EHEC O157：H7紧密黏附素C300与LTB融合基因克隆与序列分析

目的构建肠出血性大肠埃希菌（EHEC）O157：H7紧密黏附素C-端免疫保护片段与肠黏膜佐剂大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚单位（LTB）的融合基因克隆载体,为进一步研究EHEC O157：H7重组疫苗奠定了基础.方法设计引物采用PCR技术从EHEC O157：H7基因组中扩增Intimin C300的编码基因,从肠产毒性大肠埃希菌基因组中扩增LTB的编码基因,分别构建克隆载体pUC18-C300和pUC18-LTB,采用酶切位点相连技术,构建pUC19-C300-LTB克隆载体,并测序.结果从EHEC O157：H7基因组中扩增出了900 bp的目的片段,从肠产毒素大肠埃希菌基因组扩增出了275 bp的目的片段,分别插入载体pUC18和pUC19,经酶切及测序鉴定与目的序列一致.结论克隆出EHEC O157：H7的紧密黏附素C-端免疫保护片段与不耐热肠毒素B亚单位基因,并成功构建融合基因克隆载体,测序正确.     

应用可视芯片技术检测食品中常见产毒微生物的方法研究

为建立一种运用可视芯片技术快速、准确检测食品中肠出血性大肠埃希菌Escherichia coli O157:H7、志贺菌Shigella、沙门菌Salmonella、单核细胞增生李斯特菌Listeria monocytogenes的方法.分别选取肠出血性大肠埃希菌O157:H7中编码脂多糖O157抗原的基因(rfbE)...     

大肠埃希菌O157:H7致病因素的研究进展

大肠埃希菌O157:H7可使人发生腹泻、出血性结肠炎,引发溶血性尿毒综合征及血栓形成性血小板减少性紫癜等严重并发症。通过对其主要致病因素包括毒力岛、粘附因子、志贺毒素Stx等研究进展进行综述,探讨大肠埃希菌O157:H7的致病机制。     

猪大肠埃希菌肠毒素基因的多重PCR检测

以产肠毒素性大肠埃希菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)耐热肠毒素(STa、STb)基因和不耐热肠毒素(LT)基因保守序列为靶序列,设计合成了3对可扩增目的片段为182、108和336 bp的引物,建立了检测ETEC耐热肠毒素基因和不耐热肠毒素基因的多重PCR方法.该方法对肠出血性大肠埃希菌(EHEC)EDL933、猪链球菌Streptcoccus、鼠伤寒沙门氏杆菌Salmonella typhimrium和猪肺疫巴氏杆菌Pasteurella pneumotropic的检测结果均为阴性,并且能检测到102cfu/mL稀释度的标准菌.对11株分离自广东佛山地区腹泻仔猪的待检菌株进行检测,结果为:含STa基因的菌株为5株;含STb基因为2株;含LT基因为3株,其中2株同时具有STb和LT基因.结果表明:该方法的特异性和敏感性较高,可用于ETEC的临床快速诊断和流行病学调查.     

圈养条件下猕猴粪便细菌的分离与初步鉴定

本试验以猕猴粪便为主要试验材料,为了解圈养条件下的猕猴粪便携带的细菌情况,对某动物园中的猕猴粪便细菌进行分离培养、16SrRNA基因PCR扩增和序列分析,结果显示,从粪便中分离并鉴定出5属共9种细菌:希氏肠球菌、索氏志贺菌、弗氏大肠杆菌、大肠埃希菌、痢疾杆菌、屎肠球菌、莫海威芽孢杆菌、胼胝体棒状杆菌、谷氨酸棒状杆菌。     

肠出血性大肠埃希菌噬菌体裂解酶的毕赤酵母重组表达及裂解活性分析

为研究噬菌体V-EcoM-C1所编码裂解酶LysC1的裂解活性,在酵母菌GS115中重组表达裂解酶LysC1,并检测裂解酶LysC1对大肠埃希菌的裂解活性。结果表明:通过甲醇诱导后,含有裂解酶基因LysC1的重组表达质粒pPIC9K-LysC1能够在酵母菌GS115中表达,重组蛋白LysC1的分子量约为25ku,以外分泌方式表达,经HIS-trap HP(GE)亲和层析柱纯化后可获得有活性的重组蛋白LysC1,且该裂解酶对多种不同O抗原类型的肠出血性大肠埃希菌均具有较高的裂解活性,其最小抑菌浓度(MIC)为100μg·mL~(-1)。这一研究利用酵母表达系统成功表达出大肠埃希菌噬菌体裂解酶,且该裂解酶无需穿孔素等破膜因子的辅助,可直接裂解大肠埃希菌,为肠出血性大肠埃希菌的防控提供了新的思路和途径。     

犊牛产肠毒素性大肠杆菌病的防治

致病性大肠埃希菌共有5种,其中产肠毒素性大肠埃希菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是一种常见的消化道致病菌,可导致犊牛发热、腹泻,甚至造成死亡,对畜牧养殖造成很大损失。本文从该病菌的致病机制、临床诊断、防治措施等方面进行简要综述。     

鸭大肠杆菌病的诊治

本病是由大肠杆菌埃希氏菌的某些致病性血清型菌株引起的疾病总称。 一、病原学 大肠埃希氏杆菌是中等大小杆菌,其大小为1～3微米×0．5～0．7微米,有鞭毛,无芽胞,有的菌株可形成荚膜,革兰氏染色阴性。在170种O型抗原血清型中1／2左右对禽有致病性,但最多的是O1、O2、O78、O35四个血清型。本菌对一般消毒剂敏感,对抗生素及磺胺类药等极易产生耐药性。     

泰州地区鸭场大肠杆菌病的调查

为了解泰州地区鸭场大肠杆菌病发病情况,对泰州地区部分鸭场进行调查,从流行病学、临床症状疑似大肠杆菌病死鸭中采集排泄物、肝脏、心脏等病料,进行大肠埃希菌的分离鉴定,对分离的大肠埃希菌进行耐药性检测。结果表明,泰州地区鸭场大肠杆菌病发病率为2%~20%;分离鉴定大肠埃希菌23株,优势血清型为O78、O2、O76;对头孢噻呋、头孢他啶、阿米卡星的耐药率较低,分别为4.3%、8.7%、21.7%;对庆大霉素、氨苄西林的耐药率较高,分别为73.9%、95.7%。本研究为临床药物治疗大肠杆菌病提供参考依据。     

大肠埃希菌O157:H7植物组织内生化研究概况

人畜共患病原菌大肠埃希菌O157:H7是一种产志贺毒素的典型菌株,人体感染后会引起出血性腹泻和肠炎,且可并发溶血性尿毒综合征、血栓性血小板减少性紫癜等疾病,严重时可致人死亡。人畜粪肥携带的大肠埃希菌O157:H7等病原菌可通过污灌、径流、农田施用和昆虫传播等途径进入到土壤环境中,污染种植的水果和蔬菜,使其成为传播大肠埃希菌O157:H7的重要媒介,对公众健康构成了严重威胁。大肠埃希菌O157:H7可从植物表面自身通道(如气孔、皮孔和侧根发生处等)或表面损伤(生物损伤或物理损伤等)等途径进入植物体内,随宿主植物的细胞分化在植物体内繁殖,与宿主植物构成特殊的共生关系,但不形成特殊结构,也不引发植物体外观形态改变。然而,大肠埃希菌O157:H7植物内生化与植物体损伤程度、植物免疫系统及其模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs)、附生植物微生物群落和根际土壤微生物群落等因素之间存在复杂的交互作用。该文对大肠埃希菌O157:H7的污染来源、植物组织内生化途径及其影响因素等进行了综合的阐述,为深入了解人畜共患病原菌植物内生化机制和污染风险提供参考,以便降低人畜共患病原菌对人类健康和环境安全的危害。     

鸡源Iss抗血清对鸡大肠埃希菌O2、O78、CVCC1551的抑制作用

为探讨Iss抗体对鸡大肠埃希菌(Escherichia coli)血清抗性的抑制作用,将纯化的Iss融合蛋白免疫雏鸡而获得抗血清,并对3株鸡大肠埃希菌株O2、O78、CVCC1551进行血清抗性抑制试验,分析Iss抗血清对鸡大肠埃希菌血清抗性的抑制作用。结果表明,抗血清对O2、O78、CVCC1551等3株致病性-血清抗性,但iss基因氨基酸序列不同的大肠杆菌均产生抑制作用,且抑制作用的程度与抗血清含量有关。     

黑龙江奶牛肠外致病大肠埃希菌种系分类群研究

研究黑龙江省奶牛主要肠外致病(奶牛乳房炎、子宫内膜炎)大肠埃希菌的种系分类群。用PCR扩增具有种系分类群标记的chuA、yjaA基因和TSPE4.C2 DNA片段的方法,对黑龙江省84株来源于奶牛乳房炎和41株来源于奶牛子宫内膜炎的大肠埃希菌进行种系进化群分类。奶牛乳房炎所检测菌株中A进化种系群占11.90%。B1种系进化群占88.10%。奶牛子宫内膜炎所检测菌株中A种系进化群占14.63%,B1种系进化亚群占85.37%。未检测到属于B2和D群的肠外强毒力株。大肠杆菌分离株接种小鼠剖检可见明显病变。通过遗传进化分析,引起黑龙江奶牛肠外致病大肠埃希菌主要属于B1种系进化群,为奶牛乳房炎和子宫内膜炎疫苗的研制提供理论依据。     

甘肃地区新生仔猪腹泻细菌性病原的分离鉴定及其耐药性分析

为了解甘肃地区导致新生仔猪腹泻的主要细菌性病原。采集甘肃省部分地区新生仔猪腹泻病料104份,采用16SrDNA扩增技术对细菌性病原进行鉴定,经标准诊断血清确定其血清型,并用药敏纸片法对细菌性病原进行耐药性分析。结果显示:在35份病料中分离出致病性大肠埃希菌,4份病料中分离得到与致病性大肠埃希菌混合感染的沙门菌;肠道产毒性大肠埃希菌的血清型主要以O78:K80(B)为主;该地区的致病性大肠埃希菌对多种抗生素产生耐药性。表明:甘肃地区新生仔猪腹泻的细菌性病原主要是大肠埃希菌,且多重耐药性严重。     

遗传标志性基因Z0372 PCR检测肠出血大肠杆菌O157:H7

肠出血性大肠杆菌(Enterohaemorrhagic E.coli,EHEC)O157:H7是重要的食源性病原菌,导致严重的人兽共患病。本文旨在建立以Z0372基因为靶基因的PCR检测技术,特异性检测EHEC O157:H7。以Z0372基因为靶序列,设计引物,建立Z0372-PCR,分析敏感性、特异性,并检测模拟阳性污染样品。结果表明,Z0372-PCR对纯培养物检测限103~104CFU/m L,模拟阳性污水样和肉样,增菌后检测限10~102CFU/m L(g)。非大肠杆菌O157和其他肠道病原全部为阴性扩增,只有肠出血性大肠杆菌O157:H7扩增出清晰而特异的条带。模拟阳性样品检测,条带特异,无任何杂带,测序与Gen Bank序列高度同源。因此,Z0372-PCR是特异性检测肠出血性大肠杆菌O157:H7的技术,操作简便,成本低廉,适合实验室肠道内容物、刮取物、污水和食品等的快速检测。     

林麝肠源和圈舍土源大肠埃希菌的分离鉴定及其耐药基因的检测

为了解林麝肠源大肠埃希菌耐药表型和耐药基因及其与圈舍土源大肠埃希菌的关系。从茂县、都江堰、理县、陕西、泸定、汉源6个林麝养殖场采集66份林麝新鲜粪便及养殖场20份土壤样本,通过分离纯化、生化试验、16S rRNA基因序列分析鉴定,得到59株林麝肠源大肠埃希菌和12株土源大肠埃希菌,并对其进行药敏试验。据其结果,设计相关12对引物,采用PCR方法对所有菌株的耐药基因进行检测。药敏试验显示,林麝肠源大肠埃希菌对青霉素、庆大霉素、链霉素、四环素、氯霉素具有较强耐药性,在所有菌株中所占比例分别为81.36%、5.08%、13.56%、20.34%和6.78%;土源大肠埃希菌对除氯霉素以外的同种类药物具有较强耐药性,在所有菌株中所占比例为91.67%、16.67%、16.67%、25.00%。PCR结果显示,林麝肠源大肠埃希菌7个基因检出率较高;而土源大肠埃希菌3个基因检出率较高。对于同一种耐药基因而言,林麝肠源大肠埃希菌耐药基因检出率普遍高于土源大肠埃希菌,但从耐药基因检测整体结果来看,林麝肠源大肠埃希菌与土源大肠埃希菌又存在一致性,这说明二者之间可能存在某种相互影响的关系。     

猪源致泻大肠埃希菌系统进化分群及致病型检测

为明确长春地区某规模化猪场大肠埃希菌系统进化分群、毒力基因和致病型分布以及耐药情况。采用PCR对分离自哺乳仔猪、妊娠母猪、哺乳母猪和断奶仔猪粪便的129株大肠埃希菌进行系统进化分群的检测;采用多重荧光实时定量聚合酶链式反应检测菌株毒力基因,鉴定致泻大肠埃希菌(DEC)的致病型;并检测17种抗生素耐药情况。结果显示B1群为优势群(51.94%,67/129)。共检出DEC 47株,分离率为36.43%,其中肠道聚集性大肠埃希菌(EAEC)38株(29.46%,38/129),均携带astA基因,其中25株属于B1群,13株属于A群;肠道致病性大肠埃希菌(EPEC)6株(4.65%,6/129),均携带escV基因,其中5株属于B1群,1株属于B2群;产肠毒素大肠埃希菌(ETEC)1株(0.78%,1/129),携带stp基因,属于A群;肠道出血性大肠埃希菌(EHEC)1株(0.78%,1/129),携带stx2基因,属于B1群;EAEC-EPEC检测出1株(0.78%,1/129),毒力基因型为astA-escV,属于B1群;此次分离到的DEC未发现EIEC和DAEC这2种类型。经检测发...     

三株O_(78)、O_(137)混合血清型鸡大肠埃希菌iss基因的序列分析

采用1日龄雏鸡对3株O78、O137混合血清型鸡大肠埃希菌的致病性进行了测定,并扩增了iss基因。结果表明,3株O78、O137混合血清型鸡大肠埃希菌均对1日龄雏鸡具有较强的毒力。iss基因在3株O78、O137混合血清型鸡大肠埃希菌中的序列与已知的禽大肠埃希菌iss基因序列的同源性为100%,与人源大肠埃希菌iss基因序列的同源性为90.9%,显示了此基因的保守性。     

初春平养肉鸡细菌病防控措施

<正>初春季节是病原体生长繁殖活跃的季节,也是鸡大肠杆菌病和鸡白痢易发的季节。这两种常见细菌病轻者可引起鸡群生产性能下降,重者导致发病鸡大批死亡。因此,养殖场需做好细菌疫病的防控工作,保障养殖效益。一、鸡大肠杆菌病1.流行现状鸡大肠杆菌病病原属肠杆菌科埃希菌属的兼性厌氧大肠埃希氏杆菌,无芽孢,散在或成对存在的直杆菌。该菌由于有菌体抗原（O）、鞭毛抗原（H）、荚膜抗原（K）,而形成了许多血清型。     

羔羊大肠杆菌病的中西疗法

羔羊大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌所引起的一种幼羔急性、致死性传染病。临床上表现为腹泻和败血症。 1病原 大肠杆菌是革兰氏阴性、中等大小的杆菌。分类上届肠杆菌科埃希氏菌属。     

鸡致病性大肠埃希氏菌的血清型鉴定

前言 鸡大肠杆菌病是由致病性大肠埃希氏菌引起的传染病。在临床上表现为气囊炎、败血症、肠炎、关节炎、输卵管炎、肉芽肿等多种类型。致病性大肠埃希氏菌即可成为本病的原发性病原体,也可以在某种诱因条件下作为继发性病原体而起作用。特别是某些特定血清型大肠埃希氏菌与各种病型之间有着密切联系。国外研究者Edward和Ewing早在1954年就证实O_2血清型大肠埃希氏菌是鸡大肠杆菌性败血症的病原体,此后,Soika、Glantz等人