耐药结核分枝杆菌基因突变分析

目的 探讨结核分枝杆菌耐药表型与基因突变位点之间的相互关系.方法 采用序列特异性引物分别扩增92株结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB,异烟肼耐药基因katG、inhA、ahpC,链霉素耐药基因rrs、rpsL,乙胺丁醇耐药基因embB及喹诺酮耐药基因gyrA,SSCP筛选出突变序列,DNA测序分析突变性质.结果 59株利福平耐药株rpoB基因突变检出率94.9%(56/59),以Ser450Trp突变最多;90株异烟肼耐药株中,katG基因突变检出率38.9%(35/90),以Ser315Thr最多,3株检出inhA基因突变,ahpC基因无突变检出;34株喹诺酮耐药株中gyrA基因突变检出率82.4%(28/34),主要为Asp94Gly,其次为Ala90Val;31株链霉素耐药株中,15株检出rrs突变,最常见为A514C和A1041G,10株发生rpsL Lys88Arg突变,总的链霉素基因突变检出率为77.4%(24/31);31株乙胺丁醇耐药株中embB 基因突变检出率19.4%(6/31),主要为Met306Val.结论 耐药结核分枝杆菌耐药情况较为严重,以DNA测序为基础的基因突变分析能快速有效地检测结核分枝杆菌的rpoB、katG、gyrA、rrs、rpsL、embB 等耐药分子标识,显示了西安地区耐药性结核分枝杆菌的突变特点,为结核病的临床诊断和合理用药提供了实验依据.     

耐多药结核分枝杆菌耐药相关基因突变特征分析

目的了解中国耐多药结核分枝杆菌耐药相关基因的分子特征。方法对138株耐多药结核分枝杆菌和45株敏感菌的耐药相关基因inhA、katG和oxyR-ahpC间隔区(异烟肼)、rpob(利福平)、gyrA(氧氟沙星)和rrs(卡那霉素)进行序列测定,分析其基因突变特点。结果 138株耐多药结核分枝杆菌中,14.4%的菌株inhA基因发生突变,72.5%菌株的katG基因发生突变,15.9%菌株的oxyR-ahpC基因发生突变,同时考虑这3种基因,异烟肼耐药相关基因突变检出率可达90.6%;94.2%菌株的rpoB基因发生突变,74.5%菌株的gyrA基因发生突变,61.1%菌株的rrs基因发生突变,主要的突变位点为katG315(66.7%),inhA-15(9.4%),oxyR-ahpC-10(5.1%),rpoB516(13.8%),526(26.1%)和531(49.3%),gyrA90(21.6%)和94(51%),rrs1401(61.1%)。结论我国耐多药结核菌异烟肼、利福平、氧氟沙星和卡那霉素耐药相关基因最常见突变为katG315、inhA-15,rpoB531、526和516,gyrA94和90,rrs1401。     

结核分枝杆菌耐药基因突变的研究

结核病在许多国家出现回升的一个主要原因是细菌耐药性问题 ,随着联合药物治疗的使用 ,又出现了耐多药结核分枝杆菌 (结核菌 ) ,使许多结核病 ,难以治疗 ,增加了死亡率[1] 。目前对于结核菌的耐药机制的研究已有了较大的进展 ,细菌内一些酶的基因突变或缺失是导致耐药的重要原因。随着分子生物学技术的发展 ,通过聚合酶链反应 (PCR)等方法对耐药基因进行快速检测 ,大大缩短了检测时间 (2～3d) ,为耐药结核菌的治疗提供参考。本研究通过PCR -SSCP ,PCR -测序技术检测结核菌临床分离株的katG、rpoB和rpsL基因序列 ,分析济南军区结核菌…     

广西结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药基因突变特征

目的 了解广西壮族自治区结核分枝杆菌乙胺丁醇(EMB)耐药基因突变特征及其影响因素,为结核病的分子诊断和临床治疗用药提供依据。方法 对2018-2019年广西30个结核病耐药监测点连续不间断收集的655株结核分枝杆菌(其中52株乙胺丁醇耐药菌株,603株乙胺丁醇敏感菌株)进行全基因组测序,分析乙胺丁醇耐药基因突变特征及其影响因素。结果 655株结核分枝杆菌中,54株发生乙胺丁醇耐药基因突变,突变率为8.24%(54/655)。在比例法检测EMB耐药的52株菌株中,21株发生基因突变,突变率为40.38%(21/52);603株EMB敏感株中,33株发生基因突变,突变率为5.47%(33/603),耐药株中的基因突变率高于敏感株(χ²=77.133,P=0.000)。EMB耐药表型与基因突变的符合率为40.38%(21/52),二者检测结果吻合度不高(Kappa值=0.343,P <0.001)。54株发生基因突变的菌株,突变基因为emb A、emb B和emb C,突变形式有20种,其中单位点突变29株,占53.70%(29/54),联合位点突变25株,占4...     

链霉素耐药结核分枝杆菌rpsL、rrs基因突变分析

目的：探讨链霉素耐药相关基因rpsL、的突变与链霉素耐药性的关系。方法：采用PCR和PCR～DS技术对66株临床分离株进行rpsL、rrs基因检测和序列分析。结果：常规药敏实验显示20株为链霉素敏感株，46株为链霉素耐药株。20例敏感株中未发现2个基因突变，46株耐多药临床分离株中rpsL 67％，rrs基因突变率为37％，两种基因同时突变率为2％。结论：PCR—DS对耐链霉素结核分枝杆菌的检出率较高，与传统药敏试验互补，对临床耐药性检测和用药有指导意义。     

台州地区结核分枝杆菌分离及耐药特征分析

目的了解台州地区结核分枝杆菌(MTB)和非结核分枝杆菌(NTM)的分离情况及MTB对利福平、异烟肼耐药基因突变位点分布特征,为结核病的诊断和临床用药提供参考。方法采用DNA微阵列芯片法对3 334份临床样本进行分枝杆菌菌种鉴定,并检测384株MTB对利福平、异烟肼的耐药基因。结果3 334份临床样本中MTB阳性837例(25.10%),NTM阳性265例(7.95%),居前3位的依次是胞内分枝杆菌(4.44%)、浅黄分枝杆菌(1.32%)和鸟分枝杆菌(0.75%)。不同性别和年龄患者MTB感染率不同(P0.05)。384株MTB中,对利福平耐药32株(8.33%),对异烟肼耐药27株(7.03%),双重耐药57株(14.84%)。利福平耐药基因突变位点主要是rpoB基因531位点(53.93%)和526位点(26.97%),异烟肼耐药基因突变位点主要是katG基因315位点(91.67%)。结论台州地区MTB感染较普遍,NTM感染也不容忽视。应根据MTB耐药基因检测结果合理用药。     

结核分枝杆菌异烟肼耐药基因突变与其他抗结核药物耐药的相关性

目的 探讨不同抗结核药物对结核分枝杆菌异烟肼耐药相关基因突变的影响,以进一步准确理解结核分枝杆菌异烟肼耐药的分子机制。方法 在广州地区分枝杆菌菌株库中选择异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素、阿米卡星、克拉霉素、左氧氟沙星、莫西沙星、利福布丁、丙硫异烟胺和对氨基水杨酸等11种抗结核药物的药敏性试验临床测定结果明确的结核分枝杆菌分离株进行katG、mabA-inhA、oxy RahpC、kasA和ndh基因测序,以结核分枝杆菌H37Rv标准序列为参照进行基因突变分析,应用卡方检验对比分析H^-(R/F/O)^-与H^-(R/F/O)⁺、H⁺R^-与H⁺R⁺、H⁺F^-与H⁺F⁺和H⁺O^-与H⁺O⁺几大菌群之间5种基因突变发生总频率的差异(其中R、H、F、O...     

208例耐药结核病患者耐药特征分析

目的 为了解耐药结核病患者的耐药特征。方法 收集2021年9月至2022年9月昆明市第三人民医院结核科收治的208例耐药结核病患者的实验室资料为研究对象,分析其在不同年龄、性别、标本类型、抗结核药物耐药中的占比情况。结果 208例研究对象中。各年龄段耐药青少年5例(2.40%),青年97例(46.64%),中年70例(33.65%),老年36例(17.31%);不同性别中男性130例(62.50%),女性78例(37.50%)。各抗结核药物中单耐药97例(46.63%),多耐药22例(10.58%),耐多药89例(42.79%);单耐药中耐异烟肼最多,为51例(24.52%),其次为耐利福平24例(11.54%)。各标本耐药中痰液110例(52.89%),灌洗液83例(39.90%),脓液7例(3.37%),胸水3例(1.44%)、支刷物3例(1.44%)、脑脊液2例(0.96%)。结论 耐药结核病患者以异烟肼为代表的单耐药为主,耐多药次之,不同人群中青年和男性耐药多见,各标本中痰液标本耐药占比最多。应注意耐药结核病患者检测及诊疗工作。     

结核分枝杆菌氟喹诺酮耐药与gyrA基因突变的关系

目的:了解结核分枝杆菌临床分离株氟喹诺酮类药物耐药与gyrA基因突变的关系.方法:选取经过全自动快速分枝杆菌培养鉴定药敏系统(BACTEC-MGIT960)检测的氟喹诺酮类药物敏感株30株,耐药株30株,针对其gyrA基因的氟喹诺酮类药物耐药决定区(QRDR)进行扩增,并将扩增产物进行T-A克隆后进行测序.结果:在这60株结核分枝杆菌临床分离株中,30株敏感株均未在QRDR检出有义突变,30株耐药株中有19株QRDR存在有义突变,主要突变位点为90、91和94.gyrA基因突变占结核分枝杆菌氟喹诺酮类药物耐药菌株的63.3％(19/30).结论:gyrA基因突变与结核分枝杆菌氟喹诺酮类药物耐药密切相关.     

结核分枝杆菌链霉素耐药分离株rpsL基因突变的检测

目的 探讨结核分枝杆菌（结核菌）对链霉素（Ｓｍ）产生耐药性的分子机制,建立直接快速检测结核菌Ｓｍ药物敏感性的试验方法。方法 应用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染分析技术检测３２例结核菌临床分离株的ｒｐｓＬ基因。结果 以结核菌标准株（Ｈ３７Ｒｖ）为对照,３２株结核菌临床分离株中,１０株Ｓｍ敏感株的ｒｐｓＬ基因未见ＳＳＣＰ泳动异常,２２株Ｓｍ耐药株中,１６株（７２．７％）的ｒｐｓＬ     

DNA芯片快速检测结核分枝杆菌利福平耐药rpoB基因突变

目的建立快速检测结核分枝杆菌利福平（RFP）耐药rpoB基因突变的DNA芯片。方法从34株临床痰样本中提取结核分枝杆菌的基因组DNA,采用聚合酶链反应（PCR）扩增含有rpoB基因突变位点的特异DNA片段,荧光标记后与芯片上含有特异突变位点的寡核苷酸探针进行杂交,同时与DNA测序法比较。结果用DNA芯片检测出19株耐药株和15株敏感株,且结果与DNA测序相同,准确率可达88．2％,敏感性为78．9％,特异性为100．0％。结论DNA芯片快速检测结核分枝杆菌对RFP的耐药rpoB基因突变是一种操作简便、准确性、敏感性和特异性较高,且易于开展的方法。     

广西钦州地区结核分枝杆菌相关耐药基因变异特征分析

目的分析广西钦州地区结核分枝杆菌(MTB)相关耐药基因rpoB、katG、inhA、rpsL及embB的变异特征。方法应用聚合酶链式反应(PCR)-反向斑点杂交法对237例MTB-DNA阳性的痰液标本进行结核分枝杆菌5种常见耐药突变基因检测。结果对4种一线抗结核药物耐药菌株占30.38%,其中单耐利福平(RIF)占2.53%,单耐异烟肼(INH)占13.92%,仅对链霉素(STR)耐药占3.80%,对两种及以上抗结核药物耐药(PR)占3.80%,同时对RIF和INH耐药(MDR)占6.33%。5种耐药基因的13个突变位点中,INH inhA基因的-15M位点最多见,其次为RIF的S531L位点和STR的43M位点。结论广西钦州地区的主要耐药菌株为INH耐药,其中又以inhA基因突变为主。     

艾滋病患者淋巴结结核分枝杆菌培养及耐药情况分析

目的比较两种不同方法培养艾滋病(AIDS)患者淋巴结抗酸杆菌的阳性率,并探讨此类患者抗酸杆菌的耐药情况。方法选择该院53例AIDS患者作为研究对象,采集淋巴结,用仪器法(3D法)和L-J法进行抗酸杆菌培养及其耐药实验。结果53例AIDS患者淋巴结经两种方法培养及检测,共培养出24例阳性标本,阳性率45.28%,其中3D法培养阳性阳性率为45.28%(24/53),罗氏培养法阳性率为41.50%(22/53),两种方法阳性率比较差异无统计学意义(χ2=0.15,P>0.05)。药敏结果有9例出现耐药,耐药率为37.5%。结论 3D法与罗氏法相互结合可提高检出率,淋巴结抗酸杆菌的培养和药敏试验能为临床诊断AIDS/TB和指导用药提供重要依据。     

线性探针分析法检测结核分枝杆菌rpoB耐药基因突变的研究

目的研制线性探针分析法检测结核分枝杆菌(结核菌)rpoB基因耐药突变试剂盒。方法设计15条结核菌rpoB基因野生型和突变型的线性探针，固定尼龙膜上；在rpoB基因引物上标记生物素，扩增结核菌DNA，获得生物素标记扩增产物，与rpoB基因线性探针杂交，加入标记过氧化物酶的亲合素，再加四甲基联苯胺显色。结果应用线性探针分析法检测87株结核菌，其与rpoB基因直接测序法、传统药敏法符合率分别为98．8％(82／83)和94．3％(82／87)。结论线性探针分析法检测rpoB耐药基因突变是一种操作简便、特异性高、敏感性高，易开展的方法。     

结核分枝杆菌复合群耐药基因突变检测试剂相关审评要点

正结核病是当前危及人类生命的主要杀手。据世界卫生组织估计,2012年全球约有45万耐多药结核病(MDR-TB)患者,17万人死于MDR-TB,全球1/4的MDR-TB患者在中国[1-3]。鉴于全球耐药结核病的严峻形式,世界卫生组织于2014年推出了《耐药结核病规划管理指南伙伴手册》(下称《手册》),旨在指导耐药结核病的预防、诊断和治疗[4-5]。耐药结核病是指由耐药结核分枝杆菌复合群引起的结核病。实验室药敏试验是确诊耐药结核病的唯一方法。但是,传统的实验室药     

艾滋病合并胫骨非结核分枝杆菌骨髓炎一例

非结核分枝杆菌（NTM）是一种机会致病菌,常发生于免疫抑制人群,NTM骨髓炎是一种罕见的疾病,多数是播散性感染的一部分。该文报道1例艾滋病合并胫骨下段的NTM骨髓炎患者的诊治过程。该例为40岁女性患者,在抗反转录病毒过程中,出现左侧踝关节疼痛入院,结合血培养及影像学,术前诊断为马尔尼菲篮状菌骨髓炎,术后脓液培养NTM阳性,结合病理最终诊断为NTM骨髓炎,予多次手术治疗。术后随访1年余,患者情况良好。该例的诊治过程提示,艾滋病患者出现迅速进展的骨髓炎,应该考虑到NTM骨髓炎的诊断,其诊断依赖于病原体的培养,及时的手术清创和基于药敏试验的抗NTM治疗,对疾病的转归有重要意义。     

吉林省耐多药结核分枝杆菌rpoB及katG基因突变特征分析

目的分析吉林省耐多药结核分枝杆菌临床分离株rpoB、katG基因突变特点,为建立本省快速耐多药检测方法提供参考。方法对吉林省耐多药结核分枝杆菌菌株扩增rpoB、katG基因测序后比对分析。结果耐多药结核分枝杆菌rpoB、katG基因的突变率分别为83.53%和70.6%,突变类型包括点突变、联合突变和缺失。在rpoB基因中,82.30%突变发生在RRDR区域,最常见突变位点为rpoB 531、rpoB 526、rpoB 516。KatG基因突变率为70.6%,最常见突变位点为katG315,占所有突变的68.55%。结论吉林省耐多药结核分枝杆菌最常见突变位点为rpoB531、rpoB 526、rpoB 516和katG 315。     

耐药结核分枝杆菌基因变异研究

目的 研究多药结核分枝杆菌ｋａｉＧ、ｉｎｈＡ基因的变异机理。方法 用ｋａｔＧ、ｉｎｈＡ基因片引物,聚合酶链反应扩增产物,克隆后制质粒、直接测定ＤＮＡ序列。结果 １５株耐异烟肼菌株均有ｋａｔＧ基因突变,主要为点突变,其中１４株有４６３位和３１５位ＡＡＰ２密码改变,在１８个耐异烟肼菌株中,全部出现基因ｉｎｈＡ 基因变异,主要为点突和人,以单个点变异主,各菌株变异不同,ｋａｔＧ、ｉｎｈＡ基因同时出现变异     

结核分枝杆菌耐药特点分析

目的分析临床分离结核分枝杆菌的耐药特点。方法用改良罗氏培养基间接药敏实验绝对浓度法检测结核菌的耐药情况。结果210株临床分离株中对6种药物全部敏感仅有1株;两种以上药物耐药的有148株,耐药率70.48%;同时耐INH和RFP的菌株有90株,耐药率42.86%。结论耐药及耐多药结核菌感染是临床治疗结核病的一个严重问题;临床分离的结核杆菌耐药率和耐多药率高;分析临床分离株的耐药特点,对控制结核病传染及指导临床合理用药具有重要意义。     

结核分枝杆菌mpt64基因突变研究

目的分析结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)mpt64基因突变情况。方法提取MTB标准株H37Rv和45株MTB临床株的DNA,扩增mpt64基因并进行序列分析。结果 MTB标准株H37Rv和44株MTB临床株的mpt64基因无突变,1株MTB临床分离株的mpt64基因存在63个碱基的缺失突变。结论结核分枝杆菌mpt64基因突变频率低。