巨噬细胞移动抑制因子对结肠癌HT-29细胞增殖和血管生成因子表达的影响

目的研究巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在体外对人结肠癌细胞HT-29增殖及VEGF和IL-8表达的影响。方法分别用25、50、100μg/L人重组MIF(rhMIF)对细胞进行处理后,采用MTT法检测细胞增殖,RT-PCR检测细胞VEGF、IL-8mRNA含量,ELISA测定细胞培养上清液中VEGF和IL-8的蛋白含量。结果rhMIF作用不同时间后,能够促进HT-29细胞生长,增殖活性随浓度增加、时间延长逐渐上升(P<0.05),呈现量—效、时—效关系。细胞VEGF和IL-8mRNA表达及上清液中VEGF和IL-8蛋白含量均明显增加,存在时间和浓度依赖性(P<0.05)。结论MIF能够促进结肠癌细胞增殖,MIF参与肿瘤血管形成有可能是通过上调VEGF和IL-8的表达发挥作用。     

组织因子/因子Ⅶ激活人胶质母细胞瘤细胞PI3K/Akt信号途径调控凋亡的研究

目的:研究组织因子(TF)对化疗药物诱导人胶质母细胞瘤细胞凋亡影响的信号转导机制。方法:分子生物学方法构建TF-pcDNA3表达载体,以脂质体介导进行基因转染。以Western Blotting检测TF表达及信号转导途径活化状态。以Western Blotting检测阿霉素诱导的Caspase-3、PARP的裂解。结果:以TF-pcD-NA3真核表达载体转染低表达TF的LN-229细胞,TF表达水平呈剂量依赖性增强。以FⅦ与转染TF的LN-229细胞作用,可观察到磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)信号途径的Akt的显著激活,呈时间依赖性。在转染了TF-pcDNA3真核表达载体的LN-229细胞中,TF获得强制高表达,而阿霉素诱导的Caspase-3、PARP的裂解减弱,PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002则可以抵消TF强制表达对阿霉素诱导凋亡的抑制。结论:人胶质母细胞瘤中TF的异常高表达可抑制阿霉素诱导的肿瘤细胞凋亡,此效应可能与TF与FⅦ相互作用后对下游PI3K/Akt信号的激活有关。     

肺癌中PI3K／AKT信号通路对Skp2调控机制的研究

目的探讨肺癌中磷脂酰肌醇-3-激酶（P13K）／AKT信号通路对S期激酶相关蛋白2（Skp2）的调控机制。方法体外培养4种类型肺癌细胞系H460、LK2、H446和A549,经LY294002处理细胞24h后实时RT—PCR法检测Skp2基因表达变化;Westernblot检测E2F1蛋白表达变化。结果实时RT—PCR显示LY294002作用后4种肺肿瘤细胞系中skp2基因表达均下降;Westernblot结果表明在小细胞肺癌、肺鳞癌、大细胞肺癌中E2F1蛋白表达降低,肺腺癌中E2F1蛋白未表达。结论肺癌中P13K／AKT通路可在转录水平调节Skp2表达,在小细胞肺癌、肺鳞癌、大细胞肺癌中此种调节可能通过转录因子E2F1发挥作用,而肺腺癌中E2F1不参与此种调节。     

PI3K/Akt信号通路调节心脏功能的研究进展

PI3K/Akt是调节心脏功能的一条重要的信号转导通路,主要通过血管内皮生长因子介导血管生成、抑制心肌细胞凋亡、重构心室、促进细胞能量代谢等方面调节心脏功能。研究发现PI3K/Akt信号通路在内分泌疾病、肾病、肝纤维化、肿瘤及心血管疾病的发生、发展中起着重要作用。本文就PI3K/Akt信号通路调节心脏功能的分子机制作一阐述。     

牛磺酸通过激活PI3K/Akt信号通路抑制高糖诱导的内皮细胞凋亡

目的 探讨牛磺酸对高糖诱导的内皮细胞凋亡的影响及其信号途径.方法 取健康产妇分娩后12h内的脐带分离人脐静脉内皮细胞(HUVEC),进行细胞培养并分为5组:正常葡萄糖组(5 mmol/LD-葡萄糖,NG组);高糖组(30 mmol/LD-葡萄糖,HG组);NG+TAU组(5mmol/LD-葡萄糖+5 mmol/L牛磺酸);HG+TAU组(30 mmol/L D-葡萄糖+5 mmol/L牛磺酸);HG+TAU+Wo组(30 mmol/LD-葡萄糖+5 mmol/L牛磺酸+50 nmol/L wortmannin).干预48 h后应用流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western印迹检测磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白的表达水平,2,7-二氯二氢荧光素二乙酯(H2DCF-DA)探针技术及荧光倒置显微镜检测活性氧簇的相对含量.结果 与NG组相比,HG组细胞的凋亡率显著增加(P＜0.05).与HG组相比,HG+TAU组的凋亡率下降(P＜0.05).与HG+TAU组相比,HG+TAU+Wo组的凋亡率较高(P＜0.05).与NG组相比,HG组磷酸化-Akt蛋白表达下降(P＜0.05).与HG组比较,HG+TAU组磷酸化-Akt蛋白表达增加(P＜0.05).与HG+TAU组相比,HG+TAU+Wo组磷酸化-Akt蛋白表达下降(P＜0.05).牛磺酸可降低高糖诱导的活性氧簇生成(P＜0.05),这一作用亦可被wortmannine所阻断(P＜0.05).结论 牛磺酸通过PI3K/Akt信号途径调节细胞内活性氧簇生成,进而在高糖环境下发挥其抗凋亡作用.     

肝癌细胞中PI3K信号通路对骨桥蛋白表达的影响

目的研究磷脂酰肌醇3-激酶（P13K）信号通路在肝癌细胞骨桥蛋白（OPN）表达调控中的作用。方法体外培养高转移性人肝癌细胞株HCCLM3,分为对照组、P13K特异性抑制剂LY294002浓度5、10、20μmol／L组,处理6h后,采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术检测OPNmRNA表达的变化。结果LY294002可使肝癌细胞HCCLM3的OPNmRNA的表达下降,且这种抑制作用随着LY294002浓度增大而增大（P〈0．01）,呈现剂量依赖性关系。结论LY294002可以抑制肝癌细胞株HCCLM3中OPN的表达,肝癌细胞OPN的表达调控受P13K信号通路调控。     

PI3K/Akt信号转导通路与脑缺血后细胞凋亡

细胞凋亡为脑缺血时细胞死亡的重要形式之一.磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide-3 kinase,PI3K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(serine/threonine kinase,Akt)为重要的细胞存活信号通路,c-Jun氨基端激酶(c-jun N-terminal kinase,JNK)为重要的促进细胞凋亡信号通路.这两大通路转导信号的动态平衡维持着生理状态下的细胞生存与凋亡.脑缺血刺激打破了这一生理平衡,导致大量神经细胞凋亡.多种确切的神经保护因素都与增强细胞存活信号的放大或抑制凋亡信号的放大有关,从而维持这2个通路信号的平衡.     

塞来昔布对人结肠癌细胞株HT-29MIF、PTEN和Caspase-3表达的影响

背景：塞来昔布为环氧合酶．2（COX-2）选择性抑制剂,近年研究发现其具有抗肿瘤作用。目的：观察塞来昔布对人结肠癌细胞株HT-29巨噬细胞游走抑制因子（MIF）、抑癌基因蛋白PFEN和凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响,探讨其防治结肠癌可能的分子机制。方法：25、50、100μmol／L塞来昔布分别作用于HT-29细胞24h后,以逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测HT-29细胞MIFmRNA表达,蛋白质印迹法检测MIF、PTEN、Caspase-3蛋白表达。结果：经25～100μmol/L塞来昔布处理后,HT-29细胞MIFmRNA和蛋白表达随塞来昔布浓度的增加而减低,PTEN和Caspase-3蛋白表达随塞来昔布浓度的增加而增加,与正常对照组相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：塞来昔布的抗结肠癌作用可能与下凋MIF表达和上调PTEN、Caspase-3表达有关。     

酰基甘油激酶通过影响PTEN/PI3K/Akt/Gsk3β信号通路调控血小板活化

目的：探究酰基甘油激酶（AGK）在血小板活化中的作用及可能的调控机制。方法：分别提取野生型小鼠（WT）和AgkG126E点突变（AGK激酶活性丧失）小鼠（PM）的血小板。将等体积、等浓度的WT或PM小鼠的血小板放入聚集仪,分别利用3种刺激剂（α-Thrombin、ADP、U46619）刺激,检测每种刺激剂作用下相应的血小板聚集水平;每管聚集曲线达到最大稳定值后,加入等体积的ATP荧光检测剂,检测相应血小板活化过程中释放的ATP水平。分别在静息态WT或PM小鼠血小板（不加α-Thrombin刺激）、活化态WT或PM小鼠血小板（加入α-Thrombin刺激）中加入等量荧光偶联的纤维蛋白原（Fg）,利用流式细胞仪检测血小板的Fg结合水平。Western blot法分别检测静息态（不加刺激剂）和活化态（加入α-Thrombin、ADP、U46619刺激）WT或PM小鼠血小板中关键信号通路蛋白的磷酸化水平。结果：在刺激剂作用于血小板后,PM小鼠血小板的聚集程度、ATP释放水平及Fg结合能力均明显低于WT小鼠的血小板（P均<0.01）。与WT小鼠相比,PM小鼠的血小板在活化过程中张力蛋白同源...     

非小细胞肺癌中PI3K/Akt信号通路通过Cdh1调控Skp2表达的机制研究

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）中Cdc20同源蛋白1（Cdh1）参与磷脂酰肌醇三羟基激酶（PI3K）/Akt信号通路对S期激酶相关蛋白2（Skp2）表达调控的机制。方法体外培养NSCLC细胞系A549、LK2和H460,LY294002特异性阻断PI3K/Akt信号通路后,Western blot检测Skp2、Cdh1及p-Akt蛋白表达的变化,免疫荧光（IF）检测Cdh1在NSCLC中的定位变化。结果 LY294002处理后,与对照组相比3种细胞中Skp2蛋白表达和Akt磷酸化水平均降低（P〈0.01）,Cdh1在3种细胞的核内表达均增多。结论 NSCLC中PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002使Skp2蛋白表达下调与Cdh1由细胞质向细胞核转位有关。     

沙利度胺对人胰腺癌细胞细胞动力学和VEGF表达的影响

背景：研究显示沙利度胺及其类似物具有免疫调节、抗血管生成、抗炎等多方面的作用,其对多发性骨髓瘤和一些实体瘤的抗肿瘤作用与其免疫调节活性以及抗血管生成、抗增殖和促凋亡特性有关。目的：观察沙利度胺对人胰腺癌细胞细胞动力学和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,探讨其用于胰腺癌临床辅助治疗的可能性。方法：以沙利度胺干预人胰腺癌细胞株Patu-898848h,MTT实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,RT—PCR检测VEGFmRNA表达。结果：经不同浓度沙利度胺干预的Patu-8988细胞,生长抑制率、G0／G1期细胞比例和细胞凋亡率均显著高于溶剂对照组（P〈0．05）,VEGF异构体VEGF121、VEGF165mRNA表达显著低于溶剂对照组（P〈0．05）。结论：沙利度胺能从多方面对胰腺癌生长产生抑制作用,包括直接抑制癌细胞增殖、诱导细胞周期G0／G1期阻滞和早期凋亡,以及通过抑制VEGF转录而抑制肿瘤血管发生。     

Sulfone通过转录因子Elk1调节人结肠癌细胞XAF1表达的研究

背景:Sulfone是一个高效的结肠肿瘤化学预防制剂,具有抗肿瘤功能,但其具体作用机制尚未完全明确。目的:探讨Sulfone在转录水平调节X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)相关因子1(XAF1)表达的作用机制。方法:以Sulfone干预人结肠癌细胞株HCT116,以蛋白质印迹法检测磷酸化ERK1/2(pERK1/2)、XAF1和ERK1/2表达;构建稳定转染pLuc-291质粒以及pLuc-291-18T、pLuc-291-70T、pLuc-291-IRFm质粒的HCT116细胞(分别为转录因子Elk1、c-ETS、IRF结合序列点突变),以荧光素酶报告基因检测Sulfone对XAF1启动子转录活性的调节作用;以染色质免疫沉淀法检测Elk1-XAF1的DNA结合活性;以实时定量PCR检测Elk1 siRNA对XAF1 mRNA表达的影响。结果:Sulfone可显著抑制pERK1/2表达,显著上调XAF1表达。XAF1启动子Elk1结合序列点突变能显著增加Sulfone诱导的XAF1启动子转录活性,而c-ETS和IRF结合序列点突变对Sulfone诱导的XAF1启动子转录活性无明显影响。XAF1启动子区域存在Elk1的特异性结合序列。以Elk1 siRNA抑制Elk1表达能显著增高XAF1mRNA表达。结论:Sulfone通过抑制ERK1/2信号通路下游转录因子Elk1活性,在转录水平上调人结肠癌细胞XAF1表达。     

PI3K/Akt在肺炎衣原体感染诱导血管平滑肌细胞迁移中的作用

目的研究PI3K/Akt在肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae,C.pn)感染诱导血管平滑肌细胞(vascularsmooth muscle cell,VSMC)迁移中的作用。方法利用透射电镜鉴定C.pn成功感染VSMC;采用PI3K特异性抑制剂LY294002预处理VSMC后,wound-healing实验和Transwell实验分别观察VSMC迁移能力的改变;Western blot实验检测VSMC内Akt的磷酸化水平。结果透射电镜可观察到感染的VSMC内出现典型的C.pn原体;C.pn感染VSMC 24 h后,细胞迁移实验结果显示C.pn感染组VSMC的迁移能力增强且明显高于正常对照组(P<0.05);Western blot结果显示C.pn感染组Akt的磷酸化表达水平明显上调且高于正常对照组(P<0.05);PI3K特异性抑制剂LY294002可有效抑制C.pn感染诱导的VSMC迁移及Akt的磷酸化。结论 C.pn感染通过激活PI3K/Akt促进VSMC迁移。     

丁酸钠和1，25-（OH）2D3对人结肠癌细胞增殖和hTERT表达的影响

背景：端粒酶在肿瘤细胞永生化过程中起重要作用．人端粒酶逆转录酶（hTERT）是调节端粒酶活性的关键因素。有研究发现生物活性制剂丁酸钠和1n,25-二羟维生素D3[1．25-（OH）,D3]具有潜在抗肿瘤效应。目的：观察丁酸钠和1,25-（OH）：D3对人结肠癌细胞增殖的影响及其可能机制。方法：以不同浓度丁酸钠（0．5～2．0mmol／L）、1,25-（0H）2D3（10^-6～10^-6mol/L）或两者联合[1．0mmol／L丁酸钠＋10^-7mol／L1,25-（OH）2D3]诱导人结肠癌细胞株HT29,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,RT—PCR检测hTERTmRNA表达。结果：丁酸钠和1,25-（OH）2D3能剂量和时间依赖性地抑制HT29细胞生长：1．0mmol／L丁酸钠和10^-7mol／L 1．25-（OH）2D3能诱导HT29细胞G0／G1期阻滞和细胞凋亡,抑制hTERTmRNA表达。联合用药组的上述作用较两者单用更为明显（P〈0．05）。结论：丁酸钠和1,25-（OH）2D3抑制人结肠癌细胞增殖的作用与其通过下调hTERT基因表达而抑制端粒酶活性、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡有关：两者联合可产生协同作用．     

CD40、P13K、P-Akt、VEGF在人胃腺癌中的表达和意义

背景：CD40属于肿瘤坏死因子受体超家族成员,多种恶性肿瘤中存在CD40表达,其高表达与肿瘤侵袭、转移和预后不良相关。P13K／Akt信号通路在肿瘤发生过程中起关键作用。血管内皮生长因子（VEGF）与肿瘤血管生成关系密切。目的：探讨CD40、P13K、p—Akt、VEGF在人胃腺癌中的表达及其生物学意义。方法：以免疫组化方法检测128例胃腺癌及其相应癌旁组织中的CD40、P13K、p—Akt、VEGF蛋白表达,分析四种蛋白表达与胃腺癌临床病理特征之间的关系以及四者间的相关性。结果：胃腺癌组织中CD40、P13K、P-Akt、VEGF蛋白阳性表达率分别为64．8％、84．4％、88．3％和73．4％．而相应癌旁组织中阳性表达率分别为7．0％、30．5％、28．1％和41．4％,两组间四种蛋白表达强度差异均有统计学意义（P〈O．001）。CD40表达与胃腺癌远处转移和TNM分期相关,P13K、P-Akt表达仅与TNM分期相关,VEGF表达与肿瘤分化程度相关。胃腺癌组织中四种蛋白表达两两之间均呈正相关。结论：CD40、P13K、p-Akt、VEGF在胃腺癌中均呈高表达。CD40可能通过激活P13K／Akt信号通路上调VEGF表达,从而促进肿瘤血管生成,参与胃腺癌的进展和转移。     

siRNA干扰galectin-3表达对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡和化疗敏感性的影响

Galectin-3属于半乳凝素家族成员,参与细胞生长和凋亡、细胞黏附、新生血管形成、肿瘤浸润和转移等多种生理和病理过程,在多种恶性肿瘤细胞中呈高表达。目的:研究siRNA干扰galectin-3表达对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡和化疗敏感性的影响。方法:合成靶向galectin-3的siRNA并转染SGC-7901细胞,以real time PCR和蛋白质印迹法检测干扰效果。CCK-8实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:Galectin-3siRNA转染24 h后转染效率为83.8%,转染后SGC-7901细胞的galectin-3表达显著受抑,mRNA和蛋白表达量分别较空白对照组降低87.8%和90.4%(P0.01)。转染后24 h、48 h和72 h,galectin-3 siRNA组SGC-7901细胞增殖抑制率分别为15.57%±1.45%、32.90%±0.76%和57.35%±1.05%,转染后72 h该组细胞凋亡率为46.17%±2.39%,均显著高于同时间点空白对照组、空脂质体组和阴性对照siRNA组(P0.01)。Galectin-3 siRNA组SGC-7901细胞由化疗药物奥沙利铂诱导的增殖抑制亦较其余三组显著增加(P0.01)。结论:以siRNA干扰galectin-3表达后,SGC-7901细胞增殖减少、凋亡增加,对化疗药物的敏感性增强,表明galectin-3有望成为胃癌基因治疗的有效靶点。     

5-氮杂-2’-脱氧胞苷诱导CDX2基因表达对人胃癌细胞株MKN45增殖和凋亡的影响

背景：DNA甲基化导致基因表达沉默是胃癌发生的重要步骤。近年发现肠表型调节因子CDX2在胃癌中具有抑癌基因的作用。目的：探讨5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-aza—CdR）对人胃癌细胞株MKN45中CDX2基因表达的影响及其对细胞增殖和凋亡的作用。方法：以不同浓度5-aza—CdR（2．5、5、10μmo]／L）处理胃癌细胞株MKN45,甲基化特异性PCR（MSP）检测CDX2启动子区甲基化状态;实时荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测CDX2mRNA和蛋白表达：CCK8法检测MKN45细胞增殖活性,AnnexinV．FITC／PI检测细胞凋亡和Hoechst33258染色观察其凋亡形态：比色法检测caspase-3活性。结果：MKN45细胞中CDX2基因启动子区高甲基化．CDX2mRNA表达极低且蛋白不表达：经3种浓度5-aza-CdR处理72h后．MKN45细胞CDX2基因启动子区高甲基化发生逆转．CDX2mRNA和蛋白表达均上调。与对照组相比,5-aza-CdR呈剂量依赖性地抑制MKN45细胞增殖和促进凋亡（P〈0．05）：Hoechst33258染色示细胞核致密浓染、细胞核碎裂;caspase-3活性随着5．aza．CdR浓度的增加而升高（P〈0．05）。结论：MKN45细胞中CDX2基因表达缺失可能与其启动子区CpG岛高甲基化有关;5-aza—CdR能有效逆转CDX2基因的异常甲基化．诱导其再表达．并抑制MKN45细胞增殖和促进凋亡．该作用可能与caspase-3活性有关．     

Stem Cell Factor/c-<Emphasis Type="Italic">kit</Emphasis> Receptor Signaling Enhances the Proliferation and Invasion of Colorectal Cancer Cells Through the PI3K/Akt Pathway

In this study, we examined the role of c-kit receptor (KIT) signal transduction on the proliferation and invasion of colorectal cancer cells. We found that c-kit was expressed in 2 colorectal cancer cell lines as determined by RT-PCR, Western blot, and flow cytometry. In KIT-positive lines, KIT was activated by stem cell factor (SCF). SCF enhanced cellular proliferation of positive lines as demonstrated by the WST-1 proliferation assay. Furthermore, SCF enhanced the invasive ability of KIT-positive cell lines. SCF stimulation upregulated p44/42 mitogen-activated protein kinase (MAPK) and Akt as shown by Western blot. We examined the roles played by p44/42 MAPK and phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/Akt pathways in proliferation and invasion. PI3K/Akt activity strongly correlated with proliferation and invasion and p44/42 MAPK was correlated with only invasion. In conclusion, the SCF-enhanced proliferation and invasion of KIT-positive colorectal cancer cells is achieved mainly through the PI3K/Akt pathway.