抗生素对新生大鼠肠道免疫发育影响及双歧杆菌干预的研究

目的 研究新生大鼠口服抗生素对肠道免疫发育的影响及双歧杆菌干预的效果.方法 选用50只7日龄新生SD大鼠,每组10只,随机分为5组:对照组(A)、抗生素组(B)、益生菌组(C)、益生菌干预组(D)和生理盐水组(E).A组为空白对照,B组给予头孢克洛灌胃,C组给予双歧杆菌灌胃,D组先给头孢克洛灌胃,2h后再灌长双歧杆菌,E组每天灌以等量的生理盐水,持续2周后处死大鼠,取少许新鲜盲肠内容物粪便涂片,免疫组化方法检测末端回肠肠组织中CD4、CD8的表达和组织学观察.结果 粪便涂片结果显示:B组与其余四组相比G+b占肠道总细菌数比率明显下降,G-b及G+c占总细菌数比率明显升高(P＜0.01).组织形态学观察:C组与E组肠黏膜绒毛和腺体发育良好,上皮结构完整,排列整齐,而A组腺体发育少,绒毛高度小;B组肠黏膜绒毛和腺体萎缩,黏膜水肿,部分上皮细胞变性、坏死、脱落;D组肠黏膜绒毛和腺体排列整齐绒毛显示清楚,少部分黏膜上皮细胞脱落、坏死.组肠组织中CD4、CD8的表达:B组CD4、CD8表达程度受到抑制,灰度值增大(P＜0.05);C组与E组相比CD4、CD8表达增加,灰度值比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 肠道菌群的正常定植,刺激肠道免疫系统的发育.新生大鼠口服抗生素后肠黏膜结构被破坏以及干扰肠道菌群的定植,影响肠道免疫系统的发育.长双歧杆菌的能预防抗生素引起的菌群紊乱,维持肠道黏膜的完整性,保护肠道免疫系统的正常发育.     

红茶对新生幼鼠肠道菌群形成的影响

探讨红茶对新生幼鼠肠道菌群形成的影响,为从微生态角度研究红茶在人体肠道菌群形成过程中的作用机制奠定基础。

利用宏基因组测序技术检测4周龄新生幼鼠（4weeks组,n = 30）、12周龄正常对照组小鼠（control组,n = 15）和12周龄喂饲红茶水实验组小鼠（teadrink组,n = 15）的肠道菌群分布,分析3组样本的菌群差异情况,探求红茶对新生幼鼠肠道菌群形成的影响。

与control组相比,teadrink组小鼠肠道拟杆菌门（t = −7.711,P＜0.001）、拟杆菌科（t = −3.411,P = 0.009）、长尾嗤菌体科（t = −2.515,P = 0.036）、拟杆菌属（t = −2.693,P = 0.027）、邓肯菌属（t = −2.434,P = 0.041）、居海事城球杆菌属（t = −3.327,P = 0.029）、迪博邓肯菌（t = −2.679,P = 0.028）、普通居海事城球杆菌（t = −3.401,P = 0.027）和Duncaniella_sp._C9（t = −3.104,P = 0.035）相对丰度显著增加,厚壁菌门（t = 8.952,P＜0.001）、乳杆菌科（t = 13.102,P＜0.001）、消化链球菌科（t = 3.665,P = 0.021）、爱格菌科（t = 4.481,P = 0.002）、理研菌科（t = 3.626,P = 0.022）、乳杆菌属（t = 5.542,P = 0.004）、黏液乳杆菌属（t = 6.334,P = 0.002）、龙包茨菌属（t = 3.785,P = 0.005）、阿德勒菌属（t = 4.504,P = 0.002）、约氏乳杆菌（t = 4.282,P = 0.011）和罗伊氏粘液乳杆菌（t = 6.156,P = 0.003）相对丰度显著减少。与4weeks组相比,teadrink组小鼠肠道菌群分布差异大于control组。

红茶对新生幼鼠肠道菌群的形成能够产生影响,不同丰度的菌群可能通过调节碳水化合物代谢等途径来达到改善肠道菌群结构、增强肠道稳态的目的,具体代谢机制有待深入研究。

     

内毒素血症对新生鼠肠道菌群的影响

利用高通量测序技术分析内毒素血症新生鼠肠道菌群的变化, 探究肠道菌群与内毒素血症的关系, 为临床诊治提供思路。

复制新生大鼠内毒素损伤模型, 注射LPS后第24小时、第3天、第7天分别处死新生大鼠, 留取粪便并将对照组(C1组6只、C3组5只、C7组7只)和LPS组(L1组5只、L3组5只、L7组5只)按处死天数各分为3组。高通量测序分析各组间菌群多样性及相对丰度差异。

(1) Alpha多样性分析提示对照组和LPS组菌群多样性及丰度有显著差异, C3组较L3组Shannon指数均值小(t=-3.386 8, P=0.009 5), Simpson指数均值大(t=3.102 4, P=0.014 6);C7组较L7组Shannon指数均值大(t=2.459 4, P=0.033 7), Simpson指数均值小(t=-2.475 6, P=0.032 8)。(2)物种组成分析表明LPS组的菌群结构发生改变, 在门水平LPS组较对照组变形菌门相对丰度高, 厚壁菌门相对丰度低; 在属水平上LPS组较对照组埃希菌-志贺菌属相对丰度高, 乳杆菌属相对丰度低; 且随着天数的递增LPS组埃希菌-志贺菌属呈递增趋势, 红球菌属呈递减趋势。

内毒素血症可以改变新生鼠肠道菌群的组成, 并与肠道菌群失调有一定的关系。

     

鹿血对小鼠肠道菌群及免疫功能的影响

本实验以肠道菌群检测与免疫不腹腔Ｍψ吞噬功能测定,溶血空斑试验,淋巴细胞转化试验,ＮＫ细胞活性测定等方法,初步研究了中药鹿血对抗生素造成的菌群失调性腹泻小鼠肠道菌菌及免疫功能的影响。     

模拟失重对大鼠肠道菌群影响的研究

目的：研究模拟失重条件下大鼠肠道菌群变化情况。方法：选择性培养基分别对肠球菌、肠杆菌、类杆菌、乳杆菌以及双歧杆菌进行定量测定,扫描电镜观察大鼠盲肠上皮细胞的组织变化。结果：过路菌群中肠杆菌和肠球菌数量增加显著;原籍菌群中双歧杆菌减少十分明显,乳杆菌的数量也有不同程度的减少,而类杆菌的数量有增加的趋势。SD大鼠盲肠出现了肿胀细胞,上皮细胞颈毛排列紊乱、稀疏。结论：模拟失重条件下大鼠肠道微生态出现平衡失调。     

肠道菌群与免疫的相关性研究

由大量微生物构成的复杂微生物群落栖息在人体的肠道内,这些微生物统称作肠道菌群。肠道菌群在人体的消化吸收、免疫、生物拮抗、抗肿瘤等各项生命活动中发挥着重要的作用。近年来的许多研究提示,肠道内复杂的微生物群落和人体的免疫系统间存在着极为密切的关系。免疫系统发挥正常的功能及建立免疫的稳态与肠道菌群的作用密不可分。研究表明肠道菌群能阻止致病微生物入侵从而影响肠道免疫系统,同时还能影响全身免疫系统,在人体的自身免疫性疾病中有较为重要的作用。     

阿泰宁对抗生素诱导的大鼠肠道菌群失调和免疫功能的影响

目的探讨阿泰宁对抗生素诱导的大鼠肠道菌群失调的恢复作用以及免疫功能的影响。方法通过给大鼠灌服抗生素诺氟沙星胶曩造成肠道菌群失调模型,然后给予阿泰宁治疗,随后进行肠道菌群分析、迟发型变态反应试验、NK细胞活性测定和T淋巴细胞转化率测定等。结果抗生素组肠道菌群失调,NK细胞活性较正常组显著降低（P〈0．01）,经阿泰宁治疗后,肠道菌群恢复平衡,在迟发型变态反应试验中,阿泰宁组足跖增厚显著高于正常组和抗生素组（P〈0．05）,T淋巴细胞转化率较正常组和模型组显著升高（P〈0．01）。结论阿泰宁能够有效恢复抗生素引起的肠道菌群失调,并能有效提高免疫。     

枇杷核提取物对小鼠免疫功能及肠道菌群影响的研究

以肠道菌群检测与免疫学腹腔Mφ吞噬功能测定、溶血空斑试验、淋巴细胞转化试验和NK细胞活性测定等方法,初步探讨了中药枇杷核提取物对抗生素造成的菌群失调性腹泻小鼠肠道菌群及免疫功能的影响。结果表明枇杷核提取物对小鼠免疫功能及肠道正常菌群（双歧杆菌、乳酸菌、肠球菌、肠杆菌和类杆菌）具有双重调节作用。     

肠道菌群与肠黏膜免疫

肠道不仅是吸收、消化和营养物质交换的重要场所 ,也是人体最大的免疫器官。人的肠黏膜面积巨大 ,约 2倍于皮肤的表面 ,每时每刻黏膜都要接触大量抗原 ,担负着重要的免疫功能。越来越多的证据表明肠黏膜免疫功能与寄居在肠道中为数众多的肠道菌群 (intestinalflora)有密切关系。本文就该领域的研究作一综述。1　肠道菌群的变迁与肠黏膜屏障人出生时肠道是无菌的 ,肠道菌群定植开始于出生后。菌群的发展和肠黏膜屏障的建立是一个渐进而互动的过程。母亲的肠菌群是新生儿肠道定植细菌的重要来源。定植也取决于环境因素。最初 ,任何厌氧菌都可…     

肠道菌群对新生儿神经发育的影响

新生儿肠道菌群的定植和建立是一个复杂的动态演变过程,且易受分娩方式、喂养方式、胎龄、抗生素暴露等多种因素的影响。肠道菌群不仅在新生儿生理发育、免疫系统成熟、抵抗病原体入侵、维护肠道屏障等方面发挥重要作用,还影响神经回路的建立、髓鞘的形成和血脑屏障的形成。早期肠道菌群失调可导致新生儿坏死性小肠结肠炎、生长发育迟缓和智力发育落后等。近年来肠道菌群通过肠-脑轴影响新生儿神经发育受到广泛关注,其主要与代谢、免疫、迷走神经和神经内分泌等途径相关。本文主要就新生儿肠道菌群特征及其影响因素和肠道菌群对神经发育的影响作一综述。     

双歧杆菌对新生大鼠坏死性小肠结肠炎肠损伤及肠道菌群影响

目的建立新生SD大鼠坏死性小肠结肠炎（NEC）模型,探讨添加双歧杆菌对新生大鼠NEC模型肠损伤的保护作用及肠道菌群的影响,为应用双歧杆菌防治NEC提供依据：方法SD新生大鼠出生48h开始给予鼠配方奶人工喂养,100％氮气缺氧90s,4℃冷刺激10min,每天2次,连续3d,建立新生SD大鼠NEC模型。按析因设计,32只新生SD大鼠随机分成4组,每组动物各8只。A组为NEC模型组并在出生48h起每日给予长双歧杆菌灌胃（1×10^8CFU／d）;B组为NEC模型组,C组为对照组,都未添加双歧杆菌;D组为对照组并给予长双歧杆菌灌胃（1×10^8CFU／d）。在最后一次缺氧、冷刺激后24h空腹断头处死大鼠,留取回盲部近端肠管组织进行肠组织损伤评分,组织学评分≥2确定为NEC;实验前后留取各组新生鼠粪便,按照张秀荣方法进行肠道菌群检测。应用Kruskal-Wallis H检验等方法进行统计学分析,α=0．05为显著性检验标准。结果开始造模后,A、B组新生SD大鼠相继出现腹泻、腹胀、萎靡、活动减少,A组程度较轻。A、B、C和D组肠组织损伤评分（^-x±s）分别为1．88±0.84、3．13±0．84、0．63±0．52、0．50±0.54,各组间肠组织损伤评分差异有显著性,与B组相比,A组肠组织损伤评分明显降低,但仍高于C、D两组,差异均有显著性。各组实验前肠道细菌总数,杆菌、球菌数,G^＋杆菌、G^＋球菌数差异均无显著性,肠道菌群中杆球菌比值在正常范围中。实验结束时,各组间新生鼠肠道细菌总数,杆菌、球菌数,杆球菌比值,G^＋杆菌、G^＋球菌数及其占肠道总菌群数的比率差异均有显著性;除B组杆菌数外,与实验前相比,各组新生大鼠实验结束后肠道细菌总数、球菌数、杆菌数、G^＋杆菌数、G^＋球菌数均有显著增加,差异均有显著性;A、B组肠道杆球菌比值和G^＋杆菌数占肠道总菌群数比     

新生鼠坏死性小肠结肠炎肠道菌群变化及意义

目的探讨新生鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)时肠道菌群变化,旨在阐明肠道菌群在NEC发病中的作用,为探讨新生儿NEC的发病机制及寻求有效的防治措施提供理论依据。方法SD新生大鼠出生48 h开始给予鼠乳代用品人工喂养,100%氮气缺氧90 s,4℃冷刺激10 min,每天2次,连续3 d,建立新生SD大鼠NEC模型。40只新生SD大鼠随机分成NEC模型组(A组)和正常对照组(B组)。每组动物各20只。在最后一次缺氧、冷刺激后24 h空腹断头处死大鼠,留取回盲部近端肠管组织进行肠组织损伤评分,组织学评分≥2确定为NEC;实验前后留取两组新生鼠粪便,按照张秀荣方法进行肠道菌群检测。实验前后比较采用配对t检验,组间比较采用方差分析,α=0.05为显著性检验标准。结果模型组新生鼠相继出现腹泻、腹胀、萎靡、活动减少,生长减慢,对照组新生大鼠进食及排便均正常,无腹胀及胃潴留,活动度良好,皮下脂肪丰满。模型组新生大鼠NEC的发生率为100%(20/20),对照组无1例发生NEC。实验组和对照组肠损伤病理评分(x±s)分别为:3.25±0.85、0.45±0.51,t=12.622,P<0.01。模型组和对照组新生鼠实验前肠道细菌总数,杆菌、球菌总数,G 杆菌、G 球菌,G-杆菌、G-球菌数差异均无显著性,肠道菌群中杆菌和球菌的比例都在正常范围中。实验结束时,正常对照组新生大鼠肠道菌群总数明显增多,其中以G 杆菌增加为主;G-杆菌属及G 球菌属菌数占肠道菌群的比率在实验前后差异无显著性;模型组新生大鼠肠道群总数亦明显增多,而且明显高于正常对照组。实验结束时肠道菌群数量,其中主要是G 球菌显著增加,而G 杆菌却较对照组明显减少,与实验前相比,明显下降,差异有显著性;模型组实验结束时肠道菌群中杆菌和球菌比值减少、倒置。结论NEC发病前正常肠道菌群已发生质和量的变化,肠道菌群紊乱在NEC发病机制中起关键作用;及时纠正肠道菌群紊乱可能会降低新生大鼠发生NEC危险性。     

口服益生菌对妊娠期糖尿病小鼠肠道菌群及调节性免疫细胞的影响

目的探讨口服益生菌对妊娠期糖尿病小鼠肠道菌群及调节性免疫细胞的影响。方法 C57BL/6小鼠30只,分为对照妊娠组(正常妊娠小鼠)、妊娠期糖尿病组(妊娠期糖尿病小鼠)和益生菌组(妊娠期糖尿病小鼠每日在食物中添加益生菌),每组10只。妊娠期糖尿病组和益生菌组20只小鼠构建妊娠期糖尿病小鼠模型;ATB半自动微生物检测系统检测粪便中双歧杆菌、大肠埃希菌和乳杆菌的含量;收集小鼠的心脏血,流式细胞术检测CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Treg细胞)、CD4~+CXCR5~+Foxp3~+滤泡调节性T细胞(Tfr细胞)和CD19~+IL-10~+调节性B细胞(Breg细胞)在淋巴细胞中的比例;ELISA检测血清中IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素10(IL-10)和转化生长因子-β(TGF-β)的浓度。结果妊娠期糖尿病组小鼠粪便中双歧杆菌、大肠埃希菌和乳杆菌的含量分别为(5.600±0.922 3)、(10.050±0.769 3)和(4.750±0.621 2)LgCFU(每克粪便湿重中菌落形成单位数的对数值),益生菌组分别为(12.770±1.764 0)、(6.667±0.691 2)和(7.367±0.373 9)LgCFU,两组之间差异有统计学意义(t=3.600,P=0.004 9;t=3.271,P=0.008 4;t=3.609,P=0.004 8);妊娠期糖尿病组淋巴细胞中Treg细胞、Tfr细胞和Breg细胞比例分别为(0.032 0±0.005 35)%、(0.338 7±0.045 51)%和(0.058 8±0.015 81)%,益生菌组为(0.185 0±0.064 33)%、(0.600 3±0.083 26)%和(0.118 2±0.012 90)%,两组之间差异有统计学意义(t=2.370,P=0.039 3;t=2.758,P=0.020 2;t=2.907,P=0.015 6);ELISA结果显示妊娠期糖尿病组小鼠血清中IL-6、TNF-α、IL-10和TGF-β浓度分别为(45.33±5.649)、(470.00±50.130)、(3.43±0.541)和(0.33±0.055)ng/mL,益生菌组为(22.33±4.128)、(223.30±41.280)、(9.05±1.953)和(1.35±0.366)ng/mL,两组之间差异有统计学意义(t=3.287,P=0.008 2;t=3.798,P=0.003 5;t=2.771,P=0.019 8;t=2.766,P=0.019 9)。结论调控肠道菌群可促进妊娠期糖尿病小鼠Treg细胞、Tfr细胞和Breg细胞比例增加,减少炎症反应和维持正常妊娠,研究为妊娠期糖尿病的治疗提供了一个新的方法。     

异麦芽低聚糖对D-半乳糖致衰老大鼠肠道菌群、血清IgG和肠黏膜sIgA的影响

目的探讨异麦芽低聚糖对D-半乳糖致衰老大鼠肠黏膜功能的影响。方法Wistar大鼠随机分为3组：（1）青年对照组,（2）衰老对照组,（3）衰老观察组（衰老＋异麦芽低聚糖）。采用D-半乳糖造成衰老模型后,应用异麦芽低聚糖灌胃,检测各组肠道菌群、血清IgG和肠黏膜sIgA。结果D-半乳糖致衰老大鼠肠道菌群失调;灌胃异麦芽低聚糖后,衰老大鼠肠道双歧杆菌增加（P〈0．05）,肠杆菌和肠球菌数量减少（P〈0．05）;血清IgG、肠黏膜sIgA含量增加（P〈0．05）。结论异麦芽低聚糖可改善衰老机体肠黏膜功能。     

阿如拉7味散对肠道菌群失调小鼠免疫功能及肠道菌群多样性的影响

目的 研究阿如拉7味散对抗生素诱导肠道菌群失调小鼠的免疫功能和肠道菌群多样性的影响。 方法 选取50只清洁级昆明小鼠,分为正常对照组、自然恢复组、阳性对照组、阿如拉7味散低剂量组(0.5 g/mL)和阿如拉7味散高剂量组(1.0 g/mL)。将所有小鼠用头孢曲松钠和盐酸林可霉素混合药液灌胃制备肠道菌群失调模型,第8天起各组小鼠相应药物连续治疗7 d,实验结束时进行样品采集。采集血清和回肠组织,采用ELISA法检测血清中的IgG、IFNγ和TNFα含量以及回肠组织中的sIgA含量;采集盲肠内容物,采用高通量测序技术检测肠道菌群多样性;采集胸腺和脾脏,测定免疫器官指数。 结果 阿如拉7味散低、高剂量可显著提高抗生素诱导肠道菌群失调小鼠的脾脏指数(P0.05)和血清IgG含量(P>0.05)无显著影响。各用药组与自然恢复组相比,尤其阿如拉7味散低剂量组,小鼠肠道菌群丰富度和多样性明显升高。 结论 阿如拉7味散对抗生素诱导肠道菌群失调小鼠具有提高免疫器官指数、增强肠道免疫功能和改善肠道菌群的作用。     

肠道菌群与儿童1型糖尿病关系的研究进展

1型糖尿病（type 1 diabetes mellitus,T1DM）是胰岛β细胞被破坏而导致胰岛素绝对缺乏所致。T1DM绝大多数属于自身免疫性疾病,由遗传及环境因素共同参与其发病过程。儿童糖尿病95%以上为T1DM。近年来儿童T1DM发病率呈现逐年上升趋势。研究表明肠道菌群与儿童T1DM的发病密切相关,T1DM儿童肠道菌群分布失调,肠道菌群可能通过影响肠道免疫系统和改变肠壁通透性来参与T1DM的发病过程。动物实验的研究中,改变肠道菌群分布和应用益生菌可以预防和延缓T1DM的发病。干预肠道菌群是否会预防、延缓儿童T1DM的发生尚需要进一步的研究,希望干预肠道菌群能为预防和治疗儿童T1DM提供新的方向。