应用噬菌体十二肽库筛选卫氏并殖吸虫抗原模拟表位

目的从噬菌体12肽库中筛选卫氏并殖吸虫抗原模拟表位。方法将卫氏并殖吸虫病患者血清免疫粗球蛋白(Ig)作为靶分子筛选噬菌体随机12肽库。经过5轮淘筛，随机挑取24个蓝色噬菌斑进行扩增，以ELISA检测其免疫活性并分析其诊断并殖吸虫病的价值。结果24个克隆中有12个可以被卫氏并殖吸虫病患者血清Ig所识别，其中有2个克隆(P5、P6)具有较好的特异性和敏感性，可能为特异性的卫氏并殖吸虫抗原模拟表位。结论应用噬菌体肽库筛选可以获得卫氏并殖吸虫抗原模拟表位，为并殖吸虫病诊断抗原和短肽疫苗的研究提供了新的方法学依据。     

卫氏并殖吸虫模拟抗原的血清免疫学诊断价值

目的初步探讨卫氏并殖吸虫模拟抗原模拟的血清学免疫学诊断价值。方法采用ELISA检测,将以噬菌体随机12肽库筛选所获卫氏并殖吸虫模拟抗原与卫氏并殖吸虫成虫抗原(PwA)进行比较实验。结果经噬菌体随机12肽库筛选获得的6个卫氏并殖吸虫抗原模拟表位特异性和敏感性与PwA相比均无显著性差异(P>0.05),其中3个交叉反应性明显较PwA低(χ2=4.630,P<0.05),其余3个则与PwA无明显差异(P>0.05)。结论卫氏并殖吸虫抗原模拟表位对卫氏并殖吸虫病的诊断具有潜在的应用价值,有望开创一种用于卫氏并殖吸虫病诊断的新方法。     

应用噬菌体十二肽库筛选卫氏并殖吸虫抗原模拟表位

目的　从噬菌体 12肽库中筛选卫氏并殖吸虫抗原模拟表位。　方法　将卫氏并殖吸虫病患者血清免疫粗球蛋白 (Ig )作为靶分子筛选噬菌体随机 12肽库。经过 5轮淘筛 ,随机挑取 2 4个蓝色噬菌斑进行扩增 ,以ELISA检测其免疫活性并分析其诊断并殖吸虫病的价值。　结果　 2 4个克隆中有 12个可以被卫氏并殖吸虫病患者血清Ig所识别 ,其中有 2个克隆 (P5、P6)具有较好的特异性和敏感性 ,可能为特异性的卫氏并殖吸虫抗原模拟表位。　结论　应用噬菌体肽库筛选可以获得卫氏并殖吸虫抗原模拟表位 ,为并殖吸虫病诊断抗原和短肽疫苗的研究提供了新的方法学依据。     

两种不同噬菌体筛选方法所获的卫氏并殖吸虫抗原模拟表位抗原性比较

目的比较从兔抗蚯蚓血清免疫球蛋白(E-Ig)结合后的噬菌体12肽库中和从噬菌体肽库中筛选出的两种卫氏并殖吸虫抗原模拟表位的抗原性。方法以肺吸虫病患者血清免疫球蛋白(Pw-Ig)作为靶分子,分别对噬菌体12肽库(PwA)和经过 E-Ig 筛选一轮后的肽库(PwB)进行3轮吸附-洗脱-扩增的淘筛,随机挑取 PwA 和 PwB 蓝色噬菌斑各24个扩增,用 ELISA 方法检测并比较两者的抗原性。结果24个 PwA 克隆中有12个可以与肺吸虫病患者血清发生免疫反应,其中 A_(491)nm 值较高的2个克隆具有较好的特异性和敏感性;24个 PwB 克隆中有10个可以被卫氏并殖吸虫病患者血清所识别,其中 A_(491)nm 值较高的2个克隆具有较好的抗原性。结论从 PwA 和 PwB 中均筛选到了对肺吸虫具有潜在诊断价值的抗原模拟表位,提示以异源性抗体结合后的肽库作为源肽库来筛选寄生虫抗原模拟表位是可行的,为研制新型诊断试剂提供了一条新的着眼点。     

卫氏并殖吸虫囊蚴和成虫抗原的分析及单克隆抗体识别

本文报道卫氏并殖吸虫囊蚴和成虫可溶性抗原（ＰｗＭ和ＰｗＡ）ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后银染色及丁应单克隆抗体识别免疫酶染色的结果，银染色显示ＰｗＭ有２２条蛋白带，其中主带有１０条，分子量分别为１２－１３、１４、４０、４１、４２、４８、５６、５７、６３和８０ｋＤ。ＰｗＡ有４１条带，其中主要有２１条，分子量分别为１１－１２、１４、１６－１７、１８、１９、２１－２３、２４－２６、３３、３９、４０、４２、４３－４７     

卫氏并殖吸虫感染犬循环免疫复合物和循环抗原的动态比较

卫氏并殖吸虫感染犬循环免疫复合物和循环抗原的动态比较段义农，邵义祥，朱顺星，彭光仁，张耀娟，章子豪，侯敏，吴观陵卫氏并殖吸虫病是我国流行较广的寄生虫病之一，病原学诊断较为困难。近年来，以虫源性ＣＡｇ为检测靶标的肺吸虫病血清学诊断技术，在早期诊断、指示...     

卫氏并殖吸虫成虫糖蛋白抗原及其抗体谱研究

免疫学诊断的敏感性不但取决于所用方法的敏感性,而且取决于抗原的纯度和活性。在并殖吸虫病的免疫学诊断中,目前多半用全虫匀浆作为诊断抗原。本研究结果表明,卫氏并殖吸虫成虫主要免疫原性物质仅是全虫匀浆中有限的几个糖蛋白组份,即组份14(0.47)、15(0.49)和16(0.52)。这三个组份的兔免疫血清抗体谱与全虫匀浆的兔免疫血清抗体谐相同。用这些糖蛋白组份代替全虫匀浆作为诊断抗原,可望能节省抗原并提高免疫学诊断的敏感性。这对诊断卫氏并殖吸虫早期感染或轻度感染的病人尤为适宜。     

卫氏并殖吸虫成虫重组抗原的表达与鉴定

目的 表达已转化入大肠杆菌的卫氏并殖吸虫成虫抗原(PwAg)基因，并评价其应用于免疫学诊断的价值。方法 用IPTG诱导表达已亚克隆人表达载体pRESETB的卫氏并殖吸虫成虫抗原基因，以SDS—PAGE和Westernblot分析鉴定表达产物。结果 SDS-PAGE电泳可见32ku处有1条明显的蛋白质带，该带只被卫氏并殖吸虫成虫免疫兔、感染犬和病人血清识别。结论 成功构建重组克隆PwAg，其表达产物具有卫氏并殖吸虫成虫期特异性，推测可用于并殖吸虫病的免疫学诊断。     

卫氏并殖吸虫感染犬循环抗原的动态观察

应用Dot-ELISA,以抗卫氏并殖吸虫囊蚴和成虫McAbG_2B_3、A_3D_3检测了4只Pw囊蚴感染犬吡喹酮治疗前后血清CAg动态。感染后第4d,4只犬囊蚴CAg均为阳性,1只犬成虫CAg为阳性。至第19d,4只犬囊蚴和成虫CAg均为阳性。第101～105d,4只犬中2只以每只3.2g总量吡喹酮进行治疗,治疗后短期内囊蚴和成虫CAg滴度明显升高,其中尤以成虫CAg升高显著。至治疗后第6d,囊蚴和成虫CAg达高峰,其后便逐步下降。1号犬在治疗后55d、2号犬于治疗后26d囊蚴CAg滴度为0.1号犬于治疗后65d、2号犬于治疗后36d成虫CAg滴度为0。未治疗犬成虫CAg维持于1:16～1:640,囊蚴CAg为1:20～1:40,CAg的动态呈现明显的期特异性。治疗后80d剖检2只治疗犬,其肺部均有多个陈旧性虫囊,虫囊内多为变性坏死虫卵,未发现成虫。未治疗犬于死后即行解剖检获Pw成虫60条。上述研究结果提示:1.感染Pw犬囊蚴CAg的动态具有明显的期特异性,与虫体在宿主体内的发育情况是一致的;2.有效治疗后囊蚴和成虫尤其是成虫CAg的滴度在短期内明显升高;3.可联合或单独应用抗囊蚴McAbG_2B_3、抗成虫McAbA_3D_3进行并殖吸虫病的虫期诊断和疗效考核。     

卫氏并殖吸虫二倍与三倍体型抗原组份及定位的比较分析

应用免疫印渍试验分析卫氏并殖吸虫二倍体型和三倍体型的成虫、童虫抗原,结果显示两型间既有广泛共同的多肽抗原,各自又有特异的多肽抗原成分。间接荧光抗体试验将抗原分别定位于两类型成虫、童虫的表皮、肠管上皮细胞及后尾蚴的排泄囊和表皮上。     

应用卫氏并殖吸虫成虫单克隆抗体检测感染犬循环抗原动态

本研究应用Dot-ELISA方法,以卫氏并殖吸虫(Pw)成虫单克隆抗体A_3D_3(McAbA_3D_3)检测5只实验感染犬吡喹酮治疗前后血清循环抗原(CAg)动态。结果表明,检出CAg最早时间为感染后第4d,至第19d,4只犬CAg检测均为阳性。感染后第101d,其中2只以吡喹酮总量3.2g进行治疗,治疗后短期内CAg滴度明显升高,至治疗后第6d达高峰,1号犬和3号犬分别在治疗后第65d和26dCAg滴度下降为0。2只未治疗感染犬CAg滴度维持于1:160～1:640。治疗后80d剖检2只治疗犬,其肺部均有多个陈旧性虫囊,内多为变性坏死虫卵,未发现虫体。未治疗犬于死后解剖获成虫60条。上述研究结果提示用McAbA_3D_3作Dot-ELISA对犬的Pw活动性感染具有早期诊断和疗效考核价值。     

三氯苯达唑对卫氏并殖吸虫体壁及卵黄细胞超微结构的影响

目的： 观察三氯苯达唑在体内外杀灭卫氏并殖吸虫后, 虫体体壁及卵黄细胞超微结构的变化。方法：将被药物在体内、外杀死的虫体及对照组正常虫体, 按常规方法制成电镜样品, 用扫描和透射电镜观察。结果： 在药物作用下, 体壁的外质膜及基质层裂解消失, 肌肉层有不同程度的坏死, 皮层细胞膜及卵黄细胞膜破坏消失,核膜部份破坏, 核内异染色质凝固、聚边、直至溶解。胞质内的高尔基体消失, 内质网扩张, 线粒体肿胀变性、直至溶解,但对糖原颗粒无明显影响。对体内虫体的破坏比体外严重。结论： 三氯苯达唑对卫氏并殖吸虫的体壁及卵黄细胞均有明显的破坏作用, 主要破坏细胞核、细胞的膜质结构以及微管系统, 并可使虫体皮层裂解消失。     

卫氏并殖吸虫对嗜酸性和中性粒细胞的体内趋化作用

应用体内试验将卫氏并殖吸虫成虫分泌排泄产物和成虫浸出液注入豚鼠背部皮内，观察对豚鼠嗜酸性粒细胞和中性粒细胞的影响。在注射后２～４ｈ，注射部位可见少量嗜酸性粒细胞，在８ｈ细胞数达高峰，然后很快下降，２４ｈ后只见少量嗜酸性粒细胞。在注射后１ｈ，注射部位的中性粒细胞开始增多，４ｈ细胞数最多，然后细胞逐渐减少，４８ｈ降至最低。本研究结果证明，卫氏并殖吸虫对豚鼠嗜酸性粒细胞在体内具有明显的趋化活性。     

抗卫氏并殖吸虫单克隆抗体的筛选及其在诊断中的应用

本文报道测定16种抗卫氏并殖吸虫(Pw)囊蚴和成虫单克隆抗体(McAb)的同型及其交叉反应。其中,抗Pw成虫McAb A_3D_3为IgM,k型。应用Dot-ELISA方法,以McAb A_3D_3检测痰卵阳性患者21例和痰卵阴性疑似患者63例血清循环抗原(CAg)),结果痰卵阳性患者CAg阳性率为100％(21/21),痰卵阴性疑似患者CAg阳性率为85.7％(54/63);同法检测45例日本血吸虫病、55例华支睾吸虫病、24例丝虫病、49例肠线虫感染、31例肺结核患者以及93例健康人对照血清均为阴性。结果表明,McAb A_3D_3的特异性及敏感性强,因而在Pw活动性感染和Pw病的早期诊断上均具有应用和推广前景。     

卫氏并殖吸虫童虫的生物学特性

目的： 了解卫氏并殖吸虫童虫的生物学特性。方法： 从锯齿华溪蟹分离卫氏并殖吸虫囊蚴, 以每鼠８０～１５０ 个囊蚴感染小鼠和大鼠, 分别于感染后１０～３０ ｄ 和８０～５８０ ｄ 分期解剖小鼠和大鼠, 检查虫体。观察童虫的寿命、在死亡宿主或５～８ ℃生理盐水中, 存活的时间及对新宿主的侵袭力。结果： 童虫的寿命较长, 大鼠于感染囊蚴５８０ ｄ 死亡后检出的童虫仍可转种其它大鼠; 同样, 小鼠体内的童虫也可转种其它小鼠, 童虫寿命不受某一个体宿主寿命限制。在转续宿主间转换, 可延长童虫的寿命, 并保持其活力和侵袭力。死亡小鼠体内的童虫及低温保存的童虫, 仍有较强的活力与侵袭力。结论： 童虫具有较强的活力与侵袭力, 为卫氏并殖吸虫的感染期     

卫氏并殖吸虫感染及白细胞介素2对小鼠细胞免疫功能影响的观察

本文以抗小鼠Ｌ３Ｔ４、Ｌｙｔ２单克隆抗体检测小鼠脾细胞中ＴＨ、Ｔｓ数，３Ｈ－ＴｄＲ掺入法淋巴细胞转化试验及白细胞介素２活性测定的方法，对经口接种卫氏并殖吸虫囊蚴小鼠及感染此虫并接受白细胞介素２治疗的小鼠进行了细胞免疫功能的动态观察。结果显示，感染小鼠脾细胞中ＴＨ减少、Ｔｓ增多，ＴＨ／Ｔｓ比值降低。刀豆素蛋白Ａ诱导的淋巴细胞转化受抑制。白细胞介素２诱导及活性测定中，靶细胞掺入的ｃｐｍ值降低。提示卫氏并殖吸虫的感染可使小鼠细胞免疫功能紊乱、降低。接受白细胞介素２活性水平高于感染组，接近正常对照组；提示白细胞介素２对增强感染卫氏并殖吸虫的小鼠细胞免疫功能有一定作用。     

卫氏并殖吸虫后尾蚴神经系统乙酰胆碱酯酶组织化学定位

本文报道了孵育液两种ｐＨ条件下，卫氏并殖吸虫后尾蚴神经系统ＡＣｈＥ组织化学定位的观察结果。孵育液ｐＨ５．０时．虫体仅能显示中枢神经节；而孵育液ｐＨ６．０时．则能获得虫体神经系统结构的完整图象，包括一对中枢神经节。由中枢神经节各向前、后发出的三对纵行神经干及一对咽神经、相邻神经干间的横向神经联系及腹神经干间的神经网，以及由神经干向口、腹吸盘、排泄孔及皮层下发出的细小神经分支等。结果提示，卫氏并殖吸虫后尾蚴神经系统结构虽发育较完整，但ＡＣｈＥ活性相对较低。文中还对并殖吸虫神经系统结构特征的分类意义进行了讨论。