miR-148-3p抑制剂下调Akt2调控HUVECs细胞增殖及凋亡机制研究

目的 探究微RNA(miR)-148-3p对模拟角膜新生血管形成常见体外细胞模型人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的增殖及凋亡的影响。方法 实验分2个阶段,第1阶段,HUVECs分为：空白对照组(以HUVECs不作任何处理)、NC inhibitor组(转染NC inhibitor)、miR-148-3p inhibitor组(转染miR-148-3p inhibitor)。采用CCK-8法检测抑制miR-148-3p表达对HUVECs增殖能力的影响;TargetScan筛选miR-148-3p潜在靶基因,双荧光素酶报告基因实验进行验证;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Akt2表达水平变化;第2阶段,HUVECs分为：NC组(转染过表达质粒Akt2的阴性对照)、Akt2组(转染过表达Akt2质粒);NC inhibitor组、miR-148-3p inhibitor组、miR-148-3p inhibitor+Akt2组(共转染miR-148-3p inhibitor和过表达Akt2质粒),采用CCK-8法检测miR-148-3p inhibitor和Akt2对HUVECs...     

负向调控p21对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

探讨AU 结合因子1（AUF1）调控p21对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法 采用qRT-PCR和Western blot分别检测AUF1在骨肉瘤组织mRNA和蛋白表达水平。在骨肉瘤U2OS和HOS细胞中分别转染sh-NC和sh-AUF1后,CCK8检测细胞增殖情况;qRT-PCR检测增殖相关分子PCNA的表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测凋亡相关分子Cleaved-caspase-3的表达水平。RNA结合蛋白免疫沉淀实验和RNA半衰期实验检测AUF1调控p21的机制。结果 AUF1 mRNA和蛋白的表达水平在骨肉瘤组织中明显高于癌旁正常组织（P＜0.05）,AUF1 mRNA的表达水平在骨肉瘤伴转移的患者中明显高于骨肉瘤不伴转移的患者（P＜0.05）。在U2OS和HOS细胞中分别转染sh-NC和sh-AUF1,AUF1 mRNA和蛋白的表达水平在转染sh-AUF1组较sh-NC组明显下降（P＜0.05）。低表达AUF1能够明显抑制U2OS和HOS细胞的增殖和增殖相关分子PCNA的表达（P＜0.05）,促进细胞凋亡和凋亡相关分子Cleaved-caspase-3的表达（P＜0.05）。低表达AUF1能够明显促进U2OS和HOS细胞中p21 mRNA和蛋白的表达水平（P＜0.05）。AUF1蛋白能够与p21 mRNA结合,同时低表达AUF1能够明显抑制p21 mRNA的降解速度（P＜0.05）。结论 AUF1在骨肉瘤组织和细胞中明显高表达,低表达AUF1能够抑制p21 mRNA 降解,增加p21蛋白的表达,进而抑制骨肉瘤细胞增殖和促进细胞凋亡     

蛋白激酶CK2在肿瘤生物学中的作用

蛋白激酶CK2是一种在真核细胞中普遍存在的高度保守信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶,功能多样,对细胞生长、增殖、凋亡及生物节律等均具有很重要的调控作用。其表达失衡与肿瘤的发生发展关系密切。近年来,CK2的研究取得一些重要的进展,鉴于与肿瘤的发生发展的密切联系,有关蛋白激酶CK2的研究越来越受到人们的关注,尤其是其在肿瘤及其他相关疾病的发生发展中所起的作用以及在肿瘤治疗中的应用。     

骨肉瘤中细胞凋亡和细胞增殖的关系

[目的]探讨骨肉瘤组织中细胞凋亡与细胞增殖的关系。[方法]利用原位末端转移酶法和免疫组织化学技术分别检测骨肉瘤和良性骨肿瘤中凋亡细胞密度和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。[结果]4种亚型骨肉瘤组织中凋亡细胞密度均明显低于良性骨肿瘤组织，而CNA阳性细胞密度明显高于良性骨肿瘤组织；在4种亚型骨肉瘤中凋亡细胞密度和PCNA阳性细胞密度呈明显负相关，而在良性骨肿瘤中两者呈线性正相关。[结论]在骨肉瘤的发生中可能普遍存在细胞凋亡机制的紊乱，可能以低 亡高增殖表现为多，并认为细胞凋亡检测尚难以作为一种独立的预后判断指标。     

miR-27b-3p调控SMAD1对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭作用的影响

目的 寻找并验证miR-27b-3p和SMAD1的关系,探讨miR-27b-3p对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移作用的影响,为骨肉瘤靶向治疗提供理论依据。 方法 采用生物信息学方法预测候选靶基因;应用双荧光素酶报告实验确定miR-27b-3p和SMAD1靶向关系;采用qRT-PCR法选择SAOS-2骨肉瘤细胞系。采用miR-27b-3p转染SAOS-2细胞后,分为miR-27b-3p inhibitor组、空白对照组和阴性对照组。采用MTT、Transwell迁移和侵袭实验检测miR-27b-3p对SAOS-2细胞的影响;采用Western blotting法检测沉默miR-27b-3p后SMAD1的表达量。 结果 生物信息学检测显示,miR-27b-3p与SMAD1-UTR存在结合位点;双荧光素酶报告实验显示,miR-27b-3p inhibitor组SMAD1的表达量高于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05),SMAD1是miR-27b-3p的靶基因。SAOS-2细胞MTT、Transwell迁移实验和侵袭实验结果均显示,miR-27b-3p inhibitor组与空白对照组和阴性对照组细胞数相比降低,差异有统计学意义(P<0.05),miR-27b-3p inhibitor组细胞的增殖、迁移和侵袭能力降低。miR-27b-3p inhibitor组与阴性对照组SMAD1蛋白表达量相比明显降低(P<0.05)。 结论 miR-27b-3p可以通过调控SMAD1的表达促进骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭作用。miR-27b-3p可能在骨肉瘤细胞中起着促癌基因作用。     

安石榴甙对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制研究

目的:探讨安石榴甙(PUN)对骨肉瘤(OS)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其可能机制.方法:选取OS的U2 OS和MG63细胞,用不同浓度PUN处理,分别设置为不加PUN的对照组和50、75、100μmol·L-1 PUN组.用结晶紫法检测细胞增殖能力,细胞划痕愈合实验检测细胞迁移,Transwell小室法检测细胞侵袭和...     

帕金森病相关蛋白DJ-1对人骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的影响

目的：研究帕金森病相关蛋白DJ-1对人骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法： Western 印迹检测骨肉瘤细胞株(MG-63,Saos-2和U2OS)及正常人成骨细胞株hFOB1.19中DJ-1和第10号染色体上缺失的 磷酸酶与张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog deleted from chromosome 10,PTEN)基因的表达。DJ-1 siRNA处 理人骨肉瘤细胞后,采用Western印迹检测DJ-1的蛋白表达水平;细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细 胞存活率;膜联蛋白V(annexin V)-异硫氰酸荧光素(fl uorescein isothiocyanate,FITC)/碘化吡啶(propidium iodide,PI)双染 检测细胞凋亡;Transwell侵袭和迁移实验检测细胞侵袭和迁移水平。结果：与hFOB1.19细胞比较,骨肉瘤细胞DJ-1蛋 白表达水平显著升高(均P<0.05),其中U2OS细胞升高最为显著(P<0.01)。DJ-1 siRNA可显著降低U2OS细胞中DJ-1蛋白 表达水平、降低细胞存活率、促进细胞凋亡、抑制细胞侵袭和迁移水平,以及增加PTEN蛋白表达水平(均P<0.05)。 另外,与hFOB1.19细胞比较,PTEN在骨肉瘤细胞中的蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论：DJ-1可抑制人骨肉瘤 细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞侵袭和迁移水平,其机制可能与增加PTEN蛋白的表达水平有关。     

PARP-1抑制剂对骨肉瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨PARP-1抑制剂3-aminobenzamide（3-AB）对骨肉瘤U2OS细胞增殖及凋亡的影响。方法常规培养骨肉瘤U2OS细胞,采用CCK-8法检测U2OS细胞的增殖和流式细胞术检测细胞凋亡,并用caspase-3活性测定试剂盒检测caspase-3活性和Western-blot技术检测Bcl-2、Bax的表达。结果 3-AB能抑制骨肉瘤细胞的增殖,且与剂量和时间呈相关性,流式细胞术检测结果显示3-AB能促进骨肉瘤细胞的凋亡,且呈时间相关性,3-AB刺激早期caspase-3活性增高,Western-blot显示3-AB刺激后随时间延长Bax的表达量逐渐升高,而Bcl-2的表达量则轻度升高后降低。结论 PARP-1抑制剂3-AB能抑制骨肉瘤细胞的增殖,促进其凋亡,这为PARP-1作为骨肉瘤治疗的新靶点提供了初步实验依据。     

lncRNA H19靶向miR-194对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的影响及其作用机制

目的 探讨长链非编码RNA (lncRNA) H19靶向微RNA 194 (miR-194)对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的影响及其作用机制。方法收集2018年1月至2019年6月大连医科大学附属大连市第五人民医院骨外二科行骨肉瘤切除术患者的骨肉瘤组织及对应癌旁组织标本各30例。采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测30例骨肉瘤组织、对应的癌旁组织以及人正常成骨细胞hFOB1.19和骨肉瘤细胞SAOS-2、U2OS中lncRNA H19和miR-194的表达水平。利用脂质体转染法将lncRNA H19小干扰RNA (si-H19组)、RNA干扰无意义序列（si-NC组）、miR-194模拟物（miR-194 mimics组）、miRNA阴性对照（miR-NC组）分别转染SAOS-2细胞,MTT法检测各组细胞活力,细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力,Western blotting检测细胞N-钙黏蛋白（CDH2）和1型胰岛素样生长因子受体（IGF1R）蛋白的表达。生物信息学分析、双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR验证lncRNA H19和miR-194的靶向调控关系。结果 与癌旁组织比较,...     

骨肉瘤组织中抑癌基因TAp73和自噬基因Beclin1的表达及其与肿瘤恶性程度的相关性

目的:研究骨肉瘤组织中抑癌基因TAp73和自噬基因Beclin1表达量与肿瘤恶性程度的相关性。方法:收集在我院手术切除的56例骨肉瘤组织和肉瘤旁组织、37例骨巨细胞瘤组织,采用免疫组化试剂盒测定TAp73、Beclin1的阳性表达率;采用酶联免疫吸附试剂盒测定TAp73、Beclin1以及增殖、侵袭基因的蛋白表达量。结果:骨肉瘤组织中TAp73、Beclin1的蛋白表达量及阳性表达率均显著低于肉瘤旁组织、骨巨细胞瘤组织,IRX2、JAK3、STAT5、CTGF、Wnt、β-catenin的蛋白表达量均显著高于肉瘤旁组织、骨巨细胞瘤组织;TAp73、Beclin1(+)、(++)、(+++)骨肉瘤组织中IRX2、JAK3、STAT5、CTGF、Wnt、β-catenin的蛋白表达量均显著低于TAp73、Beclin1(-)骨肉瘤组织,TAp73、Beclin1(++)、(+++)骨肉瘤组织中IRX2、JAK3、STAT5、CTGF、Wnt、β-catenin的蛋白表达量均显著低于TAp73、Beclin1(+)骨肉瘤组织,TAp73、Beclin1(+++)骨肉瘤组织中IRX2、JAK3、STAT5、CTGF、Wnt、β-catenin的蛋白表达量均显著低于TAp73、Beclin1(++)骨肉瘤组织。结论:骨肉瘤组织中抑癌基因TAp73和自噬基因Beclin1的低表达能够通过激活IRX2/JAK3/STAT5和CTGF/Wnt/β-catenin信号通路来促进细胞增殖和侵袭。     

选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398体外抑制结肠癌细胞增殖和侵袭

目的:观察环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398对结肠癌细胞增殖、侵袭的影响,探讨COX一2作为结肠癌治疗靶标的可行性.方法:用RT-PCR和Western印迹法检测结肠癌细胞CW-2、COLO-320中COX-2基因及蛋白的表达.MTT法观察NS-398对COLO-320细胞增殖的抑制作用;体外细胞侵袭试验检测NS-398对细胞侵袭能力的影响;Western印迹检测NS-398对基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的影响.结果:结肠癌细胞株CW-2、COLO-320中COX-2均有阳性表达.NS-398能抑制结肠癌细胞株COLO-320的生长,抑制作用具有时间、浓度依赖性.细胞侵袭试验表明,NS-398体外能抑制结肠癌细胞株COLO-320的侵袭.Western印迹结果表明NS-398可以抑制COLO-320中MMP-2的表达.结论:COX-2抑制剂NS-398体外可显著抑制结肠癌细胞的生长、侵袭,COX-2可作为结肠癌治疗的靶点.     

Let-7d通过靶向调控Rhotekin基因抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨let-7d在骨肉瘤组织中的表达,并研究let-7d及其靶基因对人骨肉瘤细胞U2OS增殖、迁移和侵袭的影响。方法 收集2010年至2015年于我科行手术切除的25例骨肉瘤患者的肿瘤组织和癌旁组织（距肿瘤组织边缘>5 cm）,并用qPCR检测let-7d的表达情况。构建稳定过表达let-7d的U2OS细胞,用qPCR验证let-7d过表达情况,以转染pCDH空病毒载体的U2OS细胞作为对照组细胞,并分别采用CCK-8实验、划痕实验和Transwell实验检测过表达let-7d对U2OS细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。通过微RNA靶基因预测软件和双荧光素酶实验明确let-7d的下游靶基因,检测过表达let-7d的U2OS细胞中靶基因的表达水平,并通过小干扰RNA技术研究抑制靶基因表达对U2OS细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果 骨肉瘤组织中let-7d表达水平低于癌旁组织（P<0.01）。与人成骨细胞hFOB1.19相比,U2OS细胞中let-7d表达水平下调（P<0.01）。与对照组相比,过表达let-7d能抑制U2OS细胞的增殖、迁移和侵袭（P均<0.05）。微RNA靶基因预测软件和双荧光素酶实验结果显示,Rhotekin（RTKN）基因是let-7d的直接靶基因,且过表达let-7d导致U2OS细胞中RTKN mRNA表达水平较对照组降低（P<0.01）。干扰RTKN表达能抑制U2OS细胞增殖、迁移和侵袭（P均<0.05）。结论 Let-7d通过靶向调控RTKN抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,可作为骨肉瘤治疗一个新的靶点。     

核糖核酸酶抑制因子过表达抑制B16细胞的侵袭和转移

目的 构建人核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)真核表达载体,检测其对B16细胞侵袭和转移能力的影响.方法 提取人7703细胞中的总RNA,RT-PCR特异性扩增RI编码区序列,利用基因重组技术将其克隆到载体pIRES2-EGFP中,稳定转染B16细胞以后,经G418筛选出阳性克隆.根据转染质粒不同分别命名为B16细胞组(未转染组)、空质粒对照组(pIRES2 -EGFP组)和实验组(pIRES2-EGFP-RI组).RT-PCR检测B16细胞中RI mRNA水平的表达,并通过Western blot和细胞免疫化学检测RI蛋白水平的表达;HE染色观察细胞形态的改变,黏附实验、划痕实验和Transwell法检测细胞黏附、迁移和侵袭能力的变化;Western blot检测MMP-2、MMP-9和nm23-H1以及E-cadherin的表达;建立C57BL/6小鼠肺转移模型,观察肺上肿瘤转移灶的变化.结果 酶切和测序结果证明重组质粒构建成功,实验组细胞RI的mRNA和蛋白的表达较B16细胞组和空质粒对照组显著升高(P＜0.05);HE染色结果显示,细胞铺展良好,核质比减小;转染pIRES2-EGFP-RI质粒的实验组细胞的黏附、迁移及侵袭能力明显降低(P＜0.05);与两对照组相比,实验组细胞MMP-2和MMP-9的表达水平明显降低,nm23-H1和E-cadherin的表达水平明显升高(P＜0.05);动物实验结果显示与对照组相比,实验组的肺转移灶明显减少.结论 成功构建的RI真核表达质粒能升高RI基因及蛋白水平的表达,显著抑制了B16细胞的转移和侵袭能力.     

人参皂甙对肝癌Bel-7402细胞侵袭和转移能力的影响

[目的]探讨人参皂甙Rh2对肝癌Bel-7402细胞侵袭和迁移的影响及其机制.[方法]采用MTT法检测人参皂甙Rh2对肝癌Bel-7402细胞活力的影响;Transwell小室测定侵袭和迁移能力;应用Western blot方法检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白水平的变化.[结果]给予人参皂甙Rh2处理后肝癌Bel-7402细胞生长受到抑制,细胞侵袭和迁移能力明显降低;肝癌Bel-7402细胞MMP-2和MMP-9蛋白的表达水平均明显减弱.[结论]人参皂甙Rh2可抑制肝癌Bel-7402细胞的侵袭和转移能力,其机制可能与降低MMP-2和MMP-9蛋白表达水平有关.     

过表达核糖核酸酶抑制因子对膀胱癌移植瘤侵袭转移及上皮细胞间质转化的影响

目的：研究过表达核糖核酸抑制因子（RI）对膀胱癌移植瘤侵袭转移及上皮细胞间质转化（EM T ）的影响。方法将 RI 过表达质粒（pIRES2-EGFP-RI）和阴性对照质粒（pIRES2-EGFP）稳定转染膀胱癌 T24细胞,稳定表达细胞株分别命名为：T24-RI 组、T24 vector 组、T24组。将各组 T24细胞分别接种至 BALB／C 裸鼠左腋皮下,观察移植瘤的生长、微血管密度及肺组织转移灶的变化;进一步分析 RI 、MMP-2、MMP-9、EM T 相关蛋白（E-cadherin 、N-cadherin 、Vimentin 、Snail 、Slug 、Twist 蛋白）在肿瘤组织中的表达水平。结果 T24-RI 组较 T24组与 T24 vector 组,瘤体质量显著降低（P ＜0．01）,抑瘤率分别为26．67％和38．85％;与对照组比较,T24-RI 组瘤组织微血管密度明显减少,肺组织未见明显转移灶,同时 CD31在瘤组织中表达减少;免疫组织化学染色显示：T24-RI 组瘤组织中 RI 、E-cadherin 蛋白的表达明显升高,而 MMP-2、MMP-9、N-cadherin 、Vimentin 、Snail 、Slug 、Twist 蛋白表达明显降低。结论过表达 RI 可能通过调节侵袭转移 EM T 关键蛋白的表达,显著抑制了膀胱癌移植瘤生长、侵袭和转移的潜能。     

二甲双胍抑制骨肉瘤MG63细胞的迁移和侵袭能力

目的 观察二甲双胍对骨肉瘤MG63细胞的迁移侵袭能力的影响.方法 以骨肉瘤MG63细胞株为研究对象,二甲双胍处理后分别采用transwell小室法检测细胞迁移和侵袭能力的变化,采用明胶酶谱实验检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9的活性,采用real-time PCR法检测细胞中埃兹蛋白(Ezrin) mRNA的表达,采用Western blot检测Ezrin蛋白的表达;Li-pofectamine 2000转染Ezrin质粒到细胞中观察其对二甲双胍诱导的细胞迁移侵袭抑制及对下游信号通路的影响.结果 二甲双胍可显著抑制MG63细胞的迁移和侵袭,并降低MMP-2和MMP-9的酶活性.用药48 h后,MG63细胞内Ezrin的mRNA和蛋白水平均明显下降,且上调Ezrin可减弱二甲双胍诱导的骨肉瘤细胞迁移和侵袭抑制及二甲双胍诱导的MAPK/Erk信号通路抑制.结论 二甲双胍可抑制MG63细胞的迁移和侵袭能力,可能是通过下调Ezrin和MAPK/Erk信号通路而实现.     

O-GlcNAc糖基化修饰和Akt1对胃癌细胞体外增殖及侵袭力的影响

目的 探讨O-连接N-乙酰氨基葡萄糖(O-GlcNAc)糖基化修饰对胃癌细胞体外增殖及侵袭力的影响,并评价Akt1在O-GlcNAc糖基化促进胃癌细胞体外增殖及侵袭过程中的作用.方法 通过使O-GlcNAc转移酶(OGT)过表达(过表达OGT组)或沉默表达(沉默OGT组)及使用O-GlcNAc水解酶(OGA)特异性抑制剂Thiamet-G(抑制剂组)下调O-GlcNAc水解酶活性(抑制剂组)等构建O-GlcNAc糖基化水平升高或降低的细胞模型;采用MTT法检测各组胃癌细胞增殖活力;软琼脂集落形成实验观察各组胃癌细胞集落形成;Transwell细胞迁移实验各组胃癌细胞体外迁移和侵袭能力;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组胃癌细胞Akt1活性;Thiamet-G处理Akt1表达沉默(沉默Akt1组)的胃癌细胞以评价Akt1在O-GlcNAc糖基化促进胃癌细胞侵袭中的作用;利用Thiamet-G处理Akt1过表达(过表达Akt1组)的胃癌细胞以进一步验证Akt1在O-GlcNAc糖基化调控胃癌细胞侵袭性过程中的作用.结果 O-GlcNAc糖基化水平升高可促进胃癌细胞增殖并显著提高细胞集落形成、体外迁移和侵袭的能力;Akt1活性被由O-GlcNAc糖基化水平升高所介导的Ser473磷酸化上调而激活;Thiamet-G诱导的细胞侵袭性被Akt1 shRNA所抑制;Akt1高表达可进一步促进由Thiamet-G诱导的细胞侵袭性增强.结论 O-GlcNAc糖基化可部分通过Akt1途径增强胃癌细胞的体外增殖及侵袭力.     

沉默CXCR4基因表达抑制胰腺癌增殖和侵袭的体外研究

目的 利用RNAi技术构建CXCR4 shRNA表达载体,观察CXCR4基因干扰后胰腺癌细胞增殖及侵袭能力的变化.方法 在不同分化程度胰腺癌细胞株中筛选出CXCR4高表达胰腺癌细胞株,RNAi技术构建CXCR4shRNA表达载体,转染胰腺癌CXCR4高表达细胞Miapaca-2并应用G418筛选出稳定表达株,Real-time PCR、Western blot实验观察RNAi对CXCR4基因的抑制效率;MTT实验检测CXCR4基因干扰后胰腺癌细胞增殖,应用Transwell侵袭小室观察CXCR4干扰对胰腺癌细胞侵袭转移力的影响.结果 胰腺癌细胞株Miapaca-2 CXCR4表达异常增高,特异性CXCR4基因沉默能够在基因和蛋白水平稳定、高效、特异地抑制CXCR4的表达,抑制效率达70％以上.特异性CXCR4 shRNA能够抑制细胞生长,细胞达到对数生长期的时间延长(P＜0.05).Transwell实验证明CXCR4基因干扰后细胞侵袭能力减低(P＜0.05),即使SDF-1的刺激也不能够使细胞侵袭能力增加.结论 成功构建了针对胰腺癌细胞CXCR4的siRNA载体;CXCR4基因沉默能抑制胰腺癌细胞增殖、侵袭和成瘤能力.     

槲寄生碱对低分化骨肉瘤U2OS的抑制作用

目的：通过体外实验研究槲寄生碱对人低分化骨肉瘤细胞（U2OS）生长、侵袭的影响。方法：以5-氟尿嘧啶(5-FU)作用组为阳性对照组,以不加药组为阴性对照组,槲寄生组为实验组作用U2OS细胞,采用CCK-8试剂盒检测药物对体外培养的U2OS细胞生长抑制率。绘制在不同药物浓度作用下的细胞生长曲线。观察不同药物浓度作用下细胞的形态学变化。应用Boyden小室检测槲寄生碱对U2OS细胞侵袭能力的影响。结果：槲寄生碱作用U2OS细胞的IC50值为7 mg·L^-1;生长曲线显示,加药组细胞生长速度较未加药组明显缓慢,细胞由多角型逐渐变为圆形,排列疏松,附壁性减弱。Boyden小室实验显示,槲寄生碱作用后,迁移至聚碳酸脂膜下的细胞数(47.0±2.4)明显少于未加药组(122.0±12.1)（P<0.05）。结论：槲寄生碱在体外具有抑制人低分化骨肉瘤细胞U2OS细胞生长、侵袭的作用,有望成为治疗骨肉瘤的辅助药物。     

ZEB1对食管癌细胞侵袭转移的影响及作用机制研究

目的 探讨E盒结合锌指蛋白1（zinc finger E-box-binding protein 1,ZEB1）对食管鳞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）增殖和侵袭转移的影响和机制。 方法 选择人ESCC细胞系EC9706细胞为研究对象,采用ZEB1 shRNA对EC9706细胞进行转染,敲除ZEB1表达;采用CCK8法检测细胞活力;细胞侵袭转移能力通过划痕实验检测;利用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time quantitative PCR,RT-qPCR）技术检测转染后细胞ZEB1 mRNA表达水平;ZEB1,细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinase,ERK）1/2,p-ERK1/2, E-cadherin和N-cadherin蛋白表达水平通过免疫印迹（Western blot,WB）检测。 结果 与对照组相比,敲除ZEB1的EC9706细胞系的细胞活力明显降低,并抑制了ESCC的侵袭转移能力（P＜0.05）。ZEB1表达水平降低减少了ERK1/2激活水平,促进E-cadherin表达,抑制N-cadherin表达（P＜0.05）。 结论 下调ZEB1表达抑制ESCC细胞增殖和侵袭转移能力,其作用机制与ERK1/2激活抑制及调控E-cadherin、N-cadherin相关。