缺血性心脏病细胞移植疗法的理想工具--骨髓基质干细胞

骨髓基质干细胞是一种由骨髓中分离获得的具有多种分化潜能的间质干细胞。在体外培养条件下，它可以分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、甚至于成肌细胞。因为骨髓基质干细胞具有易于获取、分高方便和良好的分化特性等特点，在细胞移植和基因治疗方面具有非常巨大的应用前景。对于缺血性心脏病而言，骨髓基质干细胞是非常好的细胞移植供体，对于改善心功能帮助巨大。本文献骨髓基质干细胞的生物学特性和在缺血性心脏病治疗中的应用前景进行简要综述。     

人骨髓基质细胞的培养及鉴定

目的:探讨骨髓基质细胞的分离、体外培养方法,为基因治疗提供载体细胞.方法:采用密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离人骨髓进行体外培养扩增,用倒置显微镜观察细胞形态学特征并用流式细胞仪鉴定其CD90表达.结果:分离培养的骨髓基质细胞似成纤维状,原代细胞呈集落生长,并可表达CD90,传代后细胞形态较一致,且随着传代次数的增加CD90表达越高,第3代可达94.31%.结论:骨髓基质细胞可通过体外培养纯化获得,随着传代次数增加,纯度越高,该方法是一种较理想的骨髓基质细胞培养方法.     

骨髓基质干细胞与心脏疾病

各种心脏疾病的临床治疗仍是困扰着临床医师的一大难题,目前针对心脏疾病的药物、介入和手术治疗的效果并不是很理想,而近年来,骨髓基质干细胞在心脏疾病方面应用成为一个新的研究亮点。现就骨髓基质干细胞移植在心脏疾病方面应用作一综述。     

细胞因子对白血病抑制因子和IL-6在骨髓基质细胞表达的调节

目的 :研究白细胞介素 1(IL 1)、TNF α、白细胞介素 4 (IL 4 )对骨髓基质细胞白血病抑制因子 (LIF)和白细胞介素 6 (IL 6 )表达的调节。方法 :用酶联免疫吸附试验 (ELISA)测定各细胞因子作用下的LIF与IL 6水平 ,用逆转录 聚合酶链反应 (PT PCR)测定各细胞因子作用下的LIF与IL 6转逆子水平。结果 :在IL 1、TNF α作用下LIF与IL 6水平明显升高 (P <0 .0 5 ) ,IL 4作用下IL 6水平明显升高 (P <0 .0 5 ) ,而LIF水平却明显降低 (P <0 .0 5 )。结论 :IL 1、TNF α有上调骨髓基质细胞LIF与IL 6表达 ,IL 4能上调骨髓基质细胞IL 6表达 ,却下调LIF的表达。     

大鼠骨髓基质细胞培养方法的改良

目的　对体外分离培养大鼠骨髓基质细胞 (BMSC)方法进行改良 ,观察其生物学特点。方法　分离大鼠胫骨、股骨 ,以 IMDM培养基冲洗骨髓 ,与培养液混合后直接接种至培养瓶中 ,接种后 7～ 14 d形成单层贴壁的成纤维状细胞。检测传代细胞接种贴壁率、生长曲线、细胞周期 ,电镜观察细胞超微结构。结果　分离培养的原代 BMSC生长良好 ,倍增时间约为 4 2 h。 BMSC传代后 12 h贴壁率达 80 %以上 ,82 %的细胞处于 G0 、G1 期 ,超微结构呈现较早期细胞特点。结论　改良法培养的 BMSC生长稳定 ,传代细胞适应性强。与传统培养方法比 ,该法操作简单、实用性强 ,可以用于 BMSC的体外实验研究     

共同培养诱导骨髓基质干细胞向肝细胞分化的研究

目的 探索大鼠骨髓皋质干细胞（MsCS）向肝细胞分化的能力，及肝细胞生长的微环境埘其诱导分化的作用。方法 采用梯度离心法，获取大鼠骨髓基质干细胞；改良的两步法获取大鼠肝细胞。将鉴定的MsCS和肝细胞以半透膜相隔共同培养，以单独培养的MSCs作对照。在第1、3、7．14．21、28天，分别以逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫细胞化学分析检测甲胎蛋白（AFP）、白蛋白、细胞角蛋白l8（CK-l8）的基因和蛋白表达。结果在MSCs与肝细胞共同培养过程中，MSCs出现明显的细胞形态、体积和数量变化，可见双核或多核细胞，细胞轮廓较清晰。RT-PCR检测：共同培养的MSCs第7天即出现AFP基因表达，第14天表达增强，第21天表达减弱；第14天开始出现白蛋白、CK-18基因表达，并持续表达。单独培养的MSCs均无表达。共同培养的MSCs，于第7天进行免疫细胞化学检测，AFP即呈阳性；第14天白蛋白和CK-18也呈阳性；单独培养的MSCs未见AFP、白蛋白及CK-18表达。结论 大鼠骨髓基质干细胞与肝细胞共同培养，可被诱导分化为肝细胞。     

骨髓基质干细胞治疗帕金森病的研究进展

帕金森病是一种以中脑多巴胺神经元丢失为特征的中枢神经系统退行性疾病。近年来发现,骨髓基质干细胞在体外可诱导分化为神经元,在帕金森病的治疗方面显示出广阔的应用前景。本文主要对骨髓基质干细胞的神经分化及对帕金森病的治疗研究进展进行综述。     

骨髓基质细胞移植治疗缺血性脑损伤的机制

骨髓基质细胞可向神经细胞方向诱导分化有望成为神经移植的重要细胞来源,为缺血性脑损伤的细胞和基因治疗奠定了基础。文章就骨髓基质细胞向缺血脑区的迁移、替代受损神经细胞、分泌神经营养因子、促进内源性神经前体细胞增殖和作为外源性基因载体等方面的机制做了综述。     

骨髓基质干细胞移植治疗脑缺血的研究进展

缺血性脑血管病严重威胁着人类健康,具有发病率高、致残率高和死亡率高等特点.目前脑缺血的治疗手段主要有溶栓、抗凝及应用神经保护剂等,但不能从根本上切实有效的修复受损脑组织.近年来骨髓基质干细胞被广泛应用于移植研究中,尤其是对于脑缺血等各种中枢神经系统疾病,更是成为研究的热点.作为细胞治疗的细胞来源之一,骨髓基质干细胞分化潜能好、来源丰富、不存在胚胎干细胞移植所带来的伦理学问题,又可用于自体移植,免除了宿主可能的免疫排斥反应,具有良好的应用前景[1].     

骨髓基质干细胞向肝细胞的定向分化及体内移植

目的:研究骨髓基质干细胞(BMSCs)在体外向肝细胞的定向分化和体内移植后对小鼠受损肝脏的修复作用.方法:在体外培养体系中用肝细胞提取液(HE)模拟体内肝脏微环境,诱导BMSCs向肝细胞定向分化,以免疫细胞化学和吲哚靛青绿(ICG)染色检测其分化程度.将5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记的BMSCs移植入小鼠体内,免疫组织化学方法显示BMSCs在肝脏的分布,血清酶学检测肝脏受损小鼠移植后7,14,28d谷草转氨酶(AST,nkat/L)、谷丙转氨酶(ALT,nkat/L)和碱性磷酸酶(AKP,nkat/L)的含量变化.结果:在体外BMSCs可由HE诱导分化成肝细胞,但HE诱导组α1-抗胰蛋白酶(4d:52.5±3.9vs76.8±4.5,P<0.05;14d:60.3±6.1vs85.4±7.6,P<0.05;21d:80.5±8.0vs105.7±8.6,P<0.05)和白蛋白(4d:43.2±6.5vs71.6±7.6,P<0.05;14d:61.5±10.4vs93.6±13.9,P<0.05;21d:80.6±17.1vs128.3±22.2,P<0.05)表达量少于HGF诱导组;体内移植后BMSCs整合于肝实质内;肝脏受损小鼠移植BMSCs后,血清中ALT(7d:493.43±120.02vs696.81±140.03,P<0.01;14d:558.45±130.03vs780.16±151.7,P<0.01;28d:583.45±138.36vs880.18±170.53,P<0.01)、AST(7d:1521.97±186.7vs2342.14±208.38,P<0.01;14d:1590.32±200.04vs2692.21±238.38,P<0.01;28d:1625.33±208.38vs2872.24±281.72,P<0.01)和AKP(7d:1.24±0.22vs1.78±0.18,P<0.01;14d:1.21±0.21vs2±0.19,P<0.01;28d:1.32±0.19vs2.27±0.2,P<0.01)比损伤组小鼠相应值均有下降,但仍高于正常对照组.结论:BMSCs在体外可由HE诱导分化成肝细胞,在体内移植后可促进小鼠受损肝脏的修复.     

茶黄素对人骨髓基质干细胞的成骨诱导作用

目的探讨茶黄素对体外培养人骨髓基质干细胞（BMSCs）的成骨诱导作用及其能力。方法将第二代人BMSCs分为茶黄素组、对照组,茶黄素组加入浓度为10 mmol/L茶黄素,对照组不干预。对比观察两组干预后细胞形态,钙结节、碱性磷酸酶（ALP）、Ⅰ型胶原及骨钙素（OCN）免疫组化染色结果,并检测各组4、8、12、16 d各时点ALP、OCN活性。结果茶黄素组钙结节、ALP、Ⅰ型胶原及OCN免疫组化染色均呈阳性,对照组均为阴性;茶黄素组各时点ALP、OCN活性均高于对照组（P均〈0.05）。结论茶黄素可促进人BMSCs向成骨细胞分化。     

犬骨髓基质干细胞体外诱导分化为肌源性细胞的研究

目的 :探讨成年犬骨髓基质干细胞 (MSSCs)体外诱导分化为肌源性细胞的可行性。方法 :用贴壁法体外分离MSSCs ,实验组 5 氮胞苷诱导 ,对照组加入等量的培养基 ,用相差显微镜、免疫组织化学和电镜方法观察、鉴定培养细胞。结果 :实验组培养细胞诱导后 4周 ,多数培养细胞由梭形变为杆状 ,免疫组织化学检查结蛋白、平滑肌肌动蛋白和肌钙蛋白Ⅰ染色阳性 ;对照组多数培养细胞为梭形 ,免疫组织化学检查结蛋白染色弱阳性 ,平滑肌肌动蛋白染色弱阳性 ,肌钙蛋白Ⅰ染色阴性 ;电镜下实验组培养细胞内可见肌丝样结构 ,对照组培养细胞无明显肌丝样结构。结论 :成年犬MSSCs体外可诱导分化为肌源性细胞。     

Murine bone marrow derived stromal progenitor cells fail to prevent or treat acute graft-versus-host disease

Human and murine stromal progenitor cells (SPCs) can suppress alloresponse i n vitro , suggesting that SPCs may have clinical application toward prevention or treatment of graft-versus-host disease (GVHD). However, th eresults of in vivo studies have been conflicting. This study utilized an established murine model of acute GVHD to assess the ability of bone marrow derived murine SPCs (mSPCs) to prevent or treat GVHD. GVHD was established by transplantation of B6 bone marrow and spleen cells into lethally irradiated (900 cGy) B6 × BALB/c F₁ recipients. mSPCs were administered using various dose and timing protocols designed to either prevent or treat GVHD. After transplantation, mice were monitored daily for weight and survival. Differences in symptom severity were compared using a clinical GVHD scoring system. All GVHD control mice died of lethal GVHD. All groups treated with mSPCs for the prevention of GVHD went on to develop clinical GVHD with no alteration of the disease course or severity compared to controls. Administration of mSPC after the development of GVHD failed to improve the disease course. We conclude that in this model, the ability of SPCs to suppress alloresponse in vitro does not correlate with in vivo prevention or treatment of acute GVHD.     

猪骨髓间充质干细胞的分离培养及体外转化为心肌样细胞的实验研究

目的 探讨体外培养猪骨髓间充质干细胞(MSCs)的方法及MSCs的一些生物学特性，为细胞心肌成形术提供新材料。方法 按照Nancer方法培养MSCs，用5-氮胞苷(5-aza)诱导，流式细胞仪检测细胞周期，并行结蛋白(desmin)、肌球蛋白重链(MHC)、心肌特异性肌钙蛋白I(cTnI)、连接蛋白-43(Cx-43)免疫组化鉴定。结果体外培养的原代MSCs10～14天达到融合，细胞周期显示80％的细胞处于G0／G1期；经5-aza刺激后，部分MSCs呈梭形，结蛋白、肌球蛋白重链、心肌特异性肌钙蛋白Ⅰ、连接蛋白-43免疫组化染色阳性。结论 猪MSCs在体外条件下生长稳定，传代后仍保持未分化状态，有分化成心肌的潜能，可作为细胞心肌成形术的材料。     

骨髓间质干细胞的生物学特性及在缺血性卒中的应用

目前,缺血性卒中的治疗手段较为有限,在细胞治疗领域,一系列基础和临床研究表明,骨髓间质干细胞对缺血性卒中有治疗作用.文章就骨髓间质干细胞的生物学特性及治疗缺血性卒中的最新进展做了综述.     

Characterization of bone marrow mesenchymal stromal cells in aplastic anaemia

In aplastic anaemia (AA), haemopoietic activity is significantly reduced and generally attributed to failure of haemopoietic stem cells (HSC) within the bone marrow (BM). The regulation of haemopoiesis depends on the interaction between HSC and various cells of the BM microenvironment, including mesenchymal stromal cells (MSC). MSC involvement in the functional restriction of HSC in AA is largely unknown and therefore, the physical and functional properties of AA MSC were studied in vitro. MSC were characterized by their phenotype and ability to form adherent stromal layers. The functional properties of AA MSC were assessed through proliferative, clonogenic and cross‐over culture assays. Results indicate that although AA MSC presented typical morphology and distinctive mesenchymal markers, stromal formation was reduced, with 50% of BM samples failing to produce adherent layers. Furthermore, their proliferative and clonogenic capacity was markedly decreased (P = 0·03 and P = 0·04 respectively) and the ability to sustain haemopoiesis was significantly reduced, as assessed by total cell proliferation (P = 0·032 and P = 0·019 at Week 5 and 6, respectively) and clonogenic potential of HSC (P = 0·02 at Week 6). It was concluded that the biological characteristics of AA MSC are different from those of control MSC and their in vitro haemopoiesis‐supporting ability is significantly reduced.     

骨髓间充质干细胞移植在肝再生中的应用

随着当今医学的发展,干细胞的应用逐渐涉及到各个领域,并发挥着无限的潜能。干细胞以其自我更新及多向分化的能力可以对多种疾病进行替代治疗。肝病终末期肝细胞数量减少,肝功能衰竭,通过干细胞的替代治疗,肝功能能够得以改善,肝纤维化得到缓解甚至逆转。干细胞治疗成为有望替代肝移植的新技术。此文就干细胞在肝病治疗中的潜能作一综述,包括干细胞的来源、治疗机制、治疗途径,并对其临床应用进行探讨。     

骨髓干细胞在大鼠肝再生环境中的分化

研究大鼠骨髓干细胞在部分肝切除后肝再生环境中的分化。从部分肝切除模型大鼠的胫骨中提取骨髓细胞,应用流式细胞仪富集骨髓干细胞,以PKH26-GL体外标记后通过门静脉进行自体移植,2周后行白蛋白和角蛋白8免疫组化检查。结果肝板肝细胞间PKH26-GL标记骨髓干细胞表达白蛋白、角蛋白8。提示骨髓干细胞在部分肝切除后肝再生环境中能分化为肝细胞,骨髓干细胞可能参与部分肝切除后的肝再生过程。