HER-2／neu基因在肿瘤免疫治疗中的研究进展

原癌基因HER2／neu是表皮生长因子受体家族中的一员，在多种人类恶性肿瘤中存在其扩增及过度表达，HER2／neu的过表达与肿瘤病人不良总体预后及较短存活期相关。近年来以HER2／neu为靶点的抗肿瘤免疫治疗发展较快，在抗HER2／neu抗体(Herceptin)，多肽疫苗，DNA疫苗等方面取得了很大进展。     

HER-2/neu基因在涎腺肿瘤中的扩增及表达

一、材料和方法1 材料　收集湖南医科大学 1 991年 1 2月～ 1 997年 4月存档蜡块中涎腺肿瘤 37例 ,其中粘液表皮样癌 2 0例、腺样囊性癌 1 1例、腺泡细胞癌 4例、恶性混合瘤 2例。从上述蜡块中随机选取粘液表皮样癌 5例、腺样囊性癌 4例、腺泡细胞癌 2例、恶性混合瘤 1例 ,以及癌旁正常组织 1例 ,以便行荧光原位杂交法 (ＦＩＳＨ)检测。2 方法　标本经 4%甲醛固定、石蜡包埋、切片。采用链霉素抗生物素蛋白 过氧化酶免疫组织化学染色方法检测ＨＥＲ 2 /ｎｅｕ蛋白的表达 ,ＤＡＢ显色。鼠抗人ＨＥＲ 2 /ｎｅｕＩｇＧ、生物素化兔抗鼠抗…     

HER-2/neu在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义

目的 研究HER－2／neu（c-erbB-2)在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义。方法 收集106例卵巢上皮性肿瘤（恶性54例,交界性33例,良怀19例）及临床资料。按国际妇产科联合会（FIGO）标准进行分期,卵巢癌中Ⅰ,Ⅱ期中19例（19／54,35．2％）,Ⅲ,Ⅳ期共35例（35／54,64．8％）,交界性肿瘤均为Ⅰ期。采用标记链霉素卵白素生物素（LSAB）法用HER－2／neu多克隆抗体（DAKO,A0485）行免疫组织化学染色。结果 该蛋白表达的阳性率在良性肿瘤为47．4％（9／19）,过表达（3＋）为0;交界性肿瘤为84．8％（28／33）,过表达率为9．15（3／33）,恶性肿瘤为85．2％（46／54）,过表达率为25．9％（14／54）。良性与交界性以及良性与恶性之间的HER－2／neu蛋白表达率的差异有显著性（P＜0．02,P＜0．01）;该蛋白的过表达率在有转移和无转移的病例之间差异有显著性意义（P＜0．001）。结论 HER－2／neu的过表达与卵巢癌的侵袭性生物学行为相关。     

HER-2/neu基因和乳腺癌研究进展的启迪

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤.多年来从趋势上看,乳腺癌的新病例数一直在增加,但死亡率却稳定下降.这种状况得益于乳腺X线照相技术的广泛应用和普及自查知识带来的乳腺癌早期诊断,以及辅助化疗带来的乳腺癌生存率提高.     

以HER2／neu为靶点抗肿瘤治疗研究进展

原癌基因 HER2 / neu编码一种分子量 185 k Da单链跨膜糖蛋白 - p185 ,即表皮生长因子受体 2。多种人类腺癌存在HER2 / neu扩增及过度表达。HER2 / neu过度表达与肿瘤病人不良总体预后及较短存活期相关。近年来以 HER2 / neu为靶点抗肿瘤治疗在 HER2 / neu抗体、肽疫苗、酪氨酸激酶抑制剂等方面取得很大进展     

以HER2／neu为靶点抗肿瘤治疗研究进展

原癌基因HER2/neu编码一种分子量185kDa单链跨膜糖蛋白－p185，即表皮生长因子受体2。多种人类腺癌存在HER2/neu扩增及过度表达。HER2/neu过度表达与肿瘤病人不良总体预后及较短存活期相关。近年来以HER2/neu为靶点抗肿瘤治疗在HER2/neu抗体、肽疫苗、酪氨酸激酶抑制剂等方面取得了很大进展。     

HER-2/neu胞外区基因疫苗的免疫避孕作用

目的 :研究HER 2 neu胞外区基因疫苗在免疫避孕中的作用。方法 :构建含人HER 2 neu胞外区的重组质粒pcDNA3 hECD ,以该质粒转染真核细胞C2 C1 2 或注射小鼠股四头肌 ,检测其在体内外表达情况 ;以该质粒基因免疫雌性BALB C小鼠 ,部分小鼠于第 12周以重组蛋白hECDu加强免疫 ,以ELISA方法检测抗HER 2 neu抗体应答 ,3H TdR掺入法检测细胞免疫应答 ,并观察其诱导免疫避孕的情况。结果 :C2 C1 2 转染上清及小鼠股四头肌注射局部均可检测到hECD蛋白的表达。小鼠经基因免疫后可产生较高水平抗体应答 ,抗体水平至少维持 2 8周 ,同时可检测到较高水平细胞免疫应答 (pcDNA3 hECD与对照组SI值分别为 9 5 5和 1 2 5 ) ;基因免疫后小鼠平均产仔数 (3 8± 2 9,对照组为 9 7± 1 6 )明显降低 ,以蛋白加强免疫后产生特异性回忆反应 ,平均产仔数进一步降低 (2 0± 1 7)。而且 ,免疫小鼠产后 4天子宫及卵巢与正常产后鼠相比均无明显区别。结论 :基于HER 2 neu胞外区的基因疫苗免疫小鼠可诱导有效的免疫应答并产生一定免疫避孕效果 ,并且这种避孕作用经特异性蛋白加强免疫可进一步得以提高。     

HER-2/neu配体结合区2蛋白的甘露糖化修饰

目的 :建立一种蛋白质甘露糖化修饰的方法。方法 :用离子交换层析和钴亲和层析法 ,纯化重组HER 2 /neu配体结合区2 (LBD2 )蛋白 ,并将纯化后的LBD2蛋白进行甘露糖化修饰。新合成的LBD2拟糖蛋白经质谱法检测后 ,用间苯二酚 硫酸法进一步鉴定。结果 :纯化后LBD2蛋白的纯度可达 90 %。新合成的LBD2拟糖蛋白在质谱图上呈现相应于甘露糖修饰后蛋白质分子量的预期峰形。经间苯二酚 硫酸法检测 ,结合于LBD2蛋白上的化学基团为糖分子。结论 :获得了LBD2拟糖蛋白 ,为开展甘露糖受体介导的抗原提呈及肿瘤疫苗的实验研究打下了基础     

HER-2/neu癌基因信息传递途径研究进展

HER- 2 /neu原癌基因编码的 P185 neu是“孤儿受体”,其配体至今尚未确定。HER- 2引起生瘤机制的关键是其酪氨酸蛋白激酶活性的调节。HER- 2原癌基因通过点突变、扩增及过量表达而活化 ,其活性由过表达时组成性的同源二聚体化调节 ,也可由与 erb B1、或与 erb B3及 erb B4异源二聚体化为异源配体 EGF、NDF、HRG等调节 ,通过促进降解调节等等。其下游信息传递途径由 Shc- Grb2 - Ras- Raf- MAPK及 Shc- Grb2 - Ras- Raf- PI- 3′- K组成 ,前者传递有丝分裂信号 ,后者传递转化或致癌信号 ,信息传递途径的每一部份均可作为免疫治疗及基因治疗的分子靶。     

HER-2/neu癌基因与肿瘤的生成及演进

HER- 2 / neu癌基因产物是 185 k D的具酪氨酸蛋白激酶活性的待定生长因子受体 ,属 EGFR家族。 HER- 2在乳腺癌、NSC、L C卵巢癌、胃癌、结直肠癌中扩增并过量表达 ,与药物抗性及不良预后有关。本文综述了 HER- 2癌基因与乳腺癌、卵巢癌的生成及演进关系研究进展。HER- 2癌基因可能是 WTP5 3、WTPRb基因作用的靶子 ,其生瘤作用与其对凋亡的抑制、对肿瘤新血管生成及对肿瘤细胞侵袭力的促进有关     

HER-2/neu胞外配体结合区基因的克隆及原核表达

目的 克隆HER—2／neu配体结合区基因，并在大肠杆菌中获得高效表达。方法 用PCR技术扩增HER—2／neu脑外配体结合区的cDNA片段，并将该片段插入pET-28a(t)原核表达载体中，实现插入基因的融合表达；用SDS—PAGE和蛋白免疫印迹法分别测定表达产物的相对分子质量及特异性。结果 构建的重组质粒在大肠杆菌中获得高效稳定的表达，表达产物的相对分子质量与预期值一致，且所表达蛋白可被抗HER—2/neu的特异性抗体识别。结论 获得了HER—2／neu脑外配体结合区基因在原核系统中的表达，为HER—2／neu高表达肿瘤的疫苗研究奠定了基础。     

HER-2/neu基因探针的制备及特异性分析

目的 筛选、制备乳腺癌标志基因--HER-2/neu的标记探针,利用间接荧光原位杂交(FISH)技术,探索其临床应用价值.方法 通过文库构建、多级筛选、PCR鉴定、序列分析等技术获得HER-2/neu基因组片段,缺口转移法制备生物素标记探针,与生物素-亲和素放大系统和多种荧光显色系统组合,针对病理标本、细胞涂片进行间接FISH检测.结果 制备的HER-2/neu基因探针可以特异性地检测乳腺癌阳性、胃癌阳性病理片,也可以特异性检测阳性、阴性细胞标本,并与不同的荧光显色系统结合使杂交信号可以选择性地呈现绿色或红色荧光.结论 高特异性的HER-2/neu基因探针和灵活的显色系统为FISH的临床应用奠定了基础.     

HER—2／neu癌基因信息传递途径研究进展

HER－2／neu癌基因编码的“P185^neu是“孤儿受体”，其配体至今尚未确定。HER－2引起生瘤机制的关键是其酪氨酸蛋白激酶活性的调节。HER－2的癌基因通过点突变、扩增有过量表达而活化，其活性由过表达时组成性的同源二聚体化调节，也可由与erbB1、erbB3及erbB4异源二聚体化为异源配体EGF、DNF、HRG等调节，通过促进降解调节等等。其下游信息传递由Shc-Grb2-Ras-Raf-MAPK及Shc-Grb2-Ras-Raf-PI-3′－K组成，前传递有丝分裂信号，后传递转化或致癌信号，信息传递途径的每一部份均可作为免疫治疗及基因治疗的分子靶。     

乳腺癌HER-2/neu的免疫组织化学检测

筛选乳腺癌患者进行新药Herceptin的辅助化疗必须明确患者肿瘤HER2／neu(c-erbB-2)状态。评价HER-2／neu状态最客观的方法是原位杂交(FISH或者CISH)检测基因扩增水平，但是原位杂交方法试剂昂贵、条件苛刻，国内很难开展。由于基因扩增和蛋白过度表达的实际符合率达90％以上，可以使用免疫组织化学来代替原位杂交达到相应的检测目的，但是影响免疫组织化学的主客观因素很多，     

HER-2/neu基因蛋白、BRCA1和BRCA2基因突变检测在乳腺癌诊断和治疗中的临床意义

乳腺癌(breast cancer)是指发生于乳腺导管上皮细胞的恶性肿瘤,是女性常见的肿瘤之一,约占全身恶性肿瘤的7%-10%,全世界每年新发乳腺癌约150万例,死亡约57万例.北美、欧洲等西方发达国家为高发区,其发病率为亚、非、拉地区的4倍左右.我国虽属乳腺癌低发区的国家,但近20年来发病率有增高趋势,特别是在北京、上海等经济发达地区,乳腺癌已成为威胁女性健康的重要危害,有可能超过宫颈癌而居女性恶性肿瘤的首位.近年来,随着分子生物学研究的迅速进展,肿瘤发生基因学说研究的突飞猛进,使得乳腺癌的早期诊断和治疗有了希望.     

原癌基因HER2／neu表达产物p185蛋白免疫原性研究

用表达ｐ１８５蛋白ＨＥＲ２／ｎｅｕ转基因３Ｔ３－ＨＥＲ２／ｎｅｕ细胞裂解物免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，经３次免疫后，免疫小鼠脾细胞对表达ｐ１８５蛋白的３Ｔ３－ＨＥＲ２／ｎｅｕ细胞呈现较强的增殖反应（平均刺激指数分别为ＳＩ＝３．１５±１．８８），而对未转染ＨＥＲ２／ｎｅｕ基因的３Ｔ３细胞的应答较弱（ＳＩ＝１．１４±０．９７）。并检测到１号免疫鼠脾细胞对３Ｔ３－ＨＥＲ２／ｎｅｕ细胞有特异杀伤作用。免疫鼠血清中出现高水平的抗ｐ１８５抗体（ＯＤ均值＝１．０２±０．１６），较正常对照组（ＯＤ均值＝０．３６±０．１０）有显著差异（Ｐ＜０．００１），表明ＨＥＲ２／ｎｅｕ表达产物ｐ１８５蛋白具有免疫原性，用于免疫小鼠可诱导出对ｐ１８５蛋白的特异免疫应答反应。     

HER—2／neu癌基因与肿瘤的生成及演进

HER－2/neu癌基因产物是185kD的酪氨酸蛋白激酶活性的待定生长因子受体，属于EGFR家族，HER－2在乳腺癌，NSC，LC卵巢癌，胃癌，结直肠癌中扩增并过量表达，与药物抗性及不良预后胶在。本综述了HER－2癌基因乳腺癌、卵巢癌的生成及演进关系研究进展。HER－2癌基因可能是WTP53、WTPRb基因作用的靶子，其生瘤作用与其对凋亡的抑制，对肿瘤新血管生成及对肿瘤细胞侵袭力的促进有关。     

肿瘤抗原p185蛋白免疫鼠脾细胞的抗瘤效应研究

目的 研究肿瘤抗原ｐ１８５蛋白作为肿瘤疫苗所诱导的抗肿瘤效应。方法 亲和层析纯化的ｐ１８５蛋白皮下注射正常ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取脾细胞分别与ｐ１８５蛋白、３Ｔ３－ｍｅｕ细胞体外共培养,以单独佐剂注射组的小鼠脾细胞为对照,观察其培养上清中ＨＦＮ－γ和ＴＮＦ－α活性。将免疫鼠脾淋巴细胞经ｐ１８５抗原和低剂量的ＩＬ－２体外培养１周后,再用ＣＤ３抗体刺激扩增,用流式细胞仪分析其细胞表型。３Ｔｅ－ｎｅｕ和３Ｔ     

HER2/neu癌基因在骨肉瘤和骨骼尤文氏肉瘤中表达缺失

目的　骨肉瘤与骨骼尤文氏肉瘤是具有早期肺转移倾向的恶性侵袭性肿瘤 ,是青少年最常见的原发性骨肿瘤 ,由于治疗方面的进展 ,5年生存率已达到 70 % ,但复发的患者尚无好的挽救生命的方法 ,需要更有效的辅助性化疗 ,一些研究报告提出 HER2 /neu (c-erb B-2 )癌基因在骨肉瘤中表达率高 ,其表达是预后差的因素 ,并主张对这些病例进行单克隆抗体治疗。本研究即为了了解 HER2 /neu基因是否在骨肉瘤和骨骼尤文氏肉瘤中表达。方法与结果　取来自 3 3例骨肉瘤患者的 66个 11例尤文氏肉瘤患者的 11个病理存档的组织蜡块 ,通过免疫组化方法 (兔多…     

hIL-12及HER2/neu ECD修饰的生孢梭菌工程菌的构建及鉴定

目的构建人IL-12(hIL-12)基因和乳腺癌靶基因HER2/neu胞外区(ECD)分别修饰的生孢梭菌工程菌,探讨其在乳腺癌基因治疗中的作用。方法将hIL-12和HER2/neu ECD的基因分别连接到厌氧梭菌的内源性β-1,4-葡聚糖酶启动子和信号肽序列(eglAp)之后,得到融合基因eglAp-hIL-12和eglAp-HER2/neu。将融合基因插入大肠杆菌-厌氧菌穿梭质粒pIMP1,得到重组质粒pIMP1-ehIL-12和pIMP1-eHER2/neu。将重组质粒首先转化大肠杆菌DH5α,通过酶切和测序鉴定无误后,再用电穿孔法转化生孢梭菌;利用红霉素抗性筛选阳性克隆,采用菌液PCR和质粒提取鉴定阳性克隆,采用ELISA法对生孢梭菌培养上清中目的产物进行分析。结果酶切和测序结果表明重组质粒内的融合基因eglAp-hIL-12和eglAp-HER2/neu序列和读框正确,菌液PCR、质粒提取和ELISA结果显示hIL-12和HER2/neu ECD基因成功修饰生孢梭菌并表达。经过20多代抗生素压力筛选,重组生孢梭菌仍能稳定携带和表达外源基因。结论成功获得hIL-12和HER2/neu ECD基因分别修饰的生孢梭菌工程菌株,为进一步的抗肿瘤研究奠定基础。