益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β和MCP-1表达的影响

炎症是糖尿病肾病（diabeticn ephropathy，DN）发生的重要环节，转化生长因子-β（TGF-β）和单核细胞趋化因子（MCP-1）表达增高是导致单核细胞和巨噬细胞浸润肾组织的两个重要因素。益肾胶囊系纯中药制剂，     

益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β1及Smad7表达的影响

目的：探讨益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β1及Smad7表达的影响.方法：将32只雄性Wistar大鼠,随机分为对照组、糖尿病肾病模型组、氯沙坦治疗组、益肾胶囊治疗组,每组8只.治疗组给予氯沙坦钾（20 mg·kg-1·d-1）、益肾胶囊（625 mg· kg-1·d-1）灌胃8周.测定血糖、24 h尿蛋白定量、血肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）,计算内生肌酐清除率（Ccr）;观察肾脏病理变化及肾组织中TGF-β1和Smad7蛋白的表达.结果：与对照组相比,糖尿病肾病模型组大鼠血糖、24h尿蛋白定量、Scr和BUN明显升高,Ccr显著降低;肾组织出现较明显的病理损伤;且肾组织TGF-β1表达显著上调,Smad7蛋白表达量明显减少.益肾胶囊治疗后,与糖尿病肾病模型组相比,24 h尿蛋白定量、Scr和BUN明显下降,Ccr显著上升;肾组织病理损伤程度减轻;此外,肾组织TGF-β1表达显著下调,Smad7蛋白表达量明显增加.结论：益肾胶囊可能通过调节TGF-β1/Smad的表达,从而对糖尿病肾病发挥肾脏保护作用.     

益肾胶囊对糖尿病肾病肾组织SOCS3及Col-Ⅰ、Ⅳ表达的影响

目的:观察益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾组织SOCS-3、Ⅰ、Ⅳ型胶原表达的影响,探讨益肾胶囊延缓糖尿病肾病肾纤维化的机制。方法:36只健康雄性Wistar大鼠,通过尾静脉单次注射链脲佐菌素(60 mg/kg),制造糖尿病大鼠模型,后随机分为DN模型组、益肾胶囊组、氯沙坦钾组,各12只,益肾胶囊组每只灌胃益肾胶囊(625 mg.kg-1.d-1),氯沙坦组每只灌胃氯沙坦钾片(30 mg.kg-1.d-1),另取12只健康大鼠作为正常对照组。正常对照组及模型组每日给予等量蒸馏水。12周后测定各组大鼠体重、24 h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮;采用HE、Masson和PAS染色观察肾组织病理变化,采用免疫组化法检测肾组织中SOCS-3、Ⅰ、Ⅳ型胶原表达水平。结果:实验12周末,与正常组比较,模型组大鼠病理改变较明显,24 h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮明显上升(P<0.05),肾组织中SOCS-3、Ⅰ、Ⅳ型胶原表达明显上调。与模型组比较,治疗组大鼠病理改变减轻,24 h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮水平明显降低(P<0.05);肾组织中SOCS-3表达显著上调,Ⅰ、Ⅳ型胶原表达显著抑制(P<0.05)。结论:益肾胶囊可能通过上调SOCS-3表达,抑制Ⅰ、Ⅳ型胶原的表达,从而减轻了DN大鼠肾小球硬化和肾小管间质纤维化的程度,延缓糖尿病肾病的进展。     

黄芪对糖尿病肾病大鼠肾组织中SOCS1表达的影响

目的：观察黄芪（astragalus）对糖尿病肾病（DN）大鼠肾组织细胞因子信号抑制因子-1（SOCS1）表达的影响。方法：40只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组（N组）、DN模型组（DN组）、黄芪治疗组（DA组）、氯沙坦钾治疗组（DL组）,每组10只,利用单侧肾切除加腹腔注射链脲佐菌素（50mg/kg）建立DN大鼠模型,连续给药12周。检测24h尿蛋白定量、Scr、BUN,免疫组化法检测大鼠肾组织中SOCS1、TGF-β1、IL-6的表达水平。结果：DA组和DL组大鼠24h尿蛋白定量、Scr、BUN均低于DN组（P〈0.05）;SOCS1的表达水平高于DN组（P〈0.05）,而TGF-β1、IL-6的表达水平均低于DN组（P〈0.05）。结论：黄芪可能通过上调SOCS1的表达水平而间接抑制了TGF-β1及IL-6的表达,从而减轻了DN的炎症反应,具有一定的肾脏保护作用。     

益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾组织SIRT6、podocin表达的影响

目的:观察益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾组织SIRT6、podocin表达的影响。方法:SD健康雄性大鼠40只,随机选择30只大鼠建立DKD模型,实验分为4组：正常组、DKD组、益肾胶囊组、白藜芦醇组,益肾胶囊组每只大鼠灌胃益肾胶囊625 mg·kg^-1·d^-1,白藜芦醇组每只大鼠灌胃白藜芦醇30 mg·kg^-1·d^-1,正常组及DKD组每日给予等量的蒸溜水,灌胃8周。第0、4、8周末测定体重、血糖、24 h尿蛋白定量,第8周末处死大鼠,腹主动脉采血测定血肌酐、尿素氮、总胆固醇和三酰甘油,取大鼠肾组织,行HE染色和Masson染色,光镜检查肾组织病理变化,采用免疫组化检测肾组织中SIRT6、podocin表达的情况。结果:(1)与正常组相比,DKD组大鼠肾小球和肾小管损伤明显,体重明显减低(P<0.05),血糖、24 h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮、总胆固醇和三酰甘油明显升高(P<0.05),免疫组化结果示：肾组织中SIRT6、足细胞podocin蛋白表达明显下调(P<0.05);(2)...     

益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾组织SOCS-3、TLR4、IL-6表达的影响

目的：观察益肾胶囊对糖尿病肾病（DN）大鼠模型肾组织中细胞因子信号抑制物3（SOCS-3）、Toll样受体4（TLR4）及白细胞介素-6（IL-6）表达的影响。方法：将40只Wistar系雄性大鼠随机分为4组,即：正常对照组（N组）、DN模型组（DN组）、DN模型＋益肾胶囊治疗组（DN＋Y组）及DN模型＋氯沙坦钾治疗组（DN＋L组）,利用单侧肾切除＋腹腔注射链脲佐菌素,建立DN大鼠模型。记录大鼠体重,检测血糖、24h尿蛋白定量、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）等指标;取肾组织行HE染色,进行病理组织学观察;用免疫组化方法检测肾组织中SOCS-3、TLR4及IL-6的表达。结果：12周末,DN组大鼠的24h尿蛋白定量、Scr、BUN均高于N组（P〈0.05）,肾组织中SOCS-3、TLR4及IL-6表达水平明显高于N组（P〈0.05）;DN＋Y组大鼠24h尿蛋白定量、Scr、BUN均低于DN组（P〈0.05）,肾组织SOCS-3表达水平明显高于DN组（P〈0.05）,而TLR4及IL-6表达水平明显低于DN组（P〈0.05）;DN＋L组与DN＋Y组24h尿蛋白定量、Scr、BUN、SOCS-3、TLR4及IL-6的差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：益肾胶囊可能通过调节SOCS-3、TLR4及IL-6在肾组织中的表达,降低DN的炎症反应,从而延缓DN的进展。     

益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠模型肾组织TLR4表达的影响

目的：观察益肾胶囊对糖尿病肾病（DN）大鼠模型肾组织Toll样受体4（toll-like receptor4,TLR4）、白细胞介素-6（IL-6）及白细胞介素-8（IL-8）表达水平的影响。方法：36只Wistar雄性大鼠随机分成正常对照组、DN模型组、益肾胶囊治疗组,每组12只,利用单侧肾切除加腹腔注射链脲佐菌素建立DN大鼠模型,连续给药12周。记录大鼠体重、观察24h尿蛋白定量、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）变化;取肾组织行病理组织学观察;用免疫荧光方法检测肾组织中TLR4、IL-6及IL-8的表达水平的变化。结果：12周末,DN模型组大鼠的24h尿蛋白定量、Scr、BUN均高于正常对照组（P〈0.05）,肾组织中TLR4、IL-6及IL-8表达水平明显高于正常对照组（P〈0.05）;益肾胶囊治疗组大鼠24h尿蛋白定量、Scr、BUN均低于模型组（P〈0.05）,肾组织TLR4、IL-6及IL-8表达水平明显低于DN模型组（P〈0.05）。结论：益肾胶囊可能通过调节肾组织TLR4、IL-6及IL-8的表达,减少DN的炎症反应,从而延缓了DN的进展。     

黄芪对糖尿病肾病大鼠肾间质Wnt/β-catenin及TGF-β_1信号通路表达的影响

目的：观察黄芪（AM）对糖尿病肾病（DN）大鼠肾间质中Wnt/β-catenin信号通路及转化生长因子-β1（TGF-β1）表达情况的影响,探讨其抗糖尿病肾病肾间质纤维化的作用机制。方法：采用单次空腹腹腔注射60mg/kg链脲佐菌素（STZ）制备糖尿病大鼠模型。4周后测定24h尿蛋白排泄量,以24h尿蛋白定量≥30mg确定DN大鼠模型成功（n=48）。48只DN大鼠随机分为4组：DN模型组（DN组）、黄芪治疗组（DA组）、DN模型组＋氯沙坦治疗组（DL组）、DN模型组＋黄芪联合氯沙坦治疗组（AL组）,每组12只。选取12只健康雄性wistar大鼠作为正常对照组（N组）。连续给药12周后,记录大鼠体重,并检测血清尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）及24h尿蛋白定量;处死大鼠,留取肾组织行HE及Masson染色观察肾间质病理改变,采用免疫组织化学技术及实时荧光定量PCR（FQ-PCR）检测肾间质中Wnt4、β-catenin及TGF-β1蛋白及mRNA的表达。结果：与N组比较,12周末DN组大鼠24h尿蛋白定量、血清BUN、Scr水平明显增高,差异有统计学意义（P〉0.05）。与N组比较,12周末DN组、DA组、DL组和AL组肾间质Wnt4、β-catenin及TGF-β1蛋白表达量明显增加（P〈0.05）。DA组、DL组和AL组作两两比较,AL组24h尿蛋白定量、血清BUN、Scr、Wnt4、β-catenin及TGF-β1下降更为明显,差异有统计学意义（P〈0.05）。DA组与DL组相比各指标差异无统计学意义（P〉0.05）。FQ-PCR结果显示wnt4、β-catenin和TGF-β1mRNA在各组大鼠肾组织中的表达与Wnt4、β-catenin及TGF-β1蛋白表达趋势一致。结论：黄芪可以降低24h尿蛋白定量,减轻肾间质病理损伤,下调wnt4、β-catenin及TGF-β1在肾间质中的表达,提示黄芪可能通过下调Wnt4、β-catenin及TGF-β1在肾间质中的表达,延缓DN大鼠肾间质纤维化的进程,而发挥肾脏保护作用。     

益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾组织JAK/STAT信号通路的影响

目的：观察益肾胶囊对糖尿病肾病（DN）大鼠肾组织JAK/STAT信号通路影响,探讨益肾胶囊对DN大鼠肾脏保护作用的可能机制。方法：将Wistar大鼠制备成DN模型。随机分为4组,即正常对照组（N组）、DN模型组（DN组）、益肾胶囊治疗组（625mg·kg-1.d-1）、氯沙坦钾治疗组（30mg·kg-1.d-1）。实验周期12周。期间检测大鼠血糖和24h尿蛋白定量,通过光镜及电镜观察肾脏组织病理形态学的变化;采用免疫组化方法检测肾组织磷酸化JAK2（p-JAK2）、磷酸化STAT3（p-STAT3）表达及转化生长因子β1（TGF-β1）表达变化。结果：12周末,DN组大鼠肾组织中p-JAK2、p-STAT3、TGF-β1表达显著高于同期正常对照组（P〈0.05）。益肾胶囊治疗组和氯沙坦钾治疗组肾组织中p-JAK2、p-STAT3、TGF-β1表达显著低于同期DN组（P〈0.05）;24h尿蛋白定量显著低于同期DN组（P〈0.05）;病理损伤较同期DN组改善。结论：益肾胶囊可能部分通过抑制DN大鼠肾组织JAK/STAT通路调节肾组织TGF-β1表达,发挥对DN大鼠肾脏的保护作用。     

益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠足细胞podocin表达的影响

目的：观察益肾胶囊对糖尿病肾病（DN）大鼠足细胞Podocin表达的影响。方法：采用切除右侧肾脏后腹腔一次性注射STZ的方法建立DN模型,实验分组为：正常对照组、DN模型组、益肾胶囊组、贝那普利组,每组各10只,益肾胶囊组每只大鼠灌胃益肾胶囊625g·kg-1·d-1,贝那普利组每只大鼠灌胃贝那普利10mg·kg-1·d-1,正常对照组及DN模型组每日给予等量的蒸溜水。经过治疗12周后,采用PT-PCR及Westernblot检测肾组织中Podocin表达的情况。结果：实验12周末,DN模型组足细胞Podocin蛋白表达明显低子正常对照组（P〈0.05）。经过益肾胶囊治疗后Podocin表达明显增加,与DN模型组比较（P〈0.05）,与贝那普利组比较两治疗组之间差异无统计学意义。结论：益肾胶囊明显改善DN模型大鼠足细胞Podocin的表达,可能具有一定的足细胞损伤保护作用。     

益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾小管间质sFRP-1表达的影响

目的:观察益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾小管间质Wnt通路抑制因子-分泌型卷曲相关蛋白-1(sFRP-1)表达的影响。方法:采用一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法诱导建立糖尿病肾病(DN)模型,实验分组为:正常对照组(对照组)、DN模型对照组(模型组)、益肾胶囊组、氯沙坦组,每组8只。益肾胶囊组每只大鼠灌胃益肾胶囊625 mg.kg-1.d-1,氯沙坦组每只灌胃氯沙坦20 mg.kg-1.d-1,正常组和模型组每日给予等量生理盐水灌胃,于2、4、8、12周末测定24 h尿蛋白定量,于治疗12周后测定各组血糖、血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr),同时观察肾小管病理损伤,并采用免疫组化和实时荧光定量PCR方法观察大鼠肾小管间质中sFRP-1、Wnt通路关键调节因子β-catenin表达情况及肾组织中sFRP-1、β-catenin mRNA的表达。结果:12周末,与对照组相比,模型组大鼠血糖、24 h尿蛋白定量、肾小管损伤指数均显著上升,免疫组化示:肾小管间质中sFRP-1表达增加,β-catenin出现胞浆或(和)核表达,实时荧光定量PCR结果显示二者mRNA表达上调(P<0.05);益肾胶囊治疗后,与模型组相比,肾小管间质中sFRP-1表达进一步增加,肾组织中sFRP-1 mRNA进一步上调,β-catenin胞浆或(和)核表达减少,β-catenin mRNA表达下调(P<0.05)。结论:益肾胶囊可能通过上调sFRP-1在DN大鼠肾小管间质的表达,发挥对DN大鼠肾脏的保护作用。     

益肾胶囊对糖尿病肾病模型肾小球足细胞的影响

目的：观察益肾胶囊对糖尿病肾病（DN）大鼠肾组织病理改变及足细胞超微结构的影响。方法：将60只Wis-tar大鼠随机分为4组：正常对照组（对照组）、DN模型组（模型组）、苯那普利组、益肾胶囊组。于注射链脲佐菌素（STZ）后3d起,苯那普利组每日每只灌胃苯那普利3.125mg.kg-1.d-1,益肾胶囊组每日每只灌胃益肾胶囊625mg.kg-1.d-1,对照组及模型组每日给予等量的蒸镏水。各组分别干预12周,观察24h尿蛋白定量、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）的变化,同时行肾脏病理检查。结果：12周末,模型组大鼠24h尿蛋白定量、Scr、BUN均高于对照组（P〈0.05）。苯那普利组及益肾胶囊组24h尿蛋白定量、Scr、BUN均低于模型组（P〈0.05）。光镜下模型组大鼠肾小球系膜基质增多,系膜区增宽;电镜下模型组大鼠肾小球基底膜增厚,足细胞排列紊乱,数目减少,足突增宽、融合。苯那普利组及益肾胶囊组肾小球基底膜病变减轻,细胞外基质减少,足细胞数目增多,足突融合减轻。结论：益肾胶囊能降低尿蛋白排泄,改善肾功能,并对足细胞有一定的保护作用,从而延缓大鼠糖尿病大鼠肾脏损害。     

阿托伐他汀对糖尿病肾病大鼠肾组织中JAK/STAT信号通路及其抑制因子SOCS-1表达的影响

目的：观察糖尿病肾病（DN）大鼠肾组织中JAK-STAT-SOCS负反馈调节机制的变化,以期阐明阿托伐他汀对DN炎症发病机制及其防治措施。方法：60只Wistar雄性大鼠随机分成正常对照组（对照组）、DN模型组（模型组）、阿托伐他汀治疗组（治疗组）,每组20只,利用单侧肾切除加腹腔注射链脲佐菌素（50mg/kg）建立DN大鼠模型,治疗组每日每只灌胃阿托伐他汀（8mg·kg-1·d-1）,正常对照组及模型组每日每只给予等量蒸馏水,连续给药12周。记录大鼠体重;观察尿微量白蛋白（MALB-U）、24h尿蛋白定量（24hUpr）、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）变化;取肾组织行PAS、HE染色观察病理组织学变化;用免疫组织化学染色方法检测肾组织中p-STAT3,p-JAK2,SOCS-1表达水平的变化。结果：12周末,模型组大鼠MALB-U、24hUpr、Scr、BUN显著升高,与对照组比较（P〈0.05）;阿托伐他汀治疗后,各指标显著降低,与模型组比较（P〈0.05）。12周时模型组大鼠肾组织中p-STAT3、p-JAK2、SOCS-1表达水平升高,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）;经阿托伐他汀治疗12周后,大鼠肾组织SOCS-1表达水平较同期模型组明显上调（P〈0.05）,而p-STAT3、p-JAK2的表达受到抑制,低于同期模型组（P〈0.05）。结论：JAK-STAT-SOCS负反馈调节机制可能参与DN的发病过程;阿托伐他汀可能通过调节肾组织p-STAT3、p-JAK2、SOCS-1的表达,减轻DN大鼠的炎症反应,对肾脏有一定保护作用。     

PMMA骨水泥颗粒对大鼠巨噬细胞SOCS1及SOCS3基因表达的影响

目的 观察PMMA骨水泥颗粒对体外培养的巨噬细胞SOCS1及SOCS3基因表达的影响.方法 大鼠腹腔灌洗液筛选法培养巨噬细胞,CD68单抗免疫细胞化学法鉴定细胞纯度和活性,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法检测巨噬细胞SOCS1及SOCS3基因的表达量,分别观察不同浓度PMMA骨水泥颗粒及一定浓度的骨水泥颗粒作用不同时间对巨噬细胞SOCS1及SOCS3基因表达的影响.结果 PMMA骨水泥颗粒促进了体外培养的巨噬细胞SOCS1及SOCS3基因的表达,并表现出一定的浓度及时间相关性;颗粒浓度在0.25 mg/mL时SOCS1及SOCS3基因表达量明显升高(P<0.05);当颗粒作用时间在24 h左右时SOCS1及SOCS3基因表达升高最显著(P<0.05).结论 PMMA骨水泥颗粒能够促进巨噬细胞SOCS1及SOCS3基因的表达.     

肾炎康复片对糖尿病肾病大鼠肾组织Podocalyxin表达的影响

目的：观察肾炎康复片对糖尿病肾病大鼠肾组织Podocalyxin表达、生化指标及病理改变的影响。方法：40只雌性Wistar大鼠随机分为正常对照组、DN模型组（模型组）、肾炎康复片治疗组（中药组）、氯沙坦钾治疗组（西药组）。复制糖尿病肾病大鼠模型,并予药物干预。分别观察不同时期各组大鼠血糖、24h尿蛋白定量,12周末大鼠肾组织Podocalyxin表达水平、Scr、BuN及肾脏组织病理变化。结果：12周模型组、中药组、西药组大鼠Podocalyxin蛋白表达均显著低于同期正常对照组（P〈0．05）,肾组织病理损伤明显,24h尿蛋白定量较正常对照组显著增高（P〈0．05）。12周末用药组大鼠肾组织Podocalyxin蛋白表达显著高于同期模型组（P〈0．05）,肾组织病理损伤较模型组明显减轻。血糖水平略低于同期模型组,但差异无统计学意义（P〉0．05）,24h尿蛋白定量、BUN、Scr水平显著低于同期模型组（P〈0．05）。结论：肾炎康复片能够上调糖尿病肾病大鼠肾组织Podocalyxin表达水平,对糖尿病肾病肾脏损伤有保护性作用。     

人组织型激肽释放酶基因对大鼠糖尿病肾病的影响及其机制

目的：探讨人组织型激肽释放酶基因（human tissue kallikrein,HK）对糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）的影响及其机制。方法：48只雄性Wistar大鼠随机分为普通饲料组（即正常组）和高脂高糖饲料组。高脂高糖饲料组以小剂量链脲佐菌素加高脂高糖饮食诱导2型糖尿病（diabete mellitus,DM）模型,造模后随机分为两组,分别经尾静脉导入重组腺相关病毒（recombinant adeno-associated viruses,rAAV）介导的HK基因（HK组）以及报告基因beta-半乳糖苷酶（beta-galac-tosidase,LacZ）（LacZ组）,观察12周后处死实验动物,留取心、肝、肾等组织。Western blot检测HK在各组织的表达。PAS染色观察肾小球硬化情况,天狼猩红染色观察肾脏纤维化情况。24h尿微量白蛋白（microalbuminuria,mAlb）与尿渗透压检测评定肾功能,免疫组织化学以及Western blot检测肾脏转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）的表达。结果：rAAV介导的HK可在2型DM大鼠的肝脏、肾脏、心脏表达,而且相较于LacZ组且表达增强;PAS染色显示：LacZ组肾脏出现中度的肾小球系膜细胞及基质增生,血管周围间质细胞浸润,血管壁增厚,以及肾小囊滴状病变和毛细血管纤维帽。另外肾小管大量的空泡变性,肾小管腔内出现较多蛋白质管型,HK组较LacZ组明显好转;天狼星红染色显示：LacZ组肾脏间质、血管壁胶原沉积,肾小球细动脉管壁增厚,而HK组病变较轻（P〈0.05）;24hmAlb排泄量LacZ组比正常组明显增加（P〈0.05）,HK组较LacZ组排泄量显著下降（P〈0.05）。LacZ组与正常组比较,尿渗透压明显下降（P〈0.05）,HK组较LacZ组显著上升（P〈0.05）;TGF-β1主要表达于LacZ组的肾小管上皮细胞,HK组较LacZ组TGF-β1明显下调（P〈0.05）。结论：HK基因明显改善DN,保护肾功能,原因可能与下调肾脏TGF-β1的表达有关。