睡眠间歇低氧大鼠心室重塑与心肌细胞凋亡和Rho激酶表达的关系

目的 观察睡眠中间歇低氧状态下大鼠心室重塑、血液动力学异常与心肌细胞凋亡和Rho激酶表达的关系,探讨间歇低氧与心室重塑和心力衰竭之间关系的分子机制.方法 24只雄性Wistar大鼠分3组,每组8只.给予适度限制饮食量的普通饮食和每天正常运动量游泳1h,分为常氧(A组)、间歇低氧(B组)、间歇低氧+法舒地尔(C组),60...     

Rho/Rho激酶信号通路与血管内皮通透性的研究

Rho/Rho激酶信号通路是体内普遍存在的一条信号通路,它通过调节细胞内肌动蛋白骨架的聚合状态而扮演着"分子开关"的角色,参与细胞形态维持、细胞粘附与迁移、细胞增殖与凋亡、基因转录、平滑肌收缩等多种生物学行为.Rho/Rho激酶信号通路在血管内皮通透性的病理生理过程中发挥了重要作用,抑制Rho/Rho激酶信号通路取得了显著的内皮保护作用.     

雌激素对大鼠阴道平滑肌细胞RhoA/Rho激酶表达的影响

目的 研究去势及雌激素替代对大鼠阴道平滑肌细胞RhoA/Rho激酶表达的影响.方法 30只10周龄雌性SD大鼠随机均分成:对照4和6周组(C4,C6)、去势4和6周组(OE4,OE6)和去势+雌二醇(E2)干预4和6周组(E4,E6).E4和E6组分别于去势后每周皮下注射E2(250 μg/kg)4和6周,OE4和OE6组注射等量0.9％氯化钠注射液,4和6周时测定血清E2水平及用免疫组化和Western blot检测阴道平滑肌细胞Rock1、Rock2的表达.结果 OF4和OE6组血清E2水平显著低于C4和C6(P＜0.01),OF4和OE6组阴道平滑肌细胞Rock1表达显著高于C4和C6(0.261 ±0.039 vs 0.207 ±0.032;0.270 ±0.037 vs 0.208 ±0.032,P＜0.05),OE4和OE6组阴道平滑肌细胞Rock2表达显著高于C4和C6(0.377 ±0.035 vs 0.294 ±0.033;0.388 ±0.038 vs 0.300 ±0.034,P＜0.05).结论 低雌激素水平上调RhoA/Rho激酶在大鼠阴道平滑肌中的表达,E2替代治疗可抑制RhoA/Rho激酶在去势大鼠阴道平滑肌中的高表达,雌激素可能通过调控RhoA/Rho激酶表达影响阴道平滑肌功能.     

Rho激酶抑制剂对压力超负荷大鼠心肌纤维化的影响

目的:观察Rho激酶抑制剂法舒地尔对大鼠心肌纤维化的影响。方法:采用腹主动脉缩窄术制备SD大鼠心肌纤维化模型,动脉夹闭4周后,随机分为4组:假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、法舒地尔高剂量(FH,30mg/Kg/天)组和法舒地尔低剂量(FL,10mg/Kg/天)组。术后8周末,计算各组大鼠心脏质量指数(HWI)、左室质量指数(LVWI),观察心肌组织HE染色和Masson染色,碱水解法测定心肌组织羟脯氨酸(HYP)含量,免疫组化分析磷酸化的肌球蛋白磷酸酶靶蛋白亚基1(p-MYPT1)、转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)水平。结果:与Sham组相比,Model组大鼠LVWI及HYP含量显著升高(P<0.01),心肌细胞排列紊乱,间质大量胶原纤维沉积,心肌组织p-MYPT1水平升高(P<0.01),TGF-β1、CTGF表达升高(P<0.01);与Model组相比,FH组和FL组大鼠LVWI及HYP含量降低(P<0.05),间质胶原蛋白沉积程度减轻,心肌组织p-MYPT1、TGF-β1、CTGF水平均降低(P<0.05或P<0.01)。结论:Rho激酶参与压力超负荷诱导的大鼠心肌纤维化,法舒地尔抑制心肌纤维化进展的作用与TGF-β1和CTGF水平的降低有关。     

心肌梗死大鼠心室重塑的动态观察

目的：探讨大鼠心肌梗死（MI）后细胞因子TGF—β1及心室重塑指标动态变化及其与重塑的关系。方法：结扎冠脉左前降支建立心肌梗死（MI）模型并设立假手术对照组。术后3天、1周、4周和24周检测血流动力学和组织形态学及胚胎基因（B肌球蛋白重链），Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGF—β1的mRNA水平。结果：与假手术组相比，MI组血流动力学改变明显。心肌梗死后第3天胚胎基因β-MHC、胶原、TGF-β1都上升，一直持续到第4周。梗死区Ⅰ、Ⅲ型胶原在第4周仍然比非梗死区高，即使在第24周非梗死区的胶原水平仍然高于假手术组。TGF—β1在第1周达到高峰后逐渐下降到第24周时非梗死区与假手术组相比有统计学差异（P〈0．01），相关性分析提示梗死区TGF-β1与Ⅰ、Ⅲ型胶原、β-MHC存在相关；非梗死区TGF-β1与Ⅰ、Ⅲ型胶原存在相关。结论：TGF—β1参与心室重塑病理生理过程并且可能是心室重塑的病因之一。     

Rho激酶对大鼠海马神经元CRMPs mRNA表达的调节

目的探讨Rho激酶对大鼠海马神经元CRMPs mRNA表达的调节。方法体外培养新生大鼠海马神经元5d后,用Rho激酶激动剂LPA和抑制剂Y27632改变细胞内Rho激酶的活性,采用突起提取试剂盒提取神经元的突起,检测突起生长的变化,并应用实时荧光定量PCR方法检测CRMPs mRNA的表达。结果对照组细胞突起提取液吸光度值为0.0426±0.0062,用LPA处理后的细胞突起提取液吸光度值较对照组明显降低(P<0.05);Y27632组细胞突起提取液的吸光度值较对照组明显升高(P<0.05)。各基因在培养的大鼠海马神经元中均能检测到,对照组分析显示CRMP 1、2、4、5 mRNA表达水平相近且较高,CRMP3 mRNA表达水平相对较低;LPA处理后,CRMP1与CRMP3 mRNA表达水平与对照组相比明显上调(P<0.05),CRMP5 mRNA表达水平明显下调(P<0.05),CRMP2与CRMP4 mRNA表达水平与对照组相比无明显差异(P>0.05);Y27632处理后,CRMP1与CRMP3 mRNA表达水平与对照组相比明显下调(P<0.05),CRMP2、CRMP4和CRMP5 mRNA表达水平与对照组相比无明显差异(P>0.05)。结论 Rho激酶通过影响CRMP1、CRMP3和CRMP5 mRNA的表达调控神经元突起生长。     

氟伐他汀对大鼠心肌梗死后心室重塑的影响

目的:探讨羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂氟伐他汀对SD大鼠心肌梗死后心室重塑的过程及心功能的影响。方法:SD大鼠冠状动脉前降支结扎形成心肌梗死,24h后存活的大鼠随机分成心肌梗死(AMI)对照组和氟伐他汀治疗组,治疗组予以氟伐他汀20mg·kg^-1·d^-1灌胃给药,对照组予以蒸馏水灌胃;另设假手术组。8周后进行心脏超声、血液动力学检测判定心脏功能和进行心脏形态学分析;同时检测血浆总胆固醇(Tch)、肌酐(Cr)、天冬氨酸氨基转移酶(AST),NO₂^-/NO₃^-、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathioneperioxidase,GSH-PX)以及血浆、心肌脂质过氧化物(LPO)水平。结果:氟伐他汀组血浆Tch水平与AMI组比较没有显著性差异,平均主动脉压和心率差别无显著性,显著降低了左室舒张末压和减少了肺相对重量(P＜0.05);减少了右室相对重量、左室后壁厚度、肺相对重量和心肌纤维化(P＜0.05,P<0.01);降低了血浆和心肌的LPO的水平,抑制NO₂^-/NO₃^-的过度表达,增加了GSH-PX的表达(P＜0.05);血浆Cr和AST水平无显著差别(P＞0.05)。结论:氟伐他汀改善大鼠AMI后心室重塑,相对延缓心力衰竭的进展;氟伐他汀抗氧化机制可能参与这个过程。     

阿托伐他汀卡维地洛合用对老年高血压伴心衰患者心室重构及心功能的影响

目的探讨阿托伐他汀卡维地洛及合用对老年高血压伴慢性心力衰竭（CHF）患者心功能的影响及其可能的机制。方法入选门诊老年高血压伴CHF患者179例，随机分为卡维地洛治疗对照组（口服6．25～50mg／d）和阿托伐他汀／卡维地洛联合治疗组。治疗随防8个月。治疗前及后行超声心动图、核素心血池检查。结果治疗8个月后，联合治疗组患者与卡维地洛组比较。明显降低了左室重量指数，增加了左室射血分数及左室高峰充盈率。结论阿托伐他汀与卡维地洛合用，可进一步改善老年高血压伴CHF患者的左室重构和心功能。     

肝素对RhoA/Rho激酶信号通路激活致心肌肥厚的影响

目的 探讨激活心肌细胞三磷酸肌醇受体(IP3R)是否能触发RhoA/Rho激酶介导的心肌肥厚信号通路及肝素的干预作用,阐明除经典信号传导通路之外的作用途径及干预方式. 方法 培养Wistar乳鼠心肌细胞,RT-PCR法检测应用三磷酸肌醇(IP3)刺激后RhoA、Rho激酶基因表达,Western blotting法检测IP3刺激后胚胎基因α-肌动蛋白(α-actin)、β主要组织相容性复合体(β-MHC)及即早基因(c-fos、c-myc)蛋白表达及肝素的干预作用. 结果 给予IP3(10-7mmol/L)刺激心肌细胞IP3R,能明显激活心肌细胞RhoA/Rho激酶信号通路,促使心肌细胞的即早基因和胚胎基因表达(P＜0.05),且随时间延长而作用明显,肝素可抑制上述作用(P＜0.05). 结论 激活IP3R介导的RhoA/Rho激酶信号通路能显著地促使心肌细胞肥大,此信号通路不同于已知的G蛋白耦联受体介导的心肌肥厚信号转导途径,且肝素有望成为抑制心肌细胞生长的药物之一.     

人参皂甙Rb1通过Rho/Rho激酶通路影响低氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及SERT和5-HT_(1B)R表达

目的:观察人参皂甙Rb1对低氧性大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)5-羟色胺转运体(SERT)和5-羟色胺1B受体(5-HT_(1B)R)表达及细胞增殖的影响,并探讨Rho/Rho激酶通路在其中的作用。方法:分离并培养健康雄性SD大鼠PASMCs,随机分为常氧组(normal组)、低氧组(hypoxia组)以及低氧加50、100和200 mg/L人参皂甙Rb1组(HR50、HR100和HR200组),采用CCK-8、Brd U结合流式细胞术、Western blot及RT-PCR等方法,观察大鼠PASMCs的增殖程度以及SERT和5-HT_(1B)R的mRNA和蛋白表达变化;另取PASMCs分为normal组、hypoxia组、HR200组和低氧加Y-27632组(HY组),检测Rho激酶(ROCK1)mRNA表达和肌球蛋白磷酸酶目标亚单位1(MYPT1)磷酸化水平。结果:与normal组比较,hypoxia组PASMCs增殖明显(P0.01);与hypoxia组比较,人参皂甙Rb1可明显抑制PASMCs的增殖(P0.01),并浓度依赖性抑制SERT和5-HT_(1B)R的mRNA与蛋白表达(P0.05);HR200组可明显抑制ROCK1的mRNA表达和MYPT1磷酸化水平(P0.01),与HY组相比较,差异无统计学显著性。结论:低氧能诱导大鼠PASMCs增殖,上调SERT和5-HT_(1B)R表达;人参皂甙Rb1能浓度依赖性抑制这种作用,其机制可能与抑制Rho/Rho激酶通路表达有关。     

达利全对心力衰竭大鼠β_1、β_2、β_3肾上腺素能受体的影响

目的研究达利全(α_1肾上腺素受体阻断剂、β肾上腺素受体非选择性阻断剂)对升主动脉缩窄压力超负荷心力衰竭大鼠β_1、β_2、α_3肾上腺素能受体(β_1AR、β_2Ar、β_3AR)表达的影响,探讨达利全改善心力衰竭的新机制。方法将升主动脉缩窄术后心力衰竭Wistar雌性大鼠随机分为4组,一组为心力衰竭组,给予生理盐水灌胃,每日2次(n=10);其余3组为治疗组,治疗组分别给予达利全3mg/Kg、达利全12.5mg/Kg、达利全50mg/Kg,灌胃,每日2次(n=10);治疗12周。同时制备模型设置假手术组作为对照(n=10),不予处置。观察各组大鼠各项指标变化。结果与假手术组对比,心力衰竭鼠心肌细胞β_1ARmRNA表达显著降低(P<0.05),而β_3ARmRNA表达显著升高(P<0.05),药物治疗12周后,与心力衰竭组对比,β_1ARmRNA表达显著升高,β_3ARmRNA表达显著降低,且随剂量增加作用越明显(P<0.05);β_2AR mRNA表达各组之间无明显差异(P>0.05)。结论达利全通过调节心肌细胞内β_1ARmRNA和β_3ARmRNA表达,缓解心力衰竭症状。     

慢性压力负荷性心衰大鼠心肌细胞肌动蛋白的免疫组化研究

目的：探讨慢性心衰时心肌细胞肌动蛋白的变化情况。方法：采用ＳＰ免疫组化方法,对升主动脉缩窄慢性心衰大鼠心肌细胞肌动蛋白进行定性及半定量分析。结果：慢性心衰时左心室心衰时左心室心肌细胞肌动蛋白免疫反应活性显著降低,反应产物排列不规则,而右心室心肌细胞肌动蛋白免疫反应活性无显著变化。结论：肌动蛋白活性降低是引起收心肌收缩力降低的原因之一。     

左西孟旦和米力农治疗对心力衰竭患者血管内皮因子、心室重构及心功能的影响

目的探讨并对比左西孟旦和米力农对心力衰竭患者血管内皮因子、心室重构及心功能的影响。方法将2016年6月至2018年6月医院收治的80例急性失代偿期心力衰竭患者随机分为左西孟旦组和米力农组,每组各40例。治疗前和治疗7d采用超声心动图检测心功能参数[左心室收缩末期内径(left ventricular end systolic diameter,LVESD)、左心室舒张末期内径(left ventricular end diastolic diameter,LVEDD)、左心室射血分数(left ventricular ejection fractions,LVEF)],检测血清N-末端前体脑钠肽(N-terminal pro-B-type natriuretic peptid,NT-pro BNP)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、白介素6(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),治疗结束后2个月行6min步行实验(6-minute walk test,6MWT),记录两组不良反应。结果左西孟旦组治疗后LVESD值低于米力农组,LVEF值高于米力农组,差异有统计学意义(P <0.05),但两组治疗后LVEDD值比较,差异无统计学意义(P>0.05);左西孟旦组治疗后NT-pro BNP水平低于米力农组,6MWT距离长于米力农组,差异有统计学意义(P<0.05);左西孟旦组治疗后VEGF水平高于米力农组,IL-6、TNF-α水平低于米力农组,差异有统计学意义(P<0. 05),两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0. 05)。结论左西孟旦、米力农均可用于治疗心力衰竭患者心室重构,改善心功能,但短期效果而言,左西孟旦优于米力农。     

Myocardial Morphological Characteristics and Proarrhythmic Substrate in the Rat Model of Heart Failure Due to Chronic Volume Overload

Chronic volume overload leads to cardiac hypertrophy and later to heart failure (HF), which are both associated with increased risk of cardiac arrhythmias. The goal of this study was to describe changes in myocardial morphology and to characterize arrhythmogenic substrate in rat model of developing HF due to volume overload. An arteriovenous fistula (AVF) was created in male Wistar rats between the inferior vena cava and abdominal aorta using needle technique. Myocardial morphology, tissue fibrosis, and connexin43 distribution, localization and phosphorylation were examined using confocal microscopy and Western blotting in the stage of compensated hypertrophy (11 weeks), and decompensated HF (21 weeks). Heart to body weight (BW) ratio was 89% and 133% higher in AVF rats at 11 and 21 weeks, respectively. At 21 weeks but not 11 weeks, AVF rats had pulmonary congestion (increased lung to BW ratio) indicating presence of decompensated HF. The myocytes in left ventricular midmyocardium were significantly thicker (+8% and +45%) and longer (+88% and +97%). Despite extensive hypertrophy, there was no excessive fibrosis in the AVF ventricles. Distribution and localization of connexin43 were similar between groups, but its phosphorylation was significantly lower in AVF hearts at 21st week, but not 11th week, suggesting that HF, rather than hypertrophy contributes to the connexin43 hypophosphorylation. In conclusion, volume overload leads to extensive eccentric hypertrophy, but not to myocardial fibrosis. Increased vulnerability to arrhythmia in this HF model is possibly related to gap junction remodeling with hypophosphorylation of connexin43. Anat Rec, 2010. © 2010 Wiley‐Liss, Inc.     

DKK3基因在心力衰竭家兔心脏中的表达改变研究

目的：通过增加家兔心脏前后负荷制作心衰模型,研究DKK3（ dickkopf 3）基因在心衰家兔心脏中表达改变,初步探讨DKK3在心力衰竭家兔中的作用。方法取20只日本大耳白兔随机分为对照组和心衰组。心衰组家兔通过刺破家兔主动脉瓣造成反流,2周后缩窄腹主动脉;对照组仅行假手术。2月后测量心脏结构及功能,行HE和PSR染色评价家兔心肌细胞大小及胶原重构,免疫组化检测DKK3的改变。结果与对照组相比,心衰组家兔射血分数显著下降,心脏重量增加,心肌细胞增大,胶原增多, DKK3含量明显减少。结论在心力衰竭时, DKK3表达降低,加深了心脏重构的程度。     

Nek6在心力衰竭家兔心脏中的表达增加

目的：通过刺破主动脉瓣造成反流加重心脏前负荷联合缩窄腹主动脉加重心脏后负荷制作心力衰竭模型,研究Nek6在心力衰竭家兔心脏的心肌细胞中含量表达的改变,初步探讨Nek6在心力衰竭发生发展中的作用。方法将日本大耳白兔分为心衰组和对照组各10只,通过刺破主动脉瓣及缩窄腹主动脉两次手术制作心衰组模型,对照组仅行假手术。2月后使用超声检测心脏各腔室大小及室壁厚度,并计算射血分数;处死家兔后,计算心脏重量与身体重量比值,使用HE染色分析比较心肌细胞面积,使用PSR染色分析比较基质胶原含量,使用Nek6免疫组化染色分析Nek6蛋白含量变化。结果与对照组相比,心衰组家兔左室收缩末期内径及舒张末期内径均增加,射血分数降低,身心比增加,细胞明显增大,胶原增多, Nek6蛋白含量增加。结论 Nek6在心力衰竭家兔心脏的心肌细胞中表达明显上升。     

压力超负荷大鼠心、肺、肾血管重构的动态研究

目的 探讨压力超负荷与大鼠心、肺、肾内小动脉形态学重建的关系。方法 采用缩窄腹主动脉造成大鼠压力负荷模型，将大鼠随机分为两组：假手术组（SOG)和手术组(OG)。每组分为术后1、2、4、7、14、21、30、45、60d 9个时间点，对大鼠心、肺、肾组织连续切片，采用光镜配合计算机图像分析技术检测三个脏器小动脉几何形态的动态改变。结果 (1)随着压力负荷的增加，心、肺、肾小动脉的形态学重建可能存在时间顺序。(2)平均动脉压和造模时间与小冠状动脉和肾小动脉的壁腔比显著相关，而对小冠状动脉的管壁面积无影响；收缩压和造模时间与肾小动脉的管壁面积显著相关；造模时间与肺小动脉的壁腔比和管壁面积显著相关。结论 压力超负荷与心、肺、肾小血管的动态重构关系密切。小冠状动脉的重建以中膜平滑肌细胞的重排为主，肺、肾内小动脉的重建则可能存在中膜平滑肌细胞的肥大和增殖。     

法舒地尔对大鼠动脉粥样硬化斑块中单核细胞趋化蛋白-1表达的抑制作用

目的探讨Rho/Rho激酶途径在大鼠动脉粥样硬化形成过程中的作用及机制。方法将30只健康雄性Wistar大鼠（体质量220～250g）,随机分为正常对照组、动脉硬化组和法舒地尔组,每组10只。正常对照组行假球囊损伤手术给予正常饮食,余两组每只大鼠给予30万U/kg维生素D3右下肢肌肉注射后用球囊行动脉拉伤,在基础饲料中加入2%胆固醇、0.5%胆酸钠、0.2%丙基硫氧嘧啶、维生素D3粉剂（1.25×10^6U/kg饲料）、3%猪油等饲养。法舒地尔组同时给予法舒地尔5mg/kg体质量,每日2次腹腔注射。喂养9周后空腹24h抽血并处死,检测血脂水平,自主动脉弓下约1cm处留取动脉组织1cm用4%甲醛溶液固定,行HE染色,用免疫组织化学法检测斑块中血管紧张素Ⅱ-1型受体（AT1R）和单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）蛋白的表达。结果动脉硬化组均形成了典型的粥样斑块;免疫组化半定量分析表明：动脉硬化组与正常对照组和法舒地尔组比较,AT1R和MCP-1蛋白均明显升高（P〈0.001）,法舒地尔组与正常对照组比较,AT1R和MCP-1蛋白的表达也明显升高,有明显差异（P〈0.05）。结论Rho/Rho激酶途径在大鼠动脉粥样硬化的形成过程中参与了重要的作用,该途径的激活与RAS系统的激活有密切关系,Rho激酶抑制剂的抗动脉粥样硬化作用可能是通过抑制了MCP-1的表达而起作用。     

沙库巴曲缬沙坦在心力衰竭治疗中的应用

心力衰竭是一种慢性疾病,是心脏无法泵出足够的血液为其他身体器官提供氧气,从而引发呼吸短促、疲劳和水肿等症状。目前其治疗包括病因治疗、一般治疗、药物治疗及非药物治疗等,其中血管紧张素受体脑啡肽酶抑制剂（ARNI）是当前新研发出的一类抗心衰药物,沙库巴曲缬沙坦是其代表药物,具有阻断肾素-血管紧张-醛固酮系统（RAAS）及抑制脑啡肽酶（NEP）的双重作用,新的欧美指南均推荐用于射血分数降低心力衰竭（HFrEF）的治疗。本文现就沙库巴曲缬沙坦在心力衰竭治疗中的作用机理、临床试验、药物安全性作一综述,旨在为该病的临床治疗提供参考。