葛根素对血管平滑肌细胞凋亡的影响

葛根素是中药葛根的有效成分 ,对心脑血管疾病具有广泛的药理作用[1] 。研究表明 ,经皮腔内冠状动脉成型术(ＰＴＣＡ)后最主要的并发症为再狭窄 ,其主要表现为血管平滑肌细胞 (ＶＳＭＣ)的增殖和迁移以及细胞外基质的增多 ,而ＶＳＭＣ和巨噬细胞的凋亡功能失调和 (或 )凋亡小体的清除不足是促进动脉粥样硬化发生、发展的重要因素[2 ] 。因而寻找能够促进动脉粥样硬化中ＶＳＭＣ凋亡的手段具有重要的临床意义。本实验利用体外细胞培养技术、流式细胞术、荧光显微镜观察了葛根素对ＶＳＭＣ凋亡的影响。1　材料和方法1.1　血管平滑肌原代细胞的…     

氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞凋亡

AIM: To examine whether oxidized low density lipoproteins (ox-LDL) could induce apoptosis in rabbit aortic smooth muscle cells (VSMC). METHODS: Low density lipoproteins (n-LDL) were isolated from healthy human plasma by gradient ultracentrifugation and oxidized by CuSO4 10 mumol.L-1. VSMC were exposed to ox-LDL, n-LDL, or phosphate-buffer solution (PBS) as control. Morphological changes were observed under fluorescene microscope after Hoechst 33258 staining. Extracted DNA was electrophoresized on agarose gel. RESULTS: Incubation of VSMC with ox-LDL 300 mg.L-1, not n-LDL, for 24 h induced morphological apoptosis changes (chromatin condensation, nucleus fragmentation) and DNA fragmentation, which was furthered with the incubation time up to 48 h or at a concentration of 400 mg.L-1. Dextran sulfate, a scavenger receptor blocker and butylated hydroxytoluene (BHT), an antioxidant, exhibited no effect on DNA fragmentation. Lysophosphatidylcholine (LPC) at a concentration up to 125 mumol.L-1 (equivalent to ox-LDL 300 mg.L-1) did not elicit DNA fragmentation. CONCLUSION: Ox-LDL induced apoptosis in VSMC without involving oxygen free radicals and LPC.     

他汀类药物与血管平滑肌细胞凋亡

血管平滑肌细胞（VSMC）的异常增殖和迁移在粥样斑块形成和冠状动脉介入治疗（PCI）后再狭窄中起非常重要的作用。他汀类药物不仅是一种有效的调脂药，同时还有多种调脂以外的作用。如他汀类药物可以抑制VSMC的增殖和迁移，并诱导其凋亡。临近病变部位的中层VSMC的凋亡可能造成斑块纤维帽容易破裂，进而引起斑块不稳定和临床事件。但研究证实他汀类药物有稳定斑块的作用，且新生内膜VSMC对他汀类药物诱导的凋亡作用比普通的血管中层VSMC更敏感。因此，他汀类药物的促新生内膜VSMC凋亡作用可能对预防PCI术后再狭窄起有益作用。具体作用机制以及临床上如何合理发挥此类作用尚待进一步研究。     

泛素-蛋白酶体抑制剂对血管平滑肌细胞凋亡的影响

血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle,VSMC)是构成血管壁的重要成分。在动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)病变中,VSMC在病理状态下凋亡失平衡引起血管重塑,导致动脉粥样硬化的发生。目前研究发现,细胞凋亡在动脉粥样硬化形成的发病和治疗中具有重要意义,而泛素-蛋白酶体抑制剂(The ubiquitinproteasome inhibitor,UPI)能够促进VSM C凋亡进而影响动脉粥样硬化。本文对泛素-蛋白酶体抑制剂影响VSM C凋亡的机制进行了综述。     

雷公藤甲素对兔血管平滑肌细胞增生和凋亡的影响

目的：研究雷公藤甲素（TP）是否具有抑制血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖并诱导其发生凋亡的作用,为临床开发新型药物洗脱支架提供实验依据。方法：体外主动脉SMCs培养和流式细胞仪检测,DNA凝胶电泳。结果：TP组与空白对照组及地塞米松组相比,凋亡率有显著提高;TP干预组凝胶电泳谱型呈凋亡特征性梯状条带。结论：TP可抑制指数生长期SMCs增殖并诱导其凋亡。     

福辛普利对平滑肌细胞凋亡及凋亡调控基因的影响

目的：探讨血管紧张素Ⅱ在不同浓度和不同作用时间下对血管平滑肌细胞凋亡及凋亡调控基因表达的作用，并研究福辛普利对其的影响。方法：采用流式细胞技术测定在不同浓度和不同作用时间血管紧张素Ⅱ作用下血管平滑肌细胞凋亡率及凋亡调控基因Fas、Bcl-2表达的变化和福辛普利对其的影响。结果：血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞凋亡和凋亡调控基因表达有较明显的诱导作用。福辛普利可抑制AngⅡ作用，对细胞凋亡有一定的影响，同时可影响凋亡调控基因的表达。结论：血管紧张素Ⅱ具有一定的的促进血管平滑肌细胞凋亡作用和调节凋亡调控基因表达的作用，尤其大剂量作用较明显。而福辛普利可明显抑制AngⅡ对血管平滑肌细胞的作用。     

药物对血管紧张素Ⅱ致平滑肌细胞凋亡的影响

目的:探讨血管紧张素Ⅱ在不同浓度和不同作用时间下,对血管平滑肌细胞凋亡的作用及卡托普利和氯沙坦对其影响。方法:采用流式细胞技术测定了在血管紧张素Ⅱ不同浓度和不同作用时间下,血管平滑肌细胞凋亡率的变化和卡托普利、氯沙坦及二者舍用对其影响。结果:血管紧张素Ⅱ中低剂量对血管平滑肌细胞凋亡无明显作用,大剂量有诱导凋亡的作用;单用氯沙坦对细胞凋亡无明显作用,卡托普利有一定的作用,二者合用时明显增加凋亡率。结论:血管紧张素Ⅱ具有促进血管平滑肌细胞凋亡作用,大剂量作用尤为明显;合用卡托普利和氯沙坦可明显增加平滑肌细胞的凋亡作用。     

缬沙坦对人脐静脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的:研究血管紧张素受体阻滞剂缬沙坦对人脐静脉血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的调节作用,以探讨缬沙坦抗动脉粥样硬化的作用机制.方法:荧光显微镜观察缬沙坦作用后VSMC凋亡的形态学变化,用流式细胞仪测定缬沙坦用药前后VSMC凋亡率并作周期分析,用流式细胞仪检测缬沙坦对凋亡相关基因Bax,Bcl-2和caspase3表达的影响.结果:缬沙坦高浓度 血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)组的VSMC凋亡率较AngⅡ模型组明显提高,缬沙坦单药高、中、低浓度组的VSMC凋亡率较对照组明显提高.细胞周期分析表明,AngⅡ 缬沙坦组与AngⅡ组比较,G0/G1期百分率显著升高,S期百分率显著降低,且具有浓度依赖性.Bax和caspase 3基因经高浓度缬沙坦组作用24 h后表达水平增加,Bcl-2则没有改变.结论:缬沙坦对AngⅡ诱导VSMC的增殖有抑制作用;缬沙坦可能促进VSMC凋亡;缬沙坦促进VSMC凋亡可能与Bax和caspase基因表达增加有关.     

葛根素对血管平滑肌细胞凋亡及其相关基因表达的影响

目的：观察中药黄酮葛根素对血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡的影响，并进一步探讨其作用的分子机制，探讨葛根素对何种VSMC凋亡相关基因的表达有影响。方法：应用流式细胞仪、荧光显微镜及电镜观察药物作用后细胞凋亡情况；采用cDNA差式分析法观察药物对细胞凋亡相关基因表达的影响。结果：（1）葛根素可促进VSMC凋亡，药物作用48h后凋亡率为15．5％，对照组为1．0％，荧光显微镜及电镜观察均可见明显的细胞凋亡特征；（2）cDNA差式分析筛选出两条长752bp和761bp的片断。同源检索显示与葡萄糖调节蛋白GRP94基因高度同源。结论：葛根素可促进VSMC凋亡，可能与促进VSMC的GRP94的片断，同源检索显示与葡萄糖调节蛋白GRP94基因高度同源。结论：葛根素可促进VSMC凋亡，可能与促进VSMC的GRP94的基因表达有关。     

曲古菌素A抑制血管平滑肌增殖和诱导凋亡的研究

目的观察曲古菌素A(TrichostatinA,TSA)体外抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和诱导凋亡的作用。方法采用MTT比色法和BrdU参入法观察TSA对血清诱导的VSMC增殖的抑制作用;采用流式细胞仪和检测细胞周期蛋白表达的方法观察TSA对VSMC细胞周期的影响;采用测定DNA片段和活化caspase-3表达的方法观察TSA诱导VSMC发生凋亡的作用。结果小剂量TSA抑制血清诱导的VSMC增殖而无明显的细胞毒作用,大剂量TSA激活caspase-3并诱导VSMC发生凋亡。TSA干预可延缓血清诱导VSMC进入S期,此效应与抑制cyclinD1和cyclinA表达有关。结论TSA能抑制血清诱导的VSMC增殖,使VSMC停滞于静止期,大剂量条件下诱导VSMC凋亡。TSA有望成为治疗血管增殖性疾病的新策略。     

萘哌地尔抗大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用

目的研究萘哌地尔(naftopidil,Naf)对去甲肾上腺素(noradrenalin,NA)诱导大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖的影响并探讨其机制。方法培养的VSMCs经NA诱导其增殖,分别用MTT比色法和细胞计数法检测Naf对VSMCs增殖的影响;荧光法测定细胞内钙浓度([Ca2+]i)及Real-TimeRT-PCR检测c-myc、c-fos、高血压相关基因(hypertension related gene-1,HRG-1)mRNA的表达。结果萘哌地尔(10-7～10-6mol·L-1)能够抑制NA诱导的VSMCs增殖,并明显降低VSMCs[Ca2+]i,降低c-myc、c-fos mRNA表达,增加HRG-1 mRNA的表达。结论萘哌地尔明显抑制NA诱导的VSMCs增殖,作用机制可能与其降低VSMCs[Ca2+]i、拮抗NA上调c-myc、c-fos mRNA的表达和拮抗NA下调HRG-1 mRNA的表达有关。     

组织蛋白酶S抑制剂对兔血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 研究组织蛋白酶S抑制剂对培养的兔血管平滑肌细胞凋亡的影响及其机制.方法 获取兔主动脉组织,传代培养血管平滑肌细胞,将细胞分为对照组、单药组(血管紧张素Ⅱ)、联合组(组织蛋白酶S抑制剂+血管紧张素Ⅱ);采用流式细胞术和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测血管平滑肌细胞凋亡,蛋白质印迹法检测B细胞淋巴瘤基因-2蛋白、B细胞淋巴瘤基因-2相关蛋白X及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3的表达.结果 ①流式细胞术检查及TUNEL染色结果均显示,联合组血管平滑肌细胞晚期凋亡数量明显低于单药组;TUNEL染色10 h和12 h时点,单药组与联合组差异有统计学意义[ 10 h:(23607±176)比(36058±269)个,12 b:(29813±205)比(39146±263)个,均P＜0.05];②蛋白质印迹检测结果显示,与单药组相比,联合组B细胞淋巴瘤基因-2相关蛋白X/B细胞淋巴瘤基因-2蛋白明显下降,组间差异有统计学意义(P＜0.05);联合组半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3表达明显降低,组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 组织蛋白酶S抑制剂可能通过下调B细胞淋巴瘤基因-2相关蛋白X、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3表达减轻血管平滑肌细胞凋亡.     

色满卡林对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的：观察色满卡林对自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响。方法：30只12 wk龄SHR,随机分为高血压组、色满卡林组,另设正常对照组。色满卡林组给予色满卡林0.6 mg·kg~(-1)·d~(-1),分2次灌胃；另2组每日给予等量的生理盐水,共16 wk。监测尾动脉收缩压。用免疫组化法检测Bcl-2,Bax和PCNA蛋白表达。荧光标记TUNEL法检测VSMCs凋亡,计算VSMCs凋亡指数(SMAI)。结果：高血压组与正常对照组比较,收缩压明显增高(P＜0.05)；VSMCs中的Bcl-2,PCNA蛋白表达明显增强(P＜0.05)；SMAI明显减少(P＜0.01)；Bax蛋白表达2组间差异无显著意义(P＞0.05)。与高血压组比较,色满卡林组尾动脉收缩压呈降低趋势,但差别无显著意义(P＞0.05)；VSMCs的Bcl-2和PCNA蛋白的表达减少(P＜0.05),Bcl-2/Bax比值下降；SMAI增加(P＜0.05)。结论：色满卡林促进了SHR的VSMCs凋亡,可能机制是通过调节VSMCs的Bcl-2/Bax蛋白表达平衡。     

氧化甾醇抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及诱导其凋亡的作用

目的 :研究 3β ,5α ,6 β 胆甾烷三醇 (Triol)和2 5 羟胆固醇 (2 5OH)对VSMC增殖的影响 ,探讨氧化甾醇在动脉粥样硬化 (AS)发病中的作用和意义。方法 :培养和鉴定新西兰白兔主动脉VSMC ;以含不同浓度的Triol和 2 5OH的培养液作用于VSMC为实验组 ,不含氧化甾醇或含胆固醇的培养液作为对照组。VSMC增殖及其代谢活性以WST 1测定 ,细胞凋亡以光镜、透射电镜、脱氧核苷酸末端转移酶介导脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记 (TUNEL)判断。结果 :在1× 10 - 9～ 1× 10 - 7mol·L- 1范围的Triol和 2 5OH对VSMC的WST 1代谢活性无明显变化 (P >0 .0 5 ) ,而≥ 1× 10 - 6 mol·L- 1的氧化甾醇则使其代谢活性显著下降 (P <0 .0 1) ;≥ 2 0× 10 - 6 mol·L- 1的Triol和2 5OH诱导VSMC胞体皱缩变小、染色质在核周边浓集、核碎裂、空泡和凋亡小体形成等超微结构变化 ;TUNEL呈阳性反应。结论 :小剂量氧化甾醇无促进VSMC增殖而较大剂量氧化甾醇可诱导VSMC凋亡。     

细胞内游离钙在辛伐他汀诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡中的作用

目的　研究 3 羟 3 甲戊二酰辅酶A (HMG CoA)还原酶抑制剂辛伐他汀诱导血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的机制。方法　以荧光染料Fura 2 /AM负载后荧光分光光度计法检测细胞内游离钙浓度 ,以DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪PI/膜联蛋白 (an nexin)V染色及半胱天冬酶 3激活来检测细胞凋亡。结果　辛伐他汀 30 μmol·L- 1孵育VSMC后 ,细胞内游离钙浓度显著升高 ,6h时达对照的 3倍以上 (P <0 .0 1) ,维拉帕米 80 μmol·L- 1与辛伐他汀 30 μmol·L- 1共同孵育VSMC 6h后细胞内游离钙浓度为 (14 4± 34)nmol·L- 1(P <0 .0 1)。辛伐他汀可诱导细胞凋亡率增高、“DNA梯状”样改变及半胱天冬酶 3的激活 ,这些变化均可被维拉帕米所逆转。结论辛伐他汀通过使细胞外钙大量内流而诱导VSMC凋亡。     

Oxidized low-density lipoprotein sensitizes human vascular smooth muscle cells to FAS (CD95)-mediated apoptosis

1. It was investigated in the present study whether oxidized low-density lipoprotein (oxLDL) was implicated in the susceptibility of human vascular smooth muscle cells (VSMC) to Fas-mediated death. Human fetal aorta smooth muscle cells were treated with agonistic anti-Fas antibody (CH11) and oxLDL and cell death was then determined by viability and DNA fragmentation. 2. The results of the present study show that cross-linking of Fas receptor with anti-Fas antibody in the presence of oxLDL induced death and DNA fragmentation in human VSMC, which were blocked by the caspase inhibitor z-VAD.fmk, followed by the upregulation of cell surface Fas. 3. The data indicate that oxLDL is implicated in death in VSMC and provide evidence that oxLDL is involved in Fas signal transduction. The present study proposes a novel mechanism(s) by which VSMC become susceptible to Fas ligand. 4. One of the mechanisms proposed by which oxLDL upregulates cell surface Fas is by inhibiting the degradation of Fas through the ubiquitin-proteasome pathway.