抗癫(癎)药物对正常幼年大鼠脑内多药耐药基因MDR1表达的影响

近年来,国内外对于难治性癫痫发病机制的研究已经证实,多药耐药基因（MDR）在癫痫病灶内存在异常高表达现象,这种高表达可能通过一种非特异性的机制将一部分结构与其底物类似的化合物,包括大部分抗癫痫药（AEDs）,从其作用部位排出,造成局部药物的有效浓度降低,使癫痫发作难以控制。导致多药耐药基因1（MDR1）表达增加的原因还不清楚,可能是多方面的,绝大多数作者认为癫痫长期反复发作可以诱导MDR1的高表达,但是不同的学者对于抗癫痫药物是否会诱导MDR1表达增高还存在争议,尽管体外培养细胞显示AEDs对MDR1存在诱导作用,但是在活体动物的研究这一点却没有得到证实。儿童是癫痫的高发人群,未成熟脑既有与成熟脑相近的解剖生理结构,又有与成熟脑不同的发育中脑特征表现。目前国外的文献均限于成年动物的研究,2004年12月至2005年12月,我们以MDR1基因表达产物P糖蛋白（PGP）为观察指标,观察了AEDs对未成熟脑MDR1的表达是否存在诱导作用。报告如下。     

不同增生程度星形胶质细胞对癫癎大鼠多药耐药基因MDR表达的影响

目的：探讨星形胶质细胞增生与癫癎大鼠多药耐药基因（MDR）表达的关系。方法：将新生Sprague-Dawley大鼠大脑皮层星形胶质细胞分离、纯化并培养至第3代后,采用肿瘤坏死因子（TNF-α）分别作用2 h、24 h 及48 h以刺激星形胶质细胞增生。将不同增生程度的星形胶质细胞培养液分别注入到癫癎大鼠侧脑室,用PCR法、免疫组化法和免疫印记法测定脑组织MDR产物P-糖蛋白（P-gp）表达。结果：TNF-α刺激后2 h胶质细胞开始增生,24 h达高峰;增生的胶质细胞培养液可使癫癎大鼠MDR表达上调,表达量与增生程度一致。结论：星形胶质细胞增生可使癫癎大鼠MDR基因表达上调,可能参与了难治性癫癎的形成。［中国当代儿科杂志,2010,12(11)：908-911］     

托吡酯治疗后癫(癎)患儿体重和血浆甘丙肽的变化

目的探讨癫痫患儿托吡酯治疗后体重变化与血浆甘丙肽的关系。方法对服用托吡酯的61例癫痫患儿用放射免疫法测定治疗前后血浆甘丙肽浓度和观察身高、体重变化,并以16例健康儿童作为对照。结果①服托吡酯后22例（36．1％）体重下降,该组甘丙肽浓度降低有统计学意义（t=2．91,P〈0．01）。体重增加组甘丙肽变化没有统计学意义（t=1．67,P〉0．05）。对照组甘丙肽变化无统计学意义（t=1．72,P〉0．05）。②体重下降组中18例（81．8％）患儿食欲变差,与体重增加组相比,差异有统计学意义（X^2=28．50,P〈0．001）。③食欲差组甘丙肽浓度降低有统计学意义（t=4．84,P〈0．001）,而食欲好组下降无统计学意义（t=1．04,P〉0．05）。④癫痫患儿治疗后体重指数的下降[（17．48±2．22）kg／m^2比（15．24±2．38）kg／m^2]有统计学意义（t=8．628,P〈0．01）。对照组是增加的。结论服用托吡酯后部分癫痫患儿体重会有显著下降和食欲减退,同时伴有血浆中甘丙肽水平显著的下降。提示托吡酯治疗引起的体重降低和食欲减退可能与甘丙肽浓度降低有关。     

难治性癫(癎)患儿多药耐药基因的表达及意义

目的 研究难治性癫(癎)(RE)患儿多药耐药基因(MDR1)的表达及其临床意义.方法 提取难治性癫(癎)患儿(n=30)、非难治性癫(癎)患儿(n=30)和正常健康儿童(n=30)外周血标本,用荧光定量PCR方法分析比较MDR1 mRNA在各组的表达.同时观察MDR1 mRNA水平与癫(癎)发作频率和应用抗癫(癎)药物(AEDs)的种类与数量关系.结果 MDR1 mRNA在难治性癫(癎)组表达明显高于非难治性癫(癎)组及正常对照组(P均<0.01);在发作次数频繁患儿明显高于发作次数较少患儿(P<0.01);在使用4种AEDs患儿明显高于使用2种及3种AEDs息儿(P<0.05).结论 血中高表达的MDR1参与了难治性癫(癎)的耐药机制,可作为判断难治性癫(癎)的客观指标.     

长程服用苯巴比妥、氯硝安定、丙戊酸和托吡酯对未成熟脑发育影响的实验研究

目的探讨治疗血浓度下常用抗癫痫药（AEDs）对未成熟脑损伤的可能性。方法160只健康sD大鼠,幼鼠与成年鼠各80只。以AEDs血浓度达到临床治疗稳态血浓度为实验剂量,设立健康7日龄幼鼠及2月龄成年SD大鼠氯硝安定（CZP）、苯巴比妥（PB）、丙戊酸钠（VPA）、托吡酯（TPM）给药组及正常对照组。每一给药组又分为2周短程及5周长程给药组,每组8只。停药当天称取体重及脑重,尼氏染色及电镜观察脑组织病理改变,ELISA法测定血清神经元特异性烯醇化酶（NSE）含量,免疫组化检测Bcl-2、Bax蛋白表达,原位末端标记法（TUNEL）检测凋亡细胞。结果（1）短程PB给药幼鼠血清NSE浓度[（8．84±2．10）nmol／L]较正常对照[（6．27±1．27）nmol／L]高,差异有统计学意义（P〈0．01）;（2）长程CZP及PB组幼鼠脑重较对照明显减轻,额叶皮层神经细胞减少,神经元超微结构明显异常,血清NSE浓度[分别为（8．15±1．67）nmol／L及（8．07±1．27）nmol／L]较对照[（6．02±1．20）nmol／L]高,差异有统计学意义（P〈0．01）,Bax蛋白表达强于正常对照组（P〈0．01）,TUNEL染色阳性细胞较对照组多。结论治疗血浓度下4种AEDs中,PB、CZP可引起发育中脑组织明显而持久的组织学损伤及神经元坏死与过度凋亡。     

儿童急性白血病多药耐药基因检测的临床价值

随着联合化疗的应用,儿童急性白血病的疗效已有极大提高,但仍有部分患儿达不到完全缓解或缓解后易复发。多年的研究发现,白血病细胞多药耐药性(ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ,ＭＤＲ)是白血病难以获得良好疗效的障碍。多药耐药基因(ｍｄｒ1)的扩增和过度表达所引起的ＭＤＲ是其中的一个重要机制[1]。我们以半定量逆转录聚合酶链反应(ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｒｅａｃｔｉｏｎ,ＲＴＰＣＲ)技术检测了33例儿童急性白血病细胞中ｍｄｒ1ｍＲＮＡ基因的表达,初步探讨了其与临床耐药的关系。对象…     

托吡酯对癫癎患儿脑电图的影响

目的　观察小儿癫应用托吡酯单药治疗后 ,脑电背景活动变化。方法　对 34例癫予托吡酯单药治疗 ,比较用药前和用药后 3个月时脑电背景活动变化。结果　用药 3个月时θ频段相对功率显著增加 (P <0 .0 1) ,α频段相对功率显著降低 (P <0 .0 5 ) ,β频段、δ频段相对功率不变。 结论　托吡酯可使脑电背景活动中θ频段相对功率显著增加 ,α频段相对功率显著降低     

托吡酯对癫癎患儿酸碱平衡的影响

目的探讨托吡酯对癫癎患儿酸碱平衡的影响.方法 31例癫癎患儿均给予托吡酯单药治疗.初始剂量为0.5～1.0 mg/(kg·d),每周加量0.5～1.0 mg/(kg·d),4～8周达治疗量,为4.0～8.0 mg/(kg·d).于治疗前、治疗2个月行血气分析.结果托吡酯治疗前碱剩余为(-0.77±2.16) mmol/L,HCO3-为(24.0±1.22) mmol/L.服用托吡酯2个月后,碱剩余为(-6.76±1.02) mmol/L,与治疗前比较无显著差异(t=15.63 P＜0.01);HCO3-为(16.64±2.30) mmol/L,与治疗前比较差异显著(t=13.83 P＜0.01).其中1例出现明显呼吸深快,予口服碳酸氢钠治疗,症状消失.余患儿均未出现代谢性酸中毒临床表现.结论癫癎患儿在服用托吡酯时可引起酸碱平衡的变化.     

托吡酯对癫癎患儿糖代谢的影响

目的了解托吡酯治疗后癫癎患儿血糖、胰岛素、食欲、甘丙肽、瘦素变化,探讨托吡酯对糖代谢的影响.方法采用放射免疫法测定2003年2～10月在河北省儿童医院就诊的41例癫癎患儿服用托吡酯(3.93±1.60)mg/(kg·d)4个月前后血浆甘丙肽和血清瘦素和空腹血糖、胰岛素的浓度,并了解食欲变化.结果服药后的血糖由4.87mmol/L降至4.69mmol/L;胰岛素由6.78mIU/L升至7.42mIU/L;甘丙肽服药后由26.14ng/L降到20.46ng/L;而瘦素则从(1.32±0.57)μg/L升为(1.91±1.10)μg/L.服药前有4例食欲不好,服药后有19例出现食欲减退.结论服用托吡酯会引起体内血糖降低、胰岛素升高、食欲下降,这些变化可能为托吡酯导致的甘丙肽降低和瘦素升高所致.     

托吡酯对癫(癎)患儿骨代谢的影响

目的探讨抗癫癇药托吡酯(topiramate,TPM)对癫癇患儿骨代谢的影响。方法对单独服用托吡酯组32例、丙戊酸钠组45例和卡马西平组31例的癫癇患儿及36例未用药物治疗的癫癇患儿进行血钙、磷、碱性磷酸酶和骨密度的测定。结果血钙浓度TPM组和VPA组均较对照组高,CBZ组则较对照组低(P均<0.05);血磷浓度TPM组与CBZ组均较正常对照组低(P<0.05),VPA组与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);血碱性磷酸酶各组间差异无统计学意义(P>0.05)。骨密度测定,发现3个治疗组患儿均有不同程度的骨密度降低(P<0.05),并且和服药时间呈显著负相关。结论新型抗癫癇药如托吡酯亦可导致癫癇患儿骨代谢异常,且骨密度与服药时间呈负相关。     

拉莫三嗪对癫癎幼鼠海马中多药耐药基因表达的影响

癫癎是一种常见的神经系统疾病,约有25%的癫癎患者对大部分抗癫癎药物耐药,从而发展为难治性癫癎[1].越来越多的学者认为难治性癫癎的耐药机制可能与多种药物运输蛋白的过最表达、抗癫癎药物不能有效地进入脑细胞有关,其中多药耐药基因(multidrug resistance gene,MDR)及其表达产物P-gp备受关注.     

急性淋巴细胞白血病微小残留病多药耐药基因的表达

目的 探讨急性淋巴细胞白血病（简称急淋，ALL）微小残留病（MRD）与肿瘤多药耐药基因mdrl-mRNA表达的关系。方法 选择本院住院及门诊的ALL患儿33例，采集初治前及完全缓解（CR）后不同时期的骨髓标本2ml，提取DNA及RNA。用聚合酶链反应（PCR）法扩增T细胞受体γ链（TCRγ）单克隆性基因重排，以确定MRD的存在；同时采用反转录聚合酶链反应（RT－PCR）方法对同一份标本进行mdrl-mRNA表达的检测，将具有阳性特异性条带的电泳胶片用GQS－960图像处理系统软件进行定量分析，计算mdrl与β2－MG的比值，以mdrl/β2－MG比值≥0．3定为阳性表达。CR后按时进行强化治疗，每隔3－6个月对MRD DNA及mdrl-mRNA作动态观察。结果 （1）33例ALL患儿初诊时TCRγ单克隆性基因重排阳性率为82％（27／33），完全缓解（CR）率为91％（30／33），CR时MRD阳性率为80％（24／30）。（2）随访观察6－18个月MRD阳性率呈逐渐下降趋势，而mdrl-mRNA阳性表达率呈逐渐上升趋势。（3）根据随访结果，将处于CR期的28例患儿分为4个组：MRD及mdrl均阳性组（1组）7例ALL患儿有6例复发；MRD及mdrl均阴性组（4组）ALL复发数为0；MRD阳性而mdrl阴性组（2组），8例中有2例复发；MRD阴性而mdrl阳性组（3组）4例中有1例复发。1组与4组比较，P＜0．05，其他各组间比较差异均无显著意义。结论 （1）ALL完全缓解后随着CR时间延长及按时进行强化治疗，MRD阳性率逐渐下降，而mdrl阳性率却呈上升趋势，两者呈负相关；（2）MRD与mdr1均阳性者ALL复发率高，提示预后差；而MRD与mdr1均阴性者复发率低，预后较好；（3）CR期按时进行MRD及mdr1的监测，可为临床化疗方案个体化提供依据，有利于微小残留白血病细胞（MRLC）的彻底清除。     

甘珀酸对戊四氮点燃癫癎大鼠海马Fos NMDAR2 GFAP表达的影响

目的缝隙连接(GJ)是细胞间直接通道,对同步化放电有重要作用。该研究旨在探讨GJ阻断剂甘珀酸(CBX)对戊四氮(PTZ)点燃大鼠癫癎样活动的影响。方法30只SD雄性大鼠随机分为3组:对照组(NS组),点燃组(K组),干预组(CBX组),每组10只大鼠。NS组每日腹腔注射生理盐水;K组和CBX组大鼠每日腹腔注射PTZ(35mg/kg)至点燃,再分别腹腔注射生理盐水、CBX(10mg/kg)干预3d。观察3组大鼠惊厥行为的变化,以及免疫组化染色方法观察Fos、NMDAR2、GFAP在海马内的表达变化。结果①PTZ点燃癫癎大鼠出现自发性抽搐,自发性抽搐次数K组>CBX组>NS组(P<0.05)。②点燃癫癎大鼠海马Fos-Li神经元、NMDAR2-Li神经元增多,GFAP-Li星形胶质细胞增多,胞体肥大,突起丰富。CBX干预后,Fos-Li、NMDAR2-Li神经元减少(P<0.05,P<0.01),GFAP-Li星形胶质细胞无明显改变(P>0.05)。结论CBX抑制自发性抽搐和神经元活动,CBX有潜在的抗惊厥或协助抗惊厥的作用。     

甘珀酸对戊四氮点燃癫癎大鼠海马Fos NMDAR2 GFAP表达的影响

目的：缝隙连接（GJ）是细胞间直接通道,对同步化放电有重要作用。该研究旨在探讨GJ阻断剂甘珀酸（CBX）对戊四氮（PTZ）点燃大鼠癫癎样活动的影响。方法：30只SD雄性大鼠随机分为3组：对照组（NS组）,点燃组（K组）,干预组（CBX组）,每组10只大鼠。NS组每日腹腔注射生理盐水;K组和CBX组大鼠每日腹腔注射PTZ（35 mg/kg）至点燃,再分别腹腔注射生理盐水、CBX（10 mg/kg）干预 3 d。观察3组大鼠惊厥行为的变化,以及免疫组化染色方法观察Fos、NMDAR2、GFAP在海马内的表达变化。结果：①PTZ点燃癫癎大鼠出现自发性抽搐,自发性抽搐次数K组>CBX组>NS组（P<0.05）。②点燃癫癎大鼠海马Fos-Li神经元、NMDAR2-Li神经元增多,GFAP-Li星形胶质细胞增多,胞体肥大,突起丰富。CBX干预后,Fos-Li、NMDAR2-Li神经元减少（P<0.05, P<0.01）,GFAP-Li星形胶质细胞无明显改变（P>0.05）。结论：CBX抑制自发性抽搐和神经元活动,CBX有潜在的抗惊厥或协助抗惊厥的作用。［中国当代儿科杂志,2007,9（5）：465-468］     

多药耐药基因介导的骨髓保护在肝癌小鼠化疗时的富集效应

目的 探讨多药耐药基因转染小鼠骨髓单个核细胞移植后,化疗时其在体内的表达、分布以及在骨髓和外周血的富集效应.方法 骨髓造血细胞转染外源性多药耐药基因后移植入荷瘤Balb/c小鼠,免疫组化和RT-PCR观察mdr1基因在骨髓造血细胞、外周血单个核细胞及重要脏器的表达和分布;监测外周血白细胞变化及肿瘤组织P-糖蛋白表达.结果 外源性多药耐药基因在重要脏器和肿瘤组织无表达;化疗前骨髓细胞和外周血的P-糖蛋白表达阳性率分别为(9.36±1.84)%、(8.52±1.26)%,化疗药物剂量递增时,P-糖蛋白表达阳性率增高;移植未转染组与移植转染组外周血白细胞计数差异有统计学意义(P＜0.01).结论 外源性多药耐药基因转染在骨髓造血细胞和外周血单个核细胞有持续较高表达,在重要脏器无表达;随化疗药物剂量递增时骨髓和外周血有明显的富集效应;多药耐药基因转染介导保护骨髓在超剂量化疗中获得显著效果.     

甲状腺功能低下对新生期大鼠海马神经元凋亡及Bcl-2、Bax基因表达的影响

目的　探讨甲状腺功能低下 (简称甲低 )对新生期大鼠海马神经元凋亡及Bcl 2、Bax基因表达的影响。方法　孕 15天SD大鼠丙基硫氧嘧啶 (5 0mg/d)灌胃造成仔鼠甲低动物模型。采用化学发光法测定 1、5、10、15日龄仔鼠血清FT3 及FT4水平。取各日龄海马组织 ,应用光镜和透射电镜观察神经元形态学特点 ,琼脂糖凝胶电泳检测DNA降解片段 ,WesternBlotting检测Bcl 2和Bax基因蛋白表达的变化。结果　模型仔鼠各日龄血清FT4水平始终接近于药盒检测限 (2 8nmol/L) ,显著低于对照仔鼠 (1、5日龄P均 <0 0 1;10、15日龄P均 <0 0 0 1) ;血清FT3 较同日龄对照仔鼠降低 (1日龄P <0 0 5 ;其他日龄P均 <0 0 1)。模型仔鼠海马组织光镜下变性神经元增多 ,透射电镜下神经元凋亡明显增加 ,以 10、15日龄为著。DNA片段分析显示模型仔鼠各日龄均出现不同程度的DNA降解片段 ,对照仔鼠仅在 10日龄可见少量DNA降解片段。WesternBlotting结果显示对照仔鼠Bcl 2蛋白各日龄间表达水平不同 (P <0 0 5 ) ,1、5日龄表达较高 ,10日龄有所下降 ,15日龄回升 ;各日龄模型仔鼠与对照组相比表达水平明显下降 (1日龄 1 95± 0 2 7比 2 5 9± 0 19,P <0 0 5 ;5日龄 1 86± 0 2 4比 2 4 7± 0 17,P <0 0 5 ;10日龄 1 2 9± 0 2 2比 1     

癫癎大鼠海马中脂蛋白脂酶表达的动态观察及其对维生素E含量的影响

目的：研究大鼠癫癎模型海马中脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)表达的变化规律,探讨LPL在癫癎持续状态(status epilepticus)后对维生素E含量的影响。方法：采用匹罗卡品(PILO)腹腔注射法建立癫癎大鼠模型,免疫荧光方法观察癫癎损伤后不同时间点海马中LPL的表达,比色法测量海马中维生素E(Vit E)的含量。结果：免疫荧光发现正常组和癫癎组海马中均有LPL表达,且大鼠癫癎持续状态后24 h海马区LPL表达开始增加(P<0.05), 3 d达高峰(P＜0.01),以后逐渐下降,7 d时仍维持较高水平, 14 d后基本恢复正常。大鼠癫癎持续状态后12 h海马Vit E含量开始迅速降低,且明显低于正常 (P＜0.01),于24 h达到低谷(P＜0.01),3~7 d 逐渐升高,但仍显著低于正常(P＜0.05),14 d后基本恢复正常。结论：LPL在癫癎大鼠模型海马中表达上调,代偿性加速对Vit E的摄取,从而可能对癎性发作后氧化应激机制产生影响。［中国当代儿科杂志,2010,12（5）：377-381］     

EphA5/ephrinA5在癫癎大鼠海马CA3区的表达变化及作用

探讨EphA5及其配体ephrinA5在癫癎大鼠模型海马内表达变化及其在颞叶癫癎发病中的作用。方法将240只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为对照组(n=120)和癫癎组(n=120),建立氯化锂-匹罗卡品颞叶癫癎大鼠模型。致癎后分别选取12 h、24 h、7 d、15 d、30 d和60 d 6个时间点为亚组(n=20),采用原位杂交法检测各亚组大鼠海马CA3区和齿状回(DG)ephrinA5 m RNA表达水平(n=9);采用免疫组化法检测各亚组大鼠海马CA3区和DG EphA5蛋白的表达水平(n=9);采用Neo-Timm银染法观察各亚组大鼠海马CA3区的苔藓纤维出芽情况(n=2)。结果原位杂交结果显示:ephrinA5 m RNA在海马CA3区可见表达,但在DG无表达;与同时间点对照组相比,致癎后7 d、15 d,癫癎组大鼠海马CA3区ephrinA5 m RNA表达明显下调(P0.05),在致癎后30 d、60 d,癫癎组大鼠海马CA3区ephrinA5 m RNA表达逐渐上调(P0.05),且与对照组相比差异无统计学意义(P0.05)。免疫组化结果显示:EphA5蛋白在大鼠海马CA3区及DG区均有表达,其水平变化趋势与ephrinA5 m RNA相一致。Neo-Timm银染法结果显示:致癎后7 d、15 d,癫癎组大鼠海马CA3区存在明显苔藓纤维出芽。结论配体ephrinA5协同受体EphA5在海马CA3区的表达下调,可能共同参与了CA3区的苔藓纤维出芽作用机制,并与癫癎的发生、发展关系密切。