芝麻香型白酒高温大曲微生物总DNA提取的改良方法

从常温研磨、蛋白酶K和R nase的加入对传统CTAB法进行改良,并结合试剂盒法,提出了一种高效提取高温大曲微生物总DNA的方法。该方法获得的总基因片段大小约21Kb;A260/A280=1.878;A260/A230=1.706;PCR反应抑制物少,可直接用于16S rDNA的扩增;并通过构建克隆文库技术和变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析后发现高温大曲中细菌多样性丰富,能一定程度上反映微生物群落结构和组成。研究结果表明该方法提取的DNA适用于芝麻香高温大曲中微生物的分子生态学研究。     

中高温大曲中产酯酶细菌的筛选

通过在培养基中添加底物三丁酸甘油酯,从中、高温大曲中初步筛选到产酯酶细菌15株.以乙酸对硝基苯酯为底物,其中12#菌株表现出最高催化活力其酶活为0.83U/mL;以乙醇、己酸为底物,其中10#菌株表现出最高催化活力其酶活为6.7U/mL.对上述两种测定方法中相对酶活较高的菌株恒温振荡培养(36℃、150r/min) 72h后取其发酵液离心(12000r/min,4℃)20min进行气相色谱分析,结果表明这些菌株都能产生一定量的酸类、醇类和酯类物质.     

肖尔布拉克高温大曲中细菌分离及产香研究

从肖尔布拉克酒业酱香型高温大曲中通过常温法和热处理法分离出了39株细菌,采用麸皮浸出汁培养基发酵,发现其中15株细菌的发酵液酱香味明显。将这15株细菌进行复发酵并进行蛋白酶活力的测定,显示15株菌株均有蛋白酶活力,其中有6株活力较强,分别为C1-3,C4,C8,R12,R19和R20。对这6株菌株进行基因组测序,C1-3、C4、R19和R20为枯草芽孢杆菌,C8为甲基营养型芽孢杆菌,R12为考克氏菌。对该6株菌发酵液进行气相色谱质谱分析,结果显示,6株菌检测出的物质数分别为:8种、19种、24种、15种、8种和9种。其中C1-3和R19生成的四甲基吡嗪含量较高。     

绿衣观音土曲细菌DNA的提取

采用土壤DNA提取试剂盒和SDS-酶裂解法分别提取观音土曲的细菌DNA。基于SDS-酶法裂解原理的提取方法获得的结果比较理想,此方法获得的基因组片段大于15kb;A260/A280为1.82,A260/A230为1.54,DNA纯度很高;提取的DNA不经纯化能直接用于细菌16S rDNA的扩增。该法提取的DNA能直接用于后续的分子生物学实验操作。     

芝麻香型白酒高温大曲嗜热细菌群落研究

利用高温筛选和传统培养方法,借助于核糖体DNA扩增片段限制性内切酶(ARDRA)分型、分子鉴定以及系统发育分析技术,研究了芝麻香型白酒高温大曲嗜热细菌群落结构。结果显示,55℃高温筛选获得的85株嗜热细菌分属于4个菌属,分别为Thermoactinomyces sp.,Bacillus sp.,Schlegelella sp.以及Streptomyces sp.,其中第1优势菌为Thermoactinomyces vulgaris,丰度为69.41%。该研究首次报道了芝麻香型白酒高温大曲中的嗜热细菌类群,为进一步探索其功能性以及建立其与芝麻香型白酒风味的相关性奠定了基础。     

高温大曲培菌方法的探讨

高温大曲是酱香型白酒酿造中的糖化剂、发酵剂、生香剂,直接影响着产酒质量。新发酵仓由于环境等因素影响,产出的成品曲质量比老仓产出的成品曲质量差。通过培养酯化液来对发酵仓和新稻草进行接种培菌技术,提高了成品曲的质量和优质曲比率。     

高温大曲酸性蛋白酶高的原因何在

就白酒高曙大曲中酸性蛋白酶高的原因进行了试验和分析，旨在进一步提示白酒生产中蛋白质发酵途径以及蛋白酶的作用。全文分六大部分：（１）制曲温度与酸性蛋白酶的生成；（２）大曲测定引起的深思；（３）高温大曲酸性蛋白酶高的证实；（４）根霉培养试验；（５）生料培养试验；（６）熟料培养嗜热芽胞杆菌试验。     

偏高温大曲中一株嗜热细菌的分离与鉴定

从四川宜宾叙府酒业偏高温大曲中分离筛选得到一株嗜热细菌,其最适生长温度为57－67℃,最高耐受温度为72℃。经生理生化分析和16SrDNA系统发育分析,初步鉴定属于Lysinibacillus属。表明多粮浓香型白酒生产过程中存在一些极端微生物,同时亦为分析多粮浓香型白酒酒体形成原因奠定了一定的理论基础。     

利用非培养技术研究芝麻香型白酒高温大曲的细菌群落多样性

采用构建16S rDNA克隆文库的非培养方法,对我国芝麻香型白酒高温大曲细菌的群落结构及其多样性进行研究。文库中含有24个分类操作单元(OTU),优势菌属(丰度)分别为Thermoactinomyces sp.(51.99%),Kroppenstedtia sp.(17.38%),Saccharopolyspora sp.(13.87%),Lactobacillus sp.(6.95%)和Weissellasp.(4.96%)。首次在高温大曲中发现Thermoactinomyc vulgaris和Kroppenstedtia eburnea;同时发现3个潜在细菌新种,分属于Saccharothrix sp.,Streptoalloteichus sp.和Pseudofulvimonas sp.。     

浓香型大曲中微生物总DNA的PCR优化

利用SDS-酶法、试剂盒法提取大曲总DNA,对粗提DNA梯度稀释稀释,同时按浓度梯度加入BSA进行PCR扩增。SDS-酶法提取总DNA的量是试剂盒法的300倍;对粗提DNA稀释50倍同时添加BSA浓度为0.6ng/μL的PCR扩增效果最佳。利用SDS-酶法能够最大量的提取曲药中总DNA,对总DNA进行稀释同时加入BSA能够有效的进行PCR扩增。     

从颗粒污泥中提取DNA的几种不同方法比较

为了从颗粒污泥中提取出DNA,分别采用CTAB法、TENPC法、Takara试剂盒三种方法提取总DNA,通过提取的核酸总量、纯度、片段分布情况指标来评价不同的提取方法对颗粒污泥总DNA质量的影响,并考察了三种不同的溶液洗涤样品以及三种不同的细胞破壁方法对提取的DNA质量的影响.结果表明:采用脱腐缓冲液、PBSbuffer、EDTA buffer洗涤,液氮研磨破壁后TENPC法提取DNA的效果最好,提取的总量最多,大片段提取效果好,这种方法较适合从颗粒污泥中提取DNA.     

动物明胶中3种DNA提取方法的比较研究

基于DNA水平的分子生物学检测方法,因其高特异性、高灵敏度且简便快速等优点,成为明胶动物来源鉴别检测的有效方法。但明胶的特殊加工工艺给DNA的提取带来了一定的困难。研究中选取了牛皮明胶、牛骨明胶和猪皮明胶等不同动物品种和不同动物组织来源的明胶产品,采用了试剂盒法、蛋白沉淀法和裂解抽提法等3种DNA提取方法,从DNA提取质量、提取效率及明胶动物种类来源PCR扩增等方面对3种方法进行了比较。研究结果表明,裂解抽提法所提取的明胶中的DNA质量优于前2种方法,且适合于进一步的PCR扩增检测,是适合于明胶DNA提取的有效方法。     

四种酵母基因组提取方法的比较

为获得简便高效的提取酵母基因组DNA的方法,分别采用溶菌酶法、蜗牛酶过夜处理法、蜗牛酶反复冻融法和珠磨法处理酵母细胞,在荧光倒置显微镜下观察、比较细胞的破壁情况,提取基因组后利用紫外分光光度计测定样品中DNA的浓度和纯度以及琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增检测基因组DNA的质量。结果表明,除溶菌酶法外,其他3种方法均能提取出高质量的酵母基因组DNA。珠磨法提取酵母基因组具有质量高、成本低、时间短且操作简单的优点。     

高温大曲中微生物的分离与鉴定

采用传统分离培养方法和现代分子生物学方法,对酱香型白酒高温大曲中微生物的多样性进行研究分析。从酱香型白酒高温大曲中分离出147株微生物,其中97株为细菌,包括芽孢杆菌、放线菌、葡萄球菌、微球菌4类;50株霉菌,包括青霉、曲霉、毛霉、交链孢霉、茎点霉菌、球毛壳、散囊菌、红曲霉8类,研究结果表明,高温大曲中的微生物具有高度的多样性。     

转基因稻米DNA 提取方法的比较研究

目的：建立一种以水稻种子为原料,简便、快速、有效的基因组DNA 提取方法,作为转基因稻米的PCR 检测基础。方法：选择传统的CTAB 法、改良的碱处理法、高温水煮法,以转基因糙米、非转基因糙米、转基因精米为材料提取DNA,并对提取物进行检测。结果：改良的碱处理法提取的DNA 模板的完整性、纯度和PCR 反应方面与传统CTAB 法相近,且比CTAB 法的产率高、耗时短、成本低。结论：改良的碱处理法可以代替传统的CTAB 法用于转基因稻米检测中DNA 模板的制备。     

6 种食用香辛料基因组DNA提取方法比较

采用TIANGEN植物基因组DNA提取试剂盒法、TIANGEN DNAsecure新型植物基因组DNA提取试剂盒法、QIAGEN DNeasy plant kit法、Nucleospin? Food kit法、改良十六烷基三甲基溴化铵（cetyltrimethylammonium bromide,CTAB）法和十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate,SDS）-CTAB法6 种方法对来自植物根、茎、叶、花蕾、果实及种子的19 种常见食用香辛料的DNA进行提取,并比较各方法的提取效果。结果表明,QIAGEN DNeasy plant kit法和TIANGEN植物基因组DNA提取试剂盒法所得DNA的聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增成功率最高,但QIAGEN DNeasy plant kit法提取的DNA质量浓度低,不利于后续研究。本研究建议将TIANGEN植物基因组DNA提取试剂盒法作为食用香辛料基因组DNA提取的优选方法,并用该方法进行市售香辛料粉的DNA提取。结果显示,所有市售香辛料粉的DNA质量浓度、纯度及PCR扩增效率均符合实验要求。表明TIANGEN植物基因组DNA提取试剂盒法适合食用香辛料DNA提取,而对于皮类及坚硬的食用香辛料应增加样品量及裂解时间。     

银耳芽孢基因组DNA五种提取方法的比较

采用酚仿法、CTAB法、蛋白酶K法、氯化苄法和盐析法五种方法分别提取银耳芽孢基因组DNA,用吸光度估计DNA的纯度和得率、RAPD(随机扩增多态DNA)技术和限制性内切酶酶切反应评价DNA的质量.结果表明:五种方法所提的DNA纯度及产率有差别,氯化苄法和蛋白酶K法的产率要高于另外三种方法,但CTAB法所提DNA纯度最高.综合而言,CTAB法是五种方法中最为适合银耳芽孢基因组DNA提取的方法.