶柱分离青黛中的靛玉红,经HPLC测定,靛玉红纯度达98.3%。结论:利用较简单的实验路线,从青黛中得到较高纯度的靛玉红单体。     

病理与生理状态下化痰降气胶囊大鼠血清移行成分对比研究

采用UPLC-Q-TOF-MS技术,分析化痰降气胶囊在生理和慢性阻塞性肺疾病(COPD)状态下大鼠的移行成分及其体内代谢过程的差异。通过烟熏复合气管滴入脂多糖法建立COPD大鼠模型,分别给予正常和模型大鼠化痰降气胶囊,灌胃给药,肝门静脉采血,经样品处理后,制得含药血清样品。将制得的10批化痰降气胶囊含药血清样品,进行UPLC分析,评价含药血清的质量稳定性。运用UPLC-Q-TOF-MS,进行移行成分质谱信息采集。该研究鉴定了正常大鼠化痰降气胶囊血清移行成分28个,COPD模型大鼠化痰降气胶囊血清移行成分25个,两者既存在相同移行成分,也存在差异移行成分;进一步研究发现2种状态下大鼠的移行成分的体内代谢过程也存在差异,在正常大鼠中,移行成分的代谢类型多以Ⅰ相反应居多,在COPD模型大鼠中,Ⅰ相反应相应减少,Ⅱ相反应相应增加。该研究借助UPLC-Q-TOF-MS技术,分析了在生理和病理状态下化痰降气胶囊的大鼠血清移行成分及其体内代谢过程的差异,表明在COPD病理状态下,血清移行成分会出现差异,体内一些代谢酶的活性会发生改变,进而影响药物在体内的代谢转化过程,为进一步阐明化痰降气胶囊的体内代谢过程及药效物质基础奠定了基础。