T细胞疫苗抗异品系大鼠肝移植排斥反应的实验研究

目的 研究特异性T细胞疫苗接种对大鼠肝移植后排斥反应的影响。方法 利用LOU/CN大鼠的脾细胞免疫CHN大鼠,取后者脾细胞活化制备T细胞疫苗,对肝移植受者CHN大鼠进行免疫。测定T细胞疫苗接种与未接种组的混合淋巴细胞培养cpm值。采用三袖套法进行大鼠原位肝移植。按移植前后处理方法不同分为3组:（1）T细胞疫苗接种组:用T细胞疫苗接种后7～9d的CHN大鼠进行原位肝移植;（2）环孢素A（CsA）组:未接种T细胞疫苗的CHN大鼠进行原位肝移植后,用CsA10mg·kg-1·d-1进行免疫抑制治疗;（3）阴性对照组:未接种T细胞疫苗的CHN大鼠进行原位肝移植后,用生理盐水作对照。分别测定各组的存活时间、微量细胞毒反应。结果T细胞疫苗接种组与未接种组外周血淋巴细胞cpm值分别为:9804±1182和22386±2117,二者比较,差异有显著性（P<0.01）。异品系大鼠肝移植后,T细胞疫苗接种组存活时间为（17.1±2.8）d,CsA组为（14.2±3.1）d,阴性对照组为（11.6±2.4）d。三组比较,（P<0.01）。微量细胞毒测定死细胞百分率:T细胞疫苗接种组为（26.4±9.3）％,CsA组为（43.7±10.4）％,阴性对照组为（62.4±8.1 ％。三组比较,差异有显著性（P<0.01）。结论T细胞疫苗接种能显著延长异品系大鼠肝移植的存活期,有显著的抗排斥反应作用。     

不同品系大鼠之间原位肝移植的实验观察

目的　探讨不同品系大鼠之间原位肝移植耐受或排斥关系。方法　采用KamadaN等双袖套法进行原位肝移植 ;采用OnoK等改良腹腔内吻合法进行异位心脏移植。结果　Wistar→SD、SD→Wistar以及SD→DA大鼠原位肝移植 ,受体鼠存活均超过 180d ;同种组合方式的异位心脏移植供心平均存活 6.3d。给原位肝移植受体大鼠再移植供体源心脏 ,移植心脏存活均超过 15 0d。给原位肝移植受体大鼠再移植第 3品系大鼠心脏 ,移植心脏平均存活 6.8d。结论　Wistar→SD、SD→Wistar以及SD→DA大鼠的移植组合是分离耐受关系。     

胆汁白细胞介素6和干扰素γ基因表达在大鼠肝移植急性排斥反应诊断中的意义

目的　探讨肝移植术后急性排斥反应的早期诊断方法。方法　应用RT PCR技术检测大鼠肝移植术后胆汁中的IL 6和IFN γ基因表达 ,以组织病理学作为急性排斥反应的诊断标准 ,将肝移植大鼠分为急性排斥组 (Rt组 )和非急性排斥组 (Rf组 ) ,观察胆汁中IL 6和IFN γ基因表达与急性排斥反应的关系。结果　胆汁中IL 6基因表达在Rt组和Rf组无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,而IFN γ基因表达在Rt组和Rf组有显著性差异 (P <0 0 1)。结论　检测胆汁中IFN γ基因表达可能是早期诊断肝移植术后急性排斥反应的一个有效指标 ,而IL 6基因表达则无助于急性排斥反应的诊断。     

肝移植受者IL-10基因启动子多态性与急性排斥反应的关系

目的探讨肝移植受者白细胞介素10(IL-10)基因多态性与急性排斥反应的关系.方法应用PCR限制性片段长度多态性分析法,检测122例肝移植受者IL-10基因启动子的2个多态位点-1082和-592的各种基因型的分布,并分析它们与急性排斥反应的关系.结果IL-10-592位点,A/A,C/A,C/C等基因型间的急性排斥反应发生率分别为16.7%,19%,29%,相互比较,差异不显著(P>0.05);IL-10-1082位点,尽管G/G基因型的急性排斥反应发生率(33%)高于A/A型(18%),但差异仍不显著(P>0.05).结论IL-10基因多态性与肝移植受者术后急性排斥反应无确切关系.     

一氧化氮与肝移植排斥反应

一氧化氮与肝移植排斥反应刁同进１综述吴孟超２姚晓平２审校过去人们一直认为一氧化氮（ＮＯ）是一种有毒的环境污染物，并不知道ＮＯ机制存在于生物体内并具有重要意义，直到１９８７年Ｉｇｎａｒｒｏ等首先发现血管内皮细胞能产生ＮＯ，并证明ＮＯ确为血管内皮舒张因子...     

大鼠原位肝移植急性排斥反应模型的建立及技术改进

目的 建立大鼠原位肝脏移植的急性排斥模型并观察其排斥反应的特点.方法 选择近交系雄性DA大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,改良"二袖套"法建立肝移植模型48例,肝动脉重建采用"袖管式微血管缝合法"(microvascular sleeve anatomosis).受体随机分为两组,A组(非干预组,n=24):术后不用免疫抑制剂;B组(FK506处理组,n=24):术后每日用FKS06每日0.2 mg/kg体重灌胃.分别于术后3、5、7 d随机解剖受体大鼠6只,取材肝组织对移植肝进行病理学观察,同时静脉采血测定血清谷丙转氨酶(ALT)、白蛋白(Alb)和总胆红素(TBIL)浓度;每组各留6只观察其生存时间和死亡原因.结果 本方法建立模型的手术时间(包括供体手术)和重建动脉的时间明显缩短,手术成功率和肝动脉的通畅率均为100%.DA→Lewis组合的模型术后的血清生化指标、肝脏病理学改变、生存情况均符合肝移植急性排斥的特点,排斥反应于术后3～5 d出现,并逐渐增强,术后7 d迅速达到高峰并维持;该模型可以为抗排斥药物FKS06预防而达到长期存活.A、B两组中位生存时间分别为14、73 d;A、B两组的累积生存率曲线差异有统计学意义(Log-Rank取值为11.78,P《0.01).结论 .DA到Lewis大鼠品系组合可以建立稳定可靠的肝移植急性排斥模型;该模型具有研究周期短、病理改变典型、可重复性好等优点.     

阻断共刺激通络抑制大鼠肝移植急性排斥反应的研究

目的研究CD40Ig阻断共刺激通路在大鼠肝移植急性排斥反应中的作用.方法用"二袖套法"行Lewis到Brown Norway(BN)大鼠肝移植32例.A组10例为对照组;B组11例,术中肝脏冷保存前门静脉注射Lipofectamine2000-pcDNA3.1空载体复合物,行肝移植;C组11例,肝脏冷保存前门静脉注射Lipofectamine2000-pcDNA3.1 CD40Ig复合物.术后第5天每组杀死BN 3只,取病理并用细胞凋亡的原位检测法检测肝脏凋亡情况,免疫组织化学检测CD40Ig表达,取脾脏分离淋巴细胞,混合淋巴细胞反应观察刺激指数,流式细胞仪检测与CD40Ig结合的T淋巴细胞比例.余大鼠观察生存情况.死亡大鼠观察病理变化.结果 A组平均存活时间(11.00±4.28) d,B组平均存活时间(12.75±5.57) d,C组平均存活时间(41.25±13.70) d(P<0.01).A组、B组病理示中、重度急性排斥反应,凋亡指数分别为33.67±5.69、39.00±5.29,C组免疫组织化学示CD40Ig表达,第5天病理示轻度急性排斥反应,凋亡指数为0.27±0.21(P<0.01),死亡大鼠病理示部分呈中度急性排斥反应,大部分示慢性排斥反应.混合淋巴细胞反应示C组Lewis大鼠对BN大鼠产生特异性耐受.流式细胞仪示与CD40Ig结合的T细胞占总T细胞11.57%.结论供体肝脏转染CD40Ig能有效阻断T细胞共刺激通路,特异性抑制急性排斥反应,延长受体存活时间,但对慢性排斥反应无效.     

穿孔素mRNA表达与大鼠肝移植急性排斥反应的关系

目的 探讨大鼠肝脏移植术后外周血和胆汁中穿孔素mRNA表达水平与急性排斥反应的关系,寻求一种早期诊断急性排斥反应的非侵袭性方法.方法 建立大鼠原位肝移植模型及胆道引流模型,实验分为4组: 空白对照组(n=20),行单纯胆汁引流;同基因移植组(n=30);异基因移植+环孢素A(CsA)组(n=30);异基因移植组(n=30),术后未行免疫抑制剂治疗.应用RT-PCR方法分别检测各组术后第1、3、5、7和10天外周血和胆汁中穿孔素mRNA的表达水平,同时行肝脏病理组织学观察.结果 空白对照组、同基因移植组外周血中无穿孔素mRNA表达;异基因移植组外周血中穿孔素mRNA 在术后第3天开始表达,而后逐渐升高,术后第5天明显增高,术后第7～10天维持在较高水平.而异基因移植+CsA组外周血中穿孔素mRNA的表达持续呈低水平,各时间点表达与异基因移植组比较差异有统计学意义(P＜0.05).外周血穿孔素mRNA表达水平与Banff组织学诊断分级变化规律一致.各组胆汁中穿孔素mRNA表达均为阴性.结论 检测外周血中穿孔素mRNA表达可作为监测急性排斥反应较敏感的无创性方法.     

大鼠原位肝移植术后急性排斥反应中 Fractalkine的表达及意义

目的利用直视下套入式吻合肝动脉加袖套法吻合门静脉建立的大鼠全血供肝移植模型,研究同种异体大鼠肝移植术后早期急性排斥反应中Fractalkine（Fkn）的表达情况。方法制备SD-Wistar大鼠全血供肝移植模型,随机分为两组,每组20只。对照组：于移植术后第1天开始腹腔内注射生理盐水（3ml/kg）;实验组：于移植术后第1天开始腹腔内注射环孢素A（3mg/kg）。术后观察大鼠一般情况,并于第3、5及7天分别处死5只大鼠,取肝脏标本,观察移植肝组织排斥反应强度（rejection activity index,RAI）及Fkn表达情况;余大鼠观察生存时间。结果对照组存活18只,实验组存活19只。实验组较对照组术后一般情况好,存活时间为19.50±4.51d,与对照组7.60±1.60d比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。组织学观察：对照组移植肝小叶结构清楚,汇管区增大,大量淋巴细胞浸润;实验组移植肝组织RAI明显降低。术后第3、5及7天,对照组RAI为3.80±0.35、5.90±0.87及7.50±1.30,实验组为3.10±0.21、3.90±0.41及4.50±0.52。两组术后第7天RAI比较差异有统计学意义（P〈0.01）。免疫组织化学观察：两组移植肝组织中均见细胞浆或细胞膜有棕色颗粒的Fkn表达,但实验组表达较弱。术后第3、5及7天,对照组Fkn细胞数为8.20±0.57、21.30±3.30及25.70±4.91,实验组分别为8.30±0.56、10.30±0.67及11.70±1.23;两组第5、7天比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论Fkn参与了同种异体大鼠肝移植急性排斥反应,可作为诊断大鼠肝移植急性排斥反应发生的指标之一。环孢素A可以通过抑制Fkn表达来抑制排斥反应发生的强度。     

近交系大鼠DA到LEW肝移植急性排斥模型的特点

目的 探讨近交系大鼠DA到LEW原位肝移植模型的特点并判断排斥反应发生的强度.方法 采用Kamada二袖套法,利用封闭群大鼠SD和Wistar进行建模技能训练,在此基础上建立近交系大鼠DA到LEW肝移植模型,根据临床表现和Banff标准判断排斥反应发生的强度.结果 共施行DA到LEW大鼠肝移植模型15例,手术成功率86.7%,死亡原因为肝上下腔静脉漏血、肝下下腔静脉血栓、胆道梗阻.术后第3天开始出现排斥反应,7 d后逐渐达到高峰,除术后并发症致死外,其余均在12 d内死于Ⅲ级排斥反应.结论 DA到LEW为稳定、强烈的大鼠肝移植急排模型,是研究肝移植排斥反应及免疫耐受的理想动物模型.但近交系大鼠在组织结构上有其自身特点,给建模带来一定难度.     

肝移植术后排异反应的诊断和鉴别诊断

目的 探讨肝移植术后排异反应的诊断和鉴别诊断标准。方法 对于5例肝移植术后出现并发症的病人，进行了临床表现、实验室检查以及肝脏活检病理检查的综合分析，寻找其临床规律和组织学特征。结果 （1）急、慢性排异反应在临床表现和病理所见上均有其特征性改变和诊断标准。（2）其他并发症，如纤维化胆汁淤滞性肝炎和肝动脉血栓形成，也有各自的临床病理特点。（3）肝移植术前应做供肝质量评定。结论 了解和掌握排异反应的诊断标准、鉴别诊断要点以及其他并发症的临床病理特征非常必要。     

DA与Lewis大鼠品系组合建立大鼠肝移植排斥与耐受模型

目的 建立大鼠原位肝脏移植急性排斥与自然耐受模型.方法 采用近交系雄性DA大鼠与Lewis大鼠互为供受体,改良"二袖套"法建立大鼠原位肝脏移植(rat orthotopic liver trans-plantation,ROLT)模型84例.实验分为4组:排斥组(DA→Lewis,n=12),FK506处理排斥组[DA→Lewis,n=24,术后1～7 d用FK506 0.2 mg/(kg·d)灌胃],耐受组(Lewis→DA,n=24),同基因组(DA→DA,n=24).各组中随机取6例观察生存期,其余分别于术后7、14、28 d处死6例,收集外周血及肝脏标本.检测血清标本天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)浓度,病理学检查移植物排斥反应程度.结果 排斥组中位生存时间(median surviv-al time,MST)为12 d,而FK506处理排斥组MST为76 d,较排斥组明显延长(vs排斥组,P<0.01).耐受组与同基因组的MST均>120 d.术后7 d,排斥组血清AST、BILI浓度均明显高于其余3组(P<0.05);术后14 d,FK506处理组、耐受组和同基因组血清AST、TBIL浓度无明显差异.术后28 d,FK506处理组血清AST、TBIL浓度较耐受组和同基因组明显升高(P相似文献   

自由基及N-乙酰半胱氨酸在鼠肝超急性排斥反应中的作用

目的　研究自由基在异种移植超急性排斥反应 (HAR)中的作用。方法　 2 4只SD大鼠分为 4组 ,同种组、异种组、N 乙酰半胱氨酸 (NAC)治疗的同种组和异种组。全麻下分离出大鼠的胆总管、门静脉、肝上下腔静脉并插管 ,缺血 3 0min后灌注鼠肝 2h ,按每 3 0min收集胆汁 ,监测灌注压力并取血检测脂质超氧化 (MDA)、氮自由基 (NO)、肝功能。结果　异种组MDA、NO和灌注压及肝功能均明显高于同种组 ,胆汁量低于同种组 ;NAC的治疗抑制了异种组MDA、NO、肝功能及灌注压的升高 ,增加了胆汁量 ,对同种组无明显作用。结论　自由基在鼠肝的HAR中可能起重要作用 ,NAC的治疗可部分抑制HAR。     

Primary liver disease as a determinant for acute rejection after liver transplantation

Background: Graft rejection and infection remain major problems following liver transplantation; both are heavily influenced by the immunosuppressive regimen. Despite the disparity in the primary disease leading to transplantation, all patients receive the same post-transplant immunosuppressive treatment in a given center. The aim of this study is to detect a possible effect of the underlying disease on the incidence of early acute rejection episodes after orthotopic liver transplantation (OLT). Patients and Methods: Retrospective analysis on all 101 consecutive liver transplants performed in 95 patients between 1983 and March 1998; five of these patients, surviving less than 30 days, were not included. The immunosuppressive regimen was based on conventional triple therapy during the whole study period. The diagnosis and treatment of acute rejection within the first 30 days post-OLT was uniform throughout the whole study period. Results: Though there were no differences with respect to patients' characteristics [age, child classification, number of HLA-mismatches or cytomegalovirus (CMV)-serocompatibility], patients with primary biliary cirrhosis (PBC) showed a significant increase of acute rejection after OLT compared with the other patients transplanted for other liver diseases (P = 0.024). The incidence of infection was not elevated in patients transplanted for PBC when compared with other diagnoses. Conclusion: Our results indicate that primary liver disease may be a determinant for acute graft rejection in PBC. Furthermore, these results suggest that immunosuppressive regimens based on the underlying disease should be considered. Received: 19 October 1998 Accepted: 28 January 1999     

Adjuvant treatment with ursodeoxycholic acid reduces acute rejection after liver transplantation

Acute rejection, occurring with a reported frequency of 50–70%, is still a dominating problem after liver transplantation. Medication with ursodeoxycholic acid (UDCA) has beneficial effects in different cholestatic conditions and has also been shown to reduce HLA class I antigen expression on hepatocytes in patients with PBC. Since August 1989 we have consecutively treated all patients with primary graft function with UDCA (n = 41). Patients transplanted in the first half of 1989 served as a control group (n = 8). All patients in this study were given sequential quadruple drug immunosuppression. The treatment group were given oral UDCA 10 mg/kg per day. During the first postoperative month, 17% of the UDCA-treated patients had an episode of acute rejection compared with 75% of the control patients (P < 0.01). Liver biochemistry tests 1 month postoperatively were significantly better in patients treated with UDCA. The results suggest that adjuvant treatment with UDCA reduces acute liver graft rejection.     

大鼠30%小体积肝移植模型手术技巧

目的 建立稳定、理想的大鼠30%体积肝移植模型.方法 二袖套法和体内切肝法建立非动脉化30%体积肝移植模型,对100只SD大鼠施行50例30%体积肝移植(10例前期操作,不列入统计),对手术操作技巧和细节、术后存活及原因等进行探讨.结果 手术成功率100%(40/40),术后1周、2周存活率均40%(16/40),死亡原因主要为肝功能失代偿、胆管梗阻或胆漏、肝上下腔静脉血栓形成、肝叶坏死和腹腔感染等.结论 30%体积肝移植模型改进后供肝残面出血率低,机械损伤小,供肝再灌注色红均匀,存活率好,可作为小体积肝移植有关实验研究的动物模型.

Abstract：

Objective To establish a reliable and ideal model of 30% size graft liver transplantation in rats. Methods The model of 30% size graft liver transplantation in vivo was established by using male SD rats according to Kamada's two-cuff method. The operative techniques and ditails, and survival rate were explored and analyzed. Results The rate of successful surgery was 100% (40/40). The one- and two-week survival rate both were 40% (16/40), and the causes of deaths included liver function decompensation, bile duct stenosis or bile leakage, thrombosis of super inferior vena cava, liver necrosis and celiac infection.Conclusion Improved model of 30% small-for-size liver transplantation had a low hemorrhage rate of residual liver surface, reduced mechanical damage in small-for-size graft, high success rate and survival rate, and was an ideal animal model on the study of experiments related to the small-for-size liver transplantation.     

大鼠原位肝移植模型不同术式改进的研究

目的比较两种改进后大鼠原位肝移植模型建立的优缺点.方法对三套袖法的修肝技术及套管制作进行改进,实施大鼠原位肝移植30例,采用改进的缝合法实施大鼠原位肝移植70例.结果三袖套法手术成功率80%,1周存活率8%,缝合法手术成功率90%,1周存活率72%.结论改进后的三袖套法虽然明显缩短手术时间及无肝期,但手术后并发症多,缺乏实际应用价值,改进后的缝合法是建立稳定大鼠肝移植模型的有效方法.     

趋化因子受体CXCR3动态检测在早期诊断肝移植术后急性排斥中的应用价值

目的：探讨趋化因子受体 CXCR3动态变化与肝移植排斥的关系及其在早期诊断中的意义。方法：以 2005年4月～2005年9月在本院行肝移植术的30例病人为研究对象，采用流式细胞仪检测病人术前1d 及术后第 1、 3、 5、 7天外周血中淋巴细胞 CXCR3的表达，临床诊断为急性排斥的病人在确诊当天以及经激素冲击治疗后第3、 7天各检测病人外周血中淋巴细胞 CXCR3的表达变化。结果：急性排斥反应(AR)组病人的 CXCR3表达均明显升高， 与非排斥组、肝癌肝硬化组及正常人对照组有明显差异(P＜0． 01) ，当 AR 组经冲击治疗逆转后 CXCR3表达明显下降 并维持持较低水平。结论：外周血中 CXCR3的表达与排斥反应密切相关，可作为诊断急性排斥反应的发生及观察抗 排异疗效的指标。