血小板第4因子的造血保护作用

目的：了解血小板第４因子对＾６０Ｃｏγ射线照射后小鼠体内造血的作用。方法：实验鼠用ＰＦ４注射两次，间隔６ｈ，第２次注射后２０ｈ给予７．５Ｇｙ的＾６０Ｃｏγ射线一次性全身照射，第８天时检查粒－巨噬系集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ）及细胞周期的变化；第３０天检查小鼠的存活率。结果：ＰＦ４注射８ｈ后能明显增加ＣＦＵ－ＧＭ及骨髓单个核细胞的数量；３０ｄ后实验鼠的存活率及存活期亦见增加。结论：ＰＦ４能延长小鼠的     

血小板第4因子造血保护作用的实验研究

目的 :研究血小板第 4因子 (PF4)对环磷酰胺 (CTX)处理小鼠体内造血系统的保护作用。方法 :实验鼠用PF4注射 2次 ,间隔 6h ,第二次注射后 2 0h给予CTX 2 0 0mg·kg- 1 。动态观察小鼠外周血白细胞数以及不同时期外周血T细胞亚群 ,骨髓粒-巨噬系集落形成单位 (CFU -GM)、细胞周期和小鼠脾脏、胸腺的变化。结果 :PF4能增加CTX处理小鼠骨髓CFU -GM的产率 ,加速体内CFU -GM的恢复 ;短时增加CTX处理小鼠骨髓G0 /G1 期细胞 ,减少骨髓细胞的坏死和凋亡 ;增加胸体比和脾体比。但是PF4对小鼠外周血白细胞数和T细胞亚群未见明显影响。结论 :PF4能保护小鼠骨髓及胸腺、脾脏等器官组织免受CTX损伤 ,增加骨髓CFU -GM的形成能力     

血小板第4因子对辐射损伤小鼠免疫功能的保护作用

目的：探讨血小板第4因子（plateletfactor4，PF4）对辐射损伤小鼠免疫系统的影响。方法：雄性BALB／c小鼠随机分为3组，第1组（单纯照射组）、第Ⅱ组（PF4保护组）、第Ⅲ组（正常对照组），第Ⅱ组在照射前26h及20h腹腔注射PF440μg／kg，全身一次性5Gy60Co—γ射线照射后瑞氏染色法计数外周血淋巴细胞百分数。胸腺、脾脏制成细胞悬液计数后，MTT比色法测定胸腺及脾细胞增殖能力。结果：第Ⅱ组小鼠外周血淋巴细胞百分数下降趋势较第1组明显减慢。胸腺、脾细胞计数，第Ⅱ组明显高于第1组。淋巴细胞增殖试验，第Ⅱ组与第1组相比，小鼠胸腺及脾细胞的增殖能力明显增强。结论：PF4对免疫系统有辐射保护作用，可明显增强辐射损伤小鼠的免疫功能。     

血小板第4因子对小鼠急性放射损伤的防护作用与机理

目的 探讨血小板第４因子（ＰＦ４）对小鼠７．５Ｇｙβ射线全身照射所致急性放射损伤的防护作用及机理。方法 小鼠照射前２０ｈ于腹腔内注射ＰＦ４两次,间隔６ｈ,每次剂量２０～６０ｕｇ／ｋｇ。观察动物的３０ｄ存活情况及几种造血指标。结果 ３０ｄ存活率对照组和防护组分别为０％和５０％～６０％（Ｐ〈０．０１）;防护组的ＣＦＵ－ＧＭ集落形成数、骨髓细胞ＤＮＡ含量、骨髓有核细胞数、脾结节形成数、脾体比、胸体比等均较照射对照组增加,经统计学处理差异有显著性（Ｐ〈０．０５）或有非常显著性（Ｐ〈０．０１）。结论 ＰＦ４对小鼠急性放射损伤有防护作用。其机理可能同它保护和促进造血功能恢复有关。     

血小板第4因子对放射损伤小鼠骨髓基质细胞周期的影响

目的探讨血小板第4因子（platelet factor 4,PF4）对5.0 Gy γ射线全身照射小鼠的骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells,BMSCs）的保护作用,进一步探讨PF4对造血的辐射防护机制.方法30只雄性小鼠随机分为3组：①放射组,②PF4保护组,③对照组.小鼠照射前分别于26和20 h腹腔内注射PF4,每次剂量50 μg/kg.于照射后3 d取骨髓细胞体外培养,分别计数培养后3、7和14 d的骨髓基质细胞集落（CFU-F）;在培养后10 d流式细胞仪检测细胞周期.结果3组中,照射组3 d的CFU-F数量与PF4保护组差异无统计学意义,7和14 d的CFU-F数量PF4保护组较照射组明显增加.流式细胞仪检测结果表明3组中照射组G0＋G1期细胞明显高于其余两组,S,G2＋M期细胞明显低于其余两组.结论PF4对照射小鼠的骨髓基质细胞有保护作用,促进造血重建.     

ABRACL基因启动子不同片段重组质粒构建及转录活性研究

目的 构建肌动蛋白结合Rho激活C末端样（ABRACL）基因启动子不同截短片段重组质粒,并检测其转录活性。方法 以含ABRACL启动子全长质粒为模板,利用PCR方法分别扩增ABRACL启动子不同截短片段;将扩增片段分别插入pGL3.0-basic载体,构建ABRACL启动子不同截短片段重组质粒;经双酶切及序列鉴定正确后,将重组质粒转染ZR75-1和A549细胞,采用双荧光素酶报告基因检测系统测定ABRACL启动子不同截短片段的双荧光素酶活性;检测转录因子MYB原癌基因样2(B-MYB)对ABRACL启动子不同截短片段转录活性的影响。结果成功构建含ABRACL基因启动子不同截短片段重组质粒,双荧光素酶活性测定发现ABRACL基因启动子-400 bp片段活性较高,转录因子B-MYB可以增强ABRACL启动子-600 bp和-1000 bp片段的活性。结论 发现ABRACL基因启动子转录活性较高区域,为进一步研究ABRACL基因上游调控机制奠定基础。     

基于生物信息学分析的人ID4基因启动子表达载体的构建及鉴定

目的:基于生物信息学分析构建人ID4基因启动子表达载体,以其作为研究ID4基因启动子表达调控分析的工作基础.方法:在分析人ID4基因启动子结构和调控元件的基础上,据UCSC基因组生物信息学中人ID4基因转录起始点(TSS)上游启动子区-643 bp及5'非翻译区(5'-UTR) 164 bp序列设计并合成引物,进行PCR扩增;以PCR产物作为模板经巢式PCR扩增了TSS上游启动子区-621 bp片段,将PCR产物回收、纯化后再连接到pGEM-T Easy载体上并转化至DH5α感受态大肠杆菌中构建成pGEM-T Easy-人ID4基因启动子重组质粒.转化产物经半巢式PCR及酶切鉴定,对得到的阳性克隆进行测序.结果与结论:成功构建出含有糖皮质激素受体、cAMP结合蛋白及雌激素受体反应调控元件序列的人ID4基因启动子表达载体.该表达载体的构建为进一步研究人ID4基因的启动子活性及表达调控奠定了基础.     

人铜锌超氧化物歧化酶基因启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体的构建及表达

目的 构建人铜锌超氧化物歧化酶基因(Cu/Zn SOD,SOD1)启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体,并对其功能进行鉴定,为研究细胞内SOD1基因表达调控和相关的信号转导机制提供重要工具.方法 提取人基因组DNA,FCR扩增SOD1 5'非编码区启动子序列(-1 499- +17);采用基因重组技术构建由SOD1启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体,将该载体瞬时转染Hella细胞,观察静息或佛波酯(PMA)刺激下红色荧光蛋白表达,以检测SOD1启动子的转录活性及其基凶表达.结果 酶切和DNA测序证明所构建红色荧光蛋白报告基因载体正确;该表达载体静息状态下在Hella细胞表达少量红色荧光蛋白,经PMA刺激后,能够表达较多高亮度的红色荧光蛋白.结论 成功构建了SOD1启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体,其对相关刺激有很好的反应,可用于SOD1基因表达信号调控机制的研究.     

X射线照射对小鼠EL-4细胞转录因子活性的影响

转录因子ＮＦ -κＢ由Ｒｅｌ/ＮＦ -κＢ家族多肽的同源或异源二聚体构成 ,调节多种与免疫 ,炎症 ,以及辐射等所致的应激反应有关的基因的诱导表达。高剂量电离辐射具有免疫抑制作用 ,而低剂量电离辐射具有兴奋作用 ,可增强免疫功能 ,诱导机体的适应性反应等[1] 。低剂量与高剂量电离辐射所引起的细胞或机体的反应 ,均与信号转导及转录因子的作用有关。本文应用免疫组织化学方法观察并比较ＥＬ - 4细胞内ＮＦ -κＢ在不同剂量照射后活化程度及时程上的差异 ,为进一步阐明低剂量辐射兴奋效应机理提供理论依据。一、材料和方法1 细胞培养及照…     

流式细胞术在血小板因子4保护环磷酰胺损伤小鼠骨髓中的应用价值

 目的 探讨流式细胞术在研究血小板因子4(PF 4)保护环磷酰胺(CTX)损伤小鼠骨髓造血细胞中的应用价值。方法 腹腔一次性注射CTX 200mg／kg,造成药物损伤模型。给CTX前予以PF 4预处理,于给药后第5天、第8天分别用流式细胞仪测定骨髓有核细胞DNA含量及细胞周期变化。结果 第5天PF 4保护组的骨髓有核细胞中,G0／G1期细胞百分率较CTX组明显提高,坏死、凋亡率下降(P＜0.01),而与对照组基本相同(P＞0.05)。第8天各组间比较无明显差异(P＞0.05)。结论PF 4对CTX损伤的小鼠骨髓造血细胞有保护作用。通过流式细胞仪测定DNA含量及细胞周期变化可阐明其化疗保护作用机制,表明流式细胞术具有重要的应用价值。     

阿片受体δ-FLAG-pIRES2-EGFP表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达

目的 构建带FLAG标签的大鼠δ型阿片受体的pIRES2-EGFP表达质粒(δ-FLAG-pIRES2δEGFP),并实现其在CHO细胞中的表达.方法 以含大鼠全长δ阿片受体基因的δ-pMD20-T载体为模板,设计引物并行PCR扩增,在δ基因C端引入FLAG标签,AT克隆至pMD20-T载体中,测序鉴定,经酶切连接入pIRES2-EGFP中,将获得的δ-FLAG-pIRES2-EGFP载体转染CHO细胞,应用荧光显微镜观察EGFP表达情况,并采用细胞免疫荧光和蛋白印迹法检测δ-FLAG的表达.结果 测序及酶切结果表明获得了带FLAG标签的δ基因,成功构建δ-FLAG-pIRES2-EGFP表达质粒,在荧光显微镜下,转染细胞可以观察到绿色荧光.应用免疫荧光和蛋白印迹法可观察到目的 基因表达.结论 成功构建了δ-FLAG-pIRES2-EGFP表达质粒,并在CHO细胞中实现了高效表达.     

口服携带人血小板第四因子的减毒沙门氏菌对放射损伤的保护作用

目的以减毒沙门氏菌SL3261为载体研究通过口服途径血小板第四因子(plateletfactor4PF4)对小鼠放射损伤的保护作用。方法将携带PF4基因的真核表达载体pIRES2EGFP转化减毒沙门氏菌SL3261,通过口服途经1×108个3d个菌株的剂量饲服小鼠,在第3次饲服后12h小鼠接受700cGy剂量60Co全身照射。以绿色荧光蛋白(greenfluorescenceproteinGFP)、外周血象及流式的检测、骨髓集落培养、小鼠生存期的观察研究PF4对造血系统的保护作用。结果照射后SL3261PF4治疗小鼠的肝脏、脾脏、肾脏、小肠、外周血及骨髓分别检测到绿色荧光蛋白的表达。照射后第7和14天SL3261PF4组小鼠骨髓细胞总数(marrowmononuclearcellsMNC)、粒巨集落细胞形成细胞(granulocytemacrophagecolonyformingunitCFU-GM)和高增殖潜能集落形成细胞(highproliferatingpotentialcolonyformingcellsHPP-CFC)数量与对照组有明显差异(P<0.05),生存期明显延长。结论本研究首次证实以减毒沙门氏菌SL3261为载体,口服PF4基因治疗可以保护小鼠免受放射损伤,并促进放射损伤后小鼠的造血恢复。     

真核表达载体PCMV4-hTGFβ1的构建及鉴定

转化生长因子β（ＴＧＦβ）是一大类多功能的细胞增殖、分化调节蛋白,它参与了体内多种的病理、生理过程,如细胞外基质调节、胚胎发育、骨的形成与重建;而且在创伤愈合、免疫抑制、骨髓保护、肿瘤抑制等方面,具有广阔的应用前景〔１、２〕。因此,ＴＧＦβ的研究具有...     

人血小板生成素基因cDNA克隆及分析

人血小板生成素基因ｃＤＮＡ克隆及分析李文，朱美财，蔡庆，陈友纯临床实验科孙曼霁军事医学科学院主题词血小板生成素，聚合酶链反应，ＤＮＡ，重组，碱基序列血小板生成素（ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ，ＴＰＯ）是一种在细胞多层次水平上调节巨核细胞增殖、分化和成...     

前列腺癌特异性启动子P（A）PTp的构建及评价

目的构建前列腺癌特异性启动子PSAe（AREc）-PSMAe-TARPp[P（A）PTp],并在腺病毒水平评价其启动目的基因表达的效率和特异性。方法巢式PCR扩增基因组DNA获得PSAe的AREc区基因、PSMAe基因和TARPp基因,并依次连接获得嵌合启动子P（A）PTp。采用Adeasy系统构建并制备P（A）PTp启动增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）表达的重组腺病毒Ad-pSh-P（A）PTp-EGFP。不同感染复数（multi-plicity of infection,MOI）的Ad-pSh-CMV-EGFP感染各细胞系后48 h,流式细胞术确定最佳MOI;并以最佳MOI的Ad-pSh-P（A）PTp-EGFP感染各细胞系,检测EGFP的表达效率。结果 PCR成功扩增并连接获得嵌合启动子基因P（A）PTp。采用Adeasy系统,构建并制备了重组腺病毒Ad-pSh-P（A）PTp-EGFP。Ad-pSh-CMV-EGFP感染后,流式检测结果显示,前列腺癌细胞PC3和PC3M细胞的最佳MOI为100 MOI;而前列腺癌细胞DU145以及肝癌细胞SMMC-7721和HepG2为250 MOI。最佳MOI的Ad-pSh-P（A）PTp-EGFP感染后,EGFP在各细胞系中的表达效率[P（A）PTvsCMV]为：PC3（25.56%vs77.76%）、DU145（50.50%vs65.26%）、PC3M（30.81%vs89.70%）、HepG2（6.26%vs63.76%）、7721（2.27%vs67.84%）。结论成功构建前列腺癌特异性嵌合启动子P（A）PTp,并证实能在前列腺癌细胞中特异并有效地启动EGFP的表达。     

含绿色荧光蛋白基因的子宫内膜异位症体外模型的建立

目的 由腺病毒介导绿色荧光蛋白基因转染子宫内膜细胞,构建子宫内膜异位症体外模型.方法 取5例正常子宫内膜组织,分离子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞,进行形态学观察和免疫荧光鉴定.用携带有绿色荧光蛋白基因的腺病毒转染细胞,比较转染后12、18、36、42h细胞的绿色荧光蛋白表达阳性率和凋亡率的差异.结果 分离培养获得高纯度的子宫内膜腺上皮细胞(90%)和基质细胞(接近100%).两种细胞均表达绿色荧光;与腺上皮细胞比较,基质细胞转染率明显增高(F=8.362,P=0.020),凋亡率明显降低(F=46.119,P<0.001);转染对细胞的凋亡率无明显影响(F=4.208,P=0.057).结论 利用腺病毒介导的绿色荧光蛋白基因载体转染子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞,可获得相对稳定的体外荧光子宫内膜异位症模型.