核酶基因抑制肝癌细胞低氧诱导因子-1α表达的实验研究

目的探讨靶向HIF-1α核酶基因对肝癌细胞HIF-1α表达的调控。方法采用脂质体介导的方法，将靶向HIF-1α核酶基因真核表达载体转染肝癌细胞Hep3B2，并予低氧条件诱导。于转染后48h采用Western Blotting检测Hep3B2细胞中HIF-1α蛋白的表达水平；荧光报告基因方法检测HIF-1转录活性。结果Hep3B2细胞低氧诱导后，HIF-1α蛋白表达水平、HIF-1转录活性增高（1．0±0．02），转染核酶基因400μmol／L后48h，Hep3B2细胞低氧诱导的HIF-1α蛋白表达水平明显下降，HIF-1转录活性下调（0．12±0．025，P〈0．05）。结论核酶基因可特异性抑制低氧诱导的肝癌细胞HIF-1α表达，降低其转录活性。     

低氧诱导因子-1α与椎间盘退变

低氧诱导因子（HIF）‐1α是一种介导哺乳动物细胞内低氧反应的核转录复合体,对细胞增殖、迁移及凋亡等有重要调节作用,且在椎间盘细胞中明显表达。椎间盘退变是引起临床上颈肩痛和腰背痛的主要原因,其早期主要特征为髓核细胞数量减少甚至消失、细胞外基质成分合成与降解平衡紊乱。髓核细胞处于低氧环境中,细胞内合成的 HIF‐1α对其存活有重要作用,因此 HIF‐1α可能与椎间盘退变密切相关。该文就HIF‐1α与椎间盘退变研究进展作一综述。     

持续性脊髓压迫损伤中低氧诱导因子-1α表达的实验研究

目的 :探 讨低 氧诱 导 因子-1α(H IF-1α)在 持 续性 脊髓 压 迫损 伤中 表 达变 化和 作 用。方法 :采 用平 头 塑料螺钉 后 路 压 迫建 立 大 鼠 持续 性 脊 髓 压迫 损 伤 的 动物 模 型 (压 迫 组 ),并与 无 脊 髓 压迫 大 鼠 (对 照 组 )进 行 对 比 研究 。 以 改 良 Tarlov 评 分 、BBB-21 点 评 分 及 斜 板 实 验 评 价 脊 髓 运 动 功 能 ; 运 用 W estern blot和 免 疫 组 化 检 测H IF-1α在损 伤 脊 髓 组织 中 的 表 达 。结 果 :压 迫 组 与 对照 组 大 鼠 脊髓 运 动 功 能比 较 差 异 有非 常 显 著 性差 异 (P<0.01);压迫 6 周时 大鼠 脊 髓运 动功 能 明显 改善 ,与 1d 时比 较 有显 著性 差 异(P<0.05)。 持续 性脊 髓 压迫 H IF-1α在伤 后 1d 广 泛表 达上 调 ,2 周 进一 步升 高 ,保持 这 一水 平直 至 6 周 。结 论:H IF-1α参与 了持 续 性脊 髓压 迫 损伤的发 生与 发 展。H IF-1α可能 参与 了 脊髓 组织 细 胞的 低氧 耐 受。     

低氧诱导因子-1α在绝经后骨质疏松中调控作用的实验研究

目的探讨在绝经后骨质疏松的发生、发展过程中,低氧诱导因子-1α（HIF-1α）对于成骨细胞功能的调控作用。方法2004年10月至2006年5月,应用Cre—Loxp重组酶技术,建立成骨细胞条件性敲除HIF-1α小鼠,取3个月龄雌性野生型和敲除型小鼠各24只行卵巢切除术,术后0、4、8周取材行HE染色、四环素荧光双标记、Micro-CT、RT—PCR、Western-blotting检测。结果与野生型小鼠相比,敲除型小鼠骨小梁的数目、体积、厚度,骨密度,骨矿沉积速度,血管内皮生长因子（VEGF）、RunX2、ALP、OC基因在mRNA水平的表达,VEGF、RunX2在蛋白水平的表达均明显降低,尤其以术后8周最为明显。结论在绝经后骨质疏松的发生、发展过程中,成骨细胞条件性敲除HIF-1α后成骨功能降低,HIF-1α能够调控成骨细胞的成骨功能。     

低氧诱导因子-1α和p53在肝脏低氧损伤中的作用

目的:探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、p53及细胞凋亡在大鼠肝脏低氧损伤中的作用。方法:雄性SD大鼠64只,随机分为对照组和肝动脉结扎组(n=32)。各组均行剖腹、肝脏骨骼化及肝素林格液肝脏灌注,肝动脉结扎组行肝动脉结扎术。术后1、3、7、14d留取肝脏组织及血标本。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肝脏组织HIF-1αmRNA表达水平;免疫组织化学方法检测肝脏组织HIF-1α及p53蛋白表达水平;TUNEL法检测肝细胞凋亡。自动生化分析仪检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)活性以评价肝损伤。结果:肝动脉结扎后肝组织HIF-1αmRNA及HIF-1α蛋白较对照组明显增高,分别于结扎后3d和7d达峰值[0.834±0.129比0.372±0.048,(7.8±3.1)%比(2.1±1.7)%,P均<0.01]。肝动脉结扎组肝细胞p53均明显高于对照组(P<0.05或P<0.01),于术后7d达峰值[(41.2±9.1)%比(5.2±4.3)%,P<0.01]。肝动脉结扎组肝细胞凋亡指数均明显高于对照组(P<0.05或P<0.01),于术后7d达峰值[(21.3±7.4)%比(3.7±3.5)%,P<0.01]。肝动脉结扎组ALT水平均明显高于对照组。HIF-1α、p53蛋白表达及凋亡细胞都主要位于肝小叶中央静脉周围。结论:HIF-1αmRNA表达增加、HIF-1α蛋白积聚以及p53促凋亡途径的激活在肝脏低氧损伤中可能发挥重要作用。     

低氧诱导因子-1α在大鼠脊髓缺血再灌注损伤中的表达

目的　观察低氧诱导因子 1α(HIF 1α)在大鼠脊髓缺血再灌注损伤 (SCII)中的表达变化及其意义。方法　制备大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型 ,分别于再灌注后 8、12、2 4h ,3和 5d取腰骶段的脊髓 ,以假手术组大鼠相同阶段的脊髓为对照 ,采用Westernblotting法和免疫组织化学检测伤后脊髓组织中HIF 1α的表达变化。结果　再灌注 8h左右 ,HIF 1α在整个脊髓灰质开始表达上调 ,在 2 4h达峰值 ,在伤后 3d表达回落 ,5d显著减少 ,灰度值在 8、12、2 4h ,3和 5d不同时相 ,分别为 (2 11.3 9± 5 .5 8)、(184.5 3± 6.5 6)、(167.3 9± 5 .76)、(198.44± 3 .98)和 (2 2 8.3 9± 2 .87) ,分别与假手术组比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。HIF 1α在灰质中的表达以中央管周围和前角、后角最为显著。再灌注 2 4h和 3dHIF 1α在脊髓白质出现弱的表达 ,灰度值分别为 (2 3 8.15± 6.87)和(2 3 6.87± 7.41) ,分别与假手术组比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。但在白质后索 ,HIF 1α的表达相对较强。HIF 1α在灰质中主要定位于神经元和星形胶质细胞 ,在白质中主要定位于神经胶质细胞。结论　HIF 1α呈现时序性的表达变化在脊髓缺血再灌注损伤中 ,可能是一种重要的脊髓缺血再灌注损伤的适应性调节。     

Toll样受体2和低氧诱导因子-1α在胰腺癌中的表达及意义

目的 研究Toll样受体2(TLR2)和低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在胰腺癌中的表达及其临床意义.方法 采用实时荧光定量PCR检测30例新鲜胰腺癌及相应癌旁组织标本中TLR2和HIF-1αmRNA水平,应用免疫组化检测TLR2、HIF-1α在65例胰腺癌及相应38例癌旁组织中的表达,分析其与临床病理特征间的关系以...     

缺氧诱导因子-1α在结肠肿瘤中的表达及意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在结肠肿瘤中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学方法,对30例结肠癌患者癌组织及癌旁组织、10例结肠腺瘤患者腺瘤组织中H1F-1α的表达情况进行检测,并分析HIF-1α表达与结肠癌临床病理特征之间的关系。结果HIF-1α阳性率在结肠癌和结肠腺瘤组织中分别为73．3％（22／30）和10．0％（1／10）,而在癌旁组织中无表达（P〈0．05）。结肠癌组织中HIF．1et的表达水平与患者性别、年龄、病理组织学类型及分化程度无关（P〉0．05）,而与区域淋巴结转移状况及Dukes分期密切相关（P〈0．05）。结论HIF-1α过度表达与结肠癌的浸润、转移密切相关,可能作为判断预后的重要指标。     

低氧诱导因子-1α和轴突导向因子4D在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的比较低氧诱导因子-1α（HIF-1α）和轴突导向因子4D（Sema4D）在结直肠癌组织和正常组织中的表达,探讨两者之间的相关性及临床意义。方法采用免疫组织化学SP法检测86例结直肠癌组织和52例正常组织中HIF-1α和Sema4D的表达,并分析其与结直肠癌临床病理特征及预后的关系。结果结直肠癌组织中HIF-1α和Sema4D蛋白阳性表达率显著高于正常组织[分别为58．1％（50／86）比7．7％（4／52）,X2=34．624,P〈0．01;60．5％（52／86）比11．5％（6／52）,x2=31．839,P〈0．01]。HIF-1α和Sema4D蛋白与结直肠癌组织分化程度（P／0．003,P=0．010）、TNM分期（P=0．003,P=0．017）和淋巴结转移（P=0．003,P=0．020）明显有关;且两者表达呈正相关（r=0．567,P〈0．01）。全组患者5年生存率为37％。其中HIF-1α蛋白阳性和阴性表达者的5年生存率分别为24％和56％（P=0．003）;Sema4D蛋白阳性和阴性表达者的5年生存率分别为23％和59％（P=0．001）。Cox多因素分析显示,Sema4D表达是结直肠癌患者的独立预后因素（P=0．026）,而HIF-1α表达不是其独立预后因素（P=0．501）。结论HIF-1α和Sema4D具有协同关系,两者蛋白的联合检测,可为预测结直肠癌的预后判断提供参考。     

低氧诱导因子-1与肝细胞癌

低氧诱导因子-1(HIF-1)是由两个亚基组成的异源二聚体蛋白,它特异性地与靶基因的低氧反应元件结合,并诱导各种靶基因转录,提高肿瘤细胞的缺氧适应能力,利于其生长、增殖、转移。其机制包括调节肿瘤细胞的代谢、促进肿瘤新生血管形成、抗肿瘤细胞凋亡等。针对HIF-1的治疗可能成为新的辅助抗癌手段。     

突变型低氧诱导因子-1α腺病毒载体的构建及常氧表达

目的 为了在常氧条件下观察低氧诱导因子-1α( HIF-1 α)在骨缺损部位促新血管生成作用,构建能够同时表达突变型HIF-1α和人源化绿色荧光蛋白(hrGFP)的腺病毒载体并检测其在兔骨髓间充质干细胞(MSCs)中的表达。方法 利用聚合酶链式反应(PCR)定点突变人HIF-1α编码区(CDS)第402、564和803位氨基酸,将突变后HIF-1α和hrGFP重组入pAdEasy-1系统,包装病毒并测定滴度。以感染复数(MOI)=100将腺病毒转染MSCs,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测转染细胞中HIF-1αmRNA和蛋白表达。结果 (1)第402、564和803位氨基酸均定点突变为丙氨酸。(2)A、B两组HIF-1α mRNA表达量明显高于C、D两组,差异有统计学意义(P＜0.01);A组HIF-1α蛋白表达量明显高于其他3组,差异有统计学意义(P＜0.01)。结论 (1)腺病毒载体Ad-HIF-1 αmu-IRES-hrGFP-1构建成功。(2)突变后HIF-1α基因能够在常氧条件下大量且高效表达。     

低氧诱导因子-1α对脊髓损伤后血管内皮生长因子表达的调控作用

目的　研究腺病毒 (Ad)介导的低氧诱导因子 1α(HIF 1α)基因对脊髓损伤后血管内皮细胞生长因子 (VEGF)蛋白表达的影响 ,为HIF 1α基因治疗脊髓损伤提供依据。方法　改良Allen’s法制作大鼠脊髓损伤模型。SD大鼠随机分为 4组 :假手术组 (Sham )、单纯脊髓损伤对照组(SCI)、空载体对照组 (Ad Blank)、基因治疗组 (Ad HIF 1α)。分别在第 1、3、7、14、2 8天 5个时间点取组织切片 ,HE染色观察大鼠脊髓细胞形态 ,免疫组织化学法检测HIF 1α和VEGF蛋白的表达。结果　 (1)HE染色显示 ,Ad HIF 1α组出血、坏死等损伤性改变比SCI及Ad Blank组轻 ,细胞残留数目相对增多 ,形态大致正常。 (2 )Ad HIF 1α组的HIF 1α、VEGF免疫阳性细胞吸光度值较SCI及Ad Blank组增加明显 (P <0 .0 5 ) ,表达时间延长。结论　腺病毒介导的HIF 1α基因转移可在体内有效表达。HIF 1α基因可促进脊髓损伤后VEGF蛋白的表达。转HIF 1α基因可减少大鼠脊髓损伤后细胞的死亡。     

靶向低氧诱导因子-1α mRNA核酶基因表达载体的构建及在真核细胞中的表达

我们通过本实验构建转录因子低氧诱导因子-1α(HIF-1α)真核表达载体，研究其在真核细胞内的表达及切割活性。     

低氧诱导因子-1与肿瘤发生发展的关系

低氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)是缺氧条件下广泛存在于哺乳动物和人体细胞内的一种转录因子,能激活许多缺氧反应性基因表达,是哺乳动物和人在缺氧条件下维持氧稳态的关键性因子.HIF-1与基质金属蛋白酶类、基质细胞衍生因子-1、特异性趋化因子受体CX-CR以及血管生成相关因子的关系是目前肿瘤发生发展研究的热点.     

缺氧诱导因子-1α及相关基因在破裂性腹主动脉瘤中的表达及意义

目的研究缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)信号转导通路在破裂性腹主动脉瘤(ruptured abdominal aorta aneurysm,RAAA)中的表达,探讨AAA破裂的分子基础。方法选取RAAA标本18例,以20例AAA标本作对照。采用Northern杂交、Western蛋白印迹及免疫组织化学方法检测HIF-1α的mRNA及蛋白产物表达,Western蛋白印迹和免疫组织化学方法检测血管内皮生长因子(VEGF)的表达,免疫组织化学抗CD34染色法检测微血管密度(microvessel density, MVD)。结果 RAAA组织中HIF-1α mRNA表达明显高于AAA组(P<0．01),免疫组化染色表明 HIF-1α阳性细胞百分率为(40．9±10．8)％,与AAA(17．6±5．2)％比较差异有统计学意义(P< 0．01);VEGF表达亦明显增强(P<0．01),与HIF-1α表达呈显著正相关(r值为0．725,P<0．01)。 HIF-1α阳性表达主要分布在AAA中层平滑肌细胞及外膜。RAAA中微血管密度明显增多(P< 0．01)。结论 HIF-1α及其相关基因过表达在RAAA的分子机制中可能发挥重要作用。     

缺氧诱导因子-1α在前列腺癌中的表达及意义

目的　探讨缺氧诱导因子 1α(HIF 1α)蛋白在前列腺癌 (CaP)中的表达及意义。　方法　应用免疫组化SP法检测 42例CaP和相应癌旁组织 ,12例高分级前列腺上皮内瘤 (PIN )以及 9例正常前列腺组织 (NP)中HIF 1α的表达 ,免疫印迹技术分析不同氧浓度诱导下CaP细胞株PC 3M的HIF 1α蛋白水平。　结果　 3 3例 (78.6% )CaP和 9例PIN组织HIF 1α蛋白表达阳性 ,有远处转移的CaP组织中HIF 1α表达显著高于无转移者 (P <0 .0 5) ,癌旁组织及正常前列腺组织中无阳性表达 ;PC 3M细胞株中HIF 1α表达水平随氧浓度减小而明显升高 ,差异有显著性意义 (P <0 .0 1)。　结论　HIF 1α表达是CaP形成的早期事件 ,其水平升高可能导致肿瘤向恶性发展表型 ,HIF 1α可作为CaP的早期诊断指标和治疗新靶点     

低氧诱导因子1α及血管内皮生长因子在前列腺癌中的表达及意义

目的:观察低氧诱导因子1α(H IF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)在前列腺癌(PCa)中的表达及意义。方法:32例PCa患者,根据G leason评分,将≥7分者设为高G leason评分组(n=12),<7分者为低G leason评分组(n=20)。良性前列腺增生(BPH)16例,BPH伴高级别前列腺上皮内瘤(PIN)15例,正常前列腺组织(NP)12例。采用免疫组化染色CD34观察各组组织中微血管密度(MVD)及H IF-1α、VEGF的表达情况。结果:PCa、PIN中H IF-1α阳性表达率分别为62.5%、60.0%,较BPH(6.3%)及NP(0)高,差异有统计学意义(P<0.05)。PCa、PIN中VEGF阳性表达率分别为78.1%、73.3%,较BPH(18.7%)及NP(8.3%)高,差异亦有统计学意义(P<0.05)。PCa的MVD为66.9±18.0,明显高于BPH(28.3±6.9)及NP(15.3±2.9)(P<0.05)。高G leason评分组H IF-1α、VEGF阳性率及MVD值均高于低G leason评分组,差异均有显著性(P<0.05)。结论:H IF-1α及VEGF过表达是PCa形成的早期事件,与PCa密切相关。     

低氧诱导因子-1α在长骨发育中的表达研究

目的：通过动态观察小鼠长骨发育的演变过程,检测各发育时段中低氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF—1α）表达及分布状况,探讨HIF-1α在小鼠长骨发育过程中的时空表达特点与作用。方法：分别剖腹取得胎龄12．5、13．5、14．5、15．5、16．5、17．5d的C57BL6小鼠的胎鼠,解剖显微镜下观察肢芽长骨的软骨形成及其软骨内骨化的动态形态演变过程。通过免疫组织化学方法观察HIF—1α蛋白在初级骨化中心形成中的表达与分布,进一步应用RT—PCR检测HIF-1α mRNA在胎鼠长骨各发育时段的表达状况及与骨标记基因骨钙素（OC）表达的关系。结果：胚胎第13．5d（E13．5）时,软骨性肢体形成,关节轮廓出现;E14．5时,软骨性长骨内形成小的骨化核,初级骨化中心刚刚出现,显现不透光骨化影,其后逐渐增大并向头尾两端延伸。免疫组化检测到E14．5时初级骨化中心内的软骨细胞核内见大量HIF 1α阳性黄色颗粒,之后很快消失。HIF-1α mRNA自E13．5至E15．5均大量表达,其后很快下降,维持低水平表达。结论：长骨发育表现为软骨内成骨过程,存在低氧环境,伴随HIF—1α mRNA的规律性表达,这可能与长骨软骨内骨化过程的启动有关。     

抑制低氧诱导因子-1α表达对小鼠肠缺血／再灌注所致肺损伤的影响

目的探讨通过低氧诱导因子-1α（hypoxiainduciblefactor-1α,HIF—1α）抑制剂YC-1预先抑制该基因表达对肠缺血,再灌注（ischemia／reperfusion,I／R）致急性肺损伤的影响。方法6周～8周龄健康雄性C57BL／6小鼠36只,采用随机数字表法随机分为3组（每组12只）：假手术组（S组）、I／R组和I／R±YC—I预处理组（YC—I组）。YC-1组于术前10min腹腔注入YC-1（1mg／kg）,采用夹闭C57BL／6小鼠肠系膜前动脉45min后再灌注6h的方法造成肠YR损伤模型,取小鼠肺标本称重后计算肺湿干重比,苏木素-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色后观察肺组织病理学改变,分光光度法测定髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）活性、酶联免疫吸附测定法检测肺组织肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和白细胞介素（interleukin,IL）-1β表达,反转录-PCR法检测HIF-1α、Toll样受体4（toll—likereceptor4,TLR4）mRNA的表达。结果与I／R组比较,预先抑制HIFqct表达使肺实质水肿及中性粒细胞浸润聚集减少,肺组织病理学损伤减轻,肺湿干重比显著降低（RnOI）,MPO活性下调[（1．88±0．82）u／g],TNF-α[（187±20）ng／L）]、IL一1β[（536±54）ng／L）]、HIF-1α、TLR4mRNA的表达水平下降（P〈0．05）。结论YC-1预处理可使肺组织TLR4mRNA表达下调,抑制肠I／R肺组织中促炎细胞因子的释放,明显减轻小鼠肠I／R后急性肺损伤。