白色念珠菌分泌型酸性蛋白酶和细胞外磷脂酶活性与其毒力的关系

目的： 探讨临床白色念珠菌感染者不同标本中分离的白色念珠菌分泌型酸性蛋白酶和细胞外磷脂酶活性与其毒力的关系。方法： 分别采用牛奶平板和卵黄培养基法检测白色念珠菌感染者不同标本（痰、血液、鹅口疮、伤口、阴道分泌物）中分离的190株白色念珠菌分泌型酸性蛋白酶和细胞外磷脂酶的活力，分别将产酶株的菌丝相和孢子相菌悬液（5×10⁶ CFU•mL^-1）注射小鼠尾静脉，1个月内观察小鼠死亡率及平均存活时间，以平均存活时间评价菌株毒力。结果：190株白色念珠菌分泌型酸性蛋白酶和细胞外磷脂酶阳性检出率分别为83.68%和85.26%。动物实验结果表明，菌丝相白色念珠菌分泌型酸性蛋白酶和细胞外磷脂酶的活力均显著高于孢子相(P<0.01，P＜0.05)；注射菌丝相白色念珠菌的小鼠死亡率高于注射孢子相的小鼠(P<0.05)，且平均存活期短于注射孢子相的小鼠(P<0.01)。结论：分泌型酸性蛋白酶和细胞外磷脂酶是白色念珠菌重要毒力因子，酶活力可直接地反映其毒力和致病性。     

白色念珠菌天冬氨酸蛋白酶与菌株毒力的研究

目的：观察分泌型天冬氨酸蛋白酶（secreted aspartic proteinase,SAP)与念珠菌致病性的关系。方法：从住院病人中分离培养出50株念珠菌，鉴定菌种后采用限制氮盐的培养基半定量测定天冬氨酸蛋白酶，并筛选蛋白酶阳性或阴性菌株。经证实为系统感染的10株菌株腹腔感染健康小鼠。结果：白色念珠菌天冬氨酸蛋白酶阳性率高达90%。类星型和伪热带次之。蛋白酶阳性或阴性的念珠菌对健康小鼠均无致病性。结论：天冬氨酸蛋白酶在正常条件下并不能增加白念菌的侵蚀性和致病力。     

白色念珠菌腹腔感染对脾虚小鼠致病性的研究

目的:研究在脾虚状态下,小鼠对白色念珠菌免疫力的变化情况.方法:采用番泻叶泻下法造脾虚小鼠模型,经腹腔接种白色念珠菌菌液.观察小鼠的生存天数,用微量溶血分光光度法测定小鼠体液免疫功能.用双抗体夹心EusA法测定血清中υ-干扰素的含量,并进行小鼠肾脏内活茵茵数的测定.结果:与对照组比,抗体生成减少,血清中U-干扰素的含量减少,肾脏内活茵菌数增多,但脾虚小鼠生存天数没有明显变化.结论:脾虚小鼠对白色念珠菌的免疫力低于对照组.     

免疫酶斑点法(IEDA)检测白色念珠菌芽管特异性抗原的临床研究

目的：试图寻求一种较理想的系统性念珠菌病的血清学诊断方法。方法：制备白色念珠菌芽管特异性抗体，采用ＩＥＤＡ对临床病人血清中的相应抗原进行检测。结果：①检测的最低敏感浓度为０．２５ μｇ／ｍ ｌ；②以１４ 例系统性念珠菌病患者为实验组，以１５ 例浅表白念感染者，１１ 例其它疾病患者及２０位正常人为对照组，检测的敏感性为７１．４％ ，特异性为１００％ 。结论：该方法敏感性较高，特异性强，且具有简便经济的特点。有助于系统性念珠菌病的诊断，尤其适宜在基层医院普及应用。     

不同菌相白念珠菌对巨噬细胞凋亡的影响

目的：观察不同菌相白念珠菌诱导巨噬细胞凋亡情况,为疾病的预防和治疗提供思路.方法：用佛波醇酯刺激THP-1细胞分化为巨噬细胞,用酵母相、菌丝相及用胃蛋白酶抑制剂（pepstatin,PEP）预处理的白念珠菌分别作用巨噬细胞1、2、4、8 h;另设空白对照组,AnnexinV-FITC染色后流式细胞仪检测细胞的凋亡率.结果：酵母相、菌丝相、PEP作用组的白念珠菌分别感染巨噬细胞1、2、4、8 h的细胞凋亡率均较空白对照组升高（P〈0.05~P〈0.01）;各作用组均随时间的延长凋亡率不断升高（P〈0.01）;酵母相组和菌丝相白念珠菌组不同时间细胞凋亡率均较PEP作用组明显增加（P〈0.01）,并且菌丝相组细胞凋亡率明显高于酵母相组（P〈0.01）.结论：白念珠菌可诱导巨噬细胞凋亡,其作用与其菌相及其分泌型天冬氨酸蛋白酶有关.     

厚朴煎剂对白色念珠菌及其生物膜影响的初步研究

目的 观察厚朴煎剂对白色念珠菌(Candida albicans)芽管形成、早期黏附基因及成熟期生物膜的影响。方法 采用芽管形成试验检测厚朴煎剂对白色念珠菌芽管形成的影响;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测厚朴煎剂作用后,凝集素样序列1(agglutinin-like sequencefamily1,ALS1)、ALS2、ALS3基因的表达情况;荧光显微镜及扫描电镜观察厚朴煎剂对白色念珠菌成熟期生物膜的影响;共聚焦显微镜观察厚朴煎剂对生物膜中菌活性的影响。结果 芽管形成试验结果显示,厚朴煎剂可抑制白色念珠菌的芽管形成且抑制作用具有浓度依赖性(P＜0.05)。厚朴煎剂能使ALS1、ALS2、ALS3基因表达下调且具有浓度依赖性(P＜0.05)。荧光显微镜下空白对照组生物膜以菌丝为主,厚朴煎剂作用24、48及72 h后生物膜结构被破坏。扫描电镜结果也提示厚朴煎剂可以破坏生物膜的结构。共聚焦显微镜下空白对照组白色念珠菌以活菌为主,15.625 mg/L厚朴煎剂作用48 h后死菌数量明显增加。结论 厚朴煎剂可通过下调ALS1、ALS2、ALS3基因抑制白色念珠菌早期黏附,同时可通过破坏成熟期生物膜的结构促进药物进入生物膜内抑制芽管形成和发挥杀菌作用。     

卡介苗免疫预防小鼠白色念珠菌感染的实验研究

目的探讨卡介苗（BCG）预先免疫对小鼠白色念珠菌感染的影响。方法采用BCG或灭菌生理盐水皮内注射预先免疫2周,然后由尾静脉注射白色念珠菌进行攻击,观察小鼠死亡率及计算存活小鼠肾组织带菌量。结果BCG免疫组存活时间长于生理盐水免疫组（P〈0.01）;存活小鼠肾组织菌落计数：BCG免疫组远少于省里盐水免疫组（P〈0.01）。结论BCG对小鼠白色念珠菌感染具有很好的保护作用。     

念珠菌在人唾液中生长及蛋白酶表达情况的研究

目的：了解念珠菌在人唾液中生长及分泌型天冬氨酸蛋白酶（SAP）表达情况。方法：分别用添加0．2M葡萄糖的人唾液振荡培养白色念珠菌，热带念珠菌及季也蒙念珠菌，定时取样测定生长量，pH值，胞外蛋白酶活性及唾液总蛋白浓度，结果：三种念珠菌在含糖唾液中均生长良好且都能产生SAP，蛋白酶表达水平存在种间差异，念珠菌生长速率，唾液pH变化及总蛋白含量降低幅度与菌株SAP表达程度基本一致。结论：SAP很可能在口腔念珠菌病发生过程中起致病作用。     

Phenotypic and molecular detection of virulence factor genes SAP4 and PLB in Candida albicans isolates from the Western part of India

BackgroundSince the last two decades, substantial increase in fungal infections has been observed in immunocompromised hosts. Virulence factors of Candida albicans play a role in adherence, haemolytic activity, phenotypic switching and production of hydrolytic enzymes. The secreted aspartyl proteinases (SAP family) contribute to adhesion, tissue damage and invasion, while phospholipase (PLB) supports the hydrolysis of phospholipids. Very few studies showed the correlation of phenotypic activity and detection of genes contributing to the similar enzyme activity. Therefore, our study aimed at demonstrating correlation between in vitro phenotypic production of phospholipase and proteinase enzymes with genetic level detection of SAP and PLB genes.MethodsThe present study was carried out on a total of 799 samples over a period of one year. Culturing was carried out on Sabouraud's dextrose agar. Confirmation and speciation of Candida spp. was carried out using cornmeal agar and CHROMagar and by the germ tube test, urease test and automated identification system Vitek-2, and antifungal susceptibility testing was performed on Candida isolates. Phenotypic phospholipase and proteinase activity was analysed, and molecular detection of SAP4 and PLB genes was carried out.ResultsIn our study, we have screened 799 samples for mycological protocol; of which, 269 (33.6%) were Candida species, 44% (119) of which were C. albicans. Proteinase activity was exhibited by 77 (64.7%) and phospholipase activity was exhibited by 73 (61.34%) isolates, while 46.2% exhibited both activities among the C. albicans species. The PLB gene was detected in 97.3% isolates, while SAP4 was detected in 94.7% of C. albicans isolates.ConclusionThe study of in vitro expression of virulence factors and gene detection of C. albicans will help to improve the prognosis despite the nature of the sample.     

松油烯-4-醇对白念珠菌PLB1、SAP2基因表达的影响

目的:观察中药抗菌成分松油烯-4-醇对白念珠菌磷脂酶B1(PLB1)和分泌型天冬氨酸蛋白酶2(SAP2)基因表达的影响.方法:将白念珠菌分为实验组和对照组,实验组用松油烯-4-醇作用12 h,对照组不做任何处理,提取两组白念珠菌总RNA,进行RT-PCR扩增,比较两组PLB1和SAP2的相对表达量.结果:用松油烯-4-醇作用后的白念珠菌PLB1和SAP2基因的相对表达量均高于没有用药的白念珠菌(P＜0.05).结论:松油烯-4-醇作用于白念珠菌可短时间内增加PLB1、SAP2 mRNA的表达.     

单克隆抗体Mab03.2C1-C2靶抗原性质的初步研究

目的分析抗白念珠菌芽管胞壁外膜抗原单抗Mab03.2C1-C2靶抗原的性质,探讨该抗原用于实验室检测的可行性.方法制备单克隆抗体,通过SDS-PAGE及Western Blotting法分析该单抗所识别的抗原的分子量.体外诱导形成不同长度的芽管,分析其表面靶抗原的形成情况.不同的生化方法处理芽管,采用间接免疫荧光方法,对单抗靶抗原表位性质进行分析.取口腔念珠菌病患者的真菌涂片标本,用IIF方法观察体外诱导培养之芽管与体内白念芽管表面抗原分布异同.结果体外诱导30 min后白念珠菌芽管表面方可检测到靶抗原.体内白念菌丝与体外诱导菌丝表面靶抗原分布不同.靶抗原表位可能位于N-糖链上.结论Mab03.2C1-C2靶抗原为白念菌丝形成过程中生成的新成分,可能参与白念致病过程.靶抗原为糖蛋白,抗原性显著,对临床应用于系统性白念珠菌感染的检测有意义.     

口腔扁平苔藓与白色念珠菌感染关联性的Meta分析

目的：采用Meta分析方法评价口腔扁平苔藓（OLP）与白色念珠菌感染的关联性,为OLP的抗真菌治疗提供依据。方法：计算机检索PubMed数据库、EMBase数据库、Medline数据库、Cochrane图书馆、中国知网数据库（CNKI）、中文科技期刊数据库（VIP）和万方数字化期刊库,检索从建库至2016年12月30日所有相关文献。由2位研究者按照纳入和排除标准筛选文献、提取资料并评价质量后,采用RevMan 5.3及Stata12.0软件进行Meta分析,计算优势比（OR）和95%可信区间（95% CI）以评价关联性,采用漏斗图及Egger's法评估文献的发表偏倚。结果：本组共纳入13篇病例对照研究,其中OLP患者1073例,正常对照者766名。OLP患者白色念珠菌检出率明显高出对照组（OR_合并=2.30,95% CI：1.60~3.31,P < 0.01）。其中7篇研究对OLP患者进行临床分型,糜烂型OLP（E-OLP）患者白色念珠菌感染风险明显升高（OR=10.12,95% CI：4.05~25.28,P < 0.01）。结论：OLP与白色念珠菌感染有关,这一关联性在EA-OLP患者中尤为明显。     

白色念珠菌二相性与口腔致病性关系的实验研究

目的　探讨白色念珠菌二相性与口腔致病性的关系。方法　分别将孢子相、菌丝相白色念珠菌与人口腔颊粘膜细胞 (BEC)进行粘附试验 ,比较二相性白色念珠菌对BEC的粘附率 ;用兔抗人sIgA血清中和人唾液中sIgA ,12 5Ⅰ sIgA放射免疫分析法检测唾液中sIgA的浓度 ,比较含sIgA及不含sIgA的唾液对二相性白色念珠菌粘附BEC的影响。 结果　菌丝相白色念珠菌对BEC的粘附率显著高于孢子相 (P <0 .0 0 1) ;含sIgA的唾液抑制孢子相及菌丝相白色念珠菌粘附BEC的能力强于不含sIgA的唾液 (P <0 .0 0 5 ) ,且唾液中sIgA抑制孢子相白色念珠菌粘附BEC的能力强于抑制菌丝相白色念珠菌粘附BEC的能力 (P <0 .0 5 )。结论　菌丝相白色念珠菌的口腔致病性强于孢子相     

单抗Mab03.2C1C2影响白念珠菌芽管形成及粘附作用的实验研究

目的观察抗白念珠菌芽管单抗Mab03.2C1C2在体外对白念珠菌感染的保护性作用.方法将不同浓度的Mab03.2C1C2分别与白念珠菌孢子悬液、白念珠菌孢子和人口腔粘膜上皮细胞混合液、白念珠菌孢子和胎儿脐静脉内皮细胞混合液共同孵育,观察Mab03.2C1C2对白念珠菌芽管生成的抑制作用及其对白念珠菌对上皮细胞、内皮细胞粘附的抑制作用.结果Mab03.2C1C2能显著降低白念珠菌芽管生成率及在芽管形成条件下对上皮细胞、内皮细胞的粘附,其抑制作用与该单抗的浓度成正比.结论Mab03.2C1C2在体外能抑制白念珠菌芽管的形成,通过抑制白念珠菌芽管的形成而抑制白念珠菌对上皮细胞、内皮细胞的粘附,降低白念珠菌的侵袭力.     

单克隆天然抗角蛋白抗体IgM 3B4体外抑制白念珠菌芽管形成及粘附作用

目的:观察单克隆天然抗角蛋白抗体IgM 3B4在体外抑制白念珠菌芽管形成及抑制白念珠菌与宿主细胞粘附的作用.方法:将不同浓度的单克隆天然抗角蛋白抗体IgM 3B4分别与白念珠菌酵母相悬液在有利于芽管形成的条件下共同孵育,倒置显微镜下计数白念珠菌总数以及白念珠菌芽管数;将不同浓度的单克隆天然抗角蛋白抗体IgM 3B4与白念珠菌酵母相和人角质形成细胞混悬液、白念珠菌酵母相和人口腔黏膜上皮细胞混悬液、白念珠菌酵母相和胎儿脐静脉内皮细胞混悬液共同孵育,分别计数人角质形成细胞、人口腔黏膜上皮细胞、胎儿脐静脉内皮细胞上粘附的白念珠菌数.结果:与对照组比较,不同浓度的单克隆天然抗角蛋白抗体IgM 3B4均能抑制白念珠菌芽管生成,并且抗体浓度越高,抑制白念珠菌芽管形成的作用越明显;同时单克隆天然抗角蛋白抗体IgM 3B4能够显著减少白念珠菌与角质形成细胞、上皮细胞、内皮细胞的粘附,其抑制作用与单克隆天然抗角蛋白抗体IgM 3B4的浓度呈正相关.结论:单克隆天然抗角蛋白抗体IgM 3B4在体外能够抑制白念珠菌芽管形成,能够抑制白念珠菌与人角质形成细胞、人口腔黏膜上皮细胞、胎儿脐静脉内皮细胞的粘附,从而降低白念珠菌的侵袭力,提示天然抗体IgM在机体抗真菌感染的天然免疫中可能具有积极的作用.