EGCG对舌鳞癌Tca8113细胞增殖与凋亡的实验研究

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法:采用CCK-8法检测不同浓度的EGCG(0、10、20、40、80mg/L)对Tca8113细胞的体外增殖抑制作用;采用流式细胞术及DAPI荧光染色法检测EGCG对Tca8113细胞凋亡的影响。结果:CCK-8法检测显示EGCG对Tca8113细胞有明显增殖抑制作用并呈现时间及浓度依赖性(P<0.01);流式细胞仪结果显示,经10mg/L EGCG处理的Tca8113细胞凋亡率还不能认为与对照组有区别,其余EGCG处理组细胞凋亡率均高于对照组并呈现时间及浓度依赖性(P<0.01);DAPI染色在免疫荧光显微镜下可见典型的细胞核皱缩及凋亡小体等。结论:EGCG对Tca8113细胞具有明显的增殖抑制及诱导凋亡作用,且呈现时间及浓度依赖性。     

岩黄连总碱对Tca8113细胞增殖和凋亡作用的影响

目的:观察岩黄连总碱对体外培养人舌鳞癌Tca8113细胞增殖抑制及诱导凋亡作用。方法:MTT法检测不同浓度的岩黄连总碱分别处理体外培养的Tca8113细胞24、48和72 h后的细胞增殖抑制情况,Hochest33258染色及DNA ladder检测细胞凋亡,并用脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL法)原位检测细胞凋亡及细胞凋亡率。结果:岩黄连总碱对Tca8113细胞增殖具有明显抑制作用(P<0.01),且呈现出一定的时间和浓度依赖性;Hochest33258检测发现岩黄连总碱作用48 h后可见凋亡细胞;DNA ladder检测可见凋亡特有的180～200 bp整数倍DNA条带;TUNEL结果显示岩黄连总碱处理组细胞凋亡率呈时间和浓度依赖性。结论:岩黄连总碱能抑制Tca8113细胞增殖,呈时间和浓度依赖性;同时能诱导Tca8113细胞凋亡,且诱导凋亡的作用也呈时间和浓度依赖性。     

细胞增殖和细胞凋亡与口腔鳞癌研究进展

细胞增殖和细胞凋亡的平衡关系在胚胎发育，造血，免疫系统的成熟和维持正常组织的器官的细胞数目恒定与生长平衡乃至机体衰老方面都起着重要作用。目前认为它们在肿瘤的发病机制中有重要意义。本文对其概念，转导机制，诱导因素，基因调控以及其在口腔鳞癌的诊断和治疗方面的研究进展进行综述。     

NF-kB信号通路在紫草素诱导Tca8113细胞凋亡中的作用机制

目的:探讨NF-kB信号转导通路在紫草素诱导Tca-8113细胞凋亡中的作用.方法:采用蛋白印迹法检测IkBa,磷酸化-IKBa、bcl-2及Bax蛋白的表达,采用EMSA方法检测NF-KB的DNA结合活性,采用酶联免疫吸附方法(ELISA)分析Caspase 3、8、9的活性.采用SPSS12.0软件包对数据进行单因素方差分析及t检验.结果:经过紫草素作用的癌细胞,磷酸化-IkBa蛋白及NF-kB的DNA结合活性均明显降低,Bcl-2蛋白表达显著减少.Caspase 3、8、9在紫草素诱导的细胞凋亡过程中被激活.泛Caspase阻断剂Z-Asp-CH2-DCB可以明显抑制紫草素引起的细胞凋亡(P=0.021.结论:紫草素诱导口腔鳞癌细胞的凋亡作用,至少部分通过抑制NF-kB信号通路活性,继而调节其下游调亡调控分子,包括bcl-2家族及Caspase家族等来实现.应用紫草素特异性抑制口腔鳞癌中高激活状态的NF-kB通路,可望成为口腔鳞癌防治的一条新的有效途径.     

姜黄素对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖和凋亡作用研究

目的 探讨姜黄素对体外培养人舌鳞癌Tca8113细胞增殖和凋亡作用.方法 不同浓度的姜黄素处理体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,并行凋亡相关蛋白Fas、P53、Bcl-2的免疫组化测定.结果 在10、30、50、70 μmol/L浓度范围内,姜黄素可剂量依赖性抑制人舌鳞癌Tca8113细胞增殖的作用.30、40、50 μmol/L三个不同浓度姜黄素处理组的凋亡指数与对照组比较差异有统计学意义(P ＜ 0.05),细胞凋亡率与药物浓度正相关.30、40、50 μmol/L不同浓度姜黄素处理组Fas、P53、Bcl-2凋亡细胞阳性率与对照组比较差异具有统计学意义(P ＜ 0.05).结论 姜黄素可显著抑制人舌鳞癌Tca8113细胞增殖,并诱导其凋亡,其作用呈剂量依赖关系.     

口腔异常增生上皮及鳞癌组织细胞凋亡和增殖的研究

目的：了解细胞凋亡、增殖及p53、Bcl—2在口腔异常增生上皮及鳞癌组织中的变化规律。方法：采用TUNEL技术检测细胞凋亡，免疫组化SP法检测PCNA、p53和Bcl—2。结果：从单纯性增生、轻度异常增生、中度异常增生至原位癌、鳞癌，增殖指数逐渐上升；凋亡指数在前三个阶段和增殖指数同时上升，而从原位癌开始，凋亡指数开始下降，鳞癌时达最低峰。p53表达依次增高到鳞癌时出现高峰；Bcl—2在原位癌时表达升高。结论：细胞凋亡和增殖比例失调在口腔鳞癌发生过程中起着重要作用。Bcl—2、p53参与了口腔鳞癌的发生、发展，p53异常是早期且相对持续行为。     

MMP－2 siRNA促进口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡作用的研究

目的：研究基质金属蛋白酶－2（MMP－2）siRNA对口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡的作用。方法：采用MMP－2 siRNA慢病毒感染Tca8113,qPCR检测MMP－2表达,MTT检测细胞活性,Annexin－V单染检测细胞凋亡。结果：MMP－2 siRNA慢病毒成功抑制Tca8113中MMP－2 mRNA表达。MMP－2干扰组细胞活性显著低于阴性病毒组（P＜0．01）,且细胞凋亡率高于阴性对照组（P＜0．01）。结论：MMP－2干扰能促进Tca8113凋亡,起到抗肿瘤效应。     

NF-κB信号通路在紫草素诱导Tca8113细胞凋亡中的作用机制

目的:探讨NF-κB信号转导通路在紫草素诱导Tca-8113细胞凋亡中的作用。方法:采用蛋白印迹法检测IκBa,磷酸化-IκBa、bcl-2及Bax蛋白的表达,采用EMSA方法检测NF-κB的DNA结合活性,采用酶联免疫吸附方法(ELISA)分析Caspase 3、8、9的活性。采用SPSS12.0软件包对数据进行单因素方差分析及t检验。结果:经过紫草素作用的癌细胞,磷酸化-IκBa蛋白及NF-κB的DNA结合活性均明显降低,Bcl-2蛋白表达显著减少。Caspase 3、8、9在紫草素诱导的细胞凋亡过程中被激活,泛Caspase阻断剂Z-Asp-CH2-DCB可以明显抑制紫草素引起的细胞凋亡(P=0.02)。结论:紫草素诱导口腔鳞癌细胞的凋亡作用,至少部分通过抑制NF-κB信号通路活性,继而调节其下游调亡调控分子,包括bcl-2家族及Caspase家族等来实现。应用紫草素特异性抑制口腔鳞癌中高激活状态的NF-κB通路,可望成为口腔鳞癌防治的一条新的有效途径。     

免疫化疗对口腔鳞癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 评价白细胞介素—2(IL—2)局部注射联合化疗对口腔鳞癌细胞增殖、凋亡特性的影响。方法 34例T3、T4期口腔鳞癌患者随机分2组接受术前治疗，其中23例行免疫化疗(IL—2局部注射合并PVP化疗)，11例行单纯PVP化疗。采用免疫组化和原位DNA末端标记法分别检测治疗前后肿瘤增殖细胞核抗原和细胞凋亡的表达情况，计算出增殖指数和凋亡指数。结果 免疫化疗组治疗后肿瘤细胞增殖指数明显低于单纯化疗组(P＜0．05)，细胞凋亡指数明显高于单纯化疗组(P＜0．05)。经过免疫化疗对抑制口腔鳞癌细胞增殖，诱导细胞凋亡具有重要意义。     

舌鳞癌细胞系Tca8113 Fas表达水平与凋亡的关系

目的研究舌鳞癌Tca8113细胞Fas表达水平与细胞凋亡的关系,了解细胞凋亡的相关机制。方法采用脂质体法将含Fas基因片段的真核表达重组质粒pBK-Fas导入舌鳞癌Tca8113细胞,检测转染前后FasmRNA表达水平、Fas蛋白阳性表达率和阳性表达强度。以及细胞凋亡指数,分析细胞凋亡的相关因素。结果Fas转染不提高舌鳞癌Tca8113细胞Fas蛋白阳性表达率(P>0.05),但能提高FasmRNA表达水平、Fas蛋白表达强度,以及细胞凋亡指数。各项指标分别由转染前的0.201±0.015,31.02±4.63,0.88%±0.16%上升到0.399±0.073,54.32±6.38和10.21%±1.46%,统计分析均有显著性差异(P<0.01)。结论Fas介导Tca8113凋亡与Fas蛋白阳性率可能无关,而与Fas蛋白阳性强度有关。Fas蛋白激活细胞凋亡可能存在阈值。只有Fas表达达到一定强度,细胞凋亡才被激活。     

雷公藤内酯醇对人口腔鳞状细胞癌细胞株Tca8113作用的实验研究

目的 观察雷公藤内酯醇对人口腔鳞状细胞癌细胞株Tca8113的抑制作用,并与传统化疗药物顺铂的作用相比较,评价其作为抗头颈部恶性肿瘤药物的价值.方法噻唑蓝比色法检测雷公藤内酯醇和顺铂对Tca8113增殖的抑制作用,形态学观察经药物作用后细胞的生长情况.结果雷公藤内酯醇对Tca8113的增殖有明显抑制作用,呈量-效、时-...     

DNA histochemical analysis in oral squamous cell carcinoma

BACKGROUND: Recent years have witnessed an increasing emphasis on the role of nuclear DNA and its application in experimental pathological diagnosis to predict prognosis and management of certain neoplasm. AIMS: to establish objective criteria for the degree of differentiation and histochemical quantitative of nuclear DNA of oral squamous cell carcinoma (OSCC) using microspectrophotometric analysis. MATERIAL AND METHODS: The study was conducted on histologic materials from patient with OSCC. Two histological grading systems were used; Broder's and invasive front grading system were recorded. Microspectrophotometry was applied on Feulgen-stained sections to determine the quality of tumour nuclear DNA content in two different histological grading systems of OSCC. RESULTS: Nuclear DNA content increased significantly with decreasing tissue differentiation as well with increasing tumour size. CONCLUSION: The grading system and DNA content provides more objective and accurate criteria which relate the morphologic finding to biologic activity and growth patterns of oral cancer as compared to histologic differentiation alone.     

P16蛋白在口咽癌和口腔癌中的表达及临床意义

目的:分析口咽癌和口腔癌中P16蛋白表达情况及临床意义.方法:采用免疫组织化学染色法检测70例口咽癌和60例口腔癌中P16蛋白的表达情况,分析其与患者临床病理学指标的相关性及临床意义.结果:口咽癌中P16蛋白的阳性率为22.9％(16/70),与P16阴性组相比,患者的年龄、吸烟、病理分化、N分期和TNM临床分期具有统计学意义(P＜0.05);口腔癌中P16蛋白的阳性率为8.3％ (5/60),与P16阴性组相比,病理分化和TNM临床分期有统计学意义(P＜0.05).结论:口咽癌中P16蛋白阳性率明显高于口腔癌,HPV感染是口咽癌和口腔癌不可忽视的诱发因素.     

Nav1.6在口腔黏膜白斑及口腔鳞癌中的表达

目的:探讨钠离子通道Nav1.6在口腔黏膜白斑及口腔鳞癌中的表达及意义.方法:采用免疫组化SP法及Westernblot法检测Nav1.6在口腔正常组织(21例)、白斑(32例)及口腔鳞癌组织(63例)中的表达情况.结果:免疫组化检测,Nav1.6在正常组、口腔白斑组以及癌症组中的阳性表达率分别为6.25％、40％、76.74％;Nav1.6的表达与口腔鳞癌的病理分期有关.Western blot检测,正常组、口腔白斑组、癌症组中Nav1.6的蛋白表达量分别为:0.469±0.015、0.545±0.016、0.848 ±0.020(P ＜0.05).结论:Nav1.6在口腔黏膜癌前病变及口腔鳞状细胞癌的发生和发展中可能起到了一定的作用.     

TSA促进口腔鳞状细胞癌凋亡的实验研究

目的本实验探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(曲古抑菌素TSA)对口腔鳞状细胞癌(Tca-8113)生长抑制情况,以及促进凋亡的作用。方法采用0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.0μg/mLTSA对口腔鳞状细胞癌细胞进行干预,倒置相差显微镜观察细胞形态学改变;MTT法检测细胞增殖活性;Annexin-V-FITC/PI双染流式细胞仪定量检测细胞凋亡。结果①倒置相差显微镜下观察到对照组细胞呈多边形,贴壁,生长活跃;经0.1、0.2、0.4、0.8、1.0μg/mLTSA作用24小时后细胞形态变化不明显;经0.8、1.0μg/mL TSA作用72小时后,约80%细胞核固缩,细胞变小变圆,脱壁。②绘制细胞生长曲线示,随TSA浓度增加、作用时间延长,Tca-8113细胞生长明显受到抑制,各实验组细胞生长抑制率与对照组相比,P<0.05,差别有统计学意义。③0.2μg/mLTSA作用24、48小时,0.8μg/mLTSA作用24小时后,其早期凋亡率分别为3.54±1.36,3.59±1.21%,6.59±1.67%,与对照组相比有统计学意义(P<0.05);各实验组细胞总凋亡率与对照组相比均有统计学意义(P<0.05)。结...     

口腔鳞癌中 LATS2基因 mRNA 与蛋白表达及其相关性

用 RT-PCR 和 Western blot 检测57例口腔鳞癌组织及12例正常口腔黏膜组织中 LATS2 mRNA 和蛋白表达;发现口腔黏膜正常组织中 LATS2 mRNA 和蛋白的表达率为100％;口腔鳞癌组织中 LATS2基因 mRNA 和蛋白的表达率分别为47．4％（27／57）和42．1％（24／57）,二者表达具有明显的相关性（P ＜0．01）,均与患者肿瘤的分化程度及淋巴结转移明显相关（P ＜0．05）。     

NEK2基因在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

利用 Real-Time PCR 检测细胞周期相关蛋白激酶2（NEK2）mRNA 在20例口腔正常黏膜组织及42例口腔鳞状细胞癌（OSCC）组织中的表达。结果显示,NEK2 mRNA 在 OSCC 中高表达（P ＜0．050）,不同分化程度（P ＜0．05）、不同临床分期组间差异具有统计学意义（P ＜0．05）。有无淋巴结转移（P ＞0．05）、不同年龄、不同性别组间差异无统计学意义（P ＞0．05）。NEK2基因表达增高可能参与 OSCC 的形成。     

Naa10p 表达对舌鳞癌 Tca8113细胞平阳霉素敏感性的影响

目的：观察 N-α乙酰基转移酶（Naa10p）表达对舌鳞癌 Tca8113细胞平阳霉素（PYM）敏感性的影响。方法：采用慢病毒体系分别构建干扰及过表达 Naa10p 的 Tca8113细胞株,并设立相应的对照细胞 Tca8113-LV-NC,鉴定干扰和过表达效率,MTS 法检测药物处理后各处理组细胞对 PYM的敏感性。结果：干扰 Naa10p 的 Tca8113-LV-shNaa10p 细胞、过表达Naa10p 的 Tca8113-LV-Naa10p 细胞与对照细胞 Tca8113-LV-NC 对平阳霉素的半数抑制浓度（IC50）分别为（20．772±0．106）μg／ml、（2．157±0．123）μg／ml、（6．301±0．069）μg／ml（组间比较,P ＜0．05）。结论：下调 Naa10p 表达可降低口腔鳞癌细胞 Tca8113对平阳霉素的敏感性,上调 Naa10p 表达可增强口腔鳞癌细胞 Tca8113对平阳霉素的敏感性。     

热放疗对舌鳞癌Tca8113细胞及其耐药细胞株耐药性的影响

目的：探讨热放疗对舌鳞癌Tca 8113细胞和耐药的Tca 8113／CBDEA细胞耐药性的影响。方法：实时定量逆转录PCR（RT—PCR）检测热放疗对Tca 8113细胞和耐药的Tca 8113／CBDEA细胞多药耐药基因1（MDR1）、多药耐药相关蛋白1基因（MRP1）和谷胱甘肽硫-转移酶π基因（GST-π）表达的影响和检测热放疗对细胞内阿霉素浓度的影响。结果：Tca 8113／CBDEA和Tca 8113细胞热放疗后耐药基因MDR1的表达在4h和24h无明显改变（P〉0．05）。MRP1基因的表达在4h和24h组均有明显下降（P〈0．05）,GST-π基因表达在4h组Tca 8113和Tca 8113／CBDEA的表达无明显改变（P〉0．05）,在24h组有明显下降（P〈0．05）．热放疗以后肿瘤细胞内阿霉素（ADM）浓度有明显上升。结论：热放疗联合应用抑制了放疗造成的耐药基因表达上升,增加了细胞内的药物浓度,热放疗联用不会促使肿瘤细胞产生MDR。