纤维素酶的SDS-PAGE及其性质研究

用SDS-PAGE对纤维素酶进行了纯化,对它的一些性质作了研究.结果表明,该纤维素酶的主要成分是单一的蛋白质,它的相对分子量为67 000,在pH 4.0～8.0,35～50℃时较稳定,当温度超过60℃时,酶没有活性.     

黑曲霉LH2446纤维素酶的纯化及酶学性质的研究

从黑曲霉固态发酵物中提取纤维素酶。粗酶液经硫酸铵盐析除去大量杂蛋白,然后通过2次SephadexG-100柱纯化CMC酶,提纯倍数可达47.22。酶学研究表明,纤维素酶中CMC酶最适作用温度为60℃,最适作用pH为4.5,CMC酶的Km为6.54mg/mL,Vmax为0.12mg/mL.min。     

黄绿木霉纤维素酶提纯及其性质研究

通过(NH4)2SO4分级沉淀、Sephadex G-100分子筛层析和DEAE Sephadex A-50离子交换层析等步骤,分离纯化出木霉T2纤维素酶系中达到电泳纯的3种内切葡聚糖酶(EGⅠ、EGⅡ、EGⅢ)和2种β-葡萄糖苷酶(BGⅠ、BGⅡ).通过SDS-PAGE和IEF电泳测得5个酶组分的相对分子质量分别为62.3 ku、71.9 ku、52.6 ku、85.3 ku和78.3 ku,等电点分别为5.4、4.8、5.0、5.6和5.8.此酶系均为糖蛋白,含糖量分别为17.7%、11.7%、15.6%、17.8%、19.3%.5个酶组分均属酸性纤维素酶,最适pH都是5.0;3种内切葡聚糖酶的最适温度皆为60℃,2种β-葡萄糖苷酶的最适温度都是55℃.Mn2 、Fe2 、Zn2 对5种纤维素酶都有一定的激活作用,尤其是Mn2 对内切葡聚糖酶的激活作用极为显著;Mg2 、Cu2 、脲对5种纤维素酶都具有不同程度的抑制作用.酶学动力学分析表明5种纤维素酶组分的Km值分别为0.093、0.083 8、0.079 0、0.085 1和0.077 8 mg/mL,Kcat值为101.7、119.6、11.4、111.4和162.1 s-1.内切葡聚糖酶对底物CMC-Na亲和力的大小与酶的催化效率之间并无相关性,BG对底物水杨苷亲和力的大小与酶的催化效率之间有一定的相关性.β-葡萄糖苷酶有较高的底物专一性,只对水杨苷有活力;内切葡聚糖酶在对羧甲基纤维素钠有活力的同时,对滤纸和秸秆粉也有微弱的活力.     

纤维素酶EGA基因在枯草芽孢杆菌中的表达及其产物性质研究

枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis是一种高效的外源蛋白表达菌株,能将目的蛋白分泌到细胞外的培养基中.从福寿螺胃液共生菌株Bacillus sp.Strain AC-1基因组中克隆纤维素酶EGA的基因序列,利用基因工程技术构建纤维素酶EGA的重组枯草芽孢杆菌表达载体pAUsp-ega.该载体含有一个强启动子和一段信号肽,经淀粉诱导能表达外源蛋白.以枯草芽孢杆菌蛋白酶缺失型菌株WB700为宿主菌,表达得到的重组纤维素酶EGA以羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为底物得到的培养基上清酶活力达到1 120 U/L.该纤维素酶在pH 6.0表现最大水解活力,最适反应温度为60℃,在酸性条件下稳定性良好,具有较好的应用前景.     

黑曲霉液体发酵产纤维素酶酶系均衡性研究

采用pH值和温度两因素用正交实验法分析出黑曲霉710712纤维素酶系各组分最适酶解条件，其组合分别为：C1酶(pH5．0,45℃)，Cx酶(pH4．0，60℃)，βG(pH5．0，65℃)。在液体发酵条件下，探讨缓冲系统以及CaCl2及吐温-80对产酶的影响；分析了不同碳源以及碳源与碳源的配比对黑曲霉产纤维素酶系均衡性的相关性。结果表明碳源的种类和配比对最大酶活及其形成时间、比酶活和分泌变化规律均有不同影响效应。纤维素粉和麦麸浓度配比为1．09，6和2．0％时可明显改善所产纤维素酶系的均衡性；用0．1M柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液和添加适量CaCl2(0．3％)和吐温-80(0．3％)对产酶有正向影响。     

产纤维素酶细菌的筛选及其产酶条件的研究

对从连云港地区采集的样品通过富集培养、分离纯化得到31株细菌,经刚果红染色鉴定和液体发酵获得一株产纤维素酶高的细菌,该菌为革兰氏阳性,菌体成杆状,有芽孢。摇瓶产酶试验结果表明,该菌株在培养基初始pH=8,35℃,培养30 h产纤维素酶活力最高,达70 U/mL。     

磁性固定化纤维素酶的交联法制备及其磁致酶学性质

以磁性壳聚糖微球为载体,采用交联法制备磁性固定化纤维素酶.分别研究了活化剂乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亚胺盐酸盐(EDC)与戊二醛的活化时间及活化温度对酶固载量的影响.比较磁性固定化纤维素酶与游离纤维素酶在外加磁场作用下,其酶活力的变化.结果表明,磁性固定化纤维素酶的酶活受磁场作用影响较小;当磁场强度<500 mT与曝磁时间<60 min时,游离纤维素酶的酶活随着磁场强度与曝磁时间的增加而增加,但超过这范围,酶活就急速下降.     

纤维素酶的固体发酵研究

对五种纤维素酶产生菌进行了酶系分析。在稻划粉;麸皮＝７：３,加水比１：３,硫酸铵添加量３％,初始ＰＨ６．０,培养温度２８－３０℃的优化条件下,培养康氏木霉ｈ５,发酵８４小时,可使ＣＭＣ酶活力达到１８６０ｕ／ｇ干曲。     

草菇木聚糖酶SDS-PAGE后的复性及活性染色

草菇木聚糖酶经SDS-PAGE后在胶中能够原位复性。通过银染和刚果红活性染色比较．可确定该酶在胶中的位置．草菇木聚糖酶是单亚基蛋白，相对分子质量为24500．     

纤维素酶固定化研究

采用交联法制备了聚乙二醇改性壳聚糖(PEG-CS)载体,并将其用于固定纤维素酶.探讨了栽体制备过程中的几种主要影响因素、纤维素酶固定化的影响因素,并对固定化纤维素酶的性质进行了讨论.结果表明,固定化酶最适pH值比原酶降低,最适温度为60℃,比游离酶高10℃.在pH值为5.0,温度40℃时,固定化酶对羧甲基纤维素钠盐的表观米氏常数为7.2 mg/L,而游离酶为3.3 mg/L.与游离酶相比,该固定化纤维素酶热稳定性明显提高,并具有良好的操作和存储稳定性.     

聚乙二醇修饰纤维素酶的性能研究

以单甲氧基聚乙二醇丙醛(mPEG-ALD 5KD)为修饰剂,对纤维素酶进行化学修饰,得到修饰纤维素酶(mPEG-Cell)。用mPEG-Cell降解微晶纤维素,以所得还原糖量为标准(DNS比色法测定),考察各种因素对其催化性能的影响,确定最佳修饰条件。结果表明:在0.1mol·L-1 pH=4.8的柠檬酸-柠檬酸钠的缓冲溶液中,纤维素酶质量浓度为5mg·mL-1,m(mPEG-ALD)∶m(酶)=1∶1,35℃修饰24h,所得到的mPEG-Cell具有最佳的催化性能,在50℃下降解微晶纤维素,24h后可得还原糖量达到2.58mg·mL-1,比同条件下天然酶降解微晶纤维素得到的还原糖量多0.53mg·mL-1,即多26%。     

交联纤维素酶聚集体制备及其催化特性研究

用90%饱和度的硫酸铵盐析沉淀纤维素酶蛋白,将蛋白沉淀用3%戊二醛交联固定制得交联酶聚集体;研究交联酶聚集体的最适反应温度、最适反应pH、酸碱稳定性、热稳定性、批次稳定性。交联酶纤维素酶聚集体的最高比活性为559.2 U/g湿载体,最适反应温度为60℃,最适pH为9.0。交联酶聚集体的热稳定性和pH稳定性均优于游离酶,重复使用10批活性基本稳定。交联纤维素酶聚集体稳定性较好,具有一定的工业应用前景。     

热纤梭菌纤维素酶的研究

本文对热纤梭菌ATCC27405和NCIB10682发酵所产生的纤维素酶的酶系比例，酶作用的最适温度和pH值以及产酶条件进行了研究。结果表明，在热纤梭菌的纤维素酶系中，C1酶、Cx酶和β-葡萄糖苷酶在这二菌株中的比值分别为1．0：8．4：27．9和1．0：6．4：14．7。酶作用的最适温度为55～60℃，pH值为6．1～7．7。同时发现这二菌株中的Cx酶具有较高的热稳定性。     

产纤维素酶细胞固定化研究

用海藻酸钙凝胶包埋法制备木霉固定化细胞,研究了固定化条件和培养条件对固定化细胞稳定性及产纤维素酶的影响,初步确定了产纤维素酶木霉细胞的固定化方法。     

木质纤维素酶水解技术的研究

在我国可大量转化乙醇的是纤维质材料,纤维质材料转化乙醇的关键问题是纤维质转化为糖的过程．木质纤维原料酶水解是利用木质纤维原料产糖的关键步骤之一．作者对纤维素酶及其水解木质纤维原料作用机制、纤维素酶的生产、木质纤维原料酶水解的影响因素作了全面综述,并对提高木质纤维原料酶水解效率和降低水解成本的途径进行了讨论．     

里氏木霉DWC1纤维素酶的研究

实验对纤维素酶高产菌株里氏木霉ＤＷＣ１的最佳产酶条件进行了研究。且分析了菌株在不同的营养及培养条件下的产酶情况。ＤＷＣ１菌株的最佳液体培养条件如下：温度（２５￣２９）℃,初始ｐＨ５．０,发酵时间（５￣７）ｄ。在此培养条件下菌株的ＣＭＣ酶活及滤纸酶活可分别达到４８３．３ｍｇ／（ｍｌ·３０ ｍｉｎ）和１３６．７ｍｇ／（ｍｌ·ｈ）。     

产胞外耐高温纤维素酶细菌的获得和酶的纯化及性质研究

对从高温堆肥中分离得到的一株产胞外耐高温纤维素酶的细菌进行了生理生化鉴定,结果显示其属于嗜热脂肪芽孢杆菌。对其所产纤维素酶进行了分离纯化,该酶反应的最适温度约为66℃,最适pH值为7.0,至少有8个亚基。     

耐热碱性纤维素酶分离纯化及酶学特性研究

通过离子交换和凝胶过滤两步层析法,从耐碱芽孢杆菌Ⅲ-3的培养液中分离到相对分子质量约为89kD、比活力高达420U/mg的碱性纤维素酶Ⅲ-3-A.质谱分析显示:Ⅲ-3-A酶蛋白与芽孢杆菌KSM-64、KSM-S237等产生的A5家族碱性纤维素酶具有一定的同源性.酶学性质研究结果表明:Ⅲ-3-A的CMC酶反应以pH值为9.0、反应温度45℃左右为宜,在pH值为6~11和50℃以下酶活性稳定,且具有耐金属离子和表面活性剂等特性;Ca2 对酶的最适反应温度和热稳定性有显著影响,添加5mmol/LCaCl2可使最适酶反应温度和稳定性分别提高至50℃和55℃.该酶具有耐热、耐金属离子、耐碱及高比活力等特点,在棉织品的水洗整理及洗涤剂工业中具有良好应用前景.     

微生物发酵生产纤维素酶的研究进展

纤维素酶是一种重要的酶产品,主要由外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等组成,还有很高活力的木聚糖酶活力.这三类酶的协同作用,能将具有很强化学与生物抗性的天然纤维素大分子降解成简单的葡萄糖,这对于缓解当前世界所面临的能源、粮食、环境危机等问题具有重要的意义.本文就纤维素酶的微生物发酵方面的进展进行综述.     

解脂假丝酵母脂肪酶的纯化及性质研究

通过采用盐析和透析等提纯方法,对解脂假丝酵母（Candida lipolytica)脂肪酶进行了纯化,比活提高了2．69倍,率回收率45％,该酶反应的最适PH值为7．5,最适温度为38度,PH稳定范围为6．0－7．5,温度稳定性较差,以2mol/L的蔗糖作保护剂效果较好,该酶为金属酶,5mmol/L的钙离子有较好的活化效果。