华支睾吸虫天然蛋白的纯化及其在免疫诊断中应用

已从华支睾吸虫粗抗原中纯化获得多种纯化抗原,其中部分纯化抗原已初步应用于华支睾吸虫病免疫诊断。本文就华支睾吸虫纯化抗原的纯化方法、免疫诊断效果及应用前景作一综述。     

华文睾吸虫病免疫诊断及分子生物学研究进展

华文睾吸虫病是亚洲东部的一种感染人的寄生虫病，主要分布在中国、日本、韩国和越南北部。传统的病原学诊断方法存在着一些弊病，免疫诊断抗原的提纯以及免疫诊断方法的改进则提高了诊断的敏感性和特异性，为华文睾吸虫病的诊断提供了科学的辅助手段。本文对华文睾吸虫病的免疫诊断抗原、诊断方法以及在分子生物学方面的研究进展作一简要综述。     

华支睾吸虫病免疫诊断研究进展

华支睾吸虫病是华支睾吸虫寄生于人体肝胆管内引起,又称肝吸虫病,该病的诊断主要依靠检获虫卵,但因虫卵小或感染度轻、排卵少而易于漏诊,免疫诊断可弥补不足。随着高新技术的发展和应用,显著提高了免疫诊断的敏感性、特异性和诊断效果,其在临床辅助诊断和疫区流行病学调查中的作用越来越突出。现将近年来有关本病免疫诊断的研究进展综述如下。１　特异性抗体的检测１１　检测用特异性抗原的选择　检测抗体的特异性主要取决于所用抗原的特异性,华支睾吸虫诊断抗原的研究,大多限于粗抗原或初步纯化抗原［１］。１１１　华支睾吸…     

华支睾吸虫病免疫诊断的近年进展

华支睾吸虫病的诊断,主要靠粪检虫卵。但在感染度较轻的情况下,常因粪便内虫卵少,加以虫卵很小,粪样镜检易致漏诊。近年来,随着酶、同位素、胶体金等标记技术和新方法的应用,华支睾吸虫病的免疫诊断获得较大进展,几种检测华支睾吸虫抗体或抗原的新方法具有较高的敏感性和特异性。现将这几种方法作一简要综述。     

华支睾吸虫病的免疫学诊断研究进展

华支睾吸虫病在世界范围内 ,尤其是在亚洲国家 ,发病率和死亡率还很高。华支睾吸虫病的免疫学诊断敏感性和特异性高 ,简便易行 ,发展也较快。近 10年来 ,关于免疫学诊断技术的研究主要集中在ELISA、IFAT、IEST、免疫酶测定技术和各种华支睾吸虫特异的抗原抗体 ,其中对ELISA的改进方法和有关的抗原抗体研究得最多。今后 ,华支睾吸虫病的免疫学诊断方法主要向着更加敏感、特异、高效、经济、方便和安全的方向发展。     

华支睾吸虫病的免疫学诊断研究进展

华支睾吸虫病在世界范围内，尤其是在亚洲国家，发病率和死亡率还很高。华支睾吸虫病的免疫学诊断敏感性和特异性高，简便易行，发展也较快。近10年来。关于免疫学诊断技术的研究主要集中在ELISA、IFAT、IEST、免疫酶测定技术和各种华支睾吸虫特异的抗原抗体，其中对ELISA的改进方法和有关的抗原抗体研究得最多。今后，华支睾吸虫病的免疫学诊断方法主要向着更加敏感、特异、高效、经济、方便和安全的方向发展。     

麝猫后睾吸虫病的诊断研究进展

麝猫后睾吸虫病是主要流行于东南亚地区的一种由麝猫后睾吸虫所引起的寄生虫病。传统的病原学诊断方法有着明显的局限和弊病。免疫学和分子生物学的发展为诊断提供了新的途径。随着对诊断抗原、抗体研究的深入以及诊断方法的改进 ,麝猫后睾吸虫病诊断的敏感性和特异性不断提高。本文着重对麝猫后睾吸虫病的免疫诊断研究和分子生物学技术的进展作一简要综述     

免疫金电转移印斑技术检测华支睾吸虫病人血清抗体

我们应用电转移印斑结合免疫金技术,进行了华支睾吸虫病人血清中抗体的研究,以寻找一个敏感、特异的华支睾吸虫病免疫诊断方法。一、材料和方法 (一)抗原的制备自人工感染华支睾吸虫囊蚴的猫肝中取华支睾吸虫成虫100条,以生理盐水洗涤数次.超声粉碎100w,10min,4℃冰箱冷浸72h,5000r/min离心15min,取上清液。 (二)实验血清1.华支睾吸虫病人血清:采自山东金乡县及宁阳县,经粪便检查,华支睾吸虫虫卵阳性     

麝猫后睾吸虫病的诊断研究进展

麝猫后睾吸虫病是主要流行于东南亚地区的一种由麝猫后睾吸虫所引起的寄生虫病。传统的病原学诊断方法有着明显的局限和弊病。免疫学和分子生物学的发展为诊断提供了新的途径。随着对诊断抗原、抗体研究的深入以及诊断方法的改进，麝猫后睾吸虫病诊断的敏感性和特异性不断提高。本文着重对麝猫后睾吸虫病的免疫诊断研究和分子生物学技术的进展作一简要综述。     

排泄分泌抗原以ELISA法用于华支睾吸虫病血清学诊断优于粗抗原

粪检法是华支睾吸虫病的标准诊断方法 ,但由于依从性较差 ,应用起来有困难。为有效控制华支睾吸虫病 ,需要进行高效的群体检测。血清学诊断已快速发展起来并逐渐取代粪检法。虽然皮试法简单快速 ,但特异性较差 ,目前广为应用的是ELISA法。传统ELISA法用华支睾吸虫的粗抗原进行检测 ,敏感性和特异性较好 ,但存在交叉反应 ,因此需要更加敏感和特异的血清学诊断方法以检测华支睾吸虫病。本研究对华支睾吸虫的排泄分泌抗原 (ESA)检测抗体的ELISA法和粗抗原 (CA)检测抗体的ELISA法的诊断价值进行了比较和评估。收集流行区的华支睾吸虫…     

华支睾吸虫未脱脂和脱脂成虫抗原的免疫印迹分析

目的 寻找华支睾吸虫成虫抗原中具有特异性诊断价值的抗原组分。方法 应用SDS—PAGE和Westernblot分析华支睾吸虫成虫未脱脂、脱脂的可溶性抗原蛋白组分的血清学反应特征。结果 未脱脂成虫抗原有14条蛋白带可与华支睾吸虫病病人血清反应，其中分子质量单位为180、170、100、67、41、37、35、32、26ku是主带，180、170、37、35ku条带还可与日本血吸虫病、卫氏并殖吸虫病病人血清发生交叉反应。脱脂成虫抗原有10条蛋白带可与华支睾吸虫病病人血清反应，其中分子质量单位为180、100、67、37、35、24、20ku是主带，此外，180ku带可与日本血吸虫病和卫氏并殖吸虫病病人血清发生交叉反应，78ku带可以与血吸虫病病人血清发生交叉反应。结论 华支睾吸虫成虫抗原经脱脂处理后可减少与日本血吸虫病和卫氏并殖吸虫病病人血清交叉反应的蛋白组分数量。华支睾吸虫未脱脂和脱脂成虫抗原中主要的特异性抗原组分分别是100、67、41、32、26ku和100、67、37、35、24、20ku，这些组分抗原可用于华支睾吸虫病的免疫诊断。     

华支睾吸虫成虫14～33 ku抗原诊断价值的研究

目的探讨纯化华支睾吸虫成虫14~33 ku抗原在华支睾吸虫病免疫诊断中的应用价值。方法使用SDS-PAGE和电洗提法,从可溶性华支睾吸虫成虫抗原中分离纯化14~33 ku抗原,用此抗原经ELISA方法检测华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、日本血吸虫病、姜片虫病患者血清及健康人血清特异性IgG抗体,并与粗制可溶性成虫抗原和可溶性成虫脱脂抗原ELISA结果相比较。结果检测63例华支睾吸虫病患者血清,纯化华支睾吸虫成虫14~33 ku抗原ELISA阳性率为76.2%,可溶性成虫抗原和可溶性成虫脱脂抗原ELISA阳性率均为100%;检测25例卫氏并殖吸虫病、85例日本血吸虫病、27例姜片虫病患者血清,14~33 ku抗原的ELISA交叉反应阳性率分别为8.0%、3.5%、0,而可溶性成虫抗原分别为80.0%、62.4%、14.8%,可溶性成虫脱脂抗原分别为64.0%、55.3%、7.4%;检测127例健康人血清,14~33 ku抗原的ELISA假阳性率为0,可溶性成虫抗原和可溶性成虫脱脂抗原的假阳性率分别为5.5%、3.1%。结论纯化华支睾吸虫成虫14~33 ku抗原用于华支睾吸虫病免疫诊断的特异性优于粗抗原,但敏感性较低。     

不同抗原的免疫学方法诊断华支睾吸虫病的实验观察

近来有人将纯化抗原应用于华支睾吸虫病的诊断,取得了较满意的结果。我们进一步应用硫酸铵分段沉淀华支睾吸虫不同抗原,进行酶联免疫吸附试验及皮内试验,以评价其应用阶值,报道如如下。一、材料与方法(一)华支睾吸虫抗原1.粗提抗原:自人工感染华支睾吸虫囊蚴的猫肝脏中取华支睾吸虫成虫200余条。以生理盐水洗     

华支睾吸虫的器官特异性抗原

随着群众依从性的下降,进行华支睾吸虫病的病原学诊断—粪便检查日益困难。为控制华支睾吸虫病的流行,进行人群筛查十分必要,且血清学诊断正快速地取代病原学检查。该研究的目的在于通过对华支睾吸虫的一些器官的蛋白进行分析,以获得特异性的抗原蛋白。从自然感染华支睾吸虫的淡水鱼获取的囊尾蚴,经口感染兔,8周后解剖获取成虫。解剖并收集华支睾吸虫的睾丸、储精囊、卵黄腺、子宫以及肠道液体。整个虫体或分离的器官分别搅匀并离心,上清液作为粗抗原或单一器官抗原。将100条活的华支睾吸虫在PBS中饲养并收集排泄-分泌抗原。分别对获取的…     

用酶联免疫吸附试验评价不同华支睾吸虫成虫抗原在免疫诊断中的价值

用硫酸铵分段沉淀法将华支睾吸虫成虫粗抗原分离成为四种成分。以五种抗原制品(一种粗抗原制品和四种部分提纯抗原制品A、B、C和D)作为抗原,用微量酶联吸附试验(ELISA)检测华支睾吸虫病患者血清中相应抗体的存在。实验表明在五种抗原制品中,以抗原A在诊断华支睾吸虫病方面具有最高的阳性率,患者血清与正常人血清OD值的比值也最高。     

华支睾吸虫成虫四种抗原的电泳及血清学分析

华支睾吸虫病在我国的流行仍有一定的广度和深度。目前对该病的免疫学诊断仍主要是使用全虫粗抗原,其敏感性,尤其是特异性不够理想。至今有关华支睾吸虫表皮膜抗原、代谢抗原的免疫学特性的资料还未见报道。本文首次建立了华支睾吸虫表皮膜抗原的提取方法,制备华支睾吸虫代谢抗原、全虫抗原及     

重组华支睾吸虫诊断抗原研究进展

华支睾吸虫多种诊断抗原的基因已被克隆和重组表达，一些重组抗原已初步应用于华支睾吸虫病的免疫学诊断，显示出较高的诊断价值。     

酶联免疫吸附试验诊断华支睾吸虫病初步观察

实验感染兔取成虫制成1％华支睾吸虫成虫可溶性抗原。以1:1500包被ELISA板诊断华支睾吸虫病人血清,与粪检阳性符合率88.1％,健康人血清阴性符合率97.1％。用滤纸干血代替血清阳性符合率为87.0％,阴性符合率为85.4％,而在非流行区人群采滤纸干血阴性符合率则为95.1％。与丝虫病人血清未见交叉反应;与疟疾的交叉反应为3％;与血吸虫病的交叉反应为6.66％。结果表明应用ELISA诊断华支睾吸虫病是一种敏感性高、特异性强、重现性良好的免疫诊断方法,现场应用滤纸干血方法简便、微量,值得推广。     

华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶基因的扩增、克隆和表达(英文)

华支睾吸虫病严重危害着人们的身体健康 ,研制快速诊断试剂盒对于华支睾吸虫病的防治显得非常重要。目前 ,市场上销售的快速诊断试剂盒 ,其诊断抗原主要来自华支睾吸虫成虫的粗抗原 ,抗原敏感性高 ,特异性却不高 ,所以寻找并生产基因工程重组抗原有着非常重要的意义。半胱氨酸蛋白酶是一类含有半胱氨酸残基的蛋白水解酶 ,多种寄生虫都能产生或分泌半胱氨酸蛋白酶 ,它对寄生虫的生存、发育以及在寄生虫与宿主的相互关系上均有着极其重要的作用。越来越多的科研工作者开始重视它的免疫诊断价值 ,本文研究的目的是为华支睾吸虫快速诊断试剂盒寻找基因工程重组抗原。我们根据已知华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶基因序列设计一对引物 ,用文库构建试剂盒提取总RNA ,并反转录成cDNA ,以cDNA为模板 ,通过PCR技术从cDNA中扩增出目的基因。PCR产物通过测序鉴定 ,用工具酶BamHI和XholI同时消化目的基因和pGEX - 4T - 1原核表达载体 ,消化后的产物用连接酶连接 ,构建成 pGEX - 4T - 1-CP重组体 ,并将其转入Jm10 9大肠杆菌中。用PCR初步筛选阳性克隆 ,共获得阳性克隆 8个 ,再用双酶切和测序进一步鉴定初步筛选的阳性克隆。挑取阳性克隆 ,37℃条件下用IPTG诱导重组体表达 ,表达产物通过SDS -PAGE电泳鉴定。通过上述实验 ,获     

唾液检查诊断华支睾吸虫感染的效果观察

免疫学检查方法一直是华支睾吸虫病诊断的重要方面。新的免疫学检测方法的开发和应用不仅对于华支睾吸虫病的临床诊断,而且对于其现场流行病学调查都有重要意义。目前,血清是华支睾吸虫病免疫学诊断的主要材料。但要取得血清就会对组织造成一定的损伤。甚至引起感染。近年来已有一些应用唾液作为免疫学检测的样本。用于诊断血吸虫等其他寄生虫病的报告,显示了较高的诊断价值。我们尝试通过感染大鼠的研究了解唾液检查诊断华支睾吸虫病的实际效果。现将实验结果报告如下。