HDM通过肺泡巨噬细胞TLR4诱导哮喘小鼠气道炎症的机制研究

目的:研究HDM通过肺泡巨噬细胞(AM)Toll样受体4(TLR4)的高表达及诱导AM的活化,探讨其对哮喘小鼠气道炎症的影响.方法:BALB/c小鼠随机分为哮喘模型组(OVA)A,HDM处理组(HDM+OVA)B,对照组(生理盐水)C.用卵白蛋白(OVA)致敏与激发建立小鼠哮喘模型;HE染色观察小鼠气道及肺组织病理变化;光学显微镜下观察小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞分类及计数;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠BALF上清中IL-4、IL-5、IL-13和IFN-γ的含量,实时定量PCR法测定AM的TLR4的表达,流式细胞技术(FCM)检测AM的CD80、CD86的表达.结果:与A组相比,B组BALF上清中IL-4、IL-5和IL-13的水平显著增高(P<0.05),而IFN-γ差异无统计学意义(P>0.05),与A组相比,AM的TLR4mRNA表达明显增高(P<0.05),CD80的表达差异无统计学意义,CD86的表达水平显著增高,差异有统计学意义(P<0.05).结论:HDM通过AM的TLR4的高表达诱导AM的活化,加重哮喘的气道炎症.     

TLR4信号转导通路在肿瘤中的作用

慢性炎症与恶性肿瘤密切相关,Toll样受体4(TLR4)在肿瘤中的广泛表达提示其在慢性炎症致瘤机制中发挥重要作用.活化肿瘤细胞TLR4不仅促进肿瘤的生成和转移,而且参与肿瘤的免疫逃逸.另一方面,免疫佐剂又通过激活免疫细胞的TLR4信号产生抗肿瘤免疫.因此,TLR4在肿瘤中起着双刃剑的作用.     

脂多糖通过TLR4对幼年哮喘大鼠气道炎症的调节作用

以前的研究表明，TH2细胞的优势应答是导致嗜酸性粒细胞性哮喘发生发展的主要免疫学基础。近年研究发现，Toll样受体（TLR）信号通路激活诱导TH1免疫应答的作用可用来防治有害的TH2优势应答，如哮喘病的发生发展。然而在免疫激活的初始阶段TLR4刺激物脂多糖（LPS）的不同构型、不同浓度以及不同作用时间会影响适应性免疫应答的极化方向，目前对LPS在哮喘的气道炎症发生发展中的作用仍有争论。     

Toll样受体4/核因子-κB对哮喘大鼠气道炎症和重构的影响

目的:探讨TLR4/NF-κB对哮喘大鼠气道炎症和气道重构的影响.方法:将18只SD大鼠随机分成3组:对照组、哮喘4周组和哮喘8周组,每组6只.造模成功后,利用HE染色、免疫组织化学方法及病理图像分析系统分析大鼠气道平滑肌的嗜酸性粒细胞(EOS)浸润情况、气道壁厚度以及增殖细胞核抗原(PCNA)和Bcl-2的蛋白表达量.利用RT-PCR和Western blotting检测ASM中TLR4和NF-κB的mRNA及蛋白表达.结果:哮喘4周组和哮喘8周组的气道壁EOS计数、气道壁厚度、气道反应性均较正常对照组显著增加(P<0.01);哮喘4周组和哮喘8周组的TLR4及NF-κB的mRNA水平和蛋白表达与对照组比较均显著增加(P<0.01);TLR4及NF-κB的mRNA水平随哮喘天数的增加而显著增加(P<0.01);哮喘4周组、哮喘8周组PCNA和Bcl-2的蛋白表达量均显著高于正常对照组(P<0.01);哮喘两组间上述指标差异显著(P<0.05或P<0.01).结论:TLR4/NF-κB可能参与哮喘大鼠气道炎症和气道重构的调控.     

Toll样受体4/核因子-κB对哮喘大鼠气道炎症和重构的影响

目的: 探讨TLR4/NF-κB对哮喘大鼠气道炎症和气道重构的影响。方法: 将18只SD大鼠随机分成3组:对照组、哮喘4周组和哮喘8周组,每组6只。造模成功后,利用HE染色、免疫组织化学方法及病理图像分析系统分析大鼠气道平滑肌的嗜酸性粒细胞(EOS)浸润情况、气道壁厚度以及增殖细胞核抗原(PCNA)和Bcl-2的蛋白表达量。利用RT-PCR和Western blotting检测ASM中TLR4和NF-κB的mRNA及蛋白表达。结果: 哮喘4周组和哮喘8周组的气道壁EOS计数、气道壁厚度、气道反应性均较正常对照组显著增加(P<0.01);哮喘4周组和哮喘8周组的TLR4及NF-κB的mRNA水平和蛋白表达与对照组比较均显著增加(P<0.01);TLR4及NF-κB的mRNA水平随哮喘天数的增加而显著增加(P<0.01);哮喘4周组、哮喘8周组PCNA和Bcl-2的蛋白表达量均显著高于正常对照组(P<0.01);哮喘两组间上述指标差异显著(P<0.05或P<0.01)。结论: TLR4/NF-κB可能参与哮喘大鼠气道炎症和气道重构的调控。     

IL-27对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的研究IL-27对卵白蛋白(OVA)激发哮喘小鼠气道炎症的影响。方法 24只雌性BALB/c小鼠随机分为生理盐水组、哮喘组及IL-27组,每组8只。应用OVA建立哮喘模型,IL-27组小鼠应用1μgIL-27(溶于50μlPBS中)滴鼻给药,观察3组小鼠肺组织病理改变,计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞;ELISA法测定小鼠BALF中IL-4和IFN-γ浓度,RT-PCR测定肺组织T-bet mRNA的表达量。结果 IL-27组小鼠肺组织炎症反应明显轻于哮喘组小鼠;IL-27组小鼠BALF中嗜酸性粒细胞计数为(2.21±0.33)×107/L明显低于哮喘组的(12.82±2.17)×107/L(P0.01);IL-27组小鼠BALF中IL-4浓度为(20.4±3.2)μg/L,明显低于哮喘组的(61.3±13.1)μg/L(P0.05);IL-27组小鼠BALF中IFN-γ浓度为(50.3±6.3)μg/L,明显高于哮喘组的(11.1±3.3)μg/L(P0.05);IL-27组小鼠肺组织T-bet mRNA表达量(吸光度积分比值)为(0.268±0.048),明显高于哮喘组的(0.130±0.012)(P0.05)。结论 IL-27可能通过增强T-bet mRNA的表达增强Th1反应,减少BALF中嗜酸性粒细胞数量,进而减轻了哮喘小鼠肺组织炎症反应。     

地塞米松对小鼠脾脏巨噬细胞内TLR4和TLR2表达的影响

为观察小鼠脾巨噬细胞内的TLR4和TLR2在脂多糖 (LPS )刺激后 ,地塞米松 (Dx )对其表达量的影响 ,在向BALB/c小鼠腹腔内注射LPS和Dx后采用贴壁法分离小鼠脾巨噬细胞 ,通过半定量RT PCR方法测定了TLR4和TLR2mRNA的表达量。结果显示 :①LPS刺激后 ,小鼠脾巨噬细胞内TLR4mRNA显著上调 (吸光度比为 0 11) ,TLR2上调不明显 (吸光度比为0 0 0 8) ;②预先注射不同剂量Dx ,分别为 0 1mg/kg、 1mg/kg、 10mg/kg ,再用LPS刺激小鼠。注射了Dx后巨噬细胞TLR4mRNA表达量较单纯注射LPS的小鼠显著降低 (吸光度比分别为 0 0 93、 0 0 5 0和 0 0 14 ) ;但TLR2mRNA表达量随着Dx使用剂量增加而增加 (吸光度比分别为 0 0 5 4、 0 0 80和 0 16 1)。该项研究表明TLR4是参与LPS引起炎症反应的主要Toll样受体 ,而TLR2不起主要作用 ;Dx对LPS刺激后TLR 4mRNA的表达有抑制作用 ,而对TLR2mRNA的表达有增强作用 ;Dx抑制LPS引起的炎症反应可能与抑制TLR4的表达有关     

TLR家族在中枢神经系统中的免疫调节作用

Toll样受体（Toll—like receptors，TLRs）家族识别病原体相关分子模式（PAMPs）从而启动固有免疫应答，属于模式识别受体（PRRs）。目前关于TLRs在中枢神经系统中发挥的免疫调节作用所进行的研究已经积累了一些资料。深入探讨TLR家族在中枢系统的慢性炎症中的作用，将有助于揭示阿尔茨海默病等常见病的发病机理及寻求其防治新措施。     

let-7在小鼠哮喘模型气道炎性反应中的作用及机制

目的 观察let-7家族微RNA抑制剂(anti-let-7)对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠气道炎性反应的影响,并探讨let-7参与哮喘形成的机制.方法 32只小鼠按随机数字法分为4组(n=8),即正常对照组(A组)、哮喘组(B组)、干预对照组(C组)和干预组(D组).其中B、C和D组用鸡卵蛋白(OVA)免疫,建立哮喘模型,A组以生理盐水替代OVA处理.D组小鼠激发前注射anti-let-7以抑制内源性let-7表达,C组小鼠注射乱序siRNA对照.比较各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)的细胞计数,肺组织中let-7e以及BALF中白细胞介素-10(IL-10)含量;体外用anti-let-7转染肺癌细胞A549,并检测细胞中let-7e表达和细胞培养上清中IL-10的含量;荧光素酶报告法检测let-7e是否直接靶向IL-10.结果 与A组相比,B组和C组小鼠BALF中细胞总数和嗜酸粒细胞数显著增加[(20.32±5.33)×109/L和(24.74±6.69)×109/L比(7.12± 1.88)×109/L,(6.45±2.5)×109/L和(7.12±2.66)×109/L比(0.04±0.01)×109/L,均P＜0.01];肺组织中let-7e水平明显升高(分别为3.83倍和3.27倍,均P＜0.01).与C组比较,D组BALF中细胞总数和嗜酸粒细胞数明显减少[(13.85±3.74)× 109/L比(24.74±6.69)×109/L,(2.15±1.13)×109/L比(7.12±2.66)×109/L,均P＜0.05];肺组织中let-7e显著降低[(0.45±0.22)比(3.28±0.45),P＜0.01],同时BALF中IL-10水平明显升高[(4.68±0.85)比(1.70±0.29),P＜0.01].此外,在肺癌细胞A549 中转染anti-let-7,let-7e表达显著下降[(0.22±0.03)比(1.00±0.11),P＜0.01],同时培养上清中IL-10明显上升[(2.58±0.35)比(1.00±0.15),P＜0.01].体外let-7e过表达显著降低IL-10报告载体的荧光素酶活性[(0.59±0.06)比(1.00±0.03),P＜0.01],而对突变的IL-10报告载体没有抑制作用.结论 anti-let-7对哮喘小鼠气道炎性反应具有明显的抑制作用,其作用机制可能与let-7直接靶向并抑制IL-10有关.     

雷公藤甲素对哮喘豚鼠肺内嗜酸性粒细胞IL-5等受体表达的影响

目的 观察哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中不同密度嗜酸细胞（Eos)上白介素－5受体α（IL－5Rα）、IL－3Rα、粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子受体α（GM－CSFRα）及共同β链受体（βcR)mRNA表达及雷公藤甲素（TP）对它们的影响，探讨TP促进哮喘Eos凋亡的机制。方法 健康豚鼠18只随机分为正常组、哮喘组、TP组。以卵蛋白致敏激发制作豚鼠哮喘模型，分离BALF中的低密度Eos(HEos)及正常密度Eos(NEos)，TUNEL法检测细胞凋亡，原位杂交检测各受体mRNA表达，RT－PCR法检测Eos IL-5Rα、IL－3Rα相对含量。结果 哮喘豚鼠Eos凋亡明显减少，而细胞数明显高于正常组。用TP 24h后不同密度Eos数量明显低于哮喘组（P＜0．01），以HEos下降为明显（P＜0．05）；TP组Eos凋亡明显高于哮喘组（P＜0．01）。哮喘豚鼠Eos表达α受体mRNA明显低于正常组，而βcR表达明显增高；TP处理组Eos各α受体mRNA表达均明显增加，βcR表达明显下降。RT－PCR检测显示，TP组IL－5Rα、IL－3RαmRNA显著增加。结论 哮喘Eos存在凋亡抑制；TP可通过促进IL－5、IL－3、GMPCSF受体各自α链表达，抑制这3种受体的共同β链表达，减少其生物学功能，促进Eos凋亡。     

卡介菌多糖核酸对哮喘大鼠肺组织IL-12/STAT4信号通路的影响

目的探讨卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)对支气管哮喘大鼠肺组织白介素12/信号转导子及转录激活子4(IL-12/STAT4)信号通路的影响及其在气道炎症中的作用。方法将40只雄性SD大鼠随机分成正常对照组(A组),哮喘模型组(B组),卡介菌多糖核酸组(C组)和地塞米松组(D组),每组10只。采用鸡清卵蛋白(OVA)致敏和激发的方法制备哮喘大鼠模型。苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理形态学改变,用免疫组化法观察IL-12和STAT4在大鼠哮喘模型肺组织中的表达分布。结果模型组肺组织IL-12和STAT4蛋白表达较少,其平均灰度值显著高于对照组(P<0.01);地塞米松组和卡介菌多糖核酸组肺组织IL-12和STAT4蛋白表达较多,其平均灰度值显著低于哮喘组(P<0.01),而地塞米松组和卡介菌多糖核酸组之间差异无统计学意义;卡介菌多糖核酸组STAT4的表达与IL-12呈正相关(r为0.908,P<0.01)。结论卡介菌多糖核酸调节气道炎症可能是通过调控IL-12/STAT4信号通路的基因表达实现的。     

The role of Toll-like receptor 4 versus interleukin-12 in immunity to respiratory syncytial virus

Toll-like receptors (TLR) and IL-12 represent key elements of innate immunity. Using C57BL/10 ScCr mice it was shown that TLR4 is important for control of infection with respiratory syncytial virus (RSV). Since these mice have an additional defect in the IL-12R, we reinvestigated immunity to RSV in several C57BL/10 and BALB/c mouse strains lacking a functional TLR4, a functional IL-12-IL-12R interaction or both. In the absence of a functional IL-12 axis, early virus control was impaired in C57BL/10 mice, but not in BALB/c mice. By contrast, TLR4 had no impact on RSV elimination. Pulmonary NK cell recruitment was impaired in IL-12 deficient BALB/c mice and NK cytotoxicity was reduced in IL-12/IL-12R-deficient mice of both genetic backgrounds. Absence of TLR4 had no impact on NK cell recruitment or NK activity nor on recruitment of other pulmonary inflammatory cells. Activation of RSV-specific T cell immunity, including T cell mediated immunopathology, was normal in all mutant strains. These findings clearly argue against a significant role for TLR4 and define a limited role for IL-12 in primary murine RSV infection.     

C反应蛋白对人外周血CD14单核细胞TLR4信号转导的影响

目的: 观察C反应蛋白(CRP)对CD14⁺单核细胞Toll样受体4(TLR4)表达的影响,以探讨CRP在急性冠脉综合征(ACS)致炎机制中的作用。方法: 不同浓度(5、25、50、100 mg/L)和不同作用时间(6、12、24、48 h)的CRP刺激正常人外周血CD14⁺单核细胞,或者不同浓度TLR4抑制剂预先干预CD14⁺单核细胞后,再给予CRP刺激。应用流式细胞仪检测细胞表面TLR4蛋白的表达,定量PCR方法检测TLR4 mRNA和髓样分化蛋白2(MD-2)mRNA表达,ELISA检测刺激前后细胞上清液肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、金属蛋白酶9(MMP-9)水平。结果: CRP可剂量依赖和时间依赖地增加CD14⁺单核细胞表达TLR4和MD-2,高浓度TLR4抑制剂可完全阻断CRP对TLR4、MD-2的影响。TNF-α、IL-6、MMP-9与TLR4、MD-2也呈现相同的变化。结论: CRP可激活正常人CD14⁺单核细胞TLR4信号转导途径,并诱导产生TNF-α、IL-6、MMP-9,提示CRP可作为病原相关分子模式(PAMP),通过TLR4模式受体介导而产生炎症反应,参与动脉粥样硬化形成,促进ACS炎症的发展。     

Toll-like receptor 4 expression levels determine the degree of LPS-susceptibility in mice

C57BL/10ScCr (Cr) mice carry a deletion of the Toll-like receptor 4 (tlr4) gene (i.e. they are tlr4(0/0)) and are thus refractory to LPS effects. Insertion of wild-type tlr4 transgene into the tlr4(0/0) Cr germ line endowed LPS susceptibility in the two transgenic lines created, indicating that TLR4 is the only limiting factor for LPS responsiveness in Cr mice. The absolute levels of tlr4 mRNA expressed by the heterozygous transgenic (tlr4(Tr/0)), wild-type C57BL/10ScSn (Sn) (tlr4(+/+)) and heterozygous F1 (Sn x Cr) (tlr4(+/0)) mice varied markedly. However, the pattern of distribution of expression in the different organs was the same in all strains. In different biological assays (B cell mitogenicity, cytokine induction and lethal toxicity) the degree of LPS response obtained in the different strains of mice correlated with the levels of tlr4 mRNA expression. In macrophages, investigation of the LPS-induced cytokine (IL-6) response revealed a linear relationship between the response and the logarithm of TLR4-MD-2 levels.     

Toll-like receptor 3 differently modulates inflammation in progressive or benign multiple sclerosis

TLR-dependent signal transduction pathways were analyzed in patients with a diagnosis of either relapsing–remitting (RRMS), secondary progressive (PMS) or benign (BMS) MS and healthy controls (HC). Prototypical TLR molecules expressed either on the cell surface (TLR4) or intracellularly (TLR3) were stimulated with specific antigens (LPS and poly I:C, respectively). Expression of factors involved in TLR signaling cascades, production of downstream immune mediators and TLR expression were evaluated. Results showed that, whereas LPS-stimulation of TLR4 had a marginal effect on cell activation, poly I:C-stimulated TLR3 expression on immune cells was significantly increased in PMS and BMS compared to HC. This was associated with a higher responsiveness to poly I:C that resulted in the activation of the TLR3-mediated pathway and the production of inflammatory cytokines in PMS and, in contrast, in the up-regulation of a peculiar mosaic of inflammation-dampening genes in BMS. Results herein might explain different MS disease phenotypes.     

HSP60及TLR4信号途径在小鼠心脏移植物中的表达及意义

目的:检测HSP60及TLR4信号途径在小鼠心脏移植物中的表达情况,探讨其在心脏移植排斥反应中的作用以及它们之间的关系。方法:建立小鼠颈部心脏移植模型,随机分为2组:对照组(同系移植组),供、受体均为C57BL/6小鼠;实验组(同种异品系移植组),供、受体分别为BALB/c、C57BL/6小鼠。分别于移植后第3d、第7d取小鼠心脏及血液标本,免疫组化及Western blotting检测心脏移植物HSP60、TLR4、MyD88及NF-κB的表达情况,ELISA法检测小鼠血液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-12(IL-12)的浓度,病检分析心脏组织形态学改变。结果:实验组心脏移植物HSP60、TLR4、MyD88、NF-κB的表达及TNF-α、IFN-γ、IL-12的浓度明显高于对照组;病理学检查结果显示实验组小鼠在术后第3、7d分别发生轻、重度排斥,对照组无明显排斥现象。结论:心脏移植后HSP60表达增强,可能通过TLR4以MyD88依赖的方式激活TLR4信号途径,从而促进移植排斥反应的发生,调控HSP60及其受体后信号途径可能为抗排斥反应提供新思路。     

地塞米松对哮喘大鼠嗜酸性粒细胞中p53表达的影响

目的： 研究支气管哮喘支气管肺泡灌洗液（BALF）嗜酸性粒细胞中凋亡相关基因p53的表达以及地塞米松对其的作用及其机制。方法： 将36只大鼠随机分为对照组、哮喘组和激素组，并对其BALF的嗜酸性粒细胞进行计数，以免疫印迹法(Western blotting)检测嗜酸性粒细胞中p53的表达。结果： 哮喘组BALF的 总细胞数及嗜酸性粒细胞均高于激素组及对照组（P<0.01）。哮喘组BALF的嗜酸性粒细胞中p53表达弱于激素组和对照组（P<0.01）。结论： 哮喘气道炎症与嗜酸性粒细胞生存增加亦即嗜酸细胞凋亡减少密切相关。糖皮质激素可诱导嗜酸性粒细胞凋亡，其机制可能与促嗜酸性粒细胞凋亡的p53表达有关。     

地塞米松对哮喘豚鼠气道壁厚度的影响

目的:探讨哮喘时气道壁厚度变化及地塞米松对气道壁厚度的影响。方法:豚鼠30只,随机分为对照组、哮喘组和地塞米松干预组各10只。以腹腔注射10%卵蛋白和1%卵蛋白雾化吸入复制慢性哮喘模型。治疗组在每次激发前给予地塞米松干预。对右肺行支气管肺泡灌洗后分离固定,石蜡切片,行HE染色,用Luzex-F图像分析系统,测量小气道内周长和厚度,计算厚度百分比。结果:哮喘组支气管肺泡灌洗液的细胞总数多于对照组(P<0.05),哮喘组气道壁厚度%[(11.21±3.11)%]显著大于对照组[(5.82±1.29)%](P<0.05);地塞米松干预组的支气管肺泡灌洗液细胞总数、嗜酸性粒细胞%和气道壁厚度%均明显低于哮喘组,有显著差异(P<0.05)。结论:慢性哮喘时气道壁厚度增加,结构重建;早期地塞米松治疗可减轻厚度的增加。