基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术在病原菌鉴定中的应用

目的探讨基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)在快速鉴定血流感染病原菌的应用价值,并分析MALDI-TOF MS方法鉴定病原菌的准确性。方法收集321例血流感染患者的血液标本进行血培养,微生物室细菌培养结果均为阳性。从血培养阳性瓶中取病原菌至分离胶促凝管中,应用MALDI-TOF MS对富集的病原菌进行菌种鉴定。同时,对血培养瓶中的阳性标本进行常规培养,获得的纯菌落采用VITEK 2 COMPACT微生物分析系统进行检测,并将MALDI-TOF MS检测结果与VITEK 2 COMPACT结果进行对比。若检测结果有差异,则进一步进行基因测序法予以确定。结果 321例阳性血培养标本中共分离出180株革兰阴性杆菌, MALDI-TOF MS鉴定准确率为97.78%,无鉴定错误,但4株无鉴定结果;分离出的141株革兰阳性菌中,主要以革兰阳性球菌为主, MALDI-TOF MS鉴定准确率为84.39%, 1株蜡样芽胞杆菌误鉴定为大肠埃希菌,出现了菌属水平鉴定错误,其余为种类鉴定错误。结论与传统血培养及生化鉴定比较, MALDI-TOF MS在血流感染中的鉴定符合率较高,且鉴定方法简便、迅速。     

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱在血培养阳性标本鉴定方面的应用进展

<正>如今,随着抗菌药物特别是广谱抗菌药物的广泛应用,细菌耐药问题已逐渐成为全球性问题。怎样及时而有效地选择抗菌药物成为临床医生面临的一个难题。特别是在菌血症或是脓毒症等严重感染患者中,早期选用敏感抗菌药物可以有效降低病死率[1]。但传统的细菌鉴定多采用手工法,依靠形态学、革兰染色镜检和生物化学反应,速度慢,不能满足临床诊断和治疗的需要。近年来新发展起来的基质辅助激光解析电离     

应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定常见细菌和酵母菌

目的 应用MALDI-TOF MS鉴定临床常见病原菌.方法 复苏560株临床分离株,其中革兰阳性细菌(G+ )260株、革兰阴性细菌(G-)180株、酵母菌60株、肠道致病菌60株.MALDI-TOF MS鉴定结果与Vitek2 Compact全自动微生物鉴定系统比对,结果差异菌株采用16S rDNA测序验证.结果 MALDI-TOF MS与Vitek2 Compact鉴定结果比较,G+细菌鉴定符合率为94.6％( 246/260),G-细菌鉴定符合率为96.7％ (174/180),酵母菌鉴定符合率为95.0％ (57/60),肠道致病菌鉴定符合率为93.3％( 56/60).15株鉴定结果不符的菌株经16S rDNA测序确认,结果与Vitek2Compact和MALDI-TOF MS鉴定符合率分别为26.7％ (4/15)和66.7％( 10/15).结论 MALDI-TOF MS可用于常见病原微生物鉴定,其快速、低成本的特点具有推广价值.     

感染性疾病多学科交叉研究专题基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术在病原菌鉴定中的应用

目的 探讨基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)在快速鉴定血流感染病原菌的应用价值,并分析MALDI-TOF MS方法鉴定病原菌的准确性.方法 收集321例血流感染患者的血液标本进行血培养,微生物室细菌培养结果均为阳性.从血培养阳性瓶中取病原菌至分离胶促凝管中,应用MALDI-TOF MS对富...     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术及其在临床微生物鉴定中的应用

为满足临床日益增长的微生物鉴定需要,在不断提高微生物鉴定仪器的机械化与自动化的同时,微生物学家也试图寻找新的分离鉴定方法以满足临床需求.虽然这种探求从未停止,但目前在世界各地临床微生物实验室,传统的鉴定方法仍占绝对主导地位.基于表型特征进行微生物鉴定的传统鉴定方法受外部条件影响较大,且需要较长的时间才能获得鉴定结果,不能满足临床诊断和治疗的需求.虽然基于特定基因序列(如16SrRNA)的分子生物学检测为临床微生物鉴定提供了一种灵敏、快速的鉴定手段,但技术复杂、费用高,不能满足临床微生物实验室常规鉴定需求.     

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱在大肠埃希菌分群中的应用

摘要 目的 评价基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对大肠埃希菌菌群的鉴别能力。方法 通过VITEC 2 Compact全自动细菌鉴定仪及药敏分析系统对人和动物源性的大肠埃希菌敏感菌株进行初步筛选,然后将获得的21株人源和42株动物源性大肠埃希菌进行16S rRNA基因测序及同源性分析,同时通过MALDI-TOF MS技术对大肠埃希菌指纹图谱进行鉴定。结果 与16S rRNA基因测序相比,不同来源的菌株蛋白质特征图谱呈现明显的分群趋势,MALDI-TOF MS法对不同来源的菌株具有较强的鉴别区分能力。结论 MALDI-TOF MS法可用于菌株来源差异性的鉴别。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术在临床微生物鉴定中的应用及价值

摘要：20世纪90年代末,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS）技术开始用于病原菌鉴定,目前已逐步用于临床微生物检验工作,对临床感染性疾病的快速诊断意义重大。本文阐述MALDI-TOF-MS技术鉴定微生物的原理和流程、在临床微生物鉴定中的应用和对微生物检验结果回报时间（TAT）改进的作用。     

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱直接检测尿路感染病原菌性能评价

目的探讨基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)直接检测尿路感染病原菌的性能。方法收集1 000例门诊及住院患者中段尿样本,接种于固体培养基,采用MALDI-TOF MS仪和全自动微生物鉴定系统对单个菌落进行鉴定;对中段尿样本进行前处理后直接采用MALDI-TOF MS仪进行分析。结果1 000例中段尿样本中,培养法检出215例菌落计数≥10~5 CFU/mL的细菌,阳性检出率为21.5%;其中162例分离到单一细菌,53例分离到混合细菌。2种仪器对215株细菌鉴定结果的符合率达100%。革兰阴性杆菌占76.3%,革兰阳性菌占23.7%。MALDI-TOF MS仪直接检测检出185例菌落计数≥10~5 CFU/mL的细菌,阳性检出率为18.5%;其中145例分离到单一细菌,40例分离到混合细菌。直接检测法无假阳性,但阳性检出率较培养法低,阳性漏检率达到14.0%(30/215)。结论采用MADLI-TOF MS仪直接检测感染性中段尿样本,具有鉴定诊断时间短、成本低和适用性好的优点。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在临床病原菌鉴定中的应用

目的探讨基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)系统用于快速鉴定临床分离菌的可靠性和实用性。方法收集南京军区南京总医院2013年7~10月自临床标本分离的非重复细菌1 061株,分别使用MALDI-TOF MS和Vitek 2 Compact全自动细菌鉴定仪系统进行鉴定,结果不一致的菌株采用16S r DNA测序验证。结果 1 061株临床分离菌中1 058株(99.7%)经MALDI-TOF MS系统正确鉴定到属水平,1 016株(95.8%)正确鉴定到种,其余3株(0.3%)未给出鉴定结果。5株鉴定结果不一致的菌株经16S r DNA测序确认,结果与MALDI-TOF MS和Vitek 2 Compact鉴定符合率分别为40.0%(2/5)和0(0/5)。结论 MALDI-TOF MS可以作为一个快速、准确和价廉的工具应用于临床分离菌的鉴定。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术在快速检测病原菌中的研究进展

摘要：传统的临床微生物学检验依赖于长时间的对病原菌的分离、培养及复杂的生化鉴定,有些病原微生物的生化反应不典型则难以准确鉴定。分子生物学技术如PCR技术要求较高,常规实验室不易开展。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）作为一种跨学科的检测新技术,在细菌和真菌的快速鉴定、细菌的耐药性检测、流行病学分析方面呈现出较传统鉴定法较多的优势。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在临床微生物检验中的应用与发展

正基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)自20世纪90年代开始成功用于细菌的快速鉴定,其原理是根据不同细菌的特征性蛋白指纹图谱进行细菌鉴定,打破了传统生化反应方法烦琐的鉴定流程,大大缩短了检测时间,降低了检测成本,且具有准确、高通量等优势,为临床微生物检验带来了革命性的发展。MALDI-TOF MS     

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱快速检测ST11型产KPC-2肺炎克雷伯菌

目的采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)筛选并验证ST11型产KPC-2肺炎克雷伯菌的特异峰,建立快速检测此型别肺炎克雷伯菌的方法。方法收集前期已进行碳青霉烯酶基因检测和多位点序列分型(MLST)的118株肺炎克雷伯菌作为特异峰筛选组,其中ST11型产KPC-2肺炎克雷伯菌67株,非ST11型产KPC-2肺炎克雷伯菌51株,采用Clinpro Tools 3.0软件和Flex analysis 3.0图谱分析软件筛选出ST11型产KPC-2肺炎克雷伯菌的特异峰;再收集前期已进行碳青霉烯酶基因检测和MLST的另外89株肺炎克雷伯菌作为特异峰验证组,严格按照试验条件获得质量图谱,对特异峰的特异性进行验证并进行重复性试验;最后随机收集95株肺炎克雷伯菌临床分离株及其临床鉴定图谱,利用特异峰直接判断菌株是否为ST11型产KPC-2肺炎克雷伯菌,同时对菌株进行碳青霉烯酶基因检测和MLST,以评估特异峰的临床应用价值。结果利用分析软件筛选获得ST11型产KPC-2肺炎克雷伯菌的最佳特异峰为m/z 4 521;在试验条件下,以该峰作为检测此型别细菌的特异峰,其特异性和敏感性分别为98.1%和97.3%,且该特异峰的重复性达97.4%;采用临床鉴定图谱对特异峰的临床应用价值进行评估,其特异性和敏感性分别为95.2%和96.9%。结论 MALDITOF MS可检出ST11型产KPC-2肺炎克雷伯菌的特异峰m/z 4 521。可依据细菌鉴定图谱是否存在此特异峰来直接检测ST11型产KPC-2肺炎克雷伯菌,该特异峰具有较高的特异性和敏感性,可快速、准确地为临床合理、有效的治疗和医院感染的控制提供依据。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在临床微生物领域的应用进展

在临床微生物实验室,革兰染色、菌落形态、显微镜检查、选择培养基的生长特点、各种手工或自动的生化试验是细菌、酵母、真菌的主要鉴定方法。这些方法依赖细菌生产代谢过程,需要长时间的孵育,一般需要24～48h,不能满足临床对感     

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱在革兰阴性杆菌对β内酰胺类抗生素耐药性检测中的应用进展

正β内酰胺类抗生素是一类临床应用最为广泛的抗菌药物,它通过干扰细菌细胞壁肽聚糖的交联结构发挥杀菌作用。该类抗生素包括青霉素及其衍生物、头孢菌素、单酰胺环类和碳青霉烯类等,其中尤以碳青霉烯类抗生素的抗菌活性最强。2013年CHINET细菌耐药性监测数据显示:肠杆菌科细菌对头孢菌素的耐药率约为20%,对碳青霉烯类抗生素的耐药率接近7%;不发酵糖革兰阴性杆菌对头孢菌素和碳青霉烯类抗生素耐药率均接近50%~[1]。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱快速鉴定革兰阴性杆菌的研究

目的评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix assisted laser desorption ionisation time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS）技术检测临床常见革兰阴性杆菌的临床应用价值。方法1665株革兰阴性杆菌经VITEK2Compact鉴定到属和种,采用MALDI—TOF—MS对1665株革兰阴性杆菌进行种属检测,并计算鉴定正确率。结果1665株菌包括27个菌属,73个菌种。主要革兰阴性杆菌菌属鉴定整体正确率为95．7％,菌种整体正确率为85．5％。其中菌属鉴定正确率最高的是布鲁菌属和沙门菌属,正确率均为100．0％;菌种鉴定正确率最高的为危险罗尔斯顿菌和摩氏摩根菌,正确率均为100．0％。结论MALDI—TOF—MS技术鉴定细菌快速、准确、方便,且成本低,适用于临床实验室的快速鉴定诊断。     

表面增强激光解析电离飞行时间质谱快速鉴定血液大肠埃希菌感染

目的探讨用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)快速鉴定引起血流感染的大肠埃希菌。方法用SELDI-TOF-MS建立大肠埃希菌的蛋白质指纹模型。临床分离的168株菌经SELDI-TOF-MS检测,数据与大肠埃希菌模型进行相似度比较,对该模型进行评价。SELDI-TOF-MS检测88株微生物血培养分析仪阳性报警的革兰阴性杆菌,与大肠埃希菌蛋白质指纹模型进行相似度比较,对其中的大肠埃希菌进行鉴定。结果 19株建模组菌株经PCR及测序鉴定均为大肠埃希菌,并建立了该菌的蛋白质指纹模型;用168株验证组菌株对该模型进行验证,对大肠埃希菌鉴定的符合率为100%(60/60);用该模型对88株引起血流感染的革兰阴性杆菌进行鉴定,鉴定结果与传统微生物学鉴定结果具有较高的一致性(k=0.905)。结论 SELDI-TOF-MS可快速鉴定引起血流感染的大肠埃希菌,为血流感染细菌的快速诊断提供了新技术。     

产OXA-23鲍曼不动杆菌的基质辅助激光解析电离飞行时间质谱检测研究

目的应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱快速检测产OXA-23鲍曼不动杆菌。方法 125株泛耐药鲍曼不动杆菌及110株碳青霉烯类敏感鲍曼不动杆菌为研究对象,用PCR和测序方法检测OXA基因。美罗培南与鲍曼不动杆菌37℃孵育2h后,上清液进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱检测,统计学分析各质谱峰的ROC曲线。结果 125株泛耐药鲍曼不动杆菌均携带OXA-23基因。碳青霉烯类敏感鲍曼不动杆菌的质谱峰质荷比（m/z）为384m/z,406m/z,428m/z,而泛耐药鲍曼不动杆菌的质谱峰为358m/z,380m/z,402m/z,406m/z,424m/z,428m/z,446m/z,468m/z。质谱峰358m/z与380m/z的ROC曲线下面积（AUC）均为0.99。通过质谱峰的变化鉴定产碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌,灵敏度与特异度均为100%。结论基质辅助激光解析电离飞行时间质谱可以快速、准确检测碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌,指导临床合理使用抗菌药物。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱微生物鉴定系统性能验证方案的建立

目的建立基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱系统(MALDI-TOF MS)在常规临床微生物鉴定中的性能验证方法,指导临床实验室规范微生物鉴定程序。方法选取标准菌株、质控菌株和临床菌株共115株,包含革兰阳/阴性球菌30株、革兰阳/阴性杆菌31株、真菌30株,厌氧菌、苛养菌各12株,所有菌株均经Vitek Compact鉴定和/或细菌16S r DNA、真菌ITS DNA测序分析验证。任意选择3种MALDI-TOF MS微生物鉴定系统厦门质谱、布鲁克质谱、安图质谱,采用检测系统推荐方法进行菌株鉴定,进行准确度验证试验。精密度验证:选取标准菌株和临床菌株10株,1位操作者使用3个检测系统对10株菌株分别进行质谱鉴定3次,连续鉴定3 d; 3位操作者使用3个检测系统对10株菌株每d分别进行质谱鉴定3次,连续鉴定3 d,从而验证鉴定结果的重复性。结果厦门质谱、布鲁克质谱、安图质谱对标准/质控菌株(除外厌氧菌)的鉴定符合率为100%;对临床菌株的属水平鉴定符合率为100%;对革兰阴/阳性杆菌的种水平鉴定符合率分别为100%、100%、96.77%;对革兰阳性球菌的种水平鉴定符合率分别为96.67%、96.67%、100%;对真菌的种水平鉴定符合率均为90%一致;对苛养菌的种水平鉴定符合率均为100%;对厌氧菌鉴定符合率为91.67%种水平一致。精密度验证试验结果重复性100%。结论 3种MALDI-TOF MS系统在革兰阳/阴性球菌、革兰阳/阴性杆菌、真菌、苛养菌鉴定的准确度和精密度符合要求,验证通过。本文建立的微生物鉴定质谱仪性能验证方案可满足综合性医院临床微生物实验室常规鉴定基本要求。