改良"彗星"分析法检测鼻咽癌放射敏感性的初步研究

目的　评价改良”彗星”分析法应用于预测临床鼻咽癌放射敏感性的价值。方法　应用改良”彗星”分析法对 10 5例鼻咽癌患者放射治疗前的鼻咽活检组织标本进行分析。将鼻咽癌活检标本制备的单细胞悬液分为对照管和单次 5Gy照射管。所有病例在放射治疗前及至 5 0Gy时行螺旋CT或MRI检查 ,分别测量肿瘤最大横截面积 (S0 为疗前 ,S50 为疗中至 5 0Gy时 )。临床放射敏感性评价应用肿瘤最大横截面积的消退率表示 [即Rs=(S0 S50 ) /S0 ],Rs≥ 0 .9为高度敏感 ,0 .7≤Rs<0 .9为中度敏感 ,Rs<0 .7为不敏感。实验室根据图像特点将”彗星”图分为ⅠA、ⅠB、ⅡA、ⅡB四类 ,根据尾力矩、DNA积分吸光度等参数设定实验室放射敏感性判断标准。统计分析采用SPSS10 .0软件包 ,用Kappa分析法进行临床和实验室结果一致性分析。结果　全组患者临床放射敏感性高度敏感 4 1例 ,中度敏感 2 1例 ,低敏感 4 3例。改良”彗星”分析法放射敏感性敏感 5 8例 ,不敏感 4 7例。改良”彗星”分析法的敏感性为 71.0 % ,特异性为 6 7.4 % ,准确性为 6 9.5 %。两种检测方法接近中高度一致性(Kappa=0 .38)。结论　改良”彗星”分析法检测人鼻咽癌活检标本 ,在放射治疗前能对鼻咽癌的临床放射敏感性作出预测 ,方法简单、检测周期短 ,具有较强的     

"彗星"分析法检测人癌裸鼠移植瘤的放射敏感性

目的　探讨“彗星”分析法应用于人实体肿瘤放射敏感性检测的可能性。方法　应用“彗星”分析法 ,以尾力距之比 (RTM)作为终指标 ,检测人肺腺癌、人食管鳞癌和人鼻咽鳞癌等 3种人癌裸小鼠移植瘤的放射敏感性。裸小鼠移植瘤组织被消化并稀释成细胞浓度为 4× 10 4ml的单细胞悬液后 ,分成对照组 (0Gy)和不同剂量照射组 ,照射组分别给予 2、5、10和 15Gy的 6MVX射线的冰上照射 ,照射后立即进行“彗星”分析。结果　 3种人癌裸小鼠移植瘤细胞未照射时 (0Gy)的尾力矩 (TM)差异有显著性意义 (F =9.11,P <0 .0 1)。不同剂量 (2、5、10和 15Gy)照射后 ,3种人癌裸小鼠移植瘤细胞未做校正时的TM所反映放射敏感性由高到低的变化趋势依次为 :肺腺癌 >食管鳞癌 >鼻咽鳞癌 ,显然与临床一般印象不符 ;而经与对照组进行“本底”校正后的RTM所反映放射敏感性由高到低的变化趋势依次为 :食管鳞癌 >鼻咽鳞癌 >肺腺癌 ,则符合临床一般印象。结论　①应用“彗星”分析法检测实体肿瘤的放射敏感性 ,尾力矩必须进行“本底”校正 ,即扣除对照组本底误差后的尾力矩才能很好地反映实体肿瘤的放射敏感性差异。②“彗星”分析法可用于检测人体肿瘤组织的放射敏感性。     

"彗星"分析法测定人癌体外培养细胞的放射敏感性

目的探讨"彗星"分析法在检测人癌体外培养细胞放射敏感性方面的应用价值.方法应用"彗星"法对人鼻咽高分化鳞状细胞癌CNE-1和肺腺癌973细胞进行检测,以尾力矩作为定量评价指标,检测细胞照射后的DNA初始损伤和损伤后的修复能力;同时,用经典的克隆形成方法测算CNE-1和973细胞的D0值和Dq值,并对两种实验方法所得结果进行比较.结果 (1)"彗星"法测定显示,CNE-1细胞的初始DNA损伤大于973细胞,差异有显著性(P<0.01),提示CNE-1细胞的放射敏感性高于973细胞;细胞存活曲线检测显示,CNE-1细胞的D0值为1.631,973细胞的D0值为1.822,提示CNE-1细胞的放射敏感性高于973细胞.两种方法检测结果所反映细胞放射敏感性的趋势一致.(2)"彗星"分析法检测显示,973细胞DNA损伤的半修复时间为33 min,CNE-1细胞的半修复时间为41 min, 提示973细胞对DNA损伤的修复能力强于CNE-1细胞;细胞存活曲线显示,973细胞的Dq值为2.152,CNE-1细胞的Dq值为0.626,提示973细胞的亚致死损伤修复能力大于CNE-1细胞.两种方法测定结果所反映的损伤修复能力的差异也一致.结论 "彗星"分析法检测CNE-1和973细胞的DNA初始损伤及修复所反映的放射敏感性,与经典细胞存活曲线法所测的放射敏感性一致,说明"彗星"分析法是一种能够较准确检测细胞放射敏感性的方法.     

改良"彗星"分析法检测实体肿瘤放射敏感性的方法学研究

目的 改进和完善改良"彗星"分析法以更好地用于检测实体肿瘤的放射敏感性.方法 门诊活检标本制成单细胞悬液,冰上照射后立即铺胶制板,在裂解液中裂解50 min,漂洗后进行细胞电泳20 min.PI染色后在荧光显微镜下采图并用专用软件进行图像分析.每例样品均设对照(包括外参对照和自身对照)+m5 Gy照射,并对活检样品的正常细胞和肿瘤细胞进行分类采图.观察指标为细胞DNA含量和尾力矩.结果 影响实验室测定结果与临床肿瘤放射反应相关性的因素主要有:(1)取材较表浅样品中仅有淋巴细胞而无肿瘤细胞,从而导致实验室测定结果与临床肿瘤放射敏感性的吻合性下降;(2)样品中坏死细胞较多,使本底增高,是影响放射敏感性分析的重要因素;(3)增设淋巴瘤细胞作为外参对照可对实验系统误差进行校正,是质量控制不可缺少的环节;(4)对活检样品中正常细胞和肿瘤细胞进行分类采图能提高临床与实验室检测结果的吻合性.结论 实验同时设置内、外参对照和对样品中肿瘤细胞和正常组织细胞进行分类采图,能不同程度提高实验室检测结果与临床肿瘤实际放射反应的吻和性.     

放射敏感性与放射增敏

近年来,肿瘤的放射治疗取得了较好的成绩,这主要得益于临床放射生物学的发展。但是,如何克服放射抵抗性尚无理想途径。目前,“４Ｒ”仍是综合分析的理论基础,且已融入了许多新的内容。本文试图综合放射生物学领域的最新成果,就放射敏感性相关因素作一总结。１乏氧细胞与放射敏感性 多数实体瘤中均存在一定比例的乏氧细胞,它们对低ＬＥＴ辐射相当抗拒,是放射治疗失败的重要原因之一。肿瘤乏氧本身是受多种因素影响的,包括肿瘤所在部位、宿主情况、肿瘤血管形态异常等。随着认识的逐步深入,试图解决的途径也越来越多。早期曾以高压…     

DSB修复蛋白ATM DNA-PKcs与肿瘤放射敏感性关系的研究进展

放射线主要通过导致细胞DNA双链断裂(DSB)而起到杀死肿瘤细胞的作用,但细胞都有不同程度的DSB修复能力,研究证实DSB 修复水平与细胞放射敏感性关系密切.在人类细胞内有2 种DSB 修复途径:一种是以DNA 依赖蛋白激酶(DNA-PK)复合物为主的非同源末端连接(NHEJ)修复,另一种是以毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白(ATM)为主的同源重组(HR)修复.在人体内,NHEJ修复是最主要的修复途径,DNA依赖蛋白激酶催化亚单位(DNA-PKcs)是DNA-PK复合物的主要功能单位.DNA-PKcs的激酶活性是NHEJ修复所必须的,其在DSB修复中起核心作用.近年来的研究显示ATM、DNA-PKcs蛋白表达水平与肿瘤放射敏感性有关.该综述将有关ATM、DNA-PKcs的功能、在肿瘤组织中的表达及与肿瘤放射敏感性关系的研究进行简要回顾.     

肿瘤凋亡与放射敏感性研究进展

准确预测和提高肿瘤的放射敏感性一直是放疗工作者苦苦研究但尚未解决的难题,近来研究显示肿瘤细胞凋亡与放射敏感性相关,本文综术这方面的研究结果。     

肿瘤放射敏感性预测方法探索

肿瘤放射敏感性的预测可帮助临床制订治疗方案，目前研究重点已从肿瘤细胞株的离体实验转向肿瘤活检标本及正常组织的放射敏感性，建立并发展了一些具有潜力的预测方法，但其临床可行性尚需进一步研究，观察。     

P53基因突变与肿瘤放射敏感性

ｐ~（５３）基因突变与肿瘤放射敏感性王俊杰综述申文江审校北京医科大学第一医院放疗科（北京市１０００３４）放射治疗是现代肿瘤治疗的重要组成部分，但是对于肿瘤放射治疗的核心问题一肿瘤细胞放射敏感性的认识仍停留在细胞学水平，尤其是控制肿瘤细胞放射敏感性的内?..     

Measurements using the alkaline comet assay predict bladder cancer cell radiosensitivity

In the UK, the two main treatments of invasive bladder cancer are radiotherapy or cystectomy. However, approximately 50% of patients undergoing radiotherapy fail to respond. If tumour radiosensitivity could be predicted in advance, it may be possible to improve control rates significantly by selecting for radiotherapy those patients whose tumours are radiosensitive. Additionally, patients who would benefit from surgery would be identified earlier. The alkaline comet assay (ACA) is a sensitive method for the detection of DNA strand break damage in cells. In the present study, using six bladder cancer cell lines of differing radiosensitivities, cell survival was compared to the manifestation of radiogenic DNA damage as assessed by ACA. For all the cell lines, the extent of comet formation strongly correlates with cell killing (R2>0.96), with a greater response being noted in radiosensitive cells. In repair studies, measures of residual damage correlate with survival fraction at 2 Gy (R2>0.96), but for only five of the cell lines. Finally, cells from human bladder tumour biopsies reveal a wide range of predicted radiosensitivies as determined by ACA. Overall, these studies demonstrate ACA to be a good predictive measure of bladder cancer cell radiosensitivity at low dose, with potential clinical application.     

TECIA法体外放射敏感性实验对原发性肺鳞癌放疗个体化方案选择的意义

目的：建立人原发性肺鳞癌的组织培养放疗敏感性检测法,快速确定人原发性肺鳞癌组织的辐射敏感性的个体差异,用于筛选放疗方案及指导临床肿瘤个体化放疗方案。方法：采用TECIA法检测不同个体原发性肺鳞癌组织在不同剂量、不同分次放疗方案照射后不同时间的细胞凋亡水平。比较不同剂量、不同分次放疗方案照射后不同时间的细胞凋亡水平的差异。结果：TECIA法发现,照射前人原发性肺鳞癌组织细胞凋亡指数较低,放疗后出现较高的细胞凋亡指数,与放疗剂量呈正相关。结论：肿瘤放射敏感性实验对指导患者的个体化治疗具有重要的价值。     

彗星试验中全血法与分离淋巴细胞法的比较

背景与目的 :比较在彗星试验中全血法和分离淋巴细胞法的结果差异 ,为简化彗星试验方法提供实验依据。材料与方法 :重铬酸钾和乙醇腹腔注射给药 ,取全血或分离淋巴细胞 ,应用彗星实验法比较小鼠外周血液淋巴细胞的DNA损伤情况。结果 :在全血和分离淋巴细胞条件下均能检测到两种损伤剂所导致的细胞DNA损伤 ,且作用趋势相同。 结论 :采用全血进行彗星试验更为简便 ,有利于大规模筛选和检测工作     

热休克预处理对高温致中国仓鼠肺细胞（V79）细胞DNA双链断裂的影响

目的研究热休克预处理对高温致V79细胞DNA双链断裂的影响。方法培养V79细胞,分为对照组和39℃、40℃、41℃、42℃热休克预处理组,预处理后,恢复6 h,再以43℃与45℃进行高温损伤处理,4%多聚甲醛固定,抗γ-H2AX抗体标记,然后羊抗鼠FITC二抗孵育1 h,细胞核内DNA双链断裂斑点用激光共聚焦显微镜进行观察。结果在激光共聚焦显微镜下观察,经统计：对照组细胞核内的DNA双链断裂数量与热休克预处理组细胞核内的DNA双链断裂数量差异有统计学意义（P<0.05）。结论热休克预处理可以减少高温所致V79细胞DNA双链断裂的数量,说明V79细胞可以产生对温度的适应性反应。     

miR-34s增强结直肠癌细胞对放射敏感性的作用研究

目的:探讨miR-34s对结直肠癌细胞放射敏感性的影响以及在电离辐射致DNA损伤中的作用。方法:利用实时荧光定量PCR（real-time quantitative fluorescence PCR,qRT-PCR）检测miR-34a/b/c-5p在结直肠癌细胞中的表达水平,以及电离辐射后miR-34a/b/c-5p表达水平变化趋势。基于克隆形成法和单击多靶模型建立细胞存活曲线,分析miR-34a/b/c-5p对结直肠癌细胞放射敏感性的影响。过表达miR-34a/b/c-5p并进行照射,利用免疫荧光法检测照射后γH2AX焦点形成情况,进而分析miR-34a/b/c-5p对电离辐射致DNA损伤的作用。结果:miR-34a/b/c-5p在HCT116细胞中的表达水平明显高于HT29细胞（P＜0.05）。HCT116细胞经4 Gy照射后24 h内,miR-34a/b/c-5p表达水平呈双峰变化趋势。与miR-NC组相比,过表达miR-34a/b/c-5p可显著增加结直肠癌细胞的放射敏感性,miR-34a/b/c-5p组细胞平均致死剂量（D0）和准阈值剂量（Dq）均明显降低,且辐射增敏比（SER）明显增加。过表达miR-34a/b/c-5p可显著增加电离辐射诱导的DNA双链断裂（double strand breaks,DSBs）水平,照射后1 h和8 h γH2AX焦点数明显高于miR-NC组（P＜0.05）。结论:miR-34s为放射响应miRNA分子,过表达miR-34s可增加电离辐射诱导的DNA损伤水平并增强结直肠癌细胞的放射敏感性。     

Assessing the likelihood of severe side effects in radiotherapy

Ionizing radiation is a powerful tool to treat cancer. The curing effect is mainly based on the efficiency of ionizing radiation to kill the cancer cells and it is believed that DNA double-strand breaks (DSBs) represent the most significant genetic lesion introduced by radiation that causes cell killing. One limitation in radiotherapy is the unavoidable damage delivered to the normal, noncancer cells that can give rise to side effects. The ultimate goal in treatment planning is to maximize cell killing in the tumor by minimizing damage induction in the normal tissue surrounding the tumor. The biological response to the induction of DSBs is largely affected by DSB repair processes and it has, therefore, been a long-standing goal to determine a patient's DSB repair capacity to "individualize" treatment planning. A recently developed DSB repair assay that allows the assessment of patients' repair capacity under in vivo conditions may provide a new approach to predict individuals' responses to radiotherapy and may be able to contribute to improvements in treatment planning.     

循环肿瘤细胞检测技术的研究进展

循环肿瘤细胞（circulating tumor cells,CTCs）是导致发生肿瘤远处转移和复发的必要前提。随着靶向治疗的不断进步,对于无法取得肿瘤组织的晚期癌症患者,CTCs可作为一种肿瘤组织替代物指导患者治疗方案的选择。精确计数以及分子生物学分析对于肿瘤患者的预后判断、疗效评价以及个体化治疗均有重要的指导作用。随着CTCs检测技术不断发展,CTCs检测的准确性明显提高。本文针对CTCs的检测技术进行综述。      

Detection of Hypoxic Cells in Murine Tumors Using the Comet Assay: Comparison with a Conventional Radiobiological Assay

The comet (single-cell electrophoresis) assay has been developed as a method for measuring DNA damage in single cells after irradiation. We have developed our own methods and image analysis system for the comet assay to identify hypoxic fractions. In vitro, we tested our system using a cultured tumor cell line (SCCVII). In vivo, we compared the hypoxic fractions detected by this assay with those determined by the in vivo-in vitro clonogenic assay using two rodent tumors (SCCVII/C3H, EMT6/KU/balb/c), which exhibit different types of hypoxia: acute and chronic. In vitro, our method could differentiate hypoxic cells from oxic cells, using the parameter of tail moment. In vivo, there were good correlations between the hypoxic fractions determined by the comet assay and by the clonogenic assay, in SCCVII/C3H ( r = 0.85) and in EMT6/KU/balb/c ( r = 0.75) tumors. By comparison of the two methods in chronically hypoxic and acutely hypoxic tumors, we further confirmed that the comet assay is clinically useful for estimating hypoxic fractions of solid tumors.     

自噬对人肺腺癌A549细胞放疗敏感性的影响

背景与目的放射治疗是肺癌最重要的治疗手段之一,然而却因放疗抵抗极易导致肿瘤的复发和转移。放疗可诱导肿瘤细胞自噬发生,最新研究也报道,自噬可能与DNA损伤修复过程相关。本研究旨在探讨通过雷帕霉素上调A549细胞自噬,能否增加细胞放疗敏感性,其过程是否与DNA损伤修复过程相关。方法以人肺腺癌A549细胞作为实验对象,实验设对照组（N）、单纯放疗组（IR）、雷帕霉素联合放疗组（R+ARPA）。采用Western blot检测γ-H2AX蛋白质、Rad51蛋白质、Ku70/80蛋白质、p62蛋白质、LC3蛋白质表达;电镜检测自噬体形成;细胞克隆形成实验检测细胞存活分数（survival fraction, SF）值。结果与单纯放疗组相比,放疗联合雷帕霉素组自噬活性增加,且Rad51、Ku80蛋白质表达减少,细胞增殖能力下降。结论通过雷帕霉素上调自噬可增加肺癌细胞放疗敏感性,其机制可能与抑制DNA损伤修复过程相关。