五味温通除痹胶囊对佐剂性关节炎大鼠自噬蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响

目的明确五味温通除痹胶囊(桂枝、茯苓、淫羊藿,等)对佐剂性关节炎大鼠自噬蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响,探讨其防治类风湿关节炎的可能机制。方法雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、五味温通除痹胶囊(0.80、1.60、3.20 g/kg)组、阳性药雷公藤多苷片(40 mg/kg)组,每组10只。除正常组外,采用弗氏完全佐剂诱导佐剂性关节炎大鼠模型。致炎后第12天灌胃给药,连续12 d。实验结束后,取非致炎侧踝关节,HE染色观察病理学改变,实时定量荧光PCR测定滑膜组织中Beclin-1、LC3-ⅡmRNA的表达,免疫荧光组织化学染色和Western blot法检测滑膜组织中Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白的表达。结果与模型组相比,五味温通除痹胶囊(1.60、3.20 g/kg)不仅可减轻佐剂性关节炎大鼠关节病理损伤程度,还可显著升高Beclin-1、LC3-ⅡmRNA和蛋白的表达水平。结论五味温通除痹胶囊对佐剂性关节炎大鼠具有一定的治疗作用,其机制可能与促进细胞自噬,减少滑膜细胞的过度增殖,从而减轻关节软骨损伤有关。     

电针颈夹脊穴对神经根型颈椎病大鼠局部脊髓组织自噬相关因子LC3和Beclin-1的影响

目的:观察神经根型颈椎病(CSR)模型大鼠脊髓及神经根组织神经细胞自噬小体的变化及LC3、Beclin-1蛋白表达情况,探讨电针颈夹脊穴对CSR大鼠的镇痛作用机制。方法:将30只SPF级SD大鼠,随机分为模型组、针刺组及电针组,每组10只。采用颈椎插线法构建CSR模型大鼠,并于造模后第3天进行干预,模型组予每日抓取1次,针刺组取双侧颈2-3(C2-3)、颈6-7(C6-7)节段颈夹脊穴进行普通针刺,电针组在此基础上以一侧穴位为一组进行电针干预,1次/d,20 min/次,连续干预7 d后处死。治疗后检测各组大鼠外周神经机械性痛阈,取压线处脊髓及神经根组织,通过透射电镜观察其神经细胞自噬小体的变化,并采用免疫组化法检测LC3、Beclin-1蛋白的表达水平。结果:与模型组比较,针刺组及电针组外周神经机械性痛阈、LC3、Beclin-1蛋白表达明显升高(P 0. 05),自噬小体数量明显增加;与针刺组对比,电针组外周神经机械性痛阈、LC3、Beclin-1蛋白表达升高(P 0. 05),自噬小体数量增多。结论:电针颈夹脊穴对CSR大鼠具有明显的镇痛作用,通过调节神经细胞自噬可能是实现其镇痛作用的重要机制之一。     

阿尔茨海默病大鼠自噬相关蛋白Beclin-1和凋亡相关蛋白p53表达变化及电针的调控作用

目的观察电针对大鼠海马自噬相关蛋白Beclin-1和凋亡相关蛋白p53表达的影响,探讨电针治疗阿尔茨海默病(AD)的作用机制。方法将大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和电针组。电针组取"百会"和"涌泉"进行电针治疗,每日1次,7 d为1个疗程,共治疗4个疗程。疗程结束后尼氏染色观察各组海马CA1区组织形态的变化并计数尼氏体阳性细胞,Western blot检测Beclin-1和p53蛋白的表达。结果模型组CA1区尼氏体阳性的细胞数目较正常组显著减少(P0.01),电针组锥体细胞和尼氏体表达较模型组明显增多(P0.05)。与正常组比较,模型组海马组织中Beclin-1蛋白表达降低、p53蛋白表达升高(P0.05);与模型组比较,电针组Beclin-1蛋白表达明显升高(P0.01),p53蛋白表达降低(P0.05)。结论电针治疗可对抗β-淀粉样蛋白诱导的神经元凋亡,改善AD海马组织形态变化。     

基于“肾脑相济”理论的电针疗法对SAMP8小鼠海马内线粒体自噬相关蛋白LC3-Ⅱ及Bnip3表达的影响

目的:研究以"肾脑相济"理论为指导的电针疗法对阿尔茨海默病小鼠(SAMP8)海马内线粒体自噬相关蛋白LC3-Ⅱ及Bnip3的影响,探究以"肾脑相济"为治疗原则的电针疗法对阿尔茨海默病的治疗机制。方法:6只SAMR1小鼠作为对照组,18只SAMP8小鼠随机分为模型组,西药组及电针组。西药组采用美金刚灌胃,电针组采用电针刺激"百会""肾俞""太溪"。连续8周;运用免疫组化染色观察比较海马CA1区蛋白LC3-Ⅱ及Bnip3的形态学变化,Western Blot检测海马LC3-Ⅱ及Bnip3的蛋白表达水平。结果:免疫组化结果显示,模型组小鼠海马CA1区细胞质染色较深,呈棕褐色,与模型组相比,西药组,电针组大鼠海马CA1区细胞的细胞质染色较浅,细胞层细胞数量多,排列整齐,神经元结构完整,胞质染色均匀,清晰。Western Blot检测显示,与模型组相比,电针组和西药组LC3-Ⅱ及Bnip3的蛋白含量低于模型组(P0.05)。结论:以"肾脑相济"理论为指导的电针疗法,能够通过降低阿尔茨海默病小鼠脑内海马CA1区神经元内线粒体自噬的发生,进而有助于神经元的再生与修复。     

怡肾丸对单侧输尿管结扎模型大鼠LC3及Beclin-1表达的影响

目的:探讨怡肾丸对单侧输尿管结扎模型大鼠肾脏LC3及Beclin-1表达的影响。方法:将64只雄性SD大鼠随机分为假手术组(16只)、UUO模型组(16只)、UUO模型+怡肾丸组(16只)、UUO模型+依那普利组(16只)。手术组大鼠游离并结扎左侧输尿管制备肾纤维化模型,假手术组只游离不结扎左侧输尿管。各给药组于造模当日开始给予相应药物,假手术组和模型组灌胃等体积蒸馏水,连续灌胃3周。于术后第3、7、21天分批处死各组大鼠,取血清及左肾标本,检测血清肌酐、尿素氮,HE染色、Masson染色观察其病理形态学改变,免疫组织化学法及qRT-PCR法分别检测肾组织LC3及Beclin-1的蛋白及mRNA表达水平。结果:与假手术组相比,模型组血肌酐、尿素水平均升高(P<0.01);与模型组相比,治疗组肾功能上升速度缓慢(P<0.05);假手术组大鼠肾脏未见明显病理改变。模型组大鼠肾小球硬化,肾小管高度扩张萎缩,小管基底膜变薄,间质区细胞大量增生及纤维化,并随梗阻时间延长而加重,治疗组病理损伤明显减轻,胶原纤维沉积减少(P<0.05);与假手术组相比,模型组的LC3、Beclin...     

β-细辛醚与冰片对Aβ1-42损伤PC12细胞自噬相关蛋白LC3和线粒体功能的影响

目的 观察β-细辛醚与冰片对β-淀粉样蛋白1-42（Aβ1-42）诱导PC12细胞损伤自噬相关蛋白轻链3（LC3）的作用,以及对细胞内钙离子浓度 和线粒体膜电位（MMP）的影响。方法 体外培养PC12细胞,β-细辛醚与冰片预处理,用终浓度为1.25 μmol·L-1 Aβ1-42诱导细胞产生自噬,光镜观察细胞形态,3-（4, 5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐比色法（MTT法）检测细胞活力,流式细胞仪检测LC3蛋白的表达、细胞内钙离子浓度及MMP,电镜观察细胞超微结构。结果 与模 型组比较,β-细辛醚组、冰片组及其β-细辛醚+冰片组能提高细胞活力（P＜ 0.05）,升高LC3蛋白的含量（P＜ 0.05）,降低细胞内钙离子浓度及升高MMP（P＜ 0.05）, 减少自噬体,保护线粒体形态结构。结论 β-细辛醚与冰片及其配伍对Aβ1-42诱导的细胞损伤有保护作用。     

疏肝健脾方对肝纤维化大鼠自噬蛋白Beclin-1和LC3-Ⅱ的影响

目的观察疏肝健脾方对肝纤维化大鼠自噬蛋白Beclin-1和LC3-Ⅱ的影响。方法将60只SD大鼠,随机分为正常组、模型组、疏肝健脾方(1.5、3.0、6.0 g/kg)组和阳性药秋水仙碱(0.1×10-3g/kg)组,每组10只。除正常组外,其余各组采用50%四氯化碳(CCl4)每周2次,连续12周皮下注射的方法,诱导肝纤维化大鼠模型。造模后第7周,灌胃给予不同剂量的疏肝健脾方和秋水仙碱,正常组和模型组给予等量溶媒,每天1次,连续6周。HE和Masson染色观察肝脏病理组织学损伤程度,免疫组化法检测肝组织中Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠肝脏病理组织学损伤程度明显加重,肝组织中CollagenⅠ、α-SMA、Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著升高(P0.01);与模型组比较,疏肝健脾方(3.0、6.0 g/kg)组和秋水仙碱组肝组织损伤减轻,胶原纤维沉积减少(P0.05,P0.01),CollagenⅠ、α-SMA、Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著降低(P0.05,P0.01)。结论疏肝健脾方具有抗肝纤维化作用,其机制与减少细胞自噬,降低能量的生成,从而抑制肝星状细胞活化有关。     

针刺对出血性中风大鼠脑组织自噬相关蛋白表达的影响

目的:观察针刺"百会"透"曲鬓"穴对出血性中风大鼠自噬相关蛋白的影响,探讨针刺促进脑出血后大鼠神经功能恢复的机制。方法:120只SD大鼠随机分成假手术组、模型组、非穴位组、针刺组、雷帕霉素组,每组按脑出血后不同时间点(造模后第3、7天)分2个亚组。将50μL自体血注入到大鼠尾状核制备出血性中风模型。各干预组分别给予针刺"百会"透患侧"曲鬓"、非穴位针刺、侧脑室注射雷帕霉素进行干预。于各时间点对大鼠进行神经功能行为学评分(悬线测试、平衡行走测试)。评分结束后取各组大鼠出血半暗带区脑组织,免疫组织化学法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白的阳性表达,Western blot法检测LC3-Ⅱ/Ⅰ的变化。结果:与假手术组比较,模型组造模后第3、7天的神经功能行为学评分(悬线测试、平衡行走测试)显著降低(P<0. 05);与模型组比较,针刺组、雷帕霉素组大鼠神经功能行为学评分明显升高(P<0. 05),且针刺组高于雷帕霉素组(P<0. 05)。与同时间点假手术组比较,造模后第3、7天模型组大鼠脑组织LC3蛋白阳性表达、LC3-Ⅱ/Ⅰ明显升高(P<0. 05);与同时间点的模型组比较,针刺组大鼠脑组织LC3蛋白阳性表达、LC3-Ⅱ/Ⅰ明显升高(P<0. 05);与针刺组比较,雷帕霉素组大鼠脑组织LC3蛋白阳性表达、LC3-Ⅱ/Ⅰ明显升高(P<0. 05)。结论:针刺能上调出血性中风大鼠脑组织LC3-Ⅱ/Ⅰ,良性激活自噬水平,进而改善大鼠神经功能缺损。     

针刺激活Ⅲ型PI3K/Beclin-1通路调控脑缺血再灌注损伤大鼠缺血侧海马区细胞自噬

目的:观察针刺对脑缺血再灌注损伤大鼠缺血侧海马组织Ⅲ型磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)及Beclin-1等自噬相关指标的影响,探讨针刺调控Ⅲ型PI3K/Beclin-1通路适度激活脑缺血再灌注损伤大鼠缺血侧海马神经细胞自噬的作用机制。方法:SD大鼠按照随机数字表法分为假手术组、模型组、针刺组、模型+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、针刺+3-MA组,每组11只。使用改良线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型。模型+3-MA组、针刺+3-MA组于再灌注前30 min予侧脑室注射3-MA 5䥺SymbolmApL(400 nmol/5䥺SymbolmApL)。针刺组、针刺+3-MA组针刺“大椎”“水沟”“百会”,每15 min捻转1次,留针30 min,每12 h治疗1次,共7次。于再灌注后2 h、干预后进行Garcia神经功能评分,干预后通过TTC染色法观察大鼠脑组织缺血面积百分比,Western blot法检测缺血侧海马组织Ⅲ型PI3K、Beclin-1、自噬标志物微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)、溶酶体相关膜蛋白2(Lamp2)、P62的蛋白表达水平,透射电镜法观察缺血侧海马组织神经...     

电针对鱼藤酮诱导的帕金森病模型大鼠黑质内自噬相关蛋白表达的影响

目的:探讨自噬—溶酶体途径在针刺防治帕金森病(Parkinson's disease,PD)中的作用。方法:雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、电针预处理组、电针治疗7 d组、电针治疗14 d组、电针治疗21 d组、电针治疗28 d组,每组15只。采取颈背部皮下注射鱼藤酮法制备PD模型。电针治疗组取穴"太冲""风府",每次治疗20 min,每天1次,疗程分别为7 d、14 d、21 d、28 d。电针预处理组电针治疗7 d后再造模。观察各组大鼠行为学改变并进行评分。造模后除去死亡与体质量过轻过重及外观、行为学未达标的老鼠,每组均为10只。运用Western blot检测黑质酪氨酸羟化酶(TH)、微管相关膜蛋白轻链3(LC3-II)、自噬底物蛋白P62和α-突触核蛋白(α-syn)的表达。结果:模型组大鼠出现了毛发变黄变粗、弓背明显、运动缓慢迟钝、拒捕减少等异常行为学表现,而治疗组和预处理组以上表现程度明显减轻。与正常组和假手术组对比,模型组LC3-II、P62、α-syn的表达均明显增加(P0.01),TH表达明显下降(P0.01)。与模型组对比,电针治疗组和预处理组LC3-II的表达水平增加明显(P0.01);TH表达增强(P0.01或P0.05),P62、α-syn蛋白表达均明显下降(P0.01)。结论:电针防治帕金森病的机制可能与针刺能够改善自噬功能障碍,促进PD模型大鼠体内具有细胞毒性作用α-syn的降解有关。     

柔肝通络汤对MCAO大鼠自噬蛋白Beclin1及LC3表达的影响

目的 从细胞自噬的角度探讨柔肝通络汤治疗脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法 将120只SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组及柔肝通络汤组。空白组不予处理,假手术组及模型组予蒸馏水灌胃,柔肝通络汤组柔肝通络汤灌胃,均预处理1周。末次灌胃30min后,建立脑缺血再灌注模型。按再灌注3、6、12、24h时间点进行大鼠神经功能缺损评分并取脑,进行神经功能评分、TTC染色、HE染色、免疫组化法检测Beclin1、LC3蛋白的表达。结果 与空白组及假手术组相比,模型组大鼠神经功能缺损评分升高(P<0.01),模型组与柔肝通络汤组均可见面积不等的梗死灶(P<0.01);模型组大鼠梗死侧脑组织细胞形态变性、坏死,出现噬神经细胞现象,且随时间增长而加重,Beclin1及LC3表达升高(P<0.01)。与模型组比较,柔肝通络汤组神经功能缺损评分下降(P<0.05),梗死面积有所减小,差异有统计学意义(P<0.05)。且柔肝通络汤组各亚组较模型组细胞形态损伤明显减轻,Beclin1及LC3表达均降低(P<0.01)。结论 柔肝通络汤能改善大鼠神经功能缺损,缩小脑梗死灶,...     

电针对阿尔茨海默病模型大鼠行为学的影响

目的 通过针刺的方法治疗阿尔茨海默病模型大鼠,观察对其学习和记忆的改善效果.方法 通过给大鼠灌服D-半乳糖制剂,造成大鼠阿尔茨海默病模型.分别设立正常组、模型组、药物组、针刺组、电针组.正常组、模型组只给予相同剂量的生理盐水灌服,药物组给予石杉碱甲片(哈伯因)混悬液灌服治疗,针刺组采用针刺百会、神庭、肾俞、太溪、足三里的方法进行治疗,电针组采用针刺百会、神庭、肾俞、太溪、足三里穴,并连接电针仪进行治疗.以10d为1个疗程,共治疗3个疗程.通过大鼠跳台试验来检测大鼠的学习和记忆能力,并对大鼠大脑海马CA1区的tau蛋白含量进行观察.结果 造模后,正常组大鼠的记忆逃避潜伏期时间明显少于模型组(P＜0.05),治疗结束后药物组、针刺组、电针组的逃避潜伏时间短于模型组(P＜0.05).电针组的疗效优于针刺组和药物组(P＜0.05).而治疗后,海马CA1区的P-tau蛋白表达治疗组都低于模型组,且电针组的效果要优于药物组和针刺组(P＜0.05).结论 运用电针能改善阿尔茨海默病模型大鼠的记忆能力,对阿尔茨海默病有一定的治疗作用.     

电针神庭、百会穴对脑缺血再灌注大鼠学习记忆能力及自噬相关蛋白表达的影响

目的:观察电针神庭、百会穴后对缺血再灌注大鼠的学习记忆能力的影响,和自噬相关蛋白表达的数值分析。方法:线栓法制备SD大鼠脑缺血再灌注模型。将造模成功的45只SD大鼠采用随机数字表法分成3组,即电针组(n=15)、模型组(n=15)和假手术组(n=15)。通过神经行为学评分评估各组大鼠脑神经损伤程度。电针组大鼠模型制备成功后行电针神庭、百会穴干预治疗14 d。Morris水迷宫实验进行行为学观测;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法观察脑梗死的区域及脑梗死的体积;RT-PCR检测PI3K、AKT、Beclin-1的表达水平。结果:神经功能缺损评分:电针组评分明显低于模型组和假手术组,差异具有统计学意义(P0.05);Morris水迷宫实验:与模型组相比,电针组穿越逃生平台的次数明显增多,差异具有统计学意义(P0.001),其逃避潜伏期明显降低,差异具有统计学意义(P0.001);TTC染色:电针组脑梗死体积较模型组和假手术组明显缩小,差异具有统计学意义(P0.001);RT-PCR法:与模型组相比,电针组大鼠皮质及海马区PI3K、AKT、Beclin-1蛋白表达水平升高,差异显著(P0.05)。结论:电针神庭、百会穴可明显改善脑缺血再灌注大鼠的学习及记忆能力,且可调控自噬相关蛋白PI3K、AKT、Beclin-1的表达,从而达到保护大鼠脑组织的作用,同时可从一方面说明细胞自噬调控机制在具有认知障碍的脑卒中患者中发挥着至关重要的作用。     

双参活血颗粒对急性心肌缺血大鼠心肌自噬的影响

目的 通过观察双参活血颗粒对急性心肌缺血大鼠心肌细胞自噬的影响,探讨其作用机制.方法 60只大鼠随机法选取10只作为空白组,剩余的50只大鼠进行急性心肌缺血造模,将造模成功的大鼠采用随机法分到模型组、中药(双参活血颗粒)高、中、低剂量组、西药(曲美他嗪片)组.2周后,采取大鼠缺血的心肌组织,RT-PCR检测Beclin...     

三物白散对胃癌细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3、p62表达的影响

目的：探讨三物白散对胃癌细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3、p62表达的影响,探究三物白散抗胃癌的作用机制。方法：将28只SPF级雄性大鼠随机分为4组,每组7只,分别予以0.0312 5、0.062 5、0.125 0 g/（kg·d）三物白散及相同体积生理盐水灌胃,经腹主动脉采血制备含药血清。体外培养AGS细胞,设置空白对照组（空白组）、三物白散低剂量含药血清组（低剂量组）、三物白散中剂量含药血清组（中剂量组）、三物白散高剂量含药血清组（高剂量组）。采用CCK-8法检测不同浓度（5%、10%、15%、20%）三物白散含药血清对AGS细胞活性的影响;倒置显微镜下观察三物白散含药血清对AGS细胞形态的影响;RT-qPCR法检测Beclin1 mRNA、LC3 mRNA、p62 m RNA表达;Western blotting法检测Beclin1、LC3、p62蛋白表达。结果：与空白组比较,5%、10%、15%、20%三物白散高剂量含药血清可呈浓度-时间依赖性抑制AGS细胞活性;随着含药血清浓度升高,细胞形态逐渐不规则,细胞数量逐渐减少;中、高剂量组Beclin1 mRNA、LC3-Ⅰ...     

金欣康颗粒提高线粒体自噬蛋白LC3/Beclin1 表达改善心力衰竭大鼠心肌纤维化的研究

目的 探讨金欣康颗粒（丹参、桂枝、黄芪、人参、毛冬青等7味药组成）对心力衰竭（简称心衰）大鼠线粒体自噬蛋白LC3/Beclin1表达的影响,阐述金欣康颗粒改善心梗后心衰心肌纤维化的机制。方法 复制心梗后心衰大鼠模型。将造模成功的心衰大鼠随机分为4组：模型组,金欣康颗粒低剂量组、高剂量组和培哚普利组,另设假手术组,每组10只。给药12周,以HE染色、天狼猩红染色评估心肌组织的病理变化,心脏彩超对心脏结构和心功能进行评估,透射电镜观察自噬小体,免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型和Ⅲ型胶原（CollagenⅠ和CollagenⅢ）蛋白的表达,Western Blot法检测自噬蛋白LC3、Beclin1的表达。结果成功复制心梗后心衰大鼠模型,模型组大鼠梗死区周边区域有大量红色的胶原沉积,心肌纤维排列紊乱,部分纤维断裂;线粒体明显肿胀,出现峭断裂,能观察到较多的自噬小体。金欣康颗粒组和培哚普利组心肌纤维排列较模型组整齐,纤维化程度较轻,自噬小体更加明显。与假手术组比较,模型组的射血分数（LVEF）和短轴缩短率（LVFS）显著降低（P<0.01）,左室舒张末期内径（LVED...     

预针刺对阿尔茨海默病样大鼠学习记忆能力及海马区NLRP3炎性小体相关蛋白的影响

目的:观察预针刺对阿尔茨海默病(AD)样大鼠海马区核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)、白介素1β(IL-1β)以及活化的小胶质细胞(MG)数量的影响,探讨预针刺防治AD的作用机制。方法:将36只SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组,每组12只。模型组、电针组采用连续8周腹腔注射D-半乳糖溶液(120 mg·kg^-1·d^-1)的方法制备AD样大鼠模型。电针组同时予"百会""足三里"穴电针刺激,连续波,频率50 Hz,电流1 mA,每次20 min,每日1次,连续干预8周。干预结束后采用Morris水迷宫实验评估各组大鼠空间学习记忆能力,Western blot法检测各组大鼠海马组织NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达水平,免疫荧光标记法检测海马组织活化的MG数量。结果:与空白组比较,模型组大鼠平均逃避潜伏期延长(P<0.01),平台穿越次数减少(P<0.01),目标象限探索时间缩短(P<0.01);与模型组比较,电针组大鼠平均逃避潜伏期缩短(P<0.01),...