T细胞克隆应用研究进展

T细胞克隆指将单个T细胞从细胞群中分离出来后单独培养 ,使之重新繁殖成为单一克隆的T细胞群体。它是研究T细胞的有效手段 ,广泛应用于T细胞受体、T细胞治疗、T细胞表位、移植免疫以及细胞因子分泌和细胞间的协调作用等研究领域 ,并已取得了重要进展 ,本文拟就有关内容作一综述。     

T-ALL及T细胞株相关TCR Vβ基因谱系和克隆性分析

目的了解T细胞-急性淋巴细胞白血病(T-ALL)患者外周血中的T细胞及T细胞株的TCR Vβ基因谱系及其克隆性增殖情况。方法利用RT-PCR方法扩增6个不同的T细胞株和6例初发未治T-ALL病人外周血单个核细胞中24个TCR Vβ基因的互补决定区3(CDR3)，PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性，部分T细胞株的单克隆PCR产物进一步进行序列分析。结果与正常人外周血表达全部24个Vβ亚家族不同，6例T-ALL病人分别表达5～12个Vβ亚家族。6例病人均存在1个或多个Vβ亚家族的寡克隆或双克隆增殖T细胞，另外，还有一些Vβ亚家族多克隆模式发生改变，呈现寡克隆性增殖的趋势。T细胞株多显示为表达一个Vβ亚家族的单克隆T细胞，不同T细胞株的CDR3长度和序列不尽相同。结论T-ALL患者外周血T细胞的TCR Vβ谱系出现限制性改变，均可检测到克隆性增殖T细胞，尚需进一步鉴定其性质(肿瘤性或抗原特异性增殖)，对于检测微小残留病变和设计抗白血病独特型疫苗均有一定的意义。     

卵清白蛋白特异性T细胞克隆的建立及T细胞受体使用情况分析

目的：体外建立可长期培养的抗原特异性T细胞系及克隆，并分析其T细胞受体的使用情况。方法：用卵清白蛋白（OVA）免疫BALB／c小鼠，取淋巴结细胞在体外用抗原原复刺激建立抗原特异性T细胞系，通过能限稀释法进行克隆，应用锚定PCR方法分析其特异的T细胞受体的应用。结果：建立了H－2^d限制的OVA特异性T细胞系，获得了3株特异性较高的T细胞克隆，T细胞系中TCR AV11S4和BV4S1应用频率最高，3株T细胞克隆的TCR均为AV5S2和BV2S1，这些T细胞所使用的TCRα链和β链在CDR3区有明显的共性，结论：获得了卵清白蛋白特异的T细胞系和克隆，且其T细胞受体的应用有一定的限制性。     

T细胞克隆失能机制的研究进展

T细胞克隆失能是T细胞产生免疫耐受的主要机制一，近几年来一直是免疫学研究得关注的热点，本综述了诱导T细胞克隆失能的几种实验模型，相关分子机制研究进展和共刺激信号对克隆失能的影响，并探讨了调节细胞因子与T细胞失能的关系。     

系统性红斑狼疮中T细胞作用的研究进展

系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）是多种因素相互作用引起的自身免疫性疾病，T细胞在其发生发展中发挥重要作用。近年来通过对SLE中T细胞的抗原特异性和克隆扩增特点的研究，发现SLE中T细胞识别特异性自身抗原，参与其发病的各个环节，并在SLE的病程持续中发挥重要作用。本文拟就有关内容作一综述。     

自身免疫性疾病的T细胞受体研究及应用进展

自20世纪80年代T细胞受体基因先后被克隆,近年来T细胞受体与自身免疫性疾病的关系得到广泛研究.在此基础上产生的T细胞疫苗、T细胞受体肽疫苗及核酸疫苗作为治疗自身免疫病的新方法,显示了卓越的效果及广阔的发展前景.     

卵清白蛋白特异性T细胞免疫诱导BALB/c小鼠的调节性免疫应答

目的：研究T细胞免疫后正常小鼠的调节性免疫应答，方法：应用体外扩增的卵清白蛋白（OVA）特异的T细胞克隆免疫BALB／c小鼠，3H－TdR掺入法分析细胞增殖，3H－TdR标记靶细胞检测杀伤T细胞的杀伤效应，间接免疫荧光法分析血清中抗T细胞抗体水平。结果：T细胞免疫后能诱导BALB/c小鼠产生调节性T细胞的增殖反应，对靶细胞的杀伤效应以及针对于活化的T细胞的体液免疫应答，并进一步降低机体对OVA抗原的应答，结论：T细胞免疫能诱导正常机体的调节性免疫应答。     

肿瘤相关TCR Vβ亚家族克隆性增殖T细胞研究进展

利用RT-PCR和基因扫描分析T细胞受体（TCR）Vβ24个亚家族基因CDR3长度，可确定T细胞的克隆性。对多种实体瘤和白血病等患者T细胞的分析显示病人的TCR VβT细胞出现倾斜性分布和克隆生长的情况。肿瘤相关抗原诱导正常人T细胞同样可出TCR VβT细胞亚家族分布的改变和克隆性增殖，这些克隆性增殖T细胞主要是肿瘤相关抗原诱导增殖的，对肿瘤细胞具有特异性杀伤作用，探讨如何利用这种特异性克隆性T细胞作为过继性细胞免疫治疗，清除肿瘤患者微小残留病变，具有重要的意义。     

新生儿免疫的可能机制

对新生儿免疫的理解取决于对其机制的阐明，半个世纪以来Burnet的克隆选择学说主宰着对新生儿免疫机制的认识。但近年来的研究成果表明，在新生儿接受抗原刺激后，其T、B细胞并没有被克隆清除，其机制复杂多样，从而掀起了对新生儿免疫机制重新探讨的热潮。本文综述了T细胞、B细胞、解剖微环境、细胞因子等在新生儿免疫形成过程中的作用及其机制。     

苯中毒工人外周血TCR Vβ克隆性T细胞利用特点

目的:分析苯中毒工人外周血中克隆性增殖T细胞及其CDR3序列的特点.方法:利用RT-PCR方法扩增11例苯中毒工人外周血单个核细胞中24个TCR Vβ基因的CDR3, 阳性产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而了解其克隆性.结果:健康者外周血中可检测到24个Vβ亚家族, 11例苯中毒工人仅检测到2～10个Vβ亚家族.11例苯中毒工人均存在1个或多个Vβ亚家族T细胞出现寡克隆及寡克隆趋势.Vβ2、4、5、6和Vβ21的寡克隆T细胞出现频率较高.结论:苯中毒工人外周血TCR Vβ亚家族T细胞出现倾斜性分布和克隆性增殖, 这可能是机体苯中毒后所引起的特异性免疫反应.     

TCR BV CDR3谱型与自身免疫性疾病

自身抗原特异性T细胞克隆性增生在自身免疫病的发生发展中起重要作用，TCR CDR3区是T细胞直接与抗原接触的位点，一种CDR3序列代表一个T细胞克隆，通过对TCR BV CDR3谱型分析及序列测定可迅速发现自身免疫性T细胞克隆，指导疾病的免疫治疗。     

自身反应性T细胞系及克隆的建立与TCR使用情况分析

目的：体外建立可长期生长的自身反应性T细胞系克隆，并分析其T细胞受体的使用情况。方法：用狼疮小鼠BXSB自身脾脏作为刺激细胞，在体外建立长期生长的自身反应性T细胞系（ATL）通过有限稀释法进行克隆，应用锚定PCR方法分析其特异的T细胞受体应用。结果：建立了H－2^b限制性的自身反应T细胞系和2个T细胞克隆。T细胞系主要应用TRBV2S1、TRAV5S1和TRAV1021，而2个T细胞克隆均为TRBV2S1和TRAV10S1。分析其表型为CD3^ CD4^ CD28^ 。结论：从狼疮小鼠获得了自身反应性T细胞系及克隆，其T细胞受体利用具有一定的局限性。     

一株健康人γδT细胞克隆的建立及鉴定

目的 建立健康人γδT细胞克隆并进行鉴定。方法 以60Co照射的同种异体PBMC作为饲养细胞,以有限稀释法对经过阳性分选的γδT细胞进行克隆化。用流式细胞术及分子生物学检测鉴定所获克隆,以MTT掺入法对所获克隆进行增殖实验检测。结果 获得一株γδT细胞单克隆,为Vγ9Vδ2亚型,CD4分子和CD8分子表达均为阴性。进一步的研究发现表位肽EP6不仅能够特异性结合γδT细胞单克隆,而且能够促进其增殖。结论 成功建立了健康人外周血γδT细胞克隆,为深入研究γδT细胞抗原识别机制、亚群及功能奠定了坚实的基础。     

APL相关TCRVα6、Vα10和Vβ23寡克隆T细胞CDR3序列分析

目的:分析急性早幼粒细胞白血病(APL)患者外周m TCR Vα和Vβ克隆性增殖T细胞及CDR3序列特点.方法:利用RT-PCR法扩增1例APL患者外周血单个核细胞中29个TCR Vα基因和24个Vβ基因CDR3,阳性PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析确定其CDR3长度,了解其克隆性;寡克隆的PCR产物再进行CDR3区序列分析.结果:该例APL患者外周血T细胞分别在TCR Vα6、Vα10和Vβ23亚家族中出现寡克隆性增殖T细胞,经序列分析显示TCR Vα6、Vα10和Vβ23亚家族基因序列分别为Vα6NJα17、Vα10NJα35和Vβ23NDβ1NJβ2.7,其CDR3区氨基酸序列分别为CAMRENSAGNK,YLCAGDELLWECA,CASSSKWAG-GTYEQY,该3个TCR基因已被GenBank收录(登陆号:EU544946、EU544947和EU647219).结论:APL患者外周血T细胞出现的TCR Vα6、Vα10和Vβ23克隆性增殖T细胞可能是机体对抗白血病细胞所引起的抗原特异性免疫反应;这3个独特TCR重排序列将进一步作为开展APL特异性免疫治疗研究提供资料.     

TCRVβ基因谱系分析在AIDS疾病T细胞克隆性研究中的应用

对于T淋巴细胞TCRVB基因家族以及T细胞的克隆性的研究是近年的热点问题.通过对艾滋病人(模型)的TCRVβ基因谱系分析,测定特定CDR3长度及序列出现的频率能反映T细胞克隆扩增的程度和功能状态,进而有助于对MDS的临床诊断、免疫机制、药物或疫苗的治疗效果等的理解.     

类风湿关节炎小鼠关节浸润的T细胞克隆型分析

目的 :对一种自发性类风湿关节炎 (RA)小鼠 (SKG小鼠 )四肢足关节浸润的T细胞克隆型进行分析 ,以了解T细胞克隆型与RA的关系。方法 :采用RT PCR与单链构象多态性分析 (SSCP)相结合的方法。结果 :在SKG小鼠的四肢足关节Vβ2和Vβ8 2T细胞克隆型的一致率比较高 (分别为 6 8 1%和 5 9 2 % ) ,并且在被检测的所有小鼠的四肢足关节中都具有一致的Vβ2和Vβ8 2克隆型 (10 0 % )。DNA测序表明在SSCP中显示的来源于不同关节样品的共同的DNA带是相同的T细胞克隆型。T细胞转移试验表明关节聚集的T细胞克隆与RA的病变形成有关。结论 :TCR为Vβ2和Vβ8 2的T细胞可能在SKG小鼠的RA中具有重要作用。     

CML细胞诱导自体和脐血T细胞TCR Vβ谱系和杀伤性分析

目的 了解慢性粒细胞白血病(CML)细胞诱导T细胞的TCR Vβ亚家族限制性利用和克隆性增殖情况，及其对CML细胞的杀伤活性。方法 采用混合淋巴细胞/肿瘤细胞培养(MLTC)方法，利用CML细胞体外诱导脐血或患者的T细胞增殖，用RT-PCR和基因扫描分析MLTC前后T细胞的24个TCR Vβ亚家族基因的互补决定区(CDR3)，了解各Vβ亚家族的利用和T细胞克隆性特点。并利用LDH方法检测MLTC后T细胞的细胞毒性。结果 脐血T细胞表达8～11个TCR Vβ亚家族，经MLTC后，2～3个Vβ亚家族呈克隆性增殖，CML细胞诱导的自体T细胞的TCR Vβ亚家族也类似。经MLTC后T细胞对原诱导细胞有较强的杀伤活性。结论 CML细胞可诱导脐血T细胞和自体T细胞TCR Vβ优势利用和克隆性增殖，诱导后T细胞具有特异性杀伤CML细胞的作用。     

T-ALL患者外周血TCRγ/δ T细胞的分布和增殖特点

目的:了解T细胞急性淋巴白血病(T-cell acute lymphocytic leukemia,T-ALL)患者外周血TCR Vγ和Vδ亚家族T细胞的分布和克隆情况。方法:利用RT-PCR扩增9例T-ALL患者和10例正常人外周血单个核细胞中3个TCR Vγ和8个Vδ亚家族基因的互补决定区3(CDR3),了解TCR亚家族Vγ和Vδ亚家族细胞的分布;阳性产物进一步经基因扫描分析CDR3长度,从而了解其克隆性。结果:9例T-ALL患者3个Vγ亚家族的表达率都明显低于正常人Vγ亚家族的表达率(P<0.05);Vδ亚家族中只有Vδ1和Vδ3的表达率低于正常人(P<0.05)。3例T-ALL患者出现克隆性增殖的γ/δT淋巴细胞。结论:T-ALL患者外周血TCR Vγ和部分Vδ亚家族谱系出现限制性表达和克隆性增殖。同时存在克隆性增殖γδ T细胞提示可能为γδ 白血病性T细胞克隆。     

抗白血病杀伤性T淋巴细胞特性及体外制备的研究进展

在白血病病人外周血及其骨髓中存在克隆性T细胞。这些克隆性T细胞是在白血病细胞相关抗原刺激作用下产生的呈某种或某些TCRVβ亚家族优势表达的CTL,其中一些CTL能特异性识别和融解白血病细胞而对非白血病细胞无反应性。通过体外培养可以大量扩增该克隆性CTL。选择性输注这些白血病细胞特异性CTL将有助于在提高移植物抗白血病效应的同时减少移植物抗宿主疾病的发生。     

脐血中TCR Vβ亚家族T细胞的增殖特点

目的：了解脐血T细胞体外诱导后TCR Vβ亚家族的分布和克隆性增殖特点。方法：利用T淋巴细胞液体培养法，在不同刺激源（rhIL-2、抗CD3单抗、PHA、AML-M5细胞和bcr-abl多肽）条件下诱导脐血T细胞扩增，并利用RT-PCR分别扩增培养前后脐血T细胞的TCR Vβ24个亚家族基因的CDR3片段，了解各Vβ亚家族的表达情况，阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度，了解T细胞克隆性。结果：脐血T细胞仅表达部分Vβ亚家族，但经体外培养后，可检测到绝大多数TCR Vβ亚家族T细胞，而经AML-M5细胞和bcr-abl多肽诱导后，TCR Vβ亚家族T细胞呈限制性表达和Vβ亚家族克隆性增殖。结论：脐血T细胞具备产生各TCR Vβ亚家族T细胞的潜能，在白血病相关抗原诱导下，具有限制性和克隆性增殖的能力。