转基因马铃薯PCR检测方法

本文针对国际上商业化种植的3种转基因马铃薯的1种国内大田实验的转基因马铃薯，确定了使用PCR方法检测商品化转基因马铃薯的技术路线。在本研究中，选取马铃薯种属特异性的内源蛋白ptatatin基因片断为内对照，用以检验蝗取的样品DNA质量，有效避免假阴性并确定检测样品的种源，选取FMV35S启动子、CaMV35S启动子、NOS终止子、NPTⅡ选择基因作为筛选基因，选取外源目的基因PLRVrep、PVYcp作为鉴定品系的鉴定基因，同时筛选出检测以上基因的最佳引物序列，并优化了PCR反应条件，实验结果表明，各对引物特异性强且工作良好；PCR反应条件稳定可靠。本方法适用于进出口检验检疫部门和农业部门对转基因马铃薯的检测监控。     

转基因产品的检测方法

目前,转基因产品的检测方法主要有分子杂交、PCR方法、酶联免疫分析法和基因芯片等,其中分子杂交包括Southern杂交、Northern杂交和Western杂交。对以上转基因产品检测方法进行了介绍,并对它们的优缺点进行了分析。     

油菜中转基因成分的筛查检测策略

旨在建立油菜中转基因成分的快速筛查方法,服务于农业转基因生物安全监管。根据转基因油菜常用转化遗传元件信息建立转基因油菜的筛查策略,并使用定性PCR法检测。结果表明,利用CaMV35S启动子、NOS终止子、bar基因、pat基因、CP4-epsps基因和NPT II基因6个靶标元件的组合,理论上可筛查92%的已知商业化转基因油菜转化事件。该方法的检测灵敏度达到1g/kg,可对油菜中的大多数转化事件进行快速、高灵敏度的筛查。     

食品中转基因成分的检测

文章对当前几种比较常用的食品中转基因成分的检测方法进行了概述,比较了各种检测方法的优缺点;简述了基因芯片技术、近红外光谱分析技术等在转基因产品检测中的应用。     

玉米中转基因成分筛查策略

根据商业化转基因玉米外源基因元件信息,构建玉米转基因检测分子特征矩阵,并根据元件信息建立转基因玉米的筛查检测策略。结果表明:利用CaMV35S启动子、NOS终止子2个元件的组合,可完成对现有转基因玉米转化事件的筛查检测,检测灵敏度可达到1g/kg。该筛查方法可对玉米中的转基因成分进行快速、高灵敏度的筛查。     

农作物中Cry1A(c)和CP4-EPSPS转基因成分双重实时荧光PCR检测方法的建立

采用羧基荧光素(FAM)和六氯荧光素(HEX)荧光基团标记探针,建立针对农作物中常见抗虫和抗除草剂基因的双重实时荧光PCR检测方法,通过特异性、检出限以及模拟掺假试验验证此方法在转基因检测中的适用性.特异性检测试验中仅转基因作物(转基因棉花、转基因水稻、转基因大豆)和阳性质粒检测出相应转基因成分,其余样品均未出现明显P...     

常见食用菌中转基因成分的多重PCR检测技术模拟

将食用菌转基因研究用的p301-bG1质粒DNA,添加到19种常见食用菌样品中,作为模拟阳性样品,从中提取出DNA用于多重PCR分析,建立了食用菌模拟阳性样品中4个大小分别为165、398、545和600 bp的外源基因(NOS、BAR、GUS与NPTⅡ)的特异性DNA片段的5组二重PCR与2组三重PCR检测方法.     

转基因生物检测方法研究进展

随着转基因技术在农业领域的迅速应用与发展,转基因产品的种类与数量逐渐增加,转基因产品的安全性也越来越被社会公众广泛关注,转基因检测技术体系也迫切需要持续的创新与发展。简要介绍了转基因作物尤其是非授权转基因作物的成分分析检测思路及方法,目前转基因检测主要是基于外源蛋白和核酸成分的检测技术及方法,如酶联免疫吸附技术、PCR技术、等温扩增技术等,另外还有一些检测新技术如指纹识别,微阵列、高通量测序等,希望对我国转基因生物安全管理工作有所启发。     

DP -305423转基因大豆PCR检测方法研究

根据DP- 305423外源插入片段与植物基因组序列设计特异性引物,以leetin基因(118 bp)作为内参照基因,筛选最佳引物并对反应程序和反应体系进行优化,最终建立转基因大豆DP - 305423转化体特异性定性PCR检测方法.对该方法进行了特异性、灵敏度、稳定性和重复性测试.结果表明:该方法能够特异性检测出DP...     

棉花中转基因成分多重PCR检测体系的建立

以棉花内源基因sad1、报告基因GUS、外源抗虫基因Cry1 Ab/Ac、筛选基因NPTⅡ、NOS终止子和CaMV35 S启动子为检测对象,设计的6对引物能扩增长度合适的基因片段且避免了引物二聚体。通过优化PCR扩增体系中不同引物终浓度的配比以及退火温度对多重PCR检测的影响,建立了棉花转基因成分6重PCR检测体系。结果表明:采用本研究建立的棉籽基因组DNA提取方法,该6重PCR检测体系能够有效地从少至1颗棉籽的少量样品里检测出棉花中的转基因成分。     

食用大豆油中DNA的快速提取和转基因成分定性检测

转基因生物（GMO）制品中转基因成分检测的难点在于深加工产品中DNA的提取。本试验以食用大豆油为研究对象,研究操作简单、费用低廉的大豆深加工产品DNA提取的新方法。利用大豆内源基因Lectin设计引物,对所获得的DNA进行PCR检测,结果证实通过本方法提取的DNA纯度足以进行PCR反应。利用转基因大豆转化载体序列设计引物,进一步对其转基因成分进行检测,结果表明,用本方法从转基因大豆油中提取的DNA含有转基因成分。     

抗草甘膦转基因大豆PCR检测方法的建立与应用

 应用PCR检测方法 ,以大豆凝集素 (lectin)基因为内置标准 ,检测了抗草甘膦转基因大豆中的外源CaMV35S启动子、NOS终止子和CP4 EPSPS成分 ,并通过Southern杂交进一步证实了PCR检测结果的可靠性 ,建立了基于PCR的抗草甘膦转基因大豆检测方法 ,最低检测限度为 0 .0 5 %。用此方法检测转基因情况未知 ,分别来自欧盟、美国、阿根廷、未知国别的进口大豆及未知国别的进口豆粕 ,除从欧盟进口的大豆无CaMV35S启动子、NOS终止子、CP4 EPSPS基因成分外 ,其余样品均含有上述成分 ;而从国内非转基因大豆中未检出上述成分。用此方法检测抗草甘膦大豆京引D1×豫豆 12的F2 和F2∶5群体植株 ,PCR检测结果与大田施药 (草甘膦有效成分 1.0kg·ha-1)检测结果一致率分别达 10 0 %和 93.0 %。     

豆粕与发酵豆粕中主要抗营养因子调查分析

【目的】豆粕是动物饲料的主要原料,但其含多种抗营养因子（anti-nutritional factors, ANF）,阻碍营养成分的消化、吸收和利用,从而影响动物的生长发育和健康。研究表明豆粕经微生物发酵可有效地降低抗营养因子含量。但由于发酵工艺、发酵菌种、豆粕本身的因素,不同生产厂家的豆粕及发酵豆粕中各抗营养因子含量差别较大,现有研究中也少有关于二者中抗营养因子水平的研究报道。为此,抽取了市售的65批次豆粕和54批次发酵豆粕,对6抗营养因子：大豆球蛋白、β-伴大豆球蛋白、胰蛋白酶抑制因子、棉籽糖、水苏糖、脲酶进行分析测定,以了解饲料行业使用的豆粕及发酵豆粕中的抗营养因子含量。【方法】用ELISA法（enzyme-linked immuno sorbent assay）对样品中的大豆球蛋白、β-伴大豆球蛋白、胰蛋白酶抑制因子含量进行测定,其分析方法和操作要求均与所购ELISA试剂盒的说明相一致,主要过程为：样品前处理、加样、洗板、加酶标试剂、显色、终止。棉籽糖和水苏糖的检测采用高效液相色谱（high performance liquid chromatography, HPLC）检测微波提取的棉籽糖和水苏糖。脲酶分析参照国标方法：加入尿素缓冲液后恒温水浴,一定时间后加入盐酸溶液停止反应后冷却,清洗试管内容物,以氢氧化钠标准溶液滴定至pH4.7后根据体积计算得出脲酶活性。【结果】调查分析后发现：豆粕和发酵豆粕中的大豆球蛋白平均含量分别为129.3、54.7 mg·g^-1,发酵后大豆球蛋白平均含量降低了57.7%,根据百分位数法对数据进行统计分析,得出豆粕和发酵豆粕中的大豆球蛋白正常值范围分别为58.9-P₉₀（177.3 mg·g^-1）、ND-P₉₀（109.4 mg·g^-1）。豆粕中的β-伴大豆球蛋白平均含量为102.2 mg·g^-1,而发酵豆粕中的β-伴大豆球蛋白为37.6 mg·g^-1,相比豆粕降低了63.2%,使用相同的数据统计方法判定二者中β-伴大豆球蛋白含量正常值范围分别为42.8-P₈₅（147.2 mg·g^-1）和ND-P₈₅（61.8 mg·g^-1）。胰蛋白酶抑制因子在豆粕和发酵豆粕中平均含量分别为18.4 mg·g^-1和7.5 mg·g^-1,发酵处理使其含量下降了59.1%,同时得出豆粕及发酵豆粕胰蛋白抑制因子含量正常值范围分别在ND-P₈₀（28.6 mg·g^-1）、ND-P₈₀（9.9 mg·g^-1）之间。豆粕和发酵豆粕中的棉籽糖平均含量分别为11.02、1.93 mg·g^-1,发酵豆粕比豆粕减少了82.5%,豆粕和发酵豆粕中棉籽糖的正常值范围分别在ND-P₉₀ （13.79 mg·g^-1）、ND-P₉₀（4.65 mg·g^-1）之间。豆粕中水苏糖的平均含量为29.70 mg·g^-1,而发酵豆粕中水苏糖的平均含量为5.19 mg·g^-1,发酵后水苏糖含量降低了82.5%,同时水苏糖的正常值范围分别在ND-P₈₅ （33.29 mg·g^-1）、ND-P₈₅（11.58 mg·g^-1）之间;豆粕中脲酶含量正常值范围为ND-P₉₇（0.40 U·g^-1）,发酵豆粕脲酶未检出。综上得出,发酵豆粕的抗营养因子含量与豆粕相比有不同程度的减少。【结论】在分析调查的基础上得出了现行市售豆粕及发酵豆粕主要抗营养因子的含量范围。本调查分析为饲料加工工艺的进一步优化提供数据支撑,同时能够对养殖企业选择豆粕及发酵豆粕作为饲料原材料起到一定的理论指导作用。     

改性豆粕胶黏剂压制稻草板的研究

利用改性豆粕胶黏剂压制稻草板,可以有效缓解木材资源紧张的情况;采用正交实验方法考察了施胶量、热压时间、热压温度对不同配方改性的豆粕胶黏剂压制的稻草板的主要物理力学性能的影响,检测了稻草板的静曲强度和内结合强度;应用旋转粘度计,测定醋丙乳液改性豆粕胶黏剂的黏度。结果表明：改性豆粕胶黏剂的黏度均处于3000～8000 mPa·s范围内。在施胶量为30%时,利用稻草粒径在1.0～20 mm范围内的稻草刨花所压制出的稻草刨花板的静曲强度为14.23 MPa,内结合强度为0.43 MPa,其强度符合GB/T 21723—2008的要求。可见,施胶后的草片接触角明显减小,施加改性豆粕胶的稻草疏水性减弱;施胶后稻草的浸润性显著增强,稻草刨花彼此之间能形成良好的胶接效果。     

复合菌种对发酵豆粕营养成分的影响研究

[目的]采用啤酒酵母菌、乳酸菌复合菌株,研究其对固态发酵豆粕的影响。[方法]对啤酒酵母菌、德氏乳酸杆菌进行动力学研究,探讨其最佳接种时间。在起始温度30℃、接种量10%、含水量38%、啤酒酵母菌:乳酸菌=2:1(V/V)的条件下发酵96 h,研究发酵豆粕前后的得失率以及营养指标的变化。[结果]复合菌株的最佳接种时间分别为20和24 h。按照菌株的最佳接种时间,在起始温度30℃、接种量10%、含水量38%、啤酒酵母菌∶德式乳酸杆菌=2∶1(V/V)的条件下发酵96 h,发酵后干基重量减少8.1%,氨基酸总量提高13.0%,粗蛋白含量提高12.27%。[结论]发酵豆粕中的不良影响因子大大降低,从而提高了动物适口性,有利于动物的消化与利用。     

转基因大豆MON89788转化体特异性定性PCR检测（摘要）（英文）

[目的]建立MON89788大豆转化体特异性定性PCR检测方法。[方法]利用TAIL-PCR技术分离MON89788大豆的3′端旁侧序列,据此序列设计3条特异性引物用于旁侧序列的扩增。经过3轮PCR扩增,获得特异性扩增产物,将此产物回收后克隆到pMD-18T载体上测序,所得序列用Vector NTI分析,并提交NCBI进行序列比对。并对该方法的特异性和灵敏度进行测试。[结果]获得了1 142 bp的3′端旁侧序列。经Blast检索比对,该序列包括2部分,1 ～618 bp为载体序列（E9终止子部分序列和LB序列）,619 ～1 142 bp为大豆基因组序列;依据该序列建立的PCR检测方法能特异性地从MON89788大豆中扩增出170 bp的产物,检测灵敏度达到0.05%,约为40个起始模板拷贝。[结论]该研究建立的方法特异性强、灵敏度高,可适用于MON89788大豆检测。     

热处理条件参数对豆粕中脲酶活性影响的研究

在不同的时间、温度条件下对普通豆粕和提取异黄酮后的豆粕进行干热处理,测定其脲酶活性变化趋势,结果表明,提取异黄酮后的豆粕脲酶活性更易失活。     

发酵豆粕与发酵菜籽粕对断奶仔猪生产性能的影响

试验采用单因素随机区组设计,将90头体重相近的28日龄断奶仔猪分为2组（分别添加发酵豆粕和发酵菜籽粕）,每组3个重复,每个重复15头。试验分两个阶段,每个阶段12d,预饲期6d。发酵菜籽粕组在两个阶段分别以50％和100％的比例替代发酵豆粕。试验结果表明,第1阶段断奶仔猪日增重有提高趋势,饲料增重比和腹泻率有降低趋势,但差异不显著（P＞0．05）;第Ⅱ阶段断奶仔猪日增重、日采食量和饲料增重比分别提高了4．05％、3．14％和0．54％,但差异均不显著（P＞0．05）。由此可见,发酵菜籽粕可以部分或完全取代发酵豆粕用于断奶仔猪饲粮中。     

转基因豆粕对生长猪免疫机能、小肠消化酶活性和血清生化指标的影响

本试验旨在研究转基因豆粕(MON89788)对生长猪的饲用效果,主要检测对生长猪的免疫机能、肠道消化酶活性、血清生化指标和体质量增长的影响.20头杜×长×大三元杂交生长猪随机分为2组,每组10头.分别饲喂非转基因豆粕和转基因豆粕(MON89788)饲粮,试验期35d.结果表明,杜×长×大三元杂交生长猪短期(35 d)饲用转基因豆粕(MON89788),血清猪瘟抗体水平、免疫器官指数、小肠内容物胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性及猪的平均日增重均无显著变化(P＞0.05);猪血清碱性磷酸酶活性和肌酐含量转基因豆粕组显著高于非转基因豆粕组(P＜0.05),血清谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性、葡萄糖、甘油三酯、总胆固醇、总蛋白、白蛋白、球蛋白、尿素氮含量两组间均无显著差异(P＞0.05).可见,杜×长×大三元杂交生长猪短期(35 d)饲用转基因豆粕(MON89788),能显著提高血清碱性磷酸酶活性和肌酐含量,对其他免疫机能、肠道酶活性、血清生化指标和体质量增长均无显著影响.