耐热普鲁兰酶真菌的筛选、鉴定及酶学性质研究

本研究从西藏羊八井热泉下游淤泥中筛选得到了一株高产耐热普鲁兰酶菌株YBJ10-2,经诱导后其最高产酶量可达55.732U/mL,是目前国内外发现的产酶量较高的真菌。根据形态特征及18S rDNA序列同源性分析,初步判定菌株YBJ10-2属于球孢枝孢菌。该菌株发酵所产耐热普鲁兰酶在65-75℃和pH 5.0-8.0条件下较稳定,最适pH值为6.5,最适温度为72℃,对普鲁兰糖和支链淀粉催化能力最强,具有广阔的开发应用前景。     

产耐热普鲁兰酶菌株的分离、筛选与鉴定

从某火山口的土壤样品中分离筛选得到了一株产耐热普鲁兰酶菌株T-10,酶活力为1.22 U/m L。经形态特征观察、生理生化特征实验以及16S r DNA序列同源性分析,确定该菌株为解淀粉芽孢杆菌。酶学性质研究表明:该普鲁兰酶的最适温度是60℃,在70℃保温4 h后活力残留60%以上;最适p H值为6.0,p H 3.0~8.0在室温保存4 h后相对酶活力大约为70%。目前,鲜有发现产耐热普鲁兰酶的菌株为解淀粉芽孢杆菌,其具备良好的应用前景。     

一株产α-淀粉酶菌株的分离筛选、鉴定及酶学性质研究

为了更加经济、更高产量的分离出高纯酶,该实验从富含淀粉的土壤中筛选出1株高产淀粉酶的菌株LZ-10,通过菌落形态观察、生理生化特性实验、16S rDNA序列和gyrB基因序列分析对其进行鉴定。采用硫酸铵盐析,DEAE-52阴离子交换纤维素纯化,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测蛋白分子质量。结果表明,菌株LZ-10鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）。纯化后的淀粉酶比活力为59.91 U/mg,纯化倍数为4.53,回收率为60.5%,分子质量为55.4 kDa。对其酶学性质进行研究,得出菌株LZ-10所产淀粉酶最大酶活力为41.6 U/mL,最适作用温度为50 ℃,在50～70 ℃温度环境下其稳定性较高;最适pH值为7.0,在pH=5.0～7.0的环境条件下稳定性较高;Ca2+、Mg2+、Na+、K+对淀粉酶有激活作用;乙二胺四乙酸（EDTA）、Fe2+、Zn2+对淀粉酶有抑制作用。     

产普鲁兰酶蜡样芽孢杆菌的分离鉴定及酶学性质研究

利用选择性培养基从广西南宁淀粉加工厂附近土壤中分离出一株具有产普鲁兰酶能力的野生菌株GXBC-2。该菌株革兰染色为阳性,形成芽孢,菌体细胞杆状,结合生理生化特征和16S rDNA序列分析,初步鉴定该菌株为Bacillus cereus GXBC-2。对该菌所产普鲁兰酶的性质研究表明:酶的最适反应温度为50℃,在30～50℃范围内稳定,最适pH为7.0,稳定pH范围为6～8.5。产物经HPLC分析证明,该酶能水解普鲁兰糖产生麦芽三糖,对可溶性淀粉不起作用,所以该酶属于I型普鲁兰酶。     

产右旋糖酐酶菌株的筛选、鉴定及酶学性质研究

该研究从连云港海域海泥中筛选产右旋糖酐酶菌株,对其进行形态学观察、生理生化试验及分子生物学鉴定,并对其产右旋糖酐酶的酶学性质、酶解产物组分及抗氧化活性进行研究。结果表明,筛选得到一株产右旋糖酐酶菌株GN02,其被鉴定为芽孢杆菌（Bacillus sp.）。菌株GN02产右旋糖酐酶的最适温度和pH分别为20 ℃和7.0,在25～40 ℃、pH 5.0～9.0范围具有良好的稳定性。酶解1 h的主要产物为异麦芽四糖（85.6%）和异麦芽三糖（14.3%）。酶解产物清除羟基自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）和超氧阴离子自由基的半抑制浓度（IC50值）分别为0.42 mg/mL、2.98 mg/mL和11.54 mg/mL。     

产右旋糖酐酶Marinimicrobium sp.G1的筛选、酶性质及产物研究

从海洋样品中筛选产右旋糖酐酶新颖的菌株.采用透明圈法从近海海泥中筛选到一株产右旋糖酐酶的菌株G1,根据16S rDNA基因序列、形态学和生理生化指标,鉴定为Marinimicrobium sp..该菌产酶的最适碳源和氮源分别为蔗糖和鱼粉蛋白胨,在初始pH7.5、发酵温度30℃条件下发酵48 h产酶量最高.右旋糖酐酶的相...     

产褐藻胶裂解酶菌株筛选、鉴定与酶学性质研究

目的：筛选能够降解褐藻胶的新菌株,对发掘具有潜在产业化价值的褐藻胶裂解酶具有重要意义。方法：以褐藻胶为唯一碳源,从辽宁省大连市渤海湾沉积物中分离出高产褐藻胶裂解酶菌株。通过形态学、生理生化特征和16S rDNA基因序列分析,确定了它们的分类地位,并对其酶学性质进行了研究。结果：通过筛选,得到一株高产褐藻胶裂解酶的菌株并命名为LG-3。结合其形态学特征、生理生化指标检测以及16S rDNA系统发育树分析,初步确定该菌株属于坚强芽孢杆菌(Bacillus sp. LG-3)。LG-3菌株摇瓶发酵24 h后产褐藻胶裂解酶的酶活力为32.11 U/mL。最适的反应温度为30℃,最适p H值为8.0。金属离子Mn²⁺、Na⁺、Fe³⁺促进酶活性,Zn²⁺、Ag⁺、Cu²⁺、Mg²⁺、Fe²⁺对酶活有较强的抑制作用。化学试剂β-Mercaptoethanol、urea、EDTA、Triton-100、Tween-80、2,3...     

一株产凝乳酶解淀粉芽孢杆菌的筛选、鉴定及酶学性质

采用酪蛋白培养基,从甘南牦牛放牧区分离筛选产凝乳酶细菌。通过形态学、生理生化特征和16SrDNA序列同源分析对菌株进行鉴定,并对该菌株所产凝乳酶的特性进行了研究。从牧区采集的56个样品中共筛选得到6株产凝乳酶细菌,复筛得到一株凝乳活力高、蛋白水解力低的菌株GN4.1,经鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),在麸皮培养基中发酵48h,凝乳活力可达1011.56SU/mL,蛋白水解力为14.61U/mL。凝乳酶的最适作用温度为60℃,65℃加热10min后凝乳活力丧失;最适作用pH为5.5,在pH3.5～8.5内稳定性较好。预期该菌株所产凝乳酶有用于乳品加工业的潜力。     

产β-甘露糖苷酶菌株的筛选、鉴定及酶学性质研究

本研究通过初筛（魔芋粉为唯一碳源并结合刚果红染色法）和复筛（利于对硝基苯基-β-D-吡喃甘露糖苷法测定β-甘露糖苷酶活力）,从采集的森林土壤中筛选产β-甘露糖苷酶的菌株,获得1株酶高产菌株B19。通过显微形态、革兰氏染色、生理生化特征、16S r DNA序列及系统发育进化树分析等方法,将其鉴定为肠杆菌属（Enterobacter sp.）。菌株B19所产的β-甘露糖苷酶为胞内酶,在37℃、200 r/min条件下培养48 h后,测得的酶活力为1.26 U/m L。初步酶学性质研究表明:该酶的最适反应p H和最适反应温度分别为7.5和50℃,且在p H6.0⁸.0和温度45⁵0℃稳定性较高,浓度为10 mmol/L的Mn2+和Mg2+对该β-甘露糖苷酶具有激活作用,但K+、Fe2+、Ca2+、Cu2+、Co2+及Zn2+抑制酶活力。该菌株可作为产β-甘露糖苷酶的潜在菌株。      

一株产几丁质脱乙酰酶海洋细菌的Rhodococcus hoagii筛选、鉴定及酶学性质

从连云港高公岛海域采集的海泥中使用平板变色圈法初筛和摇瓶发酵复筛后,获得一株产几丁质脱乙酰酶的菌株MCDAⅡ-2。综合形态学特征以及16SrDNA序列分析最终将菌株MCDAⅡ-2鉴定为Rhodococcus hoagii。进而研究其酶学性质,得该几丁质脱乙酰酶最适催化温度为35℃,最适pH为8.0。Na^+、Mg^2+、Li+、Sr^2+对酶促反应起到促进作用,Ca^2+、Ba^2+、Co^2+、Cd^2+、Fe^2+及EDTA对酶促反应起到了抑制作用,而K^+对酶促反应影响较小。酶在25℃~35℃时较稳定,在中性和弱碱性条件下稳定性较好。本次研究的结果将为几丁质脱乙酰酶的工业化应用奠定基础。     

8种海藻和3类海带的色素抗氧化活性的研究

实验选取褐藻、绿藻、红藻及微藻中的8种代表性海藻,采取酶辅助有机溶剂法提取色素,测其含量及抗氧化活性,筛选出一种高抗氧化活性的海藻,研究其不同加工方式对色素的抗氧化活性产生的影响,并对色素含量与抗氧化活性进行了相关性分析。结果表明,8种海藻色素粗提物都具有一定的体外抗氧化活性,海带、裙带菜、石莼的色素粗提物体外抗氧化活性较好,尤以海带为佳。在海带色素粗提液终浓度0.8 mg/mL下,DPPH自由基的清除率为52.58%,羟自由基清除率为68.14%,超氧阴离子自由基清除率为60.79%。3种海带色素的含量和抗氧化活性的大小均为:新鲜海带 > 盐渍海带 > 晒干海带。相关性和线性回归分析表明,三种自由基清除率与叶绿素含量和类胡萝卜素含量的相关性都达到了0.75以上,且显著性都呈极显著,叶绿素含量与类胡萝卜素含量对三种自由基的清除率的影响是具有共同作用的,但类胡萝卜素含量与三种自由基的清除率的相关性更高。     

葛根多糖纯化工艺及其抗氧化性能研究

目的:以葛根为原料,采用大孔树脂法分离纯化葛根多糖,研究其抗氧化性质。方法:通过对葛根多糖吸附及解吸筛选出最优树脂,分析吸附解吸时间、样液浓度、样液pH以及乙醇的体积分数对多糖纯化的影响,在静态分析条件下再运用层析柱法进行动态纯化,对纯化后的葛根多糖进行抗氧化分析。结果:D101树脂分离纯化效果较好,其对葛根多糖静态吸附和解吸最佳工艺条件吸附时间为8 h,解吸时间为3 h,吸附浓度0.75 mg/mL,样液pH6.0,乙醇解吸体积分数为60%,其对动态吸附和解吸最佳工艺条件为上样液质量浓度1.0 mg/mL,解吸剂体积(60%乙醇)51 mL,在此条件下纯化的葛根多糖纯度达到55.34%。经纯化后的葛根多糖对DPPH·和·OH具有较强的清除作用,最大清除率分别为81.74%和85.11%。结论:大孔树脂法纯化葛根多糖工艺条件合理,且纯化效果好,杂质去除率高,纯化后的葛根多糖抗氧化性得到提高。     

薇菜多糖的分离纯化及体外抗氧化活性

通过水提醇沉法制备薇菜粗多糖（water-soluble polysaccharide of Osmunda japonica,WOJP）,并用二乙氨乙基（diethylaminoethyl,DEAE）-纤维素层析法对其进行分离纯化,获得2?个多糖组分薇菜中性糖（neutral WOJP,WOJP-N）和薇菜酸性糖（acidic WOJP,WOJP-A）。WOJP-N的分子质量为31.8?kDa,由鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖组成,对应各成分物质的量比为9.1∶5.7∶13.3∶37.6∶5.6∶11.8;WOJP-A的分子质量为15.7?kDa,由鼠李糖、半乳糖醛酸、半乳糖和阿拉伯糖组成,对应各成分物质的量比为7.0∶56.4∶26.1∶5.2。傅里叶变换红外光谱分析结果表明,WOJP-N主要由β-构型的半乳糖组成;WOJP-A主要由吡喃半乳糖醛酸组成,且存在部分酯化修饰。体外抗氧化活性实验结果表明,WOJP的Fe3＋还原能力、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）清除能力和超氧阴离子清除能力与VC相当,具有较好的抗氧化活性,其中WOJP-N和WOJP-A在WOJP发挥抗氧化活性时具有协同作用,两者均是WOJP发挥抗氧化活性的多糖组分。本研究结果可为进一步研究薇菜多糖的构效关系和开发功能性食品提供依据,并为薇菜的应用提供理论参考。     

新型耐热耐酸普鲁兰酶的分离纯化与酶学特性分析

从泡盛曲霉(Aspergillus awamori)XF发酵液中分离纯化普鲁兰酶(PulXF)并研究其酶学性质。通过硫酸铵沉淀、阴离子交换层析、凝胶过滤层析和疏水层析,纯化得到一种电泳纯的PulXF。纯化倍数8.16倍,比活力为309.28 U/mg。SDS-PAGE检测得单条带,表明PulXF为单亚基蛋白,分子量63.7 kDa。在50~80 ℃,pH4.5~8.0范围内,酶能保持高活性,最适反应温度60 ℃,最适pH5.0。在较广的pH范围内(pH3.0~8.0),28 ℃下,经过24 h酶活能保持80%以上活性。K_m值和V_max分别为0.92 mg/mL和11.90 μmol/min。酶活测定及TLC分析显示PulXF对普鲁兰多糖有强水解活性,终产物麦芽三糖;对支链淀粉和可溶性淀粉有较弱活性,对直链淀粉、α-环糊精、β-环糊精和糖原无活性。表明从泡盛曲霉XF分离的PulXF属于I型普鲁兰酶。Ca²⁺、Zn²⁺和Mg²⁺能够促进酶的活性,其中Ca²⁺激活作用最强。而PulXF在5%浓度的SDS、CTAB、Tween 80和30%的乙醇中保持高稳定性。基于PulXF在苛刻环境下的高稳定性及高活性,很有希望在淀粉加工、食品饮料等领域以及需要在高温、高酸环境下使用的生物技术工业中使用。     

淡豆豉多糖及其酶解产物的理化性质和抗氧活性研究

本文利用超声波辅助法提取淡豆豉多糖（SSPP）,并利用纤维素酶进行酶解得到酶解产物SSPP-E。采用硫酸-苯酚法检测可溶性总糖含量、考马斯亮蓝法检测蛋白质含量、紫外-可见光谱及红外光谱测定光谱学性质、高效液相色谱测定单糖组成。结果表明,SSPP的提取率为4.59%,可溶性总糖含量和蛋白质含量分别为68.88%、4.03%;SSPP-E的修饰率为58%,可溶性糖含量和蛋白质含量分别为55.08%、0.19%;修饰前后的单糖组成均为甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖;抗氧化活性结果表明SSPP和SSPP-E均具有抗氧化活性,清除DPPH自由基的IC50值为4.842 mg/mL和3.574 mg/mL;清除羟基自由基的IC50值分别为1.099 mg/mL和1.041 mg/mL;SSPP和SSPP-E样品在浓度为0.005 mg/mL时ORAC值分别为1492.16、2123.90 μmolTE/g。通过对比淡豆豉酶解前后的抗氧化活性结果可知淡豆豉经过酶解可提高其抗氧化活性。     

信阳毛尖茶末多糖的分离纯化和体外抗氧化活性研究

为实现废弃茶叶资源的再利用以及探究信阳毛尖茶叶末活性多糖的体外抗氧化活性,本研究首先利用不同的乙醇终浓度沉淀优化毛尖茶粗多糖提取,然后通过DEAE-52纤维素和Sephadex-100葡聚糖凝胶分级两次纯化,并进行纯度鉴定、分子量的测定、红外光谱分析以及体外抗氧化活性的测定等。研究结果表明,90%的乙醇终浓度得率最高,为2.47%;两次分级纯化后得到XPS-5B,纯度分别为92.4%;XPS-5B符合活性植物多糖结构特征,为β-型糖苷键多糖,分子量为41208 Da;XPS-5B体外抗氧化活性随着组分浓度的增加而逐渐增强,当XPS-5B浓度为1.20 mg/mL时对DPPH自由基和羟自由基的清除率分别为89.18%、90.62%,总还原力吸光值为0.536,与未纯化的毛尖粗多糖相比,具有较强的抗氧化活性。     

牦牛酸奶中一株具有抗氧化活性乳酸菌的分离及鉴定

本研究旨在从传统发酵牦牛酸奶中筛选获得具有抗氧化活性的乳酸菌。采用平板计数法对牦牛酸奶样品进行总菌与乳酸菌的菌落计数,采用添加2.5% CaCO₃的M17固体培养基进行乳酸菌的分离筛选,对筛选出的菌株采用16S rDNA基因克隆测序进行分子鉴定以及产酸、糖醇发酵试验,通过测定菌株培养上清液、菌体裂解液和菌体PBS重悬液的总抗氧化能力、DPPH自由基清除能力和羟自由基清除能力,评价乳酸菌的抗氧化活性。结果表明,分离出的革兰氏阳性球形菌株X1具备产酸特性,糖醇发酵实验表现为屎肠球菌生化反应特征,16S rDNA克隆测序鉴定菌株X1为屎肠球菌。体外抗氧化活性检测发现,菌株X1培养上清液的总抗氧化能力与DPPH自由基清除率显著高于对应的菌体裂解液和菌体PBS重悬液(P<0.05);而菌体PBS重悬液对羟自由基清除率显著高于培养上清液和菌体裂解液(P<0.05)。本试验成功从牦牛发酵酸奶中分离出一株具备抗氧化活性的屎肠球菌X1,其抗氧化活性物质主要存在于菌体培养上清液中,该结果为将牦牛酸奶来源乳酸菌开发为新型抗氧化微生态制剂、缓解畜禽养殖过程中的氧化应激提供菌种来源。     

海带酶解液的戊糖片球菌发酵及其产物的抗氧化性、抑菌性

为探讨海带及其发酵产物作为功能食品的可能性,用纤维素酶水解海带后,使用戊糖片球菌对酶解液进行发酵,并针对发酵过程中的pH值、总糖、还原糖、菌落数变化进行检测。利用ABTS＋·清除与铁还原能力实验测定海带酶解物及其发酵产物的抗氧化性;同时借助微量热方法,利用大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌对比评价两者的抑菌性。结果表明：37 ℃静置培养下戊糖片球菌对海带酶解液的发酵在12 h基本结束,而发酵后海带酶解产物的抗氧化能力与抑菌能力分别提高了23.74%和100%。     

酶法提取地桃花多糖的工艺优化及其抗氧化活性

目的:研究纤维素酶提取地桃花多糖的最佳条件,并探讨其体外抗氧化活性。方法:以地桃花多糖得率为响应值,在单因素试验基础上,以液料比、酶解温度、酶解时间、酶添加量为试验因素,采用响应面法建立数学模型,筛选最佳提取工艺条件;并使用DPPH和·OH自由基清除能力体系检测地桃花多糖的抗氧化活性。结果:纤维素酶酶解提取地桃花多糖最佳条件为:酶添加量10.8 mg/mL、酶解时间72 min、液料比7:1 mL/g、酶解温度43℃、pH为5.0,在此条件下地桃花多糖得率为13.32%,与理论值13.37%相对误差小于5%。地桃花多糖具有较强的抗氧活性,对DPPH和·OH自由基清除的半数抑制浓度IC₅₀分别为1.082、3.202 mg/mL,但与维生素C比较,抗氧化活性较弱。结论:通过响应面法获得地桃花多糖纤维素酶酶法提取的最佳条件,该工艺条件方便可行,提取到的多糖具有较强的自由基清除能力。