葛根素对脑缺血再灌注损伤神经元L-型钙通道的影响

目的 研究脑缺血再灌注损伤后，不同时点大鼠海马CA1区锥体细胞L-型Ca^2＋通道的活动变化及葛根素对它的影响。方法 采用改良Pulsinelli四血管闭塞法制作大鼠全脑缺血模型，实验随机分为3组：①正常组；②模型组：又分为6个时间点，各时间点均为1组；③葛根素组：6个时间点分组同模型组。在各时间点急性分离出成年大鼠海马CA1区锥体细胞后．采用膜片钳细胞贴附模式记录同一钳制电压下离子通道活动情况。结果 在观测的时间点内，再灌注24h时的开放概率升高（P〈0．05）；再灌注0h（缺血组）、6h、12h、24h时通道平均开放时间显著高于正常组（P〈0．05）；再灌注0．5h通道电流幅度明显高于正常组（P〈0．05）。用药组开放概率无一高于正常组水平。通道开放概率在再灌注1h、12h下降（P〈0．05）；各个时点通道电流幅度，在用药前后均没有明显的变化（P〉0．05）；再灌注0．5h组、6h组、12h组、24h组用药后，通道平均开放时间明显下降（P〈0．05）。结论在不同时点，脑缺血再灌注损伤对L-型Ca^2＋通道影响的主要机制不同。葛根素可以抑制脑缺血再灌注损伤后大鼠海马CA1区锥体细胞L型钙通道。提示临床上葛根素治疗缺血性中风可能与其抑制神经细胞L-型钙离子通道的开放防止钙超载有关。     

天麻乙酸乙酯提取物对血管性痴呆大鼠海马CA1区锥体细胞的影响

目的观察天麻乙酸乙酯提取物对血管性痴呆模型大鼠海马CA1区锥体细胞的影响。方法采用双侧颈总动脉永久性结扎法,造成慢性脑灌注不足所致SD大鼠血管性痴呆模型。造模6周后,40只大鼠随机分为5组,假手术组、模型组、尼莫地平组、天麻乙酸乙酯提取物高剂量组(高剂量组)和天麻乙酸乙酯提取物低剂量组(低剂量组),每组8只。给药3周后,HE染色检测海马锥体细胞的变化。结果与假手术组比较,模型组大鼠海马CA1区锥体细胞数目明显减少(P<0.01);与模型组比较,尼莫地平组和高剂量组大鼠海马CA1区锥体细胞数目明显增多(P<0.01),低剂量组大鼠海马CA1区锥体细胞数目无明显变化(P>0.05)。结论天麻乙酸乙酯提取物能改善血管性痴呆大鼠脑组织海马CA1区锥体细胞的病理改变。     

NMDA受体激动剂对大鼠海马CA1区神经元膜电位影响的研究

缺血缺氧可引起神经元细胞膜电位发生改变，表现为缺血缺氧早期细胞膜超极化，随后细胞膜发生缓慢去极化及快速去极化，最终导致神经元细胞的膜电位维持或接近零水平，即持续去极化。1997年Tanaka等研究发现，大鼠离体海马脑片CAl区神经元一旦发生快速去极化，即使及时给予氧及葡萄糖，其膜电位也不能恢复至正常水平，     

逍遥散对阿尔茨海默病模型大鼠海马CA1区及前额叶超微结构的影响

目的观察逍遥散对阿尔茨海默病(AD)大鼠模型大脑海马CA1区及前额叶超微结构的影响。方法将大鼠随机分为四组,其中模型组、西药组、中药组三组采用D-半乳糖(D-gal)腹腔注射和A-β双侧海马注射联合造模,生理组仅用等体积生理盐水做相同的造模处理。造模完成后,西药、中药组每日分别用奥拉西坦溶液和逍遥散煎剂灌胃干预1次,连续28 d,用药体积均为0.5 ml/100 g(浓度分别为150 mg/ml、2 g/ml);生理组采用等体积的生理盐水灌胃。灌胃结束,四组大鼠分别以0.4 ml/100 g 10%水合氯醛麻醉液腹腔注射麻醉后,断头剥离海马CA1区及前额叶,并迅速切成1 mm×1 mm×1 mm的小块,分组标记,放入装有4℃4%戊二醛固定液的小玻璃容器中,4℃保存、待检。结果模型组大鼠前额叶皮质(PFC)神经元可见大量线粒体肿胀、其嵴消失,粗面内质网扩张,核膜皱褶,微管、微丝排列紊乱、缠结;突触间隙明显变宽、突触后膜致密物(PSD)厚度明显变薄。中药组大鼠PFC神经元微量线粒体肿胀,少量粗面内质网扩张,微管、微丝排列较有序。与模型组大鼠比较,中药组大鼠PFC神经元突触间隙明显变窄,PSD厚度明显变厚。结论逍遥散能使AD模型大鼠突触间隙变窄,PSD厚度增加,增强突触传递效能,改善AD模型大鼠受损的学习记忆能力。     

慢性间歇性缺氧对大鼠认知功能及海马CA1区超微结构的影响

我们于2005年4月至2006年1月通过建立慢性间歇性缺氧大鼠动物模型,观察慢性间歇性缺氧对大鼠认知功能及海马内神经元超微结构的影响,为进一步探讨慢性间歇性缺氧导致认知功能障碍发病机制提供形态学依据。     

丹参酮Ⅱ-A对大鼠心肌细胞L-型钙通道的影响

目的研究丹参酮Ⅱ-A对大鼠心肌细胞L-型钙通道的影响。方法采用酶解法制备大鼠心肌细胞,应用全细胞膜片钳技术检测大鼠心肌细胞L-型钙通道的电流密度和动力学。结果丹参酮Ⅱ-A对L-型钙通道有抑制作用。在0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L和40μmol/L丹参酮Ⅱ-A作下,L-型钙通道的峰值电流密度分别为-13.34±1.06pA/pF、-10.46±0.75pA/pF、-7.62±0.50PA/pF和-4.69±0.18PA/pF,其抑制率分别为28.40%、52.14%和73.50%（n=8,P〈0.05）。结论丹参酮Ⅱ-A抑制大鼠心肌细胞L-型钙通道,降低L-型钙通道的电流密度,呈浓度依赖性。     

葛根素对去卵巢大鼠体重及大脑海马CA1区、CA3区神经元形态的影响

目的 观察不同浓度葛根素对去卵巢大鼠体重及海马CA1区、CA3区神经元形态的影响.方法 SD大鼠72只,摘除卵巢1 w后,随机分为葛根素高、中、低剂量组、倍美力组、模型组、假手术组,每组12只,除假手术组外,均摘除大鼠卵巢造成去势模型.灌胃过程中每5天称重一次,30 d后,用HE染色观察海马神经元形态变化.结果 与模型组比较,葛根素在不同浓度(30～ 120 mg/kg)范围内,随着浓度的增大,抑制海马神经元细胞凋亡的作用越强,并有一定的剂量依赖关系;但对大鼠体重变化无明显影响.结论 葛根素可以抑制大鼠海马神经元细胞的凋亡,而对大鼠体重改变无显著作用.     

促红细胞生成素对血管性痴呆大鼠海马CA1区胆碱乙酰转移酶的影响

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对血管性痴呆(VaD)大鼠海马CA1区胆碱乙酰转移酶(ChAT)的影响。方法将经行为学筛选合格的Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham组)、VaD组、EPO侧脑室注射+VaD组(E1组)和EPO腹部皮下注射+VaD组(E2组),采用永久性结扎双侧颈总动脉的方法建立VaD模型。通过免疫组织化学和RT-PCR方法检测VaD大鼠海马CA1区ChAT蛋白含量以及ChAT mRNA表达水平的变化。结果 EPO能明显改善VaD大鼠认知功能障碍,上调海马CA1区ChAT表达。结论 EPO可能通过增加VaD大鼠海马区ChAT表达改善其认知功能障碍。     

氧化苦参碱对豚鼠心室肌细胞膜L-型钙通道的影响

研究氧化苦参碱 (Oxy)对豚鼠心室肌细胞膜L 型钙通道的影响 ,探讨Oxy在离子通道水平的药理作用机制。用急性酶解法分离豚鼠心室肌细胞 ,应用膜片钳全细胞记录技术 ,观察不同浓度的Oxy对L 型钙通道的影响。结果 :用 0 .0 1 ,0 .1 ,1 ,1 0 μmol/L可浓度依赖性地增加L 型钙电流 (ICa L)。在 0 .1 μmol/L时 ,给药后电流密度增加约 31 %(P <0 .0 1 ) ,可使心肌细胞钙电流 电压曲线下移 ,但激活电位、峰电位及反转电位无改变 ;Oxy使激活曲线向负电位方向变化 ,半数激活电压增加 ;对失活曲线无明显影响 ,未改变ICa L失活特性。结论 :Oxy可浓度依赖性和电压依赖性地增加心肌细胞膜L 型钙通道电流     

不同旋体氨氯地平对大鼠心室肌细胞动作电位和L-型钙离子流的影响

目的 探讨不同旋体氨氯地平(amlodipine,Aml)对大鼠心室肌细胞动作电位和L-型钙离子流(ICa-L)的影响.方法 采用酶消化法获得大鼠耐钙心室肌细胞,以全细胞膜片钳技术分别观察并记录加入0.1、0.5、1、5和10 μmol/L左旋、右旋和混旋Aml后大鼠心室肌细胞动作电位、ICa-L及通道动力学参数的变化.结果 (1)加入0.1、0.5、1、5和10 μmol/L左旋、右旋和混旋Aml后,动作电位最大上升速率、动作电位幅度和超射无明显变化(P＞0.05);但左旋和混旋Aml对动作电位时限影响表现为随着浓度增加动作电位时限逐渐缩短(P＜0.05),且相同浓度的左旋Aml对动作电位时限影响比混旋Aml更明显(P＜0.05),而不同浓度右旋Aml对动作电位时限无影响(P＞0.05).(2)加入0.1、0.5、1、5和10 μmol/L左旋和混旋Aml后,ICa-L及峰值电流呈浓度依赖性降低、稳态激活曲线和稳态失活曲线左移(P＜0.05),且相同浓度左旋Aml对Ica-L和通道动力学参数影响比混旋Aml更明显(P＜0.05),但不同浓度右旋Aml对,ICa-L及通道动力学参数均无影响(P＞0.05).结论 左旋和混旋Aml对L-型钙通道有阻滞作用,表现为,ICa-L降低,动作电位时限缩短,而右旋Aml对L-型钙通道无阻滞作用,因而对ICa-L和动作电位时限无影响.     

5-羟色胺在大鼠海马CA1、CA2、CA3脑区的分布与表达

目的通过观察5-羟色胺(5-HT)在海马神经环路的分布和表达,为研究5-HT参与学习记忆的作用机制提供形态学依据。方法采用免疫组织化学技术观测抗5-HT的抗体阳性神经元在海马CA1、CA2和CA3区的分布特征。结果①抗5-HT的抗体在海马CA1、CA2和CA3的细胞中广泛分布。②海马中分子层阳性细胞数较少,排列不规则。锥体层细胞从内到外排列整齐,密集成带,染色强烈。多形层细胞染色细胞散在分布。③空白对照切片未见抗5-HT抗体的阳性神经元胞体。结论 5-HT在大鼠海马分布广泛,可能参与了海马学习记忆有关的过程。     

大鼠海马CA1区在体给药刺激记录一体化装置的改良应用

目的在体记录海马CA1区场电位时,改良局部给药方式。方法动物麻醉后固定于立体定位仪上,参照立体定位参数将自制刺激/记录电极及给药套管分别插入海马,给药并记录CA1区局部场电位,而后进行LTP的诱发和记录。结果确定改良法给药部位的准确性及药物在海马内的扩散范围;用改良法局部给予溶剂对海马CA1区突触传递及LTP没有明显影响;用改良法局部给予侧脑室给药量1/10的Aβ1-42,即显著压抑了海马CA1区LTP,且不影响突触传递;用改良法局部给予溶剂或Aβ1-42对PPF没有明显影响。结论完善了海马CA1区在体刺激/记录及同侧海马局部给药的方法,且用药量小、操作简单;用改良法成功记录并观察了Aβ1-42对海马CA1区fEPSP、LTP及PPF的影响,实现了用该方法对神经突触可塑性的评价。     

亚甲蓝对APP/PS1小鼠海马CA1区树突棘密度的保护作用

目的探讨亚甲蓝(MB)对APP/PS1转基因小鼠海马CA1区树突棘密度改变及学习记忆能力改善的影响。方法 APP/PS1小鼠及相同品系的3月龄野生小鼠,随机分为3组,每组10只:正常对照组,为野生小鼠。模型组,为APP/PS1小鼠;治疗组,3月龄的APP/PS1小鼠口服亚甲蓝25 mg·kg-1·d-1;连续用药4个月。待3组小鼠均为7月龄时,跳台实验测试3组小鼠的学习记忆能力;高尔基染色观察各组海马CA1区树突棘密度的变化。结果亚甲蓝治疗组小鼠跳台试验错误次数减少,小鼠跳台试验的潜伏期明显延长(P<0.01);治疗组与模型组相比海马CA1区树突棘密度明显增加(P<0.01),治疗组与对照组无统计学差异(P>0.05)。结论亚甲蓝可能是通过增加海马CA1区树突棘密度来改善APP/PS1小鼠的学习记忆能力。     

前脑缺血再灌注大鼠海马CA1区一氧化氮水平变化及意义

2005年8月～2006年的5月,我们采用改良Pulsinelli法建立大鼠前脑缺血／再灌注模型,观察了前脑缺血再灌注大鼠海马CA1区一氧化氮水平变化,现分析其意义。     

大鼠海马CA3区发育中神经细胞凋亡的研究

目的 观察大鼠海马发育中神经细胞凋亡的特点，探讨细胞凋亡与大鼠海马发育和老化的关系。方法 用TUNEL法结合激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察分析细胞凋亡在大鼠海马发育中的表现。结果 各年龄组大鼠海马CA3区均有数量不等的TUNEL阳性凋亡细胞，细胞核固缩，核染色质呈浓染致密的绿色或黄绿色块状及颗粒状荧光。LSCM荧光定量分析：各年龄组中以成年组荧光强度值最低。结论 大鼠海马CA3区生长发育中确有细胞凋亡存在；各年龄组中以成年组细胞凋亡率最低，乳鼠、幼年鼠和老年大鼠海马CA3区细胞凋亡率较高。表明成年期大鼠海马CA3区细胞数目相对较稳定，而在神经系统发育早期及老化阶段细胞数目均发生较大变化。结论 细胞凋亡与神经系统功能的完备有关。     

大豆肽对大鼠心室肌细胞L-型钙通道电流的影响

目的探讨大豆肽对大鼠心室肌细胞L-钙通道电流(ICa-L)的影响。方法采用全细胞膜片钳技术观察不同剂量(0.03、0.1、0.3mmol.L-1)大豆肽酶法对急性分离的成年大鼠心室肌细胞L-型钙通道电流(ICa-L)的影响。结果大豆肽0.03、0.1、0.3 mmol.L-1均明显抑制ICa-L,分别使ICa-L峰值降低21.7%(P<0.05),23.6%和30.7%(P<0.01),该作用具有剂量依赖性。大豆肽使ICa-L的I-V关系曲线上移,但原有的I-V依赖性特征不变。结论大豆肽对大鼠心室肌细胞ICa-L具有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性。     

伊贝沙坦对兔心室肌细胞L-型钙通道电流的影响

目的 研究伊贝沙坦(irbesartan)对正常家兔心室肌细胞L-型钙电流(ICa-L)、内向整流性钾电流(IK1)、快钠流(INa)以及跨膜动作电位的影响。方法 应用膜片钳全细胞记录方法记录各项离子流和跨膜动作电位。结果 (1)伊贝沙坦呈浓度依赖性阻断ICa-L；(2)伊贝沙坦可使ICa-L I—V曲线上移，但不改变其激活电位、峰值电位和反转电位；(3)伊贝沙坦呈使用依赖性阻滞ICa-L；(4)伊贝沙坦对ICa-L激活曲线无明显影响，但ICa-L失活后再激活的恢复时间常数(τ)明显延长；(6)伊贝沙坦对IKl和INa无明显影响；(7)伊贝沙坦(100nM)可使单个心室肌细胞动作电位时限缩短，对静息电位(RP)、动作电位幅度(APA)无影响。结论 伊贝沙坦作用于L-型钙通道的失活态从而阻断ICa-L。     

葛根素对大鼠心肌细胞离子通道的影响

目的：探讨葛根素对大鼠心肌细胞离子通道的影响及其抗心律失常的电生理学机制．方法：采用Langendoff胶原酶灌注加浸泡法分离大鼠心室肌细胞，据不同细胞外灌流液将实验分5组：对照组；葛根素1．2，2．4，4．8和9．6mmol／L组．分别用膜片钳全细胞记录各组内向整流钾通道（Ikl）、瞬时外向钾通道（Ito）的电流．结果：在500ms去极化的实验条件下，葛根素使不同去极化水平时的Ikl瞬间电流及稳态电流均明显下降．随着药物剂量的增加，这种抑制作用也增强．结论：葛根素对大鼠心肌细胞离子通道的作用主要是抑制Ikl且抑制呈浓度依赖性．     

葛根素对去卵巢大鼠认知功能及海马神经元超微结构的影响

目的 观察不同浓度葛根素对去卵巢大鼠认知功能及海马CA1区、CA3区神经元电镜下形态的影响.方法 SD大鼠72只,随机分为葛根素高、中、低剂量组、阳性对照组(倍美力组)、模型组、假手术组,每组12只,除假手术组外,均摘除大鼠卵巢造成去势模型.灌胃30 d后,用Morris水迷宫检测大鼠认知功能的变化,用透射电镜观察海马CA1区、CA3区神经元形态变化.结果 在训练第6天,Morris水迷宫试验测试大鼠第一次经过平台的时间(潜伏期)与模型组比较,假手术组、阳性对照组和葛根素高剂量组有统计学意义(P＜0.05);大鼠在120 s内经过平台的次数与模型组比较,假手术组、阳性对照组和葛根素高剂量组有统计学意义(P＜0.01);与低剂量组比较,葛根素高剂量组有统计学意义(P＜0.05).透射电镜结果表明,葛根素在不同浓度(30～ 120 mg/kg)范围内,随着浓度的增大,抑制海马神经元细胞凋亡的作用越强,并有一定的剂量依赖关系.结论 葛根素可以促进去卵巢大鼠学习、记忆功能的恢复,减轻因雌激素缺乏而引起的大鼠海马神经元凋亡作用.     

血管紧张素-(1-7)对心肌细胞L-型钙通道的影响

目的 :研究血管紧张素 (1 7) [Ang (1 7) ]对正常豚鼠心室肌细胞L 型钙离子通道的影响 ,旨在探讨Ang (1 7)发挥降压作用的离子通道及分子基础。 方法 :应用膜片钳全细胞记录技术。结果 :Ang (1 7)可使ICa L呈浓度依赖性增加 ,选择性AngⅠ型 (AT1)受体拮抗剂缬沙坦或非选择性AT1受体拮抗剂Sarthran(Sar)均可消除Ang (1 7)增加ICa L的作用。结论 :Ang (1 7)通过AT1受体增加ICa L,其降压作用不是通过抑制钙离子内流而实现的。