HSP70 siRNA对宫颈癌HeLa细胞HSP70表达及细胞增殖与凋亡的影响

目的通过体外实验观察HSP70的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对宫颈癌HeLa细胞株增殖及凋亡的影响,探讨HSP70在HeLa细胞增殖和凋亡中的功能。方法针对HSP70基因设计siRNA序列,克隆到空载体pTZU6+1中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行酶切鉴定和测序分析。在脂质体2000的介导下转染HeLa细胞,同时转染空载体为阴性对照及不加任何试剂的空白对照。转染48h后,应用半定量RT-PCR,Westernblot检测HeLa细胞HSP70mRNA及蛋白的表达情况;MTT法检测HeLa细胞的生长抑制率;AO/EB染色法观察HeLa细胞形态学变化;流式细胞术检测HeLa细胞的凋亡率和细胞周期分布情况。结果与对照组相比,转染pHSP70-siRNA组HSP70的mRNA及蛋白表达均明显下降(P<0.01),表明Phsp70-siRNA质粒转染能有效降低HSP70的表达;细胞生长抑制率明显增高(P<0.05),且在48h时细胞抑制率达到最大;在荧光显微镜下观察到HeLa细胞出现凋亡形态;流式细胞术结果显示pHSP70-siRNA组细胞凋亡率显著高于对照组,且G0/...     

HSP27和HSP70mRNA在大肠癌中表达的临床意义

目的：探讨HSP27和HSP70mRNA在大肠癌中表达的临床意义。方法：取大肠癌标本77例，采用免疫组织化学方法检测HSP27的表达状况，从中选取36例手术标本．采用核酸原位杂交技术（ISH）检测HSP70mRNA的表达。结果：HSP27和HSP70mRNA在大肠癌中的阳性率分别为40．3％和66．9％．HSP27和HSP70mRNA均与大肠癌的分化程度相关．与发生部位、浸润深度及淋巴结转移无明显相关性。结论：检测HSP27和HSP70mRNA可作为大肠癌患者预后的一个重要指标。     

骨髓细胞移植上调急性缺血心肌HSP32和HSP70的表达

目的 :检测骨髓细胞移植在急性心肌梗死大鼠模型中对细胞保护性蛋白HSP32和HSP70表达水平的影响 ,探讨细胞移植早期改善缺血心脏功能的可能机制。方法 :通过结扎冠状动脉左前降支制备大鼠心肌梗死模型 ,直视下心外膜注射 5× 10 6骨髓单个核细胞 ;利用免疫荧光和RT -PCR技术检测HSP32和HSP70在术后 1d、3d、7d和 14d的表达变化和移植细胞的分化情况 ;通过超声心动图分析心脏功能左室射血分数 (EF值 )和缩短分数(FS值 )。结果 :免疫荧光结果显示 ,缺血心肌中HSP32和HSP70的表达在移植组明显增强 ,并表达于部分移植细胞内。RT -PCR结果表明 ,移植组HSP32和HSP70的mRNA表达明显高于对照组 ,术后 3d达到高峰 ,比对照组分别增加 5 .0倍和 2 .9倍 (P <0 .0 1)。术后 7d ,移植组EF值和FS值明显高于同期对照组 (14 %和 2 2 % ,P <0 .0 5 ) ;术后 14d ,可在移植的骨髓细胞中检测到心肌细胞和血管内皮细胞特异性蛋白的表达 ,EF值和FS值进一步增加。结论 :骨髓细胞移植早期 ,细胞移植能够上调细胞保护性蛋白的表达 ,促进急性缺血心脏功能恢复     

HSP70对大鼠IL-1β性发热及脑内 AVP含量的影响

目的:观察热休克蛋白HSP70对大鼠IL-1β性发热反应的影响,并研究其与脑内精氨酸升压素(AVP)含量变化的关系,以探讨HSP70是否参与热限作用.方法:(1)60只大鼠随机分为热应激(HS)处理组(A组)和经热应激处理前10 min加用放线菌酮(CHX)组(B组),Western 印迹法观察热应激处理后0、4、8、12、16 h各自下丘脑内HSP70的表达水平.(2)24只大鼠随机分为4组:①HS IL-1β组,经热应激处理后,在HSP70表达最高时,向其下丘脑视前区(POA)注射IL-1β;②CHX HS IL-1β组,于应激前10 min腹腔注射CHX;③IL-1β组,仅注射IL-1β;④对照组,仅注射1 μl生理盐水.连续观察体温变化指标8 h,绘制体温变化曲线.(3)30只大鼠按方法(2)分为4组及HS组(只进行热应激处理,不注射IL-1β);测定体温变化曲线中体温高峰时各自脑内AVP含量.结果:(1)各时间点A组HSP70水平均显著高于B组(P<0.01),A组4、8、12、16 h的HSP70表达水平显著高于0 h,其中12 h的表达水平最高(P<0.01).(2)IL-1β注射后15 min,体温开始升高,120 min达发热高峰.HS IL-1β组各时间点的体温变化指标与IL-1β组有显著差异(P<0.05,P<0.01),高表达的HSP70能明显抑制IL-1β性发热的幅度.单独注射IL-1β 120 min时VSA中AVP的含量明显高于对照组和HS IL-1β组(P<0.05),而与CHX HS IL-1β组无显著差异.各组间大鼠体温高峰期下丘脑中AVP的含量均无显著变化.结论:高水平表达的HSP70能抑制IL-1β性发热;HSP70对IL-1β性发热的抑制作用是否与VSA中AVP含量的变化有关,是否参与了大鼠的热限作用仍待进一步探讨.     

HSP70和MGMT在乳腺肿瘤中的表达和意义

目的：探讨乳腺肿瘤组织中热休克蛋白HSP70和DNA修复酶O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（O6-methyguanine-DNA methytransferase,MGMT）的表达及临床意义。方法：采用免疫组织化学SABC法检测65例乳腺肿瘤组织中HSP70和MGMT的表达情况。结果：乳腺肿瘤中HSP70的阳性率为80.00%（52/65）,MGMT的阳性率为60.00%（39/65）,二者呈中度相关性（r=0.46）。其中,有淋巴结转移组的阳性率高于无转移组（P〈0.05）。结论：HSP70和MGMT的表达率与淋巴结转移情况有关。检测HSP70与MGMT对乳腺肿瘤预后和化疗方案的选择有指导意义。     

胆管癌组织中HSP70和caspase-3蛋白表达及意义

目的 观察HSP70和caspase-3在胆管癌组织中的表达, 探讨其相关性及其与临床病理特征的关系.方法 采用免疫组化S-P法检测68例胆管癌组织中HSP70和caspase-3的表达.应用SSPS统计软件进行数据处理.结果 1)HSP70蛋白1级染色14例(20.6%),2级染色29例(42.6%),3级染色25例(36.8%).caspase-3蛋白低表达为39例(64.7 %) ,高表达为29例(35.3 %).2)HSP70蛋白表达与胆管癌分化程度呈正相关(r=0.272,P=0.025),而caspase-3蛋白表达与胆管癌分化程度呈负相关(r=-0.257,P=0.034).统计学分析显示,在胆管癌中HSP70和caspase-3蛋白的表达呈明显负相关(分别为r=-0.349,P=0.004).3) Kaplan-Meier 法生存分析发现,HSP70 和caspase-3 蛋白的表达与术后无复发生存时间密切相关( P < 0.01).结论 HSP70表达水平可反映胆管癌细胞的增殖及恶性程度,有一定诊断和预后价值;从高到低分化的胆管癌细胞caspase-3蛋白染色显示其发生发展过程中抑凋亡机制减弱;HSP70 可能通过某些途径抑制胆管癌细胞的凋亡调控,提高了胆管癌细胞在应激状态下的稳定性.     

葛根粗提物及葛根素对乙醇所致海马细胞HSP70表达的影响

目的 研究葛根粗提物和葛根素对乙醇引起的胎鼠海马细胞氧化损伤是否具有相同的保护作用。方法 海马细胞的培养取材于孕18d的ICR胎鼠,采用RT－PCR和Western印迹方法观察不同剂量的葛根粗提物及葛根素对乙醇引起的胎鼠海马细胞HSP70 mRNA及蛋白质表达的变化。结果 15mg／L葛根粗提物和10mg／L葛根素均可部分拮抗50-350mmol／L不同浓度乙醇引起的胎鼠海马细胞HSP70表达量的升高。结论 葛根粗提物和葛根素均可降低乙醇所致海马细胞HSP70表达量的升高,证实两者具有相同的抗氧化作用。     

腺病毒介导HSP70对大鼠缺血低氧脑组织保护作用

目的探讨外源性热休克蛋白70(HSP70)表达对脑缺血低氧模型大鼠脑组织保护作用。方法小鼠尾静脉注射携带全长HSP70基因vAd-HSP70,采用RT-PCR方法分别检测注射24、487、2 h后脑组织HSP70mRNA的转录水平。大鼠随机分为缺血低氧组(HI组)、vAd-HSP70静脉注射转染缺血低氧组(vAd-HSP70组,静脉注射转染vAd-HSP70的48 h后予缺血低氧处理)和正常对照组(NC组),各25只。用免疫组织化学技术对各组2、24、487、2 h及7 d脑组织中HSP70蛋白表达进行检测。结果小鼠尾静脉注射含HSP70重组腺病毒后可检测到HSP70基因的有效表达,且在注射48 h后表达水平最高,与247、2 h比较有显著性(F=18.58,P<0.05)。缺血低氧后大鼠脑组织中HSP70的水平增高,在缺血低氧后24 h达高峰,并在24~48 h内维持较高水平,以后逐渐下降。vAd-HSP70组HSP70各时间点的表达水平均高于HI组,在2、48、72 h差异有显著意义(F=85.36~866.67,q=6.71~88.43,P<0.05)。病理学检测显示HI组大鼠脑组织有较严重的缺血损伤性改变,vAd-HSP70组大鼠脑组织损伤较轻。结论外源性HSP70可在大鼠脑组织有效表达,并可减轻脑缺血低氧后病理损伤,对大鼠缺血低氧性脑损伤具有保护作用。     

Hsp70-2及14-3-3zeta在膀胱尿路上皮癌中的表达及临床意义

目的检测Heat shock protein 70-2(Hsp70-2)及14-3-3zeta在膀胱尿路上皮癌(bladder urothelial carcinoma,BUC)组织中的表达,探讨两者在肿瘤发展中的作用及临床意义。方法收集人膀胱尿路上皮癌标本48例,膀胱尿路上皮癌旁组织标本20例,利用免疫组织化学S-P法、Western blot和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Hsp70-2、14-3-3zeta在蛋白水平和mRNA水平的表达,分析两者与膀胱尿路上皮癌的病理分级、临床分期等因素间的关系。结果 3种检测方法均显示Hsp70-2、14-3-3zeta在癌旁组织中低表达,在膀胱尿路上皮癌组织中高表达,其表达量随病理分级程度及浸润深度增高而增高,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Hsp70-2与14-3-3zeta蛋白在膀胱尿路上皮癌中的表达均增高,两者呈正相关(r=0.516,P<0.05)。结论 Hsp70-2与14-3-3zeta在膀胱尿路上皮癌组织中高表达,与病理分级,临床分期呈正相关,且两者之间也呈正相关,提示两者在肿瘤发生、发展过程中起重要作用。     

大鼠脑缺血后HSP70的表达

热休克蛋白 (ｈｅａｔｓｈｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎｓ ,ＨＳＰｓ)是细胞受到应激刺激后诱导产生的一组应激蛋白 ,与肿瘤的增殖及分化有关 ,其中ＨＳＰ70主要用于结肠癌、胰腺癌和乳腺癌的研究 ,具有预后的意义。本实验旨在现察ＨＳＰ70在长时间脑梗死中的表达情况 ,为研究脑梗死后的保护机制提供分子学依据。1　材料和方法1.1　实验动物雌性Ｗｉｓｔａｒ大白鼠 10只 ,随机分成两组 :正常对照组和梗塞组各 5只 ,体重 2 5 0～ 30 0 ｇ ,购自湖北省医科院动物中心 ,采用改进的线栓法[1] 制成Ｗｉｓｔ ａｒ大鼠永久性ＭＣＡＯ模型。模型成功的标志…     

双歧杆菌对实验性大鼠结肠炎中热休克蛋白70的影响

目的 观察实验性结肠炎热休克蛋白(HSP70) 、白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达变化并研究双歧杆菌对其表达的影响.方法 40只SD大鼠随机均分为正常组、模型组、5-ASA组及双歧杆菌组.2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇制备大鼠结肠炎模型.5-ASA组给予奥沙拉秦钠胶囊100 m...     

大鼠脑出血后神经元凋亡与caspase-3表达的关系

目的　研究大鼠实验性脑出血模型中神经细胞凋亡发生的规律以及与caspase 3表达的关系 ,观察caspase抑制剂zVADfmk对出血性脑损伤的保护作用。方法　应用立体定向技术 ,将自体不凝血注入大鼠尾状核区制备脑出血模型 ,将动物随机分为假手术组、出血组和zVADfmk干预组 ,分别在不同时间点断头取脑 ,连续切片作TUNEL染色和caspase 3免疫组化染色。 结果　脑出血后 6h血肿内部及周边组织出现TUNEL阳性细胞 ,72h达高峰 ,2周时仍有少量表达 ;caspase 3在脑出血后 6h表达明显增高 ,2 4h达到高峰 ,各组与假手术组之间差异显著 (P <0 .0 5 )。脑出血后的TUNEL阳性细胞与caspase 3的表达呈正相关 (r =0 .6 0 7,P <0 .0 5 ) ,且caspase 3的高峰时间早于凋亡的发生。经caspase 3抑制剂干预 ,血肿周围组织TUNEL阳性细胞明显减少 ,与对照组相比差异显著 (P <0 .0 5 )。结论　凋亡机制参与了脑出血后继发性损伤的过程 ,而caspase 3的激活在其中起着重要作用 ,通过阻断caspase的激活可以减少脑出血后神经细胞凋亡的发生     

利多卡因对局灶性脑缺血再灌注大鼠HSP70mRNA及其蛋白表达的影响

目的：观察利多卡因对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织热休克蛋白质（HSP70）mRNA及其蛋白表达的影响,并探讨其脑保护的机制。方法：60只雄性Wistar大鼠,采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,并随机将大鼠分为假手术组（Sham）、缺血再灌注组（I/R）和利多卡因组（缺血前10 min静脉注射利多卡因10 mg·kg^-1）。大鼠局灶性脑缺血2 h,然后进行再灌注。在再灌注3、6 、24及72 h断头取脑组织,采用原位杂交法和免疫组织化学法检测其HSP70 mRNA和蛋白的表达。在再灌注24 h做神经功能缺陷评估及苏木精－伊红（HE）染色,观察缺血皮层组织形态学变化。结果：缺血再灌注组,在再灌注3～72 h HSP70 mRNA及其蛋白的表达均增加,峰值分别为161.5±4.8、160.9±4.8,与假手术组比较,差异均具有显著性(P<0.01),但HSP70 mRNA表达较早,广泛分布于缺血侧大脑半球内,而HSP70蛋白表达以缺血侧大脑皮层为主,同时大鼠神经功能缺陷评分升高为2.28±0.47,与假手术组比较,差异均具有显著性(P<0.01)。组织形态学观察可见皮层水肿、淤血,神经细胞明显变性坏死。利多卡因能显著地促进脑缺血再灌注大鼠脑组织中HSP70 mRNA及其蛋白的表达,峰值分别为178.6±5.6、176.2±4.7,与缺血再灌注组比较,差异均具有显著性(P<0.01),不仅HSP70蛋白表达量增多、范围增加,而且还延缓其下降,同时大鼠神经功能缺陷评分降低为1.31±0.56,缺血皮层组织形态学损伤明显减轻,与缺血再灌注组比较,差异均具有显著性(P<0.05)。结论：利多卡因的脑保护作用可能与促进HSP70的表达有关。     

热休克蛋白70减轻大鼠急性坏死性胰腺炎机制的实验研究

目的 探讨热休克蛋白70减轻大鼠急性坏死性胰腺炎的机制.方法 80只SD大鼠随机分为4组,急性坏死性胰腺炎模型组（A）、假手术组（B）、温生理盐水腹腔灌洗预处理后急性坏死性胰腺炎（ANP）组（C）和温生理盐水腹腔灌洗和丝裂原活化蛋白激酶p38（p38MAPK）抑制剂（SB202190）预处理后ANP组（D）,ANP模型由5%牛黄胆酸钠大鼠胰胆管逆行注射诱发而成.C组使用温生理盐水持续腹腔灌洗30 min,10 h后造ANP模型;D组在使用温生理盐水腹腔冲洗后,立刻行SB202190（10 mg/kg）腹腔注射,10 h后制造ANP模型.ANP术后6 h处死大鼠,检查各组大鼠血清细胞因子IL-6、TNF-α和IL-8;血清淀粉酶;取胰腺组织行病理检查,并使用PCR方法检测胰腺中热休克蛋白70（HSP70）/p38-MAPK的表达.结果 SB202190预处理组大鼠血清淀粉酶[（1779.77±84.90）U/L]和温生理盐水腹腔灌洗预处理组[（2845.70＆#177;204.78）U/L]明显低于ANP组[（4064.93±188.97）U/L,P＜0.05],但高于假手术组[（1221.47±54.58）U/L,P＜0.05];SB202190预处理组低于温生理盐水腹腔灌洗预处理组（t＝3.329,P＜0.05）.SB202190预处理组和温生理盐水腹腔灌洗预处理组大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-8明显低于ANP组（P＜0.05）,但高于假手术组（P＜0.05）;SB202190预处理组低于温生理盐水腹腔灌洗预处理组（P＜0.05）.SB202190预处理组和温生理盐水腹腔灌洗预处理组胰腺组织p38MAPK mRNA含量明显低于ANP组（P＜0.05）,温生理盐水腹腔灌洗预处理组高于假手术组（P＜0.05）;SB202190预处理组低于温生理盐水腹腔灌洗预处理组（P＜0.05）.结论 HSP70可以通过调控p38MAPK从而下调细胞因子的表达,进而改善大鼠ANP病理生理.     

实验性脑出血后细胞凋亡的变化及依达拉奉的干预作用

目的：研究依达托奉对脑出血后神经功能缺损、细胞凋亡及caspase-3表达的影响。方法：SD大鼠分为正常组、假手术组、模型组与治疗组，后2组分为6h和1、3、5天4个亚组，每组5只，模型组与治疗组采用Ⅶ型胶原酶诱导脑出血模型，假手术组以等量生理盐水代替Ⅶ型胶原酶，治疗组予以依达拉奉3mg／kg腹腔注射，每天1次。于6h和1、3、5天观察大鼠神经行为学评分，应用TdT介导的原位末端标记（TUNEL）法标记断裂的DNA片段检测凋亡细胞，免疫组化方法测定caspase-3阳性细胞数。结果：与模型组比较，依达拉奉干预后3天和5天大鼠神经行为学评分明显减少（P〈0．05），1、3、5天时caspase-3阳性细胞数明显减少（1天和3天P〈0．05，5天P〈0．01），TUNEL阳性细胞数于3天和5天时明显减少（3天P〈0．05．5天P〈0．01）、结论：依达拉奉能有效减轻脑出血后的细胞凋亡，改善神经功能缺损症状。     

亚低温对大鼠弥漫性脑损伤后海马CA3区HSP70表达及细胞凋亡的影响

目的观察亚低温对大鼠弥漫性脑损伤(DBI)后海马CA3区HSP70在蛋白质和mRNA水平表达及细胞凋亡的影响,探讨亚低温脑保护的分子生物机制.方法将大鼠随机分成空白对照、假手术、单纯DBI和DBI后亚低温治疗4组,按Marmarou氏方法制作大鼠DBI模型,分别采用免疫组化法、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及流式细胞仪(FCM),观察各组动物脑海马CA3区HSP70在蛋白质和mRNA水平的表达及细胞凋亡率.结果与对照组相比,大鼠DBI后海马CA3区HSP70表达水平及细胞凋亡率均升高(P＜0.05).亚低温治疗后,大鼠脑海马CA3区HSP70表达水平较单纯DBI组显著增高(P＜0.01),而细胞凋亡率降低(P＜0.05).结论亚低温对创伤性脑损伤的脑保护机制可能与促进HSP70表达并减少神经细胞凋亡有关.     

电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠IL-6、IL-10表达影响的实验研究

目的 观察电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)表达的影响,探讨针刺治疗缺血性脑损伤的可能机制.方法 采用血管内线栓法制作SD大鼠大脑中动脉梗塞模型(MCAO),梗塞2 h后拔出栓线造成再灌注损伤,观察缺血再灌注后不同时间点以及电针治疗后大鼠血浆和脑组织中IL-6、IL-10含量的变化.结果 治疗1组外周血IL-6、IL-10比模型对照1组升高(P＜0.05),治疗2组IL-6较模型对照2组升高(P＜0.05).脑组织IL-10治疗1组与模型对照1组差异显著(P＜0.05).结论 电针可通过在一定范围内增强IL-6、IL-10的表达来抑制炎性细胞在缺血区的聚集和激活,而抑制细胞毒性物质的释放,从而改善微循环,促进大脑血供,有利于大鼠脑神经功能的恢复.     

亚低温对大鼠脑缺血再灌注损伤后热休克蛋白70表达及细胞凋亡的影响

[目的]观察亚低温对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤后热休克蛋白70(HSP70)表达的影响,探讨亚低温对脑神经细胞保护作用的机制。[方法]将SD大鼠随机分为正常组、假手术组、常温缺血组和亚低温缺血组。应用大脑中动脉线栓法(MCAO)建立大鼠局灶脑缺血再灌注模型,于缺血2 h再灌注,再灌注后3、6、12、24、72 h和7 d处死。其中亚低温组大鼠于缺血后30 min实施病灶侧脑亚低温并持续4 h。采用HE染色观察神经细胞形态学改变,免疫组化法检测脑组织HSP70表达,TUNEL法检测凋亡细胞。[结果]正常组及假手术组均未见明显病理改变;常温缺血组梗死灶明显,大量神经元坏死消失;亚低温缺血组未见明显梗死灶,但可见神经元固缩。正常组及假手术组未见或偶见HSP70阳性细胞;常温缺血组HSP70阳性细胞较多;与常温缺血组相比亚低温缺血组在相应时间点均明显减少(P<0.05)。常温缺血组TUNEL阳性细胞数随再灌注时间的延长而逐渐增多,至72 h达高峰;与常温缺血组相比,亚低温缺血组各时间点均明显减少(P<0.05)。[结论]亚低温对大鼠缺血再灌注损伤脑有保护作用,通过降低HSP70的表达和减少细胞凋亡可能是其保护机制之一。