糖尿病诱发神经管畸形的组蛋白乙酰化修饰谱

目的探讨母亲DM诱发胎儿神经管畸形(NTDs)的组蛋白乙酰化修饰机制。方法构建高糖处理小鼠神经干细胞(NE-4C)模型、T1DM雌鼠诱发NTDs胎鼠模型及人类母亲高血糖相关NTDs胚胎脑组织,建立葡萄糖浓度5、25 mmol/L的NE-4C细胞模型组;雌鼠分为正常对照(NC)组(n=40)和STZ构建的TIDM组(n=80);人类样本分为对照(Con)组和NTDs组。Western blot联合Orbitrap QE-HF质谱仪定性分析组蛋白乙酰化修饰谱,定量检测组蛋白特定位点乙酰化修饰水平。结果 25 mmol/L组相比5 mmol/L组,TIDM组相比NC组,NTDs相比Con组,组蛋白赖氨酸位点整体乙酰化修饰位点均增加,其中组蛋白H4K5/K8/K12/K16ac修饰在体外体内模型均保守性修饰,且25 mmol/L组H4K5/K8/K12/K16ac修饰水平是5 mmol/L组的2.2倍(P0.01)。结论组蛋白乙酰化修饰异常增加可能参与调控母亲DM诱发NTDs。     

组蛋白H4的共价修饰在表观遗传调控中的作用研究进展

表观遗传学主要从基因组修饰的角度来研究基因表达的调控机制,其中最具代表性的就是DNA甲基化.组蛋白H4的共价修饰包括甲基化、乙酰化及磷酸化,主要通过对其氨基末端残基的翻译后修饰对染色体结构和基因转录进行调控,在表观遗传调控中起着重要作用.如组蛋白H4-K16位的乙酰化的缺失和K20的三甲基化会导致人类癌症的发生[1].H4-K16的乙酰化是雄性果蝇X染色体高度活化和人细胞中染色质转录激活的标志[2].这些不同的共价修饰之间存在着相互作用,一种修饰的存在可以指导或抑制另一种修饰的存在.如体内和体外的研究都证实H4-K20的甲基化抑制H4-K16的乙酰化,而H4-R3的甲基化可以促进H4-K8和H4-K12的乙酰化.     

H9c2心肌细胞葡萄糖转运蛋白4转位机制的研究

胰岛素抵抗是高血压 ,冠心病及心力衰竭等疾病的发病基础。目前认为其发生机制是由于细胞内负责葡萄糖转运的信号传导机制和 (或 )葡萄糖转运蛋白 (Ｇｌｕｔ)细胞内转位机制异常所致。本实验将研究Ｈ9ｃ2心肌细胞在胰岛素和Ｋ (使细胞膜去极化以模拟细胞收缩 )作用下Ｇｌｕｔ4的转位机制。一、材料和方法1.细胞培养和分化 :将Ｈ9ｃ2细胞培养在 10 %小牛血清的ＤＭＥＭ中 ,种植后 48ｈ ,换成 2 %血清的ＤＭＥＭ。 3～ 4ｄ更换培养液。 2周后 95 %的细胞融合并分化为肌细胞以用于实验。2 .细胞内膜 (ＩＭ)及细胞膜 (ＰＭ)分离 :将收集并离心沉…     

Cajal间质细胞和间隙连接蛋白43参与糖尿病胃轻瘫机制的实验研究

以链脲佐菌素建立糖尿病胃轻瘫大鼠模型,观察胃肌层组织Cajal问质细胞(ICC)分布和间隙连接蛋白43(Cx43)表达的变化.结果 显示,模型组胃排空明显延迟;胃肌条收缩频率和振幅明显降低;胃肌层Cx43灰度值明显增高,与ICC分布具有一致性.这些变化可能与糖尿病胃轻瘫的发病机制有关.     

妊娠期糖尿病妇女血浆脂肪酸结合蛋白4水平与妊娠高血压和先兆子痫发生的关系

目的:探讨妊娠期糖尿病(GDM)妇女血浆脂肪酸结合蛋白4(FABP4)水平与妊娠高血压和先兆子痫(GH/PE)发生的关系。方法:选择2014-01—2017-12住院治疗的50例GDM并发GH/PE患者纳入研究(GH/PE组),选择同期50例年龄、孕龄、妊娠前体质指数(BMI)相接近的GDM未并发GH/PE妇女患者作对照(非GH/PE组)。采用ELISA法检测患者血浆FABP4水平,并收集患者临床资料进行分组及统计学分析。结果:GH/PE组与非GH/PE组比较,2组血浆FABP4水平差异有统计学意义[(17.2±4.1)μg/L vs(11.6±3.3)μg/L,t=7.605,P=0.000]。所有入组患者中血浆FABP4水平与妊娠前BMI,孕中期BMI,孕龄,糖化血红蛋白(HbA1c),HOMA-IR,MAP呈正相关(r=0.241～0.582,均P0.05);非GH/PE组患者中血浆FABP4水平与妊娠前BMI,孕中期BMI,HOMA-IR呈正相关(r=0.341～0.611,均P0.05);GH/PE组患者中血浆FABP4水平与妊娠前BMI,孕中期BMI呈正相关(r=0.521,0.534,均P0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,血浆FABP4水平是影响GDM妇女GH/PE发生的危险因素(OR=1.212,95%CI 1.002～1.402,P=0.032)。结论:血浆FABP4水平在GDM并发GH/PE妇女中显著升高,可能与GDM女性GH/PE发生相关。     

丁苯酞诱导缺氧条件下NDUFA4L2蛋白的高表达并参与脑保护的机制

目的探索NDUFA4L2蛋白在缺氧环境下大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞(pheochromocytoma cell,PC12)中的表达及其与丁苯酞介导的脑保护作用机制的关系。方法以PC12细胞为载体,制作PC12细胞缺氧模型,观察不同缺氧时间段(0、6、12、18、24、48 h) PC12细胞形态变化,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)半定量分析不同缺氧时间段及不同浓度丁苯酞预处理后PC12细胞中NDUFA4L2蛋白的表达情况。结果 PC12细胞缺氧损伤、外形变化严重程度与缺氧时间有关; NDUFA4L2蛋白在PC12细胞缺氧24 h内Western blot定量检测呈高表达趋势,高表达程度与缺氧时间无相关性;丁苯酞预处理后,NDUFA4L2蛋白表达水平均较未预处理组显著增高,差异有统计学意义(P0. 05)。结论 NDUFA4L2蛋白在缺氧24 h内可能对PC12细胞损伤有保护作用;丁苯酞可能通过诱导NDUFA4L2蛋白表达起到脑保护作用。     

RNA结合蛋白Sam68调控胃癌细胞生物学行为和患者预后机制的研究

背景:Sam68基因表达失控会诱导多种类型癌细胞的细胞周期进程、细胞增殖、转化以及肿瘤发生和转移.然而,目前尚不确定Sam68在胃癌细胞中的具体作用和分子机制.目的:探讨Sam68表达与胃癌患者临床预后以及胃癌细胞生物学行为之间的相关性.方法:收集161例胃癌组织和癌旁正常组织,采用蛋白质印迹法和免疫组化染色检测Sam...     

新诊断2型糖尿病视黄醇结合蛋白4的变化及影响因素研究

目的研究新诊断2型糖尿病(T2DM)血清视黄醇结合蛋白4(RBP4)变化规律并探讨其影响因素。方法对2002年4月至10月卫生部北京医院95例新诊断2型糖尿病患者,根据体重指数(BMI)分为肥胖糖尿病组(BMI≥25)50例、非肥胖糖尿病组(BMI<25)45例,并将30名正常体重非糖尿病者设为对照组。用ELISA方法检测各组空腹血清RBP4浓度,同时测定血糖、血脂、血压、胰岛素等,用胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)评价各组胰岛素敏感性。结果肥胖糖尿病组RBP4明显高于非肥胖糖尿病组和对照组(P<0.05),而后两组RBP4比较差异无统计学意义;单因素相关分析显示,血清RBP4与腰围(W)、HOMA-IR、BMI、三酰甘油(TG)呈正相关;多元逐步回归分析发现,腰围、HOMA-IR为影响RBP4的最显著因素。结论肥胖2型糖尿病患者血清RBP4显著升高;腰围和胰岛素抵抗是影响血清RBP4的主要因素。     

miR-451a调控TLR4信号通路参与结核分枝杆菌感染机制的研究北大核心CSCD

目的探讨结核分枝杆菌(MTB)感染中微小RNA-451a(miR-451a)调控Toll样受体4(TLR4)的表达参与肺结核发病的机制。方法收集2020年4月-2021年4月活动性肺结核患者82例(活动性肺结核组),MTB感染但无肺结核症状的患者40例(MTB感染组),健康体检者40例(健康组),采用RT-qPCR检测miR-451a和TLR4表达水平并进行比较分析;同时进行体外细胞试验,通过双荧光素酶报告验证miR-451a和TLR4的靶向关系,并将人巨噬细胞U937分为4组:对照组、miR-451a组、TLR4组和miR-451a+TLR4组,分别转染NC质粒、miR-451a mimic过表达质粒、TLR4过表达质粒、miR-451a mimic和TLR4过表达质粒,比较各组miR-451a、TLR4的表达水平、细胞活力及凋亡率。结果MTB感染组患者血清miR-451a水平显著低于健康组(t=22.706,P<0.01),TLR4 mRNA水平显著高于健康组(t=36.914,P<0.01)。活动性肺结核组的miR-451a的水平显著高于MTB感染组(t=24.146,P<0.01),TLR4 mRNA水平显著低于MTB感染组(t=35.844,P<0.01)。miR-451a与TLR4 mRNA表达水平呈负相关(r值分别为0.462和0.511,P<0.05或P<0.01)。miR-451a组的miR-451a水平和凋亡率显著高于对照组(t值分别为53.805和61.388,均P<0.01),细胞活力显著低于对照组(F=4.366,P<0.01)。TLR4组的细胞活力、TLR4 mRNA和蛋白水平显著高于对照组(F_(细胞活力)=6.328,P<0.01;t_(mRNA)=63.884,P_(mRNA)<0.01;t_(蛋白)=43.571,P_(蛋白)<0.01),凋亡率显著低于对照组(t=33,797,P<0.01)。miR-451a+TLR4组的细胞活力、TLR4 mRNA和蛋白水平显著高于miR-451a组而低于TLR4组(细胞活力F值分别为4.742和5.291,均P<0.01;t_(mRNA)值分别为53.297和64.649,均P<0.01;t_(蛋白)值分别为51.450和43.556,均P<0.01),凋亡率显著低于miR-451a组,且显著高于TLR4组(t值分别为36.037和46.459,均P<0.01)。结论miR-451a可能通过靶向抑制TLR4信号通路调控MTB的感染过程。     

肥胖及2型糖尿病患者血视黄醇结合蛋白4和胰岛素抵抗的研究

目的研究超重或肥胖(OW/OB)、糖调节受损(IGR)及2型糖尿病患者血浆视黄醇结合蛋白4(RBP4)的变化及与胰岛素抵抗(IR)的关系。方法采用酶联免疫吸附法测定了22例对照组、30例OW/OB、30例IGR和35例2型糖尿病患者血浆RBP4水平,测定空腹血糖,胰岛素,血脂,量腰围(W)、臀围,计算腰臀比(WHR);测身高、体重,计算体重指数(BM I)。结果RBP4在OW/OB组、IGR组和2型糖尿病组均较正常组高(P<0.01),IGR组较OW/OB组高(P<0.01),但IGR组和2型糖尿病组间差异无显著性。相关分析显示RBP4与W、WHR、FPG、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、TG有显著相关性(相关系数分别为r=0.550,0.444,0.552,0.545,0.555);多元逐步回归分析显示,FPG、TG、WHR、HOMA-IR是RBP4的独立相关因素(决定系数分别为r2=0.457,0.308,0.531,0.558)。结论OW/OB、IGR及2型糖尿病患者血浆RBP4水平显著升高,RBP4参与了IR及2型糖尿病的发生、发展。     

小泛素样修饰蛋白4基因163A／G多态性与2型糖尿病肾病的相关性研究

目的探讨小泛素样修饰蛋白4（SUMO4）基因163A／G多态性与2型糖尿病肾病（DN）的相关性。方法运用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法对232例T2DM患者,其中正常白蛋白尿103例（N-UAIb组）、微量白蛋白尿65例（M-UAlb组）、大量白蛋白尿64例（L-UAlb组）,以及102名健康对照（NC组）的SUM04基因163A／G多态性进行检测,并比较各组间基因型频率、等位基因频率及相关临床资料。结果NC组和T2DM组基因型和等位基因频率无统计学差异;M-UAlb和L-UAlb组的GA基因型频率高于N—UAlb组（P〈0．05）。结论在昆明地区汉族人群中,SUM04基因GA基因型可能是DN发生的危险因素。     

调控miR-495、P4HA2的表达对肝纤维化和肝细胞癌发生机制研究

目的:探究调控miR-495、脯氨酰4-羟化酶亚基α-1(P4HA2)的表达对肝纤维化、肝细胞癌的发生机制。方法:体外构建P4HA2的3’UTR报告基因质粒,使用荧光素酶报告基因检测miR-495与P4HA2的调控关系。使用miR-495及其反义链处理HepG2肝细胞癌细胞检测P4HA2的表达。低氧条件下检测HepG2肝细胞癌细胞中miR-495和P4HA2的表达,以及细胞增殖反应。在28例肝细胞癌患者中检测miR-495和P4HA2的表达,分析其相关性。结果:萤光素酶报告基因检测显示miR-495显著抑制了HepG2细胞中pGL3-P4HA2-wt的荧光素酶活性,但不能抑制pGL3-P4HA2-mut的荧光素酶活性。miR-495的过表达能够在HepG2细胞中以剂量依赖性方式抑制P4HA2的mRNA和蛋白表达。低氧组HepG2细胞中miR-495的表达显著低于正常组,而P4HA2的表达显著高于正常组。增殖检测表明低氧组HepG2细胞中EdU阳性细胞数显著增加,而在低氧组细胞中过表达miR-495可以明显逆转HepG2细胞的增殖。肝细胞癌中miR-495与P4HA2的mRNA的水平呈负相关(r=-0.683,P0.05)。结论:miR-495能够通过靶向P4HA2 mRNA的3’ UTR来抑制肝细胞癌细胞的增殖,而低氧可以通过下调miR-495来促进P4HA2的表达,进而参与肝纤维化和肝细胞癌的发生发展。     

糖尿病慢性肾脏疾病患者血清骨钙素与视黄醇结合蛋白4及胱抑素C的相关性研究

目的探讨糖尿病慢性肾脏疾病(CKD)患者血清骨钙素(OC)与视黄醇结合蛋白4(RBP4)及胱抑素C(Cys-C)水平变化的关系。方法 选取120例CKD患者,根据eGFR分为eGFR≥90ml/(min·1.73 m~2)组36例,60≤eGFR90 ml/(min·1.73 m~2)组60例,eGFR60 ml/(min·1.73 m~2)组24例,另选取健康体检者45名作为对照组(NC)。各组均测生化指标及血清OC、RBP4、Cys-C水平。结果 eGFR≥90 ml/(min·1.73 m~2)组OC低于NC组及eGFR60 ml/(min·1.73 m~2)组(P0.05);60≤eGFR90 ml/(min·1.73 m~2)组、eGFR60 ml/(min·1.73 m~2)组RBP4高于其他两组(P0.05);eGFR60 ml/(min·1.73 m~2)组Cys-C高于其他组(P0.05)。相关性分析显示,OC、RBP4、Cys-C与eGFR呈负相关(r=-0.172、-0.304、-0.348,P0.01),OC与RBP4、Cys-C呈正相关(r=0.133、0.206,P0.05)。结论 OC、RBP4及Cys-C可作为评价CKD早期肾损伤及骨代谢异常的有效指标。     

重组人突触融合蛋白4对脂多糖诱导的胰岛β细胞INS-1损伤影响和机制研究

目的:探讨重组人突触融合蛋白4(STX4)对脂多糖(LPS)诱导的胰岛β细胞INS-1损伤影响。方法:胰岛β细胞INS-1分成Control组(空白对照)、LPS组(LPS处理)、LPS+NC组(转染阴性对照载体,LPS处理)、LPS+STX4组(转染pcDNA-STX4,LPS处理),RT-qPCR和Western ...     

视黄醇结合蛋白4、25羟维生素D水平与2型糖尿病下肢血管病变的相关性研究

目的探讨T2DM患者血清视黄醇结合蛋白4(RBP-4)、25羟维生素D[25(OH)D]与下肢血管病变(LEAD)的关系。方法选取T2DM患者197例,分为下肢血管病变组(LEAD,n=103)和无下肢血管病变组(Non-LEAD,n=94),同期健康体检者80名作为对照组(NC),收集各组生化指标及血清RBP-4、25(OH)D水平。结果 LEAD组RBP4水平高于Non-LEAD组和NC组[(39.14±2.14)vs(30.01±2.09)vs(14.09±1.88)μg/ml,P0.01],LEAD组25(OH)D水平低于Non-LEAD组和NC组[(11.63±6.83)vs(18.02±6.42)vs(23.39±4.68)ng/ml,P0.05]。相关分析结果显示,RBP4与TG、LDL-C、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、BMI、WHR呈正相关,与HDL-C、25(OH)D呈负相关;血清25(OH)D水平与病程、HbA_1c、RBP-4、FPG、HOMA-IR呈负相关。HDL-C、25(OH)D是LEAD的保护因素。结论血清RBP4浓度升高及25(OH)D水平降低与T2DM合并LEAD的发生有关。     

2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病患者血清视黄醇结合蛋白4水平变化及影响因素的研究

目的 研究T2DM合并非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）患者血清视黄醇结合蛋白4（RBP4）水平变化.方法 选取单纯T2DM患者（T2DM） 32例,T2DM合并NAFLD者（T2DM＋NAFLD）31例及正常对照（NC）者34名,测定血清RBP4水平,并计算胰岛β细胞功能指数（HOMA-β）及葡萄糖处置指数（DI）.结果 与其他两组比较,T2DM＋ NAFLD组血清RBP4水平最高（P＜0.05或P＜0.01）,而DI最低（P均＜0.01）.且TG、WC、SBP、DI是RBP4的独立影响因素（P均＜0.05）.RBP4是T2DM合并NAFLD独立危险因素（OR=1.142,P=0.057）.结论 血清RBP4在T2DM＋NAFLD组最高,与胰岛β细胞功能密切相关.     

长链非编码生长停滞特异性蛋白6反义RNA1靶向miRNA-374a-3p调控高糖诱导的人肾小管上皮细胞损伤及纤维化分子机制的研究

目的 探讨长链非编码生长停滞特异性蛋白6反义RNA1(LncRNA DLX6-AS1)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞HK-2损伤及纤维化的影响及其可能作用机制。方法 高糖诱导HK-2细胞建立细胞损伤模型,实验分为正常对照（Con）组、高糖组（HG）、LncRNA DLX6-AS1小分子干扰RNA阴性对照（si-NC）+HG组（si-NC+HG组）、LncRNA DLX6-AS1小分子干扰RNA(si-LncRNA DLX6-AS1)+HG组（si-LncRNA DLX6-AS1+HG组）、miR-374a-3p寡核苷酸模拟物阴性对照mimic NC序列（miR-NC）+HG组（miR-NC+HG组）、miR-374a-3p寡核苷酸模拟物（miR-374a-3p mimics）+HG组（miR-374a-3p+HG组）、miR-374a-3p特异性寡核苷酸抑制剂阴性对照（anti-miR-NC）+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组（anti-miR-NC+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组）、miR-374a-3p特异性寡核苷酸抑制剂（anti-miR-374a-3p）...