脱乙酰壳聚糖固定碱性蛋白酶的研究

以脱乙酰壳聚糖为载体，戊二醛为交联剂制备固定化碱性蛋白酶。研究了戊二醛的浓度、给酶量、固定化温度、时间、pH对固定碱性蛋白酶的影响。结果表明：碱性蛋白酶最佳固定化条件是戊二醛浓度为0．2％：给酶量11000U／g；pH为10；在温度为50℃交联时间12h。     

壳聚糖微球固定碱性蛋白酶的研究

利用乳化交联法制得壳聚糖微球并用于碱性蛋白酶的固定,借助正交试验设计优化酶固定化条件,结果表明：常温条件下,戊二醛浓度为1％,以给酶量240U／g载体加酶,在pH10缓冲液中,交联20h时,固定化碱性蛋白酶的活力和活力回收率可达到119U／g和49．6％;固定化碱性蛋白酶耐热性较游离碱性蛋白酶较强,4℃的半衰期可达14d。     

固定化碱性蛋白酶生产CPP的研究

以ＧＭ２０１大孔树脂和壳聚糖为载体,以戊二醛为交联剂,对碱性蛋白酶２７０９的固定化条件,固定化酶的性质以及利用固定化酶制备ＣＰＰ进行研究。考察了交联剂的浓度,载体与酶的比例,温度以及ＰＨ等对碱性蛋白酶固空化的影响。     

多孔壳聚糖微球固定化碱性蛋白酶的研究

采用自制的多孔壳聚糖微球固定化碱性蛋白酶,以酶活回收率为参考指标,分别对酶浓度、酶与栽体用量比、戊二醛浓度、吸附时间、交联时间、BSA浓度等进行了单因素试验,考察了其对碱性蛋白酶固定化的影响,确定了较好的固定化碱性蛋白酶的工艺条件.结果表明,碱性蛋白酶固定化的最佳工艺条件为:酶与栽体用量比315 U/g、酶浓度45 mg/mL、固定化温度4℃、固定化pH7.2、吸附时间48 h、交联时间8 h、戊二醛浓度为1%、BSA浓度4.5 mg/mL,此时RRA达到65.46%,固定化碱性蛋白酶也具有较好的理化性质.     

粉煤灰固定化碱性蛋白酶特性的研究

以经甲烷磺酸活化和γ-氨丙基三乙氧基硅烷偶连的粉煤灰为载体,戊二醛为交联剂,采用载体交联法制备固定化碱性蛋白酶,同时对固定化条件进行了研究。实验结果表明,碱性蛋白酶的最佳固定化条件为:给酶量4mL,戊二醛浓度0.2%,固定化温度25℃、交联3h。在此条件下得到的固定化碱性蛋白酶活回收率可达63.8%。该固定化碱性蛋白酶的稳定性较理想,连续使用6次后,其剩余酶活仍保持在29.4%。     

纳米磁性壳聚糖微球固定化Alcalase碱性蛋白酶的制备及酶学性质研究

以自制磁性壳聚糖微球作固定化酶载体,考察给酶量、pH、戊二醛浓度和交联时间对固定酶酶活和酶活回收率的影响,并研究固定化酶的酶学性质及其微观结构。结果表明:给酶量112 000 u/g载体,pH 8.5,戊二醛体积分数8%,交联时间11 h条件下酶活达最高(86 779±119.26)u/g,酶活回收率达(77.48±0.11)%。固定化酶和游离酶最适pH分别为11和10.5,最适温度皆为60℃,且固定酶pH和温度稳定性明显高于游离酶;重复使用5次固定酶酶活保持(80.89±0.20)%;由米氏常数可知固定酶具有更强的底物亲和力;电镜显示Fe3O4磁核和磁性壳聚糖微球皆为表面光滑球形的纳米粒子,高比表面积能提供更多酶结合位点;红外光谱证明Fe3O4已被壳聚糖包埋,振动样品磁强计检测固定化酶具有良好磁响应性。     

固定化Neutrase中性蛋白酶的研究

以壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂固定化Neutrase中性蛋白酶。通过单因素实验，分析了壳聚糖浓度、戊二醛浓度、交联时间对微球制备的影响及戊二醛加入量对酶固定的影响。由正交实验确定制备固定化酶的最佳工艺参数为：壳聚糖浓度为3％、戊二醛与葡胺糖残基摩尔比为1：2、制备微球交联时间为1h，微球与酶振荡吸附12h，再加入2．5％戊二醛交联，使戊二醛最终浓度达到0．9％，制备得固定化中性蛋白酶活力为112．69U／g。固定化蛋白酶的热稳定性和对酸碱的稳定性均较游离中性蛋白酶有所提高。     

磁性壳聚糖微球固定化碱性蛋白酶的酶学性质

以Fe3O4和壳聚糖为原料,以戊二醛为交联剂制备磁性壳聚糖微球,固定化碱性蛋白酶,并对其品貌及结构性质进行观察和分析。结果表明:壳聚糖微球具有良好的球形外貌,大小约为15nm,固定化后粒子大小约为20nm;红外光谱分析证实Fe3O4已被壳聚糖包裹;固定化酶前后粒子晶形完整,均具有良好的磁响应能力和超顺磁性。固定化酶与游离酶相比,最适温度从60℃下降到50℃;最适pH值从10升至11;固定化酶的Km为5.85×10-4mg/mL,游离酶的Km为6.06×10-4mg/mL。     

海藻酸钠-壳聚糖共固定化菠萝茎蛋白酶的研究

以海藻酸钠、壳聚糖为材料共固定化菠萝茎蛋白酶,并对固定化条件以及固定化酶的酶学特性进行了研究。通过单因素及正交实验确定固定化酶的最佳条件为:酶用量0.4mg/g、海藻酸钠浓度3.0%、壳聚糖浓度1.0%、CaCl2浓度5.5%、固化时间90min。固定化后的酶重复使用4次后,相对酶活力仍保留80%以上,固化效果较好。同时,固定化酶最适反应温度和热稳定性提高,反应pH向碱性偏移,酶学特性得到了改善。      

海藻酸钠-壳聚糖共固定化菠萝茎蛋白酶的研究

以海藻酸钠、壳聚糖为材料共固定化菠萝茎蛋白酶,并对固定化条件以及固定化酶的酶学特性进行了研究。通过单因素及正交实验确定固定化酶的最佳条件为:酶用量0.4mg/g、海藻酸钠浓度3.0%、壳聚糖浓度1.0%、CaCl2浓度5.5%、固化时间90min。固定化后的酶重复使用4次后,相对酶活力仍保留80%以上,固化效果较好。同时,固定化酶最适反应温度和热稳定性提高,反应pH向碱性偏移,酶学特性得到了改善。     

固定化碱性蛋白酶制备麦胚降血压肽研究

采用中空壳聚糖作为载体,通过双功能试剂戊二醛作偶联剂,将碱性蛋白酶连接到中空壳聚糖,制备固定化碱性蛋白酶。研究固定化碱性蛋白酶的部分性质及水解麦胚蛋白质条件。实验结果显示,1.5% 戊二醛溶液活化的壳聚糖偶联1mg 碱性蛋白酶,酶催化相对活性可达90%;固定化酶最适pH 值为9.5,最适反应温度约65℃,催化水解麦胚蛋白质的水解率达16.5% 约需10min;固定化酶与麦胚蛋白质的比达到1:5 时,一次性获取含降血压肽水解物质的得率为15.6%。     

海藻酸钠固定化碱性蛋白酶制备及酶学性质的研究

对采用海藻酸钠固定化碱性蛋白酶的方法和酶学性质进行了研究。在单因素实验基础上,采用响应面优化方法确定固定化的最优条件,得到的最佳条件为:海藻酸钠浓度3.1%,pH9.4,CaCl2浓度3.0%,游离酶添加量10000U/g,时间1.8h,固定化酶活力可达5518U/g。固定化酶的最适pH为10,最适温度为60℃,制得的固定化酶的热力学稳定性和操作稳定性较好。此外,固定化酶重复利用5个循环后酶活力仅降低40%。     

氨基硅烷修饰的磁性纳米粒子固定化碱性蛋白酶

用3-氨丙基三乙氧基硅烷对四氧化三铁磁性纳米粒子表面进行修饰,以戊二醛作为交联剂固定化碱性蛋白酶。结果表明：在经过表面修饰的磁性纳米粒子具有较好的磁分离能力,碱性蛋白酶能有效地结合在修饰后的粒子表面。固定化酶的最佳条件：酶添加量为7000U/g、反应温度为40℃、时间为1.5h;固定后酶活力可达3352U/g,回收率为48%,在反复使用5次以后,依然能保持34.2%的酶活力。     

壳聚糖固定化木瓜蛋白酶的研究

以壳聚糖为载体,戊二醛作为交联剂,采用载体交联法制备固定化木瓜蛋白酶,并研究了固定化木瓜蛋白酶的最佳固定化条件。结果表明:木瓜蛋白酶的最佳固定化条件为给酶量为40～50mg/g,于pH7.5,25～30℃下,0.4%～0.5%的戊二醛溶液交联12h,所得的固定化木瓜蛋白酶的活力回收率平均达61.6%。     

几丁质固定化壳聚糖酶的研究

以几丁质为载体,戊二醛为交联剂,固定壳聚糖酶,对壳聚糖酶的固定化条件、固定化酶的性质进行了研究,确定了酶固定的最佳条件为0.1克几丁质与5ml5%戊二醛交联,固定2mg壳聚糖酶,在此条件下酶活力回收可达70％。固定化酶的最适温度和pH分别为60℃和4.0,动力学参数Km值为17.66g/L。将固定化酶于70℃水浴保温150min,酶活力未见明显下降。该固定化酶具有良好的操作和保存稳定性。     

果胶酶在壳聚糖上的固定化研究

本文以壳聚糖为载体，以戊二醛为交联剂，研究了果胶酶的固定化，分析了戊二醛浓度、给酶量、温度对酶固定化的影响。同时对固定化后的酶促作用条件（最适pH、温度）、米氏常数、半衰期等理化性质进行了初步测定，结果表明，在3％戊二醛，0．1mg/g湿壳聚糖的给酶量，5℃条件下，果胶酶固定化的固定率较高。酶促特性研究表明，固定化果胶酶最适温度范围较非固定化果胶酶大，最适pH和表观Km均有所下降，在4℃条件下,固定化果胶酶的半衰期约为30d。     

壳聚糖固定化超氧化物歧化酶的研究

目的:研究壳聚糖固定化超氧化物歧化酶的酶学性质。方法:分别以不同方法对超氧化物歧化酶进行固定并比较其活力,对固定化方法进行相应的优化,对固定化超氧化物歧化酶进行酶学性质测定。结果:以壳聚糖为载体,戊二醛交联法制备固定化超氧化物歧化酶,优化条件下制备的固定化酶,所得固定化酶活力为330U/g,酶活回收率为58.33%,热稳定性和酸稳定性较游离酶有很大的提高,且具有良好的贮存稳定性,固定化酶可实现反复使用,提高了利用率。结论:壳聚糖-戊二醛交联法可用于制备性能较优的固定化超氧化物歧化酶。     

壳聚糖膜固定化葡萄糖氧化酶的研究

研究以壳聚糖膜为载体、戊二醛为交联剂,固定化葡萄糖氧化酶的最佳条件。结果表明,采用脱乙酰度为86.40%,分子量为1.288×106的壳聚糖制作壳聚糖膜,与浓度0.025%的戊二醛交联后做为载体,室温状态下,在pH为6.5、酶浓度为0.2mg/ml的酶液中固定12h,固定化酶活力最大。在此条件下,固定化酶活力为186.8U/cm2,相对活力78.69%,活力回收>40%。      

几丁质固定化无花果蛋白酶的研究

载体几丁质通过甲酸和戊二醛活化共价偶联无花果蛋白酶，固定化反应在给酶量为１．０ｍｇ／ｇ载体，ｐＨ７．５，４℃进行１５ｈ。制备的固定化酶表观Ｋｍ值（酪蛋白）为０．９５ｍｇ／ｍｌ，溶液酶的Ｋｍ值为０．３８ｍｇ／ｍｌ，固定化酶的最适ｐＨ范围变宽，由溶液酶的最适ｐＨ７．５－７．８变为在ｐＨ６－８范围内酶活性保持稳定；固定化酶的最适温度由溶液酶的６０℃变为３７℃。重复水解酪蛋白７次后，固定化酶保持原酶活性５