高效液相色谱法测定莜麦米酒中γ-氨基丁酸

建立紫外—高效液相色谱测定莜麦米酒中的γ-氨基丁酸(γ-Aminobutyric acid,GABA)含量的分析方法。利用碱性条件下,GABA可与邻苯二甲醛(OPA)发生衍生化反应,生成具有较强紫外吸收的衍生物。采用紫外—高效液相色谱仪检测,色谱条件:Eclipse XDB-C18分析柱(5μm,4.6×150 mm),以50 mmol/L的乙酸钠(pH6.8)—甲醇—四氢呋喃(THF,A相,82∶17∶1;B相,22∶77∶1,V∕V)为流动相进行梯度洗脱,可检测到GABA在0.04～0.5 g/L范围内与GABA峰面积的线性关系良好R2=0.9985,样品衍生时间1 min最佳,平均回收率为99.5%,精密度相对标准偏差(RSD)为1.6%,重复性(RSD)为0.66%,最低检出限为0.0254 g/L。方法简单快捷、重复性好、灵敏度高,可用于莜麦、莜麦发酵酒等中GABA含量测定。     

高效液相色谱法测定乳酸菌中的γ-氨基丁酸

建立了邻苯二甲醛柱前衍生高效液相色谱法.定量测定短乳杆菌中γ-氨基丁酸的方法,为进一步研究乳酸菌中的γ-氨基丁酸奠定了方法基础.在对浓缩发酵上清液柱前衍生后,利用Nova2pakC18色谱柱,以50mmol/L的乙酸钠(pH6.8)-甲醇-四氢呋喃(A相,82:17:1;B相,22:77:1,V/V)为流动相进行梯度洗脱,可以检测到痕量γ-氨基丁酸(2.2mg/100g).精确度和回收率实验表明,该方法可以用于痕量γ-氨基丁酸的检测.     

高效液相色谱法测定乳酸菌发酵液中γ-氨基丁酸

通过对衍生试剂浓度、衍生时间、衍生温度、检测波长、流动相比例与柱温条件的选择,建立了一种高效液相色谱（HPLC）法灵敏检测发酵液中γ-氨基丁酸（GABA）含量的方法。以邻苯二甲醛为衍生化试剂,衍生时间5 min,衍生温度为室温,色谱条件为：检测波长228 nm,流动相为乙腈-20 mmol/L结晶乙酸钠溶液（21∶79,V/V）,柱温30℃,流速0.8 m L/min。结果表明,在γ-氨基丁酸含量0.05μg/m L～0.50 mg/m L范围内线性关系良好（相关系数R2=0.999 4）,平均加标回收率为91.87%～105.58%,精密度试验结果相对标准偏差（RSD）为0.55%～3.74%(n=5),检出限为0.02μg/m L。采用该方法检测发酵液中γ-氨基丁酸含量,其含量范围在0.157～0.369 mg/m L之间。该方法操作简单、灵敏、准确可靠,适用于发酵液中γ-氨基丁酸含量的检测。     

高效液相色谱法测定固体饮料中γ-氨基丁酸含量

建立了一种快速准确地测定固体饮料中γ-氨基丁酸含量的高效液相色谱分析方法:采用丹磺酰氯(Dansyl-Cl)为柱前衍生化试剂,色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18,流动相为25 mmol/L乙酸钠(p H=6.0)和乙腈的混合溶液(体积比为68∶32),流速为1.0 m L/min,柱温30℃,等度洗脱,紫外检测波长216 nm。结果表明,该方法的线性范围为0.002 5 mg/m L~0.1 mg/m L,R2=0.999 5,线性关系良好,检出限2.514 ng,平行试验6次,γ-氨基丁酸质量浓度的相对标准偏差(RSD)为0.89%,3个不同浓度的加标回收率在96.00%~102.39%之间,回收率相对标准偏差(RSD)在0.80%~2.87%之间。与传统的试验方法相比,该方法具有基线稳定,灵敏度高,线性范围广,回收率高及重现性好等特点。     

樟芝菌粉的氨基酸测定及营养评价

建立了柱前衍生化高效液相色谱(HPLC)测定樟芝菌粉中氨基酸含量的方法,并进行营养评价分析。样品以邻苯二甲醛(OPA)为衍生化试剂衍生后进行HPLC分析,色谱条件为:Thermo Hypersil GOLD Dim色谱柱(150mm×4.6mm,3μm),流动相A为20mmol/L醋酸钠∶0.3%四氢呋喃∶0.02%三乙胺(p H7.2),流动相B为100mmol/L醋酸钠∶甲醇∶乙腈(200∶450∶350),流速为1m L/min,检测波长为338.1nm;采用氨基酸比值系数法对樟芝菌粉进行营养评价。结果表明:樟芝菌粉中含有20种游离氨基酸、18种结合氨基酸,氨基酸的种类和含量丰富;菌粉中除苯丙氨酸+酪氨酸外,其余几种必需氨基酸均低于WHO/FAO模式谱,氨基酸配比合理性不高,菌粉中第一限制性氨基酸为蛋氨酸+半胱氨酸,樟芝菌粉含有γ-氨基丁酸,含量为1.57mg/g。     

柱前衍生反相高效液相色谱法测定 草本水杨梅叶中氨基酸含量

目的采用柱前衍生反相高效液相色谱法对草本水杨梅叶中氨基酸进行测定。方法样品以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂,与草本水杨梅叶中氨基酸柱前衍生,采用Ultimate Amino Acid氨基酸分析专用柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:A为乙腈-水(80:20,V:V),B为乙腈-三水合乙酸钠缓冲溶液(7:93,V:V,p H 6.5),梯度洗脱;柱温35℃,流速1.0 m L/min,检测波长为254 nm。结果 20种氨基酸在0.039~1.250 mmol/L内呈良好的线性关系(r20.9996)。20种游离氨基酸平均回收率在96.51%~108.06%之间,RSD在0.36%~2.08%之间(n=6);水解氨基酸平均回收率在95.29%~102.13%之间,RSD在0.85%~2.45%之间(n=6)。结论该方法可用于草本水杨梅中氨基酸的检测,其灵敏度高且准确,具有良好的重复性及稳定性。     

732阳离子交换树脂对屎肠球菌谷氨酸脱羧酶活性的促进作用

通过对732阳离子交换树脂对屎肠球菌谷氨酸脱羧酶（glutamate decarboxylase,GAD,EC4.1.1.15）活性的影响进行探讨,构建了732阳离子交换树脂-细胞GAD复合转化体系。结果表明：经含0.2?mol/L?L-谷氨酸（L-glutamic acid,L-Glu）的0.2?mol/L乙酸-乙酸钠缓冲液（pH?4.2）平衡的732阳离子交换树脂可显著提高屎肠球菌细胞GAD的转化活性,γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）产量较对照组增加了32.30%;L-Glu/谷氨酸一钠（monosodium glutamate,MSG）（2∶1）固体混合物能有效调节反应体系的pH值和维持反应液的底物浓度,显著增加GABA产量,当添加量为30?g/L时,GABA产量较不添加L-Glu/MSG（2∶1）固体混合物的对照组提高了52.40%;732阳离子交换树脂与L-Glu/MSG（2∶1）固体混合物对细胞GAD的转化活性具有协同促进作用,适宜的732阳离子交换树脂-细胞GAD复合转化体系组成为732阳离子交换树脂10?g、0.3?mol/L?MSG溶液（溶于0.2?mol/L乙酸-乙酸钠缓冲液,pH?4.2）10?mL、100?mg/mL屎肠球菌细胞悬液10?mL和L-Glu/MSG（2∶1）混合物30?g/L。在该反应体系下,80?r/min、40?℃水浴振荡器反应24?h,GABA产量为（4.57±0.11）mmol,较对照组GABA产量（（2.29±0.08）mmol）提高了99.56%。     

柱前在线衍生-高效液相色谱法测定保健食品纳豆胶囊中的牛磺酸

建立了检测保健食品中牛磺酸的柱前在线衍生-高效液相色谱方法。样品经过去离子水提取,与邻苯二甲醛在线衍生,以A相：0.02 mmol/L的乙酸钠（pH 7.2,0.018%三乙胺,0.3%的四氢呋喃）;B相：100 mmol/L的乙酸钠（pH 7.2）20%,乙腈40%,甲醇40%为流动相,梯度洗脱,采用Thermo HypersilODSC18色谱柱（4.6mm×150mm,5μm）分离,紫外线检测。方法检出限为0.51 mg/L;标准曲线的线性范围为0-1000.0mg/L,相关系数R2=0.9992,具有良好的线性关系,加标回收率为103.9%-105.0%,相对标准偏差为0.9%-2.9%。该方法的灵敏度高、准确性好、前处理操作简单,适用于保健食品纳豆胶囊中牛磺酸含量的检测。     

RP-HPLC柱后衍生法检测干酪中6种生物胺

目的:建立干酪中6种生物胺的高效液相色谱-柱后衍生检测方法。方法:采用高氯酸提取干酪中生物胺,以邻苯二甲醛(OPA)为柱后衍生试剂,高效液相色谱-柱后衍生-荧光法检测。采用Agilent Eclipse XDBC18色谱柱;流动相A为乙酸钠-辛烷磺酸钠溶液,流动相B为乙酸钠-辛烷磺酸钠和乙腈混合溶液,流速1.0m L/min,梯度与等度相结合洗脱方式;柱温40℃;荧光探测器激发波长330 nm,发射波长465 nm;衍生剂流量0.3 m L/min,衍生池温度45℃。结果 :采用本洗脱程序,40 min内6种生物胺完全分离;衍生剂OPA质量浓度0.4 mg/m L,流速0.3 m L/min时衍生效果最佳;6种生物胺标准曲线具有良好的线性关系(R20.9982),平行样品相对标准偏差(RSD)3.8%,方法稳定性良好,6种生物胺样品平均回收率89.25%~103.09%。结论:本法样品预处理简便,灵敏度高,重复性好,准确性高,适合检测干酪中的生物胺。     

POD-UPLC检测固体运动营养品中γ-氨基丁酸的含量

建立一种柱前在线衍生-超高效液相色谱法检测固体运动营养品中γ-氨基丁酸(GABA)的方法。样品由2%三氯乙酸溶液按料液比1:5 (g/mL)超声提取30 min,上清液经邻苯二甲醛在线衍生后,以80%乙腈-水(含20 mmol/L乙酸钠溶液,pH2.7)为流动相,检测波长为207.6 nm,外标法峰面积定量。结果表明,GABA在1.0～100.0 μg/mL浓度范围内线性良好,检出限为0.1 mg/kg,定量限为0.5 mg/kg,加标回收率达到96.5%～102.6%。该方法具有操作简单、专属性强、灵敏度高等优点,可满足固体运动营养品中GABA的检测要求。     

HPLC法测定中国白酒中的γ-氨基丁酸和核苷类物质

建立测定白酒中γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）和核苷类物质（腺苷、尿苷）的高效液相色谱分析方法。确定检测γ-氨基丁酸的色谱条件为流动相A∶B（A-乙腈;B-50 mmol/L三水合乙酸钠）=35∶65（体积比）,流速为1.0mL/min,柱温40℃,检测波长为436nm;确定检测核苷类物质的色谱条件为：流动相10%甲醇,流速为0.8 mL/min,柱温40℃,检测波长为254 nm。对20种白酒分析结果显示,不同香型白酒中功能成分差异明显。GABA在浓香型白酒中较高,其中2号酒样中GABA含量达0.867 mg/L。核苷类物质在芝麻香型和酱香型白酒中要高于浓香型,其中9号达到438.960 mg/L。该方法用于白酒中GABA和核苷类物质的分析具有分离效果佳、精密度高、稳定性高的特点。     

HPLC法测定市售白酒中的甲醛含量

本研究建立高效液相色谱法测定市售白酒中甲醛含量的分析方法。采用乙腈-2,4-二硝基苯肼和乙酸钠混合体系作为衍生液,在60℃水浴中进行衍生,提取样品中的甲醛。生成的衍生物经色谱柱Inertsil ODS-3-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)洗脱,流动相为甲醇∶水(68∶32,V∶V),流速1.0 mL/min,柱温40℃,检测波长为360 nm。结果表明,甲醛在0.0125～1.0 mg/L浓度范围内,线性关系良好,3个不同水平的加标回收率为93.27%～98.06%,RSD值为1.98%,检出限为1.5μg/mL,12种市售白酒中的甲醛含量在0.37～12.98 mg/L之间。该方法操作简单,稳定性好,适用于快速检测白酒中甲醛含量。     

柱前衍生-RP-HPLC法测定蜂王幼虫冻干粉中16种氨基酸含量

目的:建立柱前衍生-反相高效液相色谱同时测定蜂王幼虫冻干粉中16种氨基酸含量的方法,并测定29批蜂王幼虫冻干粉中水解氨基酸含量。方法:以异硫氰酸苯酯为柱前衍生试剂,采用Waters Symmetry C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)分析,以乙腈-水(4∶1)溶液和0.03 mmol/L醋酸钠-乙腈(355-15,ph=6.5)进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min,在254 nm波长处测定氨基酸含量。结果:氨基酸在0.0625~1.2500 mmol/L范围内具有良好的线性关系(r≥0.9974),平均平均回收率在94.97%~99.50%之间;检出限为0.0005~0.0015 mmol/L,定量限为0.0075~0.0240 mmol/L。结论:该方法简便易行、准确性高、稳定性好,适于蜂王幼虫冻干粉中氨基酸定量检测。     

高效液相色谱法测定乳与乳制品中 L-羟脯氨酸的含量

目的建立高效液相色谱法测定乳与乳制品中L-羟脯氨酸的含量。方法样品水解衍生后采用C18色谱柱,以乙腈和10 mmol/L乙酸钠(p H=5.0)为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 m L/min,柱温35℃,荧光检测器进行检测。结果 L-羟脯氨酸检出限为0.5 mg/kg,线性范围为1.0~100.0μg/m L,加标回收率在95.3%~102.7%之间,相对标准偏差在1.46%~7.56%之间。结论该方法操作简便、准确、快速,提高了样品检出灵敏度,适用于测定乳与乳制品中L-羟脯氨酸的含量。     

柱前衍生-高效液相色谱法检测运动型饮料中γ-氨基丁酸的含量

该研究建立了一种测定运动饮料中γ-氨基丁酸（GABA）的柱前衍生-高效液相色谱（HPLC）方法。 结果表明,样品由乙腈萃 取后,上清液经邻苯二甲醛（OPA）于45 ℃条件下在线柱前衍生2.0 min后进行HPLC检测。 色谱条件：Waters sunfire C18为色谱柱,以 20 mmol/L的乙酸钠溶液-乙腈（体积比70∶30）为流动相,二极管阵列检测器（DAD）的波长为247 nm,柱温30 ℃,流速1.0 mL/min, 进样量20 μL,外标法定量。 γ-氨基丁酸在1.0～100.0 μg/mL质量浓度范围内线性关系良好（R2=0.998 6）,检出限为0.30 mg/kg,定量 限为1.0 mg/kg,加标回收率为82.5%～90.6%,相对标准偏差（RSD）为2.9%～3.7%。 采用该方法检测出5种运动型饮品中GABA含量 在0.32～16.38 mg/100 mL范围内。 该方法具有操作简单、专属性强、灵敏度高等优点,可满足运动型饮料中γ-氨基丁酸的检测要求。     

超高效液相色谱串联质谱法检测玛咖产品中非法添加西地那非

建立了检测玛咖中西地那非的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法。色谱条件为Agilent SB-C18柱;柱温25℃;流动相为甲醇(10 mmol/L乙酸铵):水(10 mmol/L乙酸铵,m/V)(90∶10,v/v)等度洗脱;流速:0.3 m L/min;进样量:5μL。质谱条件为正离子模式(ESI+),多反应监测模式(MRM);三重四级杆质量分析器;分子离子峰[M+H]+m/z 475.3,子离子为m/z 282.9,碰撞能50 e V;m/z 58.1碰撞能为60 e V。西地那非在0.2~20μg/L范围内线性关系良好,相关系数R2为0.9994。建立的方法准确可靠、灵敏度高,可应用于玛咖产品中西地那非的含量测定。     

利用茶叶制备γ-氨基丁酸的工艺研究

采用邻苯二甲醛柱前衍生高效液相色谱法对富硒茶中γ-氨基丁酸的含量进行测定,利用Intertsil ODS-C18色谱柱,以15mmol/L的乙酸钠,纯乙腈为流动相进行梯度洗脱。以γ-氨基丁酸质量浓度X(mg/mL)对峰面积Y(m AU·min)作回归曲线,得回归方程Y=3 488.4X+23.525,相关系数为0.996 5。选用真空处理和谷氨酸钠浸渍处理两种方法对茶叶中γ-氨基丁酸进行富集,并对比富集效果。研究表明,在真空处理条件下处理10 h,富硒茶中γ-氨基丁酸的富集效果最好,γ-氨基丁酸含量增至0.875 mg/mL,是对照品的9.5倍。富硒茶在1%谷氨酸钠溶液浸渍12 h后效果最好,γ-氨基丁酸含量为0.624 mg/mL,是对照品的6.8倍。     

高效液相色谱法测定发芽麦粒中γ-氨基丁酸(GABA)含量

建立了一种测定发芽麦粒中γ-氨基丁酸(GABA)含量的HPLC方法,并对四川10个小麦品种中GABA含量差异及其发芽培养期间变化规律进行了分析。采用FDNB(2,4-二硝基氟苯)为柱前衍生剂,色谱条件为:色谱柱Luna C18_((2))(150 mm×4.60 mm,5μm),乙腈-0.02 mmol/L乙酸铵混合溶液为流动相(V:V=15:85),柱温30℃,流速1.0 mL/min,测定波长320 nm。结果表明,在0.025 5~0.127 6μg范围内,呈良好的线性关系,最低检出限1.081×10~(-5)μg/mL,方法的平均加标回收率为97%。采用建立的方法测定不同小麦品种在萌发12 h后的GABA含量在0.238~5.26 mg/100 g之间,不同品种间GABA的含量差异显著,在萌发的0~12 h内,GABA含量呈现先上升后下降的趋势,在8 h时含量达到最高。     

高效液相色谱法检测鲫鱼不同组织中的胶原蛋白含量

为提高水产品胶原蛋白的利用率,采用柱前衍生-高效液相色谱法对鲫鱼鱼皮、鱼肉、鱼鳞、鱼鳔组织中的羟脯氨酸含量进行检测,再将羟脯氨酸含量换算成相应胶原蛋白的含量。鲫鱼样品经盐酸110 ℃水解18 h,丹磺酰氯衍生,采用高效液相色谱-紫外法进行检测。色谱柱：反相C18柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相：A为甲醇,B为四氢呋喃-甲醇-0.05 mol/L乙酸钠（1∶15∶84,V/V）溶液,采用梯度洗脱;流速1 mL/min;柱温40 ℃;检测波长254 nm。结果表明：羟脯氨酸在20～400 μg/mL范围内呈现良好的关系（R2=0.999 8）,最低检测限为0.18 μg/g,不同水平的平均回收率为80.22%～83.33%,相对标准偏差范围为0.31%～1.84%。实际样品分析显示,鱼皮、鱼肉、鱼鳞、鱼鳔组织中胶原蛋白含量分别为106.62、24.75、166.94、115.05 mg/g。本实验建立的分析方法简便快捷、具有较好的灵敏度和可靠性,可用于水产品不同组织中胶原蛋白的定量分析。     

HPLC法快速测定婴幼儿配方奶粉中维生素B_1

建立了快速测定婴幼儿配方奶粉中维生素B_1的高效液相色谱法。样品经水提取,饱和乙酸铅溶液沉淀蛋白,碱性铁氰化钾衍生,采用C_(18)色谱柱分离,以乙酸钠-甲醇(65∶35,V/V)为流动相,荧光检测器检测。该方法检出限为0.2 mg/kg,线性范围为0.01~1.0μg/m L,样品加标回收率在86.0%~88.8%之间。该方法样品前处理简便快速、测定结果符合定性定量要求,适用于婴幼儿配方奶粉中维生素B_1的测定。