在大鼠发育过程中β1,4半乳糖基转移酶的组织分布及其变化的研究

用HPLC纯化了荧光标记的底物（Gnβ1-2Ma1-6（Gnβ1-2Mα1-3）Mβ1-4Goβ1-4Gn-PA）用β-1,4-半乳糖基转移酶的荧光标记底物的HPLC测定方法,测定了在发育过程中大鼠肝,肾,脑中的酶活性的变化,结果表明,（1）在正常成年大鼠中,各组织酶活性具有组织特异性,（2）不同的发育期,其酶活性不同。胎鼠（孕20d,以下同）时最高,以后就渐渐下降,各组织酶活力变化幅度是不一致的,这些变化的生理意义有待子进一步研究．     

β-1,4-半乳糖基转移酶家族的研究进展

β-1,4-半乳糖基转移酶是近年来糖基转移酶中研究得最多的一种。随着新成员的不断发现和克隆,进一步探求其重要生物学功能已成为研究热点。目前研究结果表明该酶与受精过程,细胞黏附和转移,癌细胞转移,表皮细胞增殖及细胞信号传导等重要生物学功能密切相关。     

β1—4半乳糖基转移酶检测方法的建立及动力学研究

本文分离纯化了人ＩｇＧ的糖肽，去掉末端大酸和半乳糖，，经解和荧光标记，用ＨＰＬＣ纯化了荧光标记的底物［Ｇｎβ１－２ｍａ１－６（Ｇｎβ１－２Ｍｄα－３）Ｍβ１－４ｎβ１－４Ｇｎ－Ｐａ］。     

β-1,4半乳糖基转移酶-I在大鼠坐骨神经损伤后的表达变化

目的分析β-1,4半乳糖基转移酶-I(β-1,4-galactosyltransferase I,β-1,4-GalT-I)mRNA在正常和损伤坐骨神经髓鞘上的定位及其表达变化.方法采用RT-PCR方法,分析β-1,4-GalT-I在小鼠坐骨神经中的表达水平.将RT-PCR扩增的β-1,4-GalT-I片段,克隆到pGEM-T载体中.采用体外转录的方法合成地高辛标记的正、反义β-1,4-GalT-I RNA探针.通过原位杂交及图像分析的方法,分析β-1,4-GalT-I mRNA在正常和损伤大鼠坐骨神经的定位及其表达变化.结果检测到β-1,4-GalT-I在大鼠坐骨神经的髓鞘中有表达,并在坐骨神经损伤后1～2d内表达最高,随后表达下降.结论提示β-1,4-GalT-I可能在周围神经最主要的胶质细胞-施万细胞中表达,并在周围神经损伤后发生表达变化,这样为进一步分析β-1,4-GalT-I在周围神经再生中的调控机制奠定基础.     

β1,4半乳糖基转移酶的生物学功能研究进展

β1,4半乳糖基转移酶(β4Gal T)是近年来研究最多的糖基转移酶之一。其家族共有7个成员,为β4Gal T1~β4Gal T7。它们一般定位在高尔基体上,将半乳糖苷基团从UDP-半乳糖苷转移到N-乙酰葡糖胺或其他糖基受体上。不同家族成员的结构和组织分布不同,其功能也不一样。目前的研究表明,β1,4半乳糖基转移酶在胚胎发育、神经系统发育、免疫及炎症反应、肿瘤的发生发展等各种生命活动中都发挥着重要作用。     

癌基因ras对β-1,4-半乳糖基转移酶活性的调节

 研究癌基因ras对细胞表面的 β 1,4 半乳糖基转移酶活性的调节 构建Ha ras表达载体并转染NIH 3T3细胞株 ,测定细胞表面和细胞内 β 1,4 半乳糖基转移酶活性和其mRNA的水平 结果发现ras使NIH 3T3细胞表面的 β 1,4 半乳糖基转移酶活性降低 ,而高尔基体内的活性不变 此外用Northern印迹检测后发现 ,ras不能改变细胞内 β 1,4 半乳糖基转移酶的mRNA水平 这说明癌基因ras能够调节细胞表面β 1,4 半乳糖基转移酶活性 ,但不能改变其转录水平     

细胞表面β1,4-半乳糖基转移酶1功能研究进展

β1,4．半乳糖基转移酶1（β1,4．galactosyltransferase 1,β4GalT1）是人们研究最广泛、最深入的糖基转移酶之一。β4GalTl的基因编码了长形和短形两种蛋白,长形的β4GalTl比短形的β4GalTl在胞浆区多了13个氨基酸的尾巴,正是由于这种差异造成了β4GalTl定位以及功能上的不同,短形的β4GalTl和部分长形的β4GalTl分布在高尔基体上,发挥糖基转移酶的基本功能,还有一部分长形的β4GalTl分布在细胞表面,发挥粘附分子样作用,在精卵结合、神经突触生长、神经元迁移、肿瘤细胞迁移等过程中有非常重要的意义。文章主要从β4GalTl的基本结构、β4GalTl与多种配体之间的相互作用介导了细胞不同的生物学功能、β4GalTl与细胞骨架蛋白的关系等几个方面综述细胞膜表面β4GalTl的研究进展。     

转人β-1,4-半乳糖苷转移酶基因烟草植株的再生

转人β－１,４－半乳糖苷转移酶基因烟草植株的再生侯学文张毅郭勇（华南理工大学生物工程系广州５１０６４１）１植物材料：烟草（ＮｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍＬ．ｋ３２６）２材料类别：烟草幼嫩叶片。３培养条件与结果：取温室栽培的烟草幼叶,先用７５％乙醇处...     

β-1，4半乳糖基转移酶-Ⅰ在大鼠坐骨神经损伤后的表达变化

目的分析β-1,4半乳糖基转移酶-Ⅰ(β-1,4-galactosyltransferaseⅠ,β-1,4-GalT-Ⅰ)mRNA在正常和损伤坐骨神经髓鞘上的定位及其表达变化。方法采用RT-PCR方法,分析β-1,4-GalT-Ⅰ在小鼠坐骨神经中的表达水平。将RT-PCR扩增的β-1,4-GalT_I片段,克隆到pGEM-T载体中。采用体外转录的方法合成地高辛标记的正、反义β-1,4-GalT-ⅠRNA探针。通过原位杂交及图像分析的方法,分析β-1,4-GalT-ⅠmRNA在正常和损伤大鼠坐骨神经的定位及其表达变化。结果检测到β-1,4-GalT-Ⅰ在大鼠坐骨神经的髓鞘中有表达,并在坐骨神经损伤后1～2d内表达最高,随后表达下降。结论提示β-1,4-GalT-Ⅰ可能在周围神经最主要的胶质细胞一施万细胞中表达,并在周围神经损伤后发生表达变化,这样为进一步分析β-1,4-GalT-Ⅰ在周围神经再生中的调控机制奠定基础。     

米曲霉GX0011β-糖基转移酶的化学修饰及活性中心研究

用化学修饰法及其修饰动力学对米曲霉GX0011β-果糖基转移酶的活性中心结构进行了研究。结果表明：NBS、PMSF、EDC能显著抑制酶的活性,底物对这些抑制有明显的保护作用,且残留酶活与修饰剂的浓度相关,抑制均符合拟一级动力学规律,进一步动力学分析,初步认定该酶活性中心包括至少一个丝氨酸（或苏氨酸）、一个色氨酸和一个天冬氨酸（或谷氨酸）残基。pCMB、TNBS能显著抑制酶的活性,但底物对抑制无明显保护作用,推断半胱氨酸和赖氨酸残基可能与维系酶活性中心构象有关,但不是酶活性中心基团。DEPC、AA和NAI对酶的活性抑制作用不明显,排除了组氨酸、精氨酸和酪氨酸残基是该酶活性中心必需基团的可能。     

细胞诱导分化剂对HL60细胞β-1,4-半乳糖基转移酶活性的影响

用荧光标记的受体底物（Ｇｎβ１－２Ｍα１－６（Ｇｎβ１－２Ｍα１－３）Ｍβ１－４Ｇｎβ１－４（Ｆｕｃα１－６）Ｇｎ－ＰＡ）,结合高效液相层析（ＨＰＬＣ）建立了细胞β－１,４－半乳糖基转移酶的活性检测方法．研究了ＨＬ６０细胞在体外低血清培养后不同的时间其酶活性的变化,发现１２至２４ｈ酶活性达到一个高峰,为５０．１４ｐｍｏｌ／ｍｉｎ（１０６ｃｅｌ）,此时细胞处在分裂间期,其它各测定时间变化不大．用ＰＭＡ,ＲＡ等细胞诱导分化剂处理ＨＬ６０细胞株时,发现其活性发生了较明显的变化,ＰＭＡ诱导的细胞其酶活性在２４ｈ变化最大,升高到对照的１．３２倍;而ＲＡ处理的细胞其酶活性在７２ｈ变化最大,升高到对照的２．１５倍．     

大鼠发育过程中下丘脑神经元钾离子通道温度效应变化的研究

为了探讨出生后钾离子通道在下丘脑神经元热敏感分化过程中的作用,采用膜片钳技术研究出生一个月内SD大鼠急性分离神经元的温度效应,结果表明IK电流密度在出生后一个月内变化不大(P>0.05),而IA电流密度则呈现为升高趋势(P<0.05).同时升高温度,不同出生日期的钾通道NPo都有不同程度的升高,但相较P1d的神经元来说,温度对P18d的电压依赖性影响更大一些.同时温度对IK和IA的影响是不一样的,IA的Q10>2,所有这些显示IA通道在神经元温度敏感性的发育分化过程中起着重要的作用.     

新生大鼠下丘脑神经元发育过程中膜特性变化

大鼠出生后下丘脑神经元温度敏感性逐步升高,采用电流钳技术发现,膜被动特性在出生后18 d内变化显著,同时峰电位升高,动作电位间期延长,前电位及后电位均有明显的变化,大多数神经元表现为单次放电.这些结果表明发育过程中离子通道的密度和活动特性发生了改变,同时温度敏感性与突触特性存在着一定的关系.     

肌细胞发育过程中间隙连接的变化

The appearance and changes of gap junctions during the development of striated muscle cells of Cynops orientalis have been studied by paraffin section, ultrathin-section and freeze-etching techniques. Gap junctions first appear between the somitic mesoderm cells in the late gastrula. A marked increase of the number of gap junctions occurs at the end of gastrulation. The number of gap junctions remains at a high level from neural plate stage up to nasal pit stage. After the stage of muscle contraction, the number of gap junctions decreases. Gap junctions do not disappear until muscle cells have attained their final differentiation and neuromuscular junctions have fully developed. The changes of size of gap junctions parallel with the changes in number. In addition, the number and size of gap junctions are both at the high level before cell fusion. Therefore, it is possible to conclude that cell communication is closely correlated with the development of striated muscle cells. The role of communications in cell determination and differentiation and in cell fusion of muscle cells are discussed.     

诱导的HL60细胞表面β1—4半乳糖基转移酶的研究

本文用荧光标记的受体底物〔Ｇｎβ１－２Ｍα１－６（Ｇｎβ１－２Ｍα１－３）Ｍβ１－４Ｇｎβ１－４（Ｆｕｃα１－６）Ｇｎ－ＰＡ〕,结合高效液相层析（ＨＰＬＣ）建立了细胞表面β１－４半乳糖基转移酶的活性检测方法。用这种方法研究ＨＬ６０细胞,发现不同的培养时间,其细胞表面的酶变化明显,在２４小时酶活性最高,此时细胞处在分裂间期。用佛波酯（ＰＭＡ）,视黄酸（ＲＡ）等细胞诱导分化剂处理ＨＬ６０细胞株时,发现其表面活性发生了明显的变化,ＰＭＡ诱导的细胞其表面酶活性在２４小时变化最大,升高到对照的１．３倍;而ＲＡ处理的细胞其表面酶活性在７２小时变化最大,升高到对照的１．７２倍。     

棉铃虫幼虫加单氧酶活性的组织分布

棉铃虫（Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｒｍｉｇｅｒａ）６龄幼虫不同组织的加单氧酶活性的测定结果显示,对－硝基苯甲醚Ｏ－脱甲基酶主要分由于外来物质的入口部位,以中肠和脂肪体的活性较高,在前肠、后肠和马氏管等组织中有相对较低的活性,而在体壁和精巢中未检测到Ｏ－ 甲基作用。体壁表现一定的艾氏剂环氧化作用,但其活性不及中肠的１０％,内源性制剂被证明并非体壁低加单氧酶活性的主要原因。不同组织生物量的差异及其动态     

水稻种子萌发过程中氰丙氨酸合酶的活性变化与分布

水稻（秀水11）种子在吸涨3d后氰丙氨酸合酶（CAS）活性才开始出现,其根、叶和胚乳中的CAS活性在萌发过程中均呈不断上升趋势,根中的CAS活性始终明显高于叶和胚乳,而萌发前期叶处CAS活性明显高于胚乳,但后期二者几乎相当。电泳结果显示其叶片、根和胚乳中均含有两种CAS同工酶,根和胚乳中CAS1（迁移率较小者）的活性明显高于CAS2(迁移率较大者）,而叶片中二者的活性相差不大。叶片细胞质中上述两种CAS同工酶都有,而线粒体中只有CAS1,叶绿体中两种CAS都没有。     

人类β-1,4-半乳糖苷转移酶Ⅲ基因的分离与克隆

以人、牛、鼠、鸡、蜗牛的β-1,4-半乳糖苷转移酶催化区的编码核苷酸序列为探针,在NCBI GenBank EST数据库中进行同源搜寻,获得若干有高度同源的EST.在拼接序列的两端设计引物,以从人胎盘cDNA文库中PCR扩增获得的片段为探针,在人胎盘cDNA分子库中步移获得一个长1,907bp的cDNA片段,包含一个长1,179bp的开放阅读框(ORF,open reading frame),编码393个氨基酸残基。该基因与已知的人类β1,4-GalTI的氨基酸同源性为43.8%,在蛋白质催化区的同源性更高达60.9%。表达谱分析发现该基因在人体16种组织中均有不同程度的表达,转录本大小约为2.4kb.通过该cDNA人/啮齿类杂种细胞株DNA Southern杂交将该基因定位在1号染色体。     

苹果果实发育过程中α—淀粉酶的活性、数量变化和亚细胞定位

淀粉降解代谢与种子萌发、叶片光合作用,块根贮藏及肉质果实的发育密切相关,α-淀粉酶是催化淀粉水解的重要酶之一。然而由于它在生活细胞中经常定位于叶绿体或质体之外,与淀粉基质在亚细胞水平上相互隔离,所以该酶在植物活体内的生理功能至今不完全清楚,研究表明,在苹果（Malus domestica Borkhcv.Starkrimson)果实发育过程中,α-淀粉酶活性由低到高,与淀粉含量大致呈现互为消长的变化。Western blotting实验证明,在果实发育过程中,α-淀粉酶的表观数量也是由少到多,与活性的变化一致,利用胶体金免疫电镜定位技术证明,果实发育过程中,α-淀粉酶的珍观数量也是由少到多,与活性的变化一致,利用胶体金免疫电镜定位技术证明,果实内α-淀粉酶主要定位于质体内,其他亚细胞区域内α-淀粉酶分布很少;尤其在果实发育中后期,围绕质体内淀粉粒有高密度的α-淀粉酶分布,说明该酶主要分布于细胞内功能区域,α-淀粉酶优先定位于质体内的亚细胞分布特点在果实整个生长发育期没有变化,随着果实发育的推进,质体内胶体金分布密度显增加,此结果与Western blotting实验相互印证,推测α-淀粉酶参与了果实细胞内质体中淀粉的水解过程。     

皖西白鹅胚胎中、后期肌组织发育变化的观察

分别于17、23、29胚龄各取6枚胚胎发育正常的种蛋,分离鹅胚的心脏、肌胃及大腿骨骼肌,制作石蜡切片,HE染色,显微观察、摄影.观察皖西白鹅胚胎中、后期肌肉组织发育的变化.结果表明,17d时的骨骼肌、平滑肌、心肌的发育程度均较低,没有形成正常的肌纤维形态,之后呈现随龄性增长.骨骼肌和平滑肌在17 d～23 d期间是以肌纤维数量的增加为主,即成肌细胞的分裂增殖,23 d～29 d 期间成肌细胞分化融合形成肌纤维;心脏成纤维细胞增殖速度较快,17 d心脏肌纤维已经排列紧密基本吻合成网状;17 d后主要是心肌纤维的伸长和成熟化的过程.说明胚胎期心肌组织的生长发育要早于骨骼肌与平滑肌.