乌鲁木齐市水磨沟区霍乱弧菌分离株脉冲场凝胶电泳分析

目的了解新疆乌鲁木齐市水磨沟区相关年份霍乱弧菌分离株分子分型特征和遗传相关性。方法用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对霍乱菌株进行分子分型,用BioNumericsV4.0软件UPGMA方法进行聚类分析。结果 54株受试菌以NotⅠ酶切后分为34个型,除1998023、2001009、2006010、1998160外,其他菌株带型高度相似(相似系数0.98),不同年份分离菌株型别不相同。结论乌鲁木齐水磨沟区霍乱弧菌可能含有多个克隆系,且分离出的霍乱弧菌为地方株。     

脉冲场凝脉电泳用于李斯特菌分型及分子流行病学研究

李斯特菌是一种重要的人畜共患病病原菌,该菌由于特殊的生物学特性,在自然界分布广泛,危害性大。文献报道,由该菌引起的李斯特菌病已在世界范围发生过４次大暴发,我国大连某饲养场也曾发生过一起猪李斯特菌病大暴发,小范围的流行也时有发生［１］。因此,对该病的病原学研究显得十分重要。国外已有数家实验室应用不同的方法对此进行了分子流行病学研究,结果显示,近年新发展起来的脉冲场凝胶电泳（ｐｕｌｓｅｄｆｉｅｌｄｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏ－ｒｅｓｉｓ,ＰＦＧＥ）法为其最优异的方法之一［２～４］。本文将该方法用于李斯…     

湖北省2012年流行株O139霍乱弧菌脉冲场凝胶电泳分型分析

目的分析3起霍乱疫情病原O139霍乱弧菌分子分型特征和遗传相关性,探讨O139霍乱疫情流行特征。方法对2012年湖北省3起霍乱疫情分离鉴定的35株O139霍乱弧菌菌株用水煮法提取DNA,利用聚合酶链反应检测霍乱肠毒素CT基因;取新鲜培养的菌株,制备约4.3个麦氏单位的细菌悬浮液,经裂解、洗涤及限制性内切酶NotI和SfiI酶切后进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型,用凝胶成像仪获取电泳图像,分析DNA片段并用BioNumerics V4.6软件UPGMA方法(复选Dice相关系数)进行聚类分析。结果 35株O139霍乱弧菌ctxA基因PCR扩增产物约为308bp,分离自聚餐食用的凉菜、病人、带菌者及厕所标本(对应病人家)O139霍乱弧菌均为产毒株,经NotI酶切分为9种PFGE带型,SfiI酶切分为6种PFGE带型;A市2株病人分离菌和4株带菌者分离菌PFGE带型为KZGN11O139.CN0077+KZGS12O139.CN0054,B市1株病人分离菌和1株厕所分离菌PFGE带型为KZGN11O139.CN0302+KZGS12O139.CN0058,C市和D市分离菌株优势型为KZGN11O139.CN0276+KZGS12O139.CN0007,包括3株食品分离菌、2株厕所分离菌及16株病人和带菌者分离菌,另有6株PFGE带型呈现多样性。结论 2012年湖北省霍乱疫情特点为散发以及聚餐导致的局限暴发,3起疫情的分离菌株带型各不相同,呈现多样性,其中2起为单一菌型感染,1起为混合菌型感染,传染来源复杂且不明确,提示应加强霍乱的病原学监测。     

鼠疫疫苗株脉冲场凝胶电泳操作规范的建立

目的建立鼠疫菌脉冲场凝胶电泳的操作规范,并对操作进行风险评估。方法应用疫苗株EV76进行实验,比较不同培养时间、两种酶切的电泳图形,以及胶块中细菌存活情况的检测。结果不同培养时间对电泳结果没有影响,FseI酶切图谱条带较容易分析,胶块内无细菌存活。结论严格执行标准操作程序,才能确保鼠疫菌脉冲场凝胶电泳(PFGE)操作的实验室生物安全。     

脉冲场凝胶电泳分子分型技术在一起肉毒中毒诊断中的应用

目的 实验室检测2例疑似肉毒毒素中毒病例的3份相关样本,探究中毒事件发生原因,为临床治疗提供参考。方法 参照GB 4789.12-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验肉毒梭菌及肉毒毒素检验》对1份自制腐乳和2份病例的粪便样本进行前处理,应用实时荧光定量PCR法检测样本中肉毒毒素基因,以血琼脂平板和营养琼脂平板分离培养单菌落,将分离出的3株肉毒梭菌进行脉冲场凝胶电泳（pulsed-field gel electrophoresis）,通过BioNumerics(BN)软件对图谱进行聚类分析。结果 1份自制腐乳和2份病例粪便样本的肉毒毒素基因检测结果,均为A型肉毒梭菌核酸阳性,3份样本均分离出A型肉毒梭菌。3株肉毒梭菌通过脉冲场凝胶电泳分子分型检测,得到指纹图谱,经BN软件聚类分析同源性为100%。结论 本次事件是一起因食用受到A型肉毒梭菌污染的自制腐乳而引起的肉毒中毒,分离出的3株肉毒梭菌通过PFGE分子分型确定为同一来源。今后应加强大众预防肉毒中毒的宣传教育,减少此类中毒事件的发生。     

脉冲场凝胶电泳分子分型技术在一起肉毒中毒诊断中的应用

目的 实验室检测2例疑似肉毒毒素中毒病例的3份相关样本,探究中毒事件发生原因,为临床治疗提供参考。方法 参照GB 4789.12-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验肉毒梭菌及肉毒毒素检验》对1份自制腐乳和2份病例的粪便样本进行前处理,应用实时荧光定量PCR法检测样本中肉毒毒素基因,以血琼脂平板和营养琼脂平板分离培养单菌落,将分离出的3株肉毒梭菌进行脉冲场凝胶电泳（pulsed-field gel electrophoresis）,通过BioNumerics(BN)软件对图谱进行聚类分析。结果 1份自制腐乳和2份病例粪便样本的肉毒毒素基因检测结果,均为A型肉毒梭菌核酸阳性,3份样本均分离出A型肉毒梭菌。3株肉毒梭菌通过脉冲场凝胶电泳分子分型检测,得到指纹图谱,经BN软件聚类分析同源性为100%。结论 本次事件是一起因食用受到A型肉毒梭菌污染的自制腐乳而引起的肉毒中毒,分离出的3株肉毒梭菌通过PFGE分子分型确定为同一来源。今后应加强大众预防肉毒中毒的宣传教育,减少此类中毒事件的发生。     

脉冲场凝胶电泳在肠炎沙门菌食源性疾病溯源中的应用

目的对2006年广州地区食源性疾病中分离的肠炎沙门菌进行分子分型,探讨广州地区肠炎沙门菌的分子型别和多态性,为食源性疾病溯源及致病菌数据库的建立提供依据。方法采用限制性内切酶XbaI,对2006年分离到的菌株进行PFGE分子分型,使用BioNumericsVersion4.0软件(使用Dice系数和UPGMA法)对菌株进行聚类分析,并与深圳市的肠炎沙门菌PFGE型别进行比较。结果所有74株肠炎沙门菌均得到一致的PFGE克隆型,表明两次不同的食源性疾病均由同一PFGE型引起。广州与深圳的肠炎沙门菌PFGE图谱的比较表明,两地食源性疾病分离株具有很近的亲缘关系。结论PFGE分子分型与流行病学资料紧密结合可增强对肠炎沙门菌食源性疾病的溯源和预警。     

鼠疫耶尔森氏菌脉冲场凝胶电泳分析

目的 对鼠疫菌的全DNA进行酶切，了解我国各别生态型的鼠疫耶尔森氏菌在核酸水平上的差异。方法 用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法进行分析。结果 用PFGE可将20株鼠疫菌分成5个核型，I型为布氏田鼠型和青海田鼠型菌；Ⅱ型为滇闽居民区型菌和滇西丛谷型菌；Ⅲ型为祁连山型、青藏高原型和1株分离自四川患的鼠疫菌。西藏仲巴地区的2株菌各为一个型。结论 提示脉冲场凝胶电泳分析可用于鼠疫耶尔森氏菌遗传关系的研究。     

吉林省小肠结肠炎耶尔森氏菌脉冲场凝胶电泳分析

目的对小肠结肠炎耶尔森氏菌全DNA进行酶切，了解吉林省小肠结肠炎耶尔森氏菌在核酸水平的差异。方法用脉冲场凝胶电泳（PFGE）方法进行分析。结果用PFGE将33株小肠结肠炎耶尔森氏菌分成7个核型，其中0：3血清型分出5个核型；0：9血清型2个核型。结论提示脉冲场凝胶电泳分析可用于小肠结肠炎耶尔森氏菌遗传关系的研究，以及分析暴发流行和常规监测，追踪传染源。     

2010~2012年深圳市龙岗区致感染性腹泻沙门菌的流行特征和分子分型

目的分析2010~2012年深圳市龙岗区致感染性腹泻沙门菌的流行特征及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型,为沙门菌病的防控提供参考依据。方法对147株沙门菌进行生化鉴定和血清分型,利用PFGE进行分子分型,采集相关的流行病学信息并分析。结果龙岗区2010~2012年沙门菌的流行具有明显季节性,第三季度为高峰期(46.3%,96/147);患者主要为婴幼儿(27.9%,41/147)和青壮年(23.1%,37/147),男女比例为1.37︰1(85/62)。147株沙门菌分属于33种血清型,肠炎沙门菌(35.4%,52/147)和鼠伤寒沙门菌(28.6%,42/147)为优势血清型,XbaⅠ酶切将其分为105种带型,肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌分别有17和34种PFGE型别,优势分子型别分别是XE5、XE1和XP8。AvrⅡ酶切显示本地区可能有数起小型暴发。结论深圳市龙岗区2010~2012年沙门菌PFGE型别较多,菌株来源复杂,主要呈散发状态,偶有局部小型暴发,夏秋季要做好学龄前儿童和青壮年沙门菌病的防控工作。     

脉冲场凝胶电泳在感染性疾病诊治中的应用

脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)被视为感染性疾病暴发疫情中流行病学关系分析的"金标准",目前主要用于细菌性感染性疾病的流行病学研究及细菌分子分型。在医院临床工作中,PFGE在相关感染性疾病的临床诊治、院内感染的溯源与控制等方面同样有很好的应用前景。本文就PFGE在医院临床工作中的应用进行综述。     

结肠黏膜组织蛋白质组双向凝胶电泳技术的建立与优化

目的为开展人类结肠黏膜组织的蛋白质组研究,建立并优化其蛋白质组分析所需的双向凝胶电泳技术,提高其分辨率及重复性.方法采用电子结肠镜直视下活检钳取结肠黏膜组织,对组织蛋白质的提取方法进行改进以达到考马斯亮蓝法染色所需的浓度,优化双向凝胶电泳的关键因素与环节,如第一向固相pH梯度(IPG)等电聚焦的上样量及电泳参数,第二向垂直平板SDS凝胶浓度等.结果以固相pH梯度-IPG胶条(pH=3～10)进行第一向等电聚焦,以SDS均一胶(12.5%)的垂直电泳为第二向,成功地得到了人类结肠黏膜组织的双向凝胶电泳图谱.平均含333±36个蛋白点,匹配率85.56%.结论优化人类结肠黏膜组织蛋白质组分析所需的双向凝胶电泳技术可以建立高分辨率和良好重复性的双向凝胶电泳图谱.     

变性梯度凝胶电泳检测阴道菌群实验方法的建立及优化

目的建立并优化应用变性梯度凝胶电泳(DGGE)检测阴道菌群的技术路线。方法 2011年5~6月在北京大学肿瘤医院妇科门诊就诊的16名成年女性,其中6名女性取阴道穹隆分泌物,10名女性分别取阴道中段和阴道穹窿部分泌物,提取阴道菌群总DNA,采用巢式聚合酶链式反应扩增细菌16SrRNA基因的V2-V3可变区,DNA扩增产物分别在30%~60%和40%~70%浓度梯度变性凝胶下进行DGGE。结果 DGGE图像分析显示阴道中段和阴道穹窿分泌物阴道菌群构成相同,平均条带数为2.5,差异无统计学意义(P>0.05)。变性凝胶浓度梯度为30%~60%时,阴道菌群的DGGE图像中各条带较分散,易于条带识别和分析,但有部分条带电泳出凝胶范围;变性凝胶浓度梯度为40%~70%时,阴道菌群的DGGE条带密集但均较清晰。结论巢式聚合酶链式反应与DGGE相结合具有高效、快速、精确的特点,可用于阴道菌群检测。     

Effects of steroids on fibroblasts: Identification of glucocorticoid-regulated proteins by two-dimensional gel electrophoresis

Fibroblasts cultured from normal human forearm or genital skin were exposed to dexamethasone (DM) 10^-9–10^-7M, deoxycorticosterone (DOC) 10^-6, or vehicle for 4–16 h and [^-35S]methionine-labelled proteins compared by two-dimensional gel electrophoresis. No effects on cell number or [^-35S]methionine incorporation were seen with either steroid, nor any effects of DOC on patterns of protein synthesis. In contrast, after 4 h incubation DM consistently (24/24 gels) caused increased abundance of a protein spot designated κ (kappa; M_r 41000, pK_i, 6.5). After 16 h steroid exposure, levels of protein κ remained elevated; abundance of a second protein spot ω (omega; M_r 42000, pK₁ 5.4) was consistently (8/8 gels) lower than in control fibroblasts. We interpret these data as evidence for glucocorticoid-specific effects on human skin fibroblasts, and that (within the pK₁ and molecular weight range studied) the observed changes in abundance of proteins κ and ω constitute the human fibroblast glucocorticoid domain.     

乙型肝炎肝纤维化组织双向电泳技术的优化

目的:建立并优化乙型肝炎肝纤维化组织蛋白质组研究所需的双向凝胶电泳技术,提高其分辨率和重复性.方法:外科手术获取乙型肝炎肝纤维化组织,提取肝组织总蛋白.利用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离总蛋白,考马斯亮蓝染色后分析凝胶图像.对2-DE中的关键因素与环节,如样本处理、上样量、电泳参数等各步条件进行了一系列优化.结果:优化条件后的乙型肝炎肝纤维化组织双向凝胶电泳图谱水平拖尾减少、斑点分辨率改善、斑点检出数量增加(246±33→729±83).结论:该双向凝胶电泳技术可应用于乙型肝炎肝纤维化组织的蛋白质组学研究.