糖皮质激素诱导细胞凋亡的研究进展

细胞凋亡从胚胎发育到生物体的整个生长过程中都是至关重要的,有助于组织的更新以及消除炎症细胞。糖皮质激素在不同组织细胞中表现出促凋亡和抗凋亡作用。虽然近几年其诱导凋亡研究进展得到长足的发展,但是详细机制过程至今仍旧不清楚。本文将重点介绍糖皮质激素促进细胞凋亡的机制,并指出了其在各个系统中分子生物学的主要研究进展。     

肺癌患者外周血细胞凋亡、增殖活性与化疗关系的初步研究

1997年 10月至 2 0 0 1年 6月 ,我们采用流式细胞术单参数分析方法 ,对 2 4例肺癌患者化疗前后外周血细胞的凋亡(Ａｐｏ)、Ｓ期细胞比率 (ＳＰＦ)和增殖指数 (ＰＩ)进行了对比研究 ,现将结果报告如下。对象和方法一、对象 :2 4例患者均经病理和 /或细胞学确诊为中晚期肺癌 ,其中非小细胞肺癌 (ＮＳＣＬＣ) 2 1例 (Ⅱ期 2例、Ⅲ期 4例、Ⅳ期 15例 ) ,小细胞肺癌 (ＳＣＬＣ) 3例 (均为广泛期 ) ;2 4例中男 17例 ,女 7例 ,年龄 3 6～ 72岁 ,中位年龄 5 2岁。主要化疗方案 :ＮＳＣＬＣ为ＭＶＰ、ＥＰ、ＮＰ等方案 ;ＳＣＬＣ为ＣＡＰ、ＥＰ等方案…     

糖皮质激素诱导大鼠原代培养杏仁核神经元的凋亡

目的探讨糖皮质激素(GC)对大鼠杏仁核神经元凋亡的影响。方法原代培养大鼠杏仁核神经元,首先采用免疫荧光技术对培养的原代神经元及其是否存在丰富的糖皮质激素受体分别进行了鉴定,并用流式细胞术检测不同浓度的人工合成糖皮质激素地塞米松(10~(-9)~10~(-6)mol·L~(-1))对杏仁核神经元细胞凋亡的影响。然后将实验分为4组:对照组(CON)、地塞米松(DEX)刺激组、地塞米松和米非司酮(受体抑制剂)共同刺激组(DEX+MIF)、米非司酮刺激组(MIF)。用TUNEL原位技术检测各组的凋亡情况,并用RTPCR技术检测各组Bax mRNA的表达变化。结果 (1)与CON组相比,不同浓度的DEX作用于神经元后,神经元凋亡率明显升高(P<0.05),且呈浓度依赖性;(2)TUNEL染色结果显示,DEX组细胞凋亡率明显高于CON组(P<0.05),而与DEX组相比,DEX+MIF组凋亡率明显降低(P<0.05),MIF组与CON组相比无明显差异(P>0.05);(3)与CON组相比,DEX组Bax mRNA的表达量明显升高(P<0.05),而与DEX组相比,DEX+MIF组的Bax mRNA的表达量明显降低(P<0.05),MIF组与CON组相比无明显差异(P>0.05)。结论糖皮质激素可以通过其受体诱导大鼠原代培养杏仁核神经元的凋亡。     

IL-23诱导人外周血单个核细胞对MUTZ-1细胞增殖、凋亡及相关基因表达的影响

目的 白介素-23(IL-23)诱导人外周血单个核细胞对骨髓增生异常综合征(MDS)细胞系MUTZ-1增殖、凋亡及相关基因表达的影响.方法 采用密度梯度离心法分离获得正常人外周血单个核细胞(PBMNC),细胞分4组:阴性对照组(未加IL-23),3个浓度IL-23组(2、10、50 ng/ml),体外诱导72 h,并与MUTZ-1共培养.MTT实验检测MUTZ-1细胞增殖.流式细胞仪检测MUTZ-1细胞凋亡和细胞周期变化.Real time-PCR和Western-blot检测MUTZ-1细胞Bax、Bcl-2、caspase-3、survivin mRNA和蛋白表达.结果 2、10、50 ng/ml IL-23诱导的PBMNC与MUTZ-1细胞共培养后,MUTZ-1细胞增殖速度、S期细胞比例明显降低,细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例明显增加,呈时间和浓度依赖性,与阴性对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);同时Bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达明显上调,Bcl-2、survivin mRNA和蛋白表达明显下调,呈时间和浓度依赖性,与阴性对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 IL-23诱导PBMNC能够明显抑制MUTZ-1细胞增殖,促进MUTZ-1细胞凋亡,其机制与上调Bax、caspase-3表达、下调Bcl-2、survivin表达有关.     

雄黄抑制宫颈癌细胞株增殖和诱导凋亡的体外研究

目的:体外研究中药雄黄主要成分As4S4对子宫颈癌细胞株Hela细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用。方法:以As4S4不同浓度(7.5、15、30、60mg/L),分12h,24h,36h,48h,60h处理Hela细胞,用光镜观察细胞变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率;用DNA梯状电泳(DNA ladder)检测凋亡的发生。结果:不同浓度(7.5、15、306、0 mg/L)的As4S4处理的Hela细胞,细胞增殖受到抑制,作用呈明显的时效和量效关系,差异有非常显著性(P<0.01);As4S4诱导Hela细胞的凋亡率为(8.13±1.13)%~(62.36±4.42)%,与对照组比较(2.84±1.88)%,差异有极显著性(P<0.01),并呈浓度依赖性;DNA ladder呈梯状条带。结论:雄黄体外对宫颈癌细胞株Hela细胞具有增殖抑制和促进凋亡作用。     

蛇床子素对肝癌Huh7细胞增殖、凋亡及放射敏感性的影响及机制研究

摘要：目的:探讨蛇床子素对人肝癌Huh7细胞增殖、凋亡及放射敏感性的影响,并初步探究其作用机制。方法:采用不同浓度(0,2.5,5,10,20,40μg·ml-1)的蛇床子素干预人肝癌Huh7细胞,噻唑蓝（MTT）法检测蛇床子素对肝癌Huh7细胞增殖的影响,并计算半数抑制浓度(IC50);10μg·ml-1蛇床子素联合不同照射剂量（0,2,4,6,8 Gy）的X射线处理Huh7细胞,MTT检测细胞增殖能力,筛选照射剂量;克隆形成实验检测Huh7细胞放射敏感性变化,分别采用10μg·ml-1蛇床子素、4 GyX射线照射及两者联合干预Huh7细胞,流式细胞术检测Huh7细胞凋亡率,Western Blot检测Huh7细胞中剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved caspase-3）和剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9（cleaved caspase-9）的表达水平。结果:蛇床子素对肝癌Huh7细胞增殖有明显抑制作用,IC50为20.14μg·ml-1;与单纯照射组相比,蛇床子素联合不同剂量X射线照射下均能够明显抑制细胞存活率,筛选出4 Gy剂量用于后续放射实验。与单纯照射组相比,蛇床子素联合照射组Huh7细胞的放射敏感性、Huh7细胞凋亡率、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达显著升高（P<0.05）。结论:蛇床子素能够抑制肝癌Huh7细胞增殖,促进细胞凋亡,并增强细胞对放射的敏感性,其作用机制可能与蛇床子素上调cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达有关。     

糖代谢正常者糖皮质激素受体基因多态性与糖皮质激素敏感性以及肥胖和血脂代谢的研究

本研究通过对糖代谢正常人群糖皮质激素受体基因多态性的分析,评估其与体内糖皮质激素敏感性的相关性,并进一步探讨其与肥胖、糖尿病、高脂血症等代谢紊乱的关系。     

姜黄素对HL-60细胞的增殖抑制与凋亡诱导的影响

目的研究姜黄素对人原髓细胞白血病HL-60细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用,探讨其诱导细胞凋亡的机理。方法应用MTT比色法、细胞荧光染色法和Western blotting检测姜黄素对HL-60细胞的增殖抑制、凋亡诱导以及对HL-60细胞表达Bcl-2、Caspase9和c-myc的影响。结果姜黄素对HL-60细胞的增殖抑制与剂量相关(P<0.05);经姜黄素作用后HL-60细胞的形态差异明显,表现凋亡的特征性变化,而且姜黄素作用后HL-60细胞的Bcl-2和原癌基因c-myc的表达量低于对照组(P<0.05),而Caspase9的表达量则明显高于对照组(P<0.05)。结论姜黄素可有效抑制体外培养的HL-60细胞增殖,其诱导HL-60细胞凋亡的途径可能通过线粒体介导。     

利多卡因调控微小RNA-195对骨肉瘤MG63细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响

目的 探讨利多卡因(lidocaine)对骨肉瘤MG63细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响及其可能的作用机制.方法 研究于2018年5―12月,体外培养骨肉瘤MG63细胞,不同浓度的利多卡因干预MG63细胞,采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测MG63细胞存活率及顺铂半抑制浓度(IC50值);流式细胞术检测细胞凋亡率;实时...     

虫草素体外抑制NB4细胞增殖与诱导细胞凋亡作用研究

目的观察虫草素体外对急性早幼粒细胞性白血病细胞（NB4细胞）的抑制增殖和诱导凋亡作用。方法将0.5,1.0,1.5,2.0 mg&#8226;mL 1虫草素在体外与NB4细胞共同培养,采用细胞计数、噻唑蓝（MTT）法检测不同浓度虫草素在24,48,72 h对NB4细胞增殖的抑制作用;用细胞瑞氏染色法、Hoechst33258荧光染色法、DNA亚二倍体检测法和线粒体膜蛋白检测法观察虫草素诱导NB4细胞凋亡的作用。结果与对照组比较,不同浓度虫草素均能显著抑制NB4细胞增殖,并呈剂量和时间依赖的量效关系;不同浓度虫草素作用24 h后均能显著促进NB4细胞凋亡。结论虫草素在体外能明显抑制NB4细胞增殖,并诱导细胞凋亡。     

Osthole induced apoptosis in human normal liver cells by regulating cell proliferation and endoplasmic reticulum stress

Osthole (Ost) is often used in treatment for cancer, inflammation and rheumatism in clinic. However, Ost‐induced liver injury has been reported. In this study, we aim to investigate the possible mechanism of Ost‐induced hepatotoxicity in human normal liver cells (L02). When cells were exposed to Ost, the cell viability was decreased and apoptosis rate increased, the intracellular markers of oxidative stress were changed. Simultaneously, Ost altered apoptotic related proteins levels, including Bcl‐2, Bax, Cleaved‐Caspase‐9/‐8/‐3, and Pro‐Caspase‐3/‐8. In addition, Ost enhanced the levels of endoplasmic reticulum (ER) stress proteins (GRP78/Bip, CHOP, Caspase‐4, IRE1α, PERK, JNK, P‐JNK, and ATF4), decreased the cell proliferation and cycle‐associated protein (Phospho‐Histone H3, P‐Cdc25C, Cdc25C, P‐Cdc2, Cdc2, and Cyclin B1) level. The results show that Ost has toxic effects on L02 cells. Furthermore, it induces apoptosis by inhibiting cell proliferation, arresting cell cycle at the G2/M phase and activating ER stress.     

Subclinical alteration of taste sensitivity induced by candesartan in healthy subjects

AIMS: There have been case reports of taste disturbance for the angiotensin II receptor blockers losartan and valsartan, but not for candesartan. This study was undertaken to examine whether candesartan causes taste disturbance. METHODS: Candesartan cilexetil (4 mg day(-1)) or vehicle was given to healthy volunteers (n = 8) for 7 days in a randomized, double-blind, placebo-controlled, cross-over design with a 2-week washout period. Clinical gustometry using the filter-paper disc test and electrogustometry were sequentially performed before and at the end of each trial. Serum and salivary zinc concentrations were also measured. RESULTS: Detection thresholds of four basic tastes (sweet, salty, sour and bitter) determined by the paper disc test were significantly (P < 0.05 in all tests) worsened (i.e. score of test increased) after repeated dosing of the drug, although the subjects did not notice such changes. The mean +/- SEM (and 95% CI) scores of the four tastes at just before the seventh dosing of candesartan or vehicle was 3.38 +/- 0.32 (3.02, 3.74) and 2.63 +/- 0.18 (2.18, 3.08) for sweetness, 3.63 +/- 0.38 (4.49, 2.77) and 2.63 +/- 0.26 (3.27, 1.98) for salt, 4.01 +/- 0.42 (3.04, 4.98) and 2.61 +/- 0.32 (3.35, 1.87) for sourness, 4.01 +/- 0.38 (3.22, 4.80) and 2.99 +/- 0.33 (2.24, 3.74) for bitterness, for candesartan and placebo, respectively. Electrogustometry confirmed the candesartan-related taste disturbance. Serum and salivary zinc concentrations were not influenced by candesartan. CONCLUSIONS: These data suggest that candesartan subclinically reduces taste sensitivity after repeated dosing in healthy subjects. Because similar events are reported for losartan and valsartan in case reports, this adverse effect might be a class effect of angiotensin-II receptor blockers (ARBs).     

大蒜素抑制牙龈卟啉单胞菌诱导人肺上皮细胞凋亡的作用

摘要： 目的 探讨不同浓度大蒜素对牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis, P.gingivalis）诱导人肺上皮细胞A549 凋亡的影响。方法 以微量肉汤稀释法, 通过检测不同浓度大蒜素在不同时间点对 P. gingivalis 的抑制作用,测定大蒜素对P.gingivalis 的最低抑菌浓度（MIC）以及最低杀菌浓度（MBC）。分别于 12 h 及 24 h 时, 以四唑盐（MTT）比色法检测不同浓度（64、 96、 128 mg/L）大蒜素对 P.gingivalis 感染后的 A549 存活率的影响, 以流式细胞术FITC/PI 染色法检测 24 h 时, P.gingivalis 与大蒜素（128 mg/L）分别以及共同作用对 A549 细胞凋亡率的影响。结果 大蒜素对 P.gingivalis 的 MIC 为 64 mg/L, MBC 为 128 mg/L。MTT 检测结果显示, P.gingivalis 感染后, 随着大蒜素浓度的增加, 细胞存活率增加, 差异有统计学意义 （P < 0.05）。大蒜素 （128 mg/L） 组的存活率与细胞对照组比较差异无统计学意义, 表明大蒜素对 A549 无明显细胞毒性。流式细胞术检测结果显示, 各组细胞凋亡率由高到低为： P.gingivalis 组>P.gingivalis+大蒜素组>大蒜素组>细胞对照组, 差异有统计学意义（P < 0.01）, 大蒜素对 P.gingivalis 感染后 A549 的凋亡有明显抑制作用。结论 大蒜素可有效抑制 P.gingivalis 对肺上皮细胞的感染, 对于治疗牙周炎合并肺部感染有良好的应用前景。     

去甲泽拉木醛通过调控细胞周期和自噬诱导的细胞凋亡抑制K562细胞生长的机制

目的研究去甲泽拉木醛(demethylzeylasteral,ZST93)在体外抑制慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)细胞的增殖作用,并初步探讨其可能的作用机制。方法以K562细胞为研究对象,采用CCK-8、细胞生长曲线和倒置显微镜检测ZST93对K562细胞增殖抑制作用;细胞转染和Western blot分析细胞自噬;PI染色、Annexin V-FITC/PI和流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果ZST93对K562细胞株的生长呈剂量和时间依赖性的抑制作用,IC₅₀值为2.59μmol·L^-1,使细胞周期阻滞于G₁期。自噬检测中发现ZST93可诱导GFP-LC3积累、LC3-Ⅰ转化为LC3-Ⅱ以及p62表达水平降低。ZST93通过调控自噬激活caspase-8,诱导外部凋亡信号通路,促使caspase-9、caspase-3和PARP剪切而被激活,针对caspase-3的抑制剂Z-DEVD-FMK能够降低ZST93诱导的K562细胞凋亡。结论ZST93可有效抑制K562细胞增殖,促进细胞周期阻滞、细胞凋亡和自噬激活,可能与自噬激活/caspase-8/caspase-3凋亡信号通路有关。     

α-干扰素增强耐药性白血病K562/ADM细胞及其白血病干细胞对阿霉素的敏感性

目的研究α-干扰素(interferon alpha,IFN-α)对白血病多药耐药K562/ADM群体细胞及其白血病干细胞(LSC)对细胞周期特异性药物阿霉素敏感性的影响。方法以K562/ADM耐药细胞为靶细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性;流式细胞术碘化丙啶(PI)染色和AnnexinV/PI双染色分别测定细胞周期分布和细胞凋亡;抗CD34、CD38和CD123抗体以及Annexin V共染色检测群体细胞中LSC的含量及凋亡率。结果 IFN-α作用后K562/ADM细胞周期分布发生改变,G0/G1期细胞比例减少,S期细胞比例增高。IFN-α与阿霉素联合作用,明显增强阿霉素对K562/ADM细胞的增殖抑制作用,细胞凋亡率增高。IFN-α可提高K562/ADM细胞群体中LSC的含量(比例),且增加LSC对阿霉素的敏感性,凋亡的LSC数量增高。结论 IFN-α促进K562/ADM群体细胞及其LSC进入细胞增殖周期而提高对细胞周期特异性抗癌药物阿霉素的敏感性。     

ι-四氢巴马汀抑制羟考酮引起小鼠行为敏化的实验研究

目的探讨ι-四氢巴马汀(-tetrahydropalmatine,ι-THP)对羟考酮(oxycodone,oxy)行为敏化的影响和作用机制。方法采用连续7d给小鼠注射羟考酮(5mg.kg-1,ip),停药5d,d13用相同剂量的羟考酮(5mg.kg-1,ip)激发致小鼠行为敏化模型,利用红外光束自主活动测定仪测定小鼠自发活动的实验方法。结果ι-THP(6.25,12.5,18.75mg.kg-1,ig)一次或多次给药,对小鼠的自发活动没有影响,但ι-THP(18.75mg.kg-1,ig)能抑制羟考酮(5mg.kg-1,ip)引起的小鼠行为敏化的形成和表达。阿朴吗啡(0.5、1.0mg.kg-1,ip)给药后50min自身不影响小鼠的自发活动,但阿朴吗啡(1.0mg.kg-1,ip)能翻转ι-THP(18.75mg.kg-1,ig)抑制羟考酮小鼠行为敏化形成的作用,但不影响ι-THP抑制羟考酮行为敏化表达的作用。结论ι-THP抑制羟考酮引起的小鼠行为敏化的形成和表达,ι-THP抑制羟考酮行为敏化的形成可能与抑制DA受体相关,而抑制表达可能与抑制DA受体无关。     

乙醇诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的研究低浓度乙醇对肝癌细胞的影响及作用机制。方法采用噻唑蓝比色法观察乙醇对细胞增殖的影响；采用流式细胞仪法观察乙醇对肝癌细胞内活性氧的影响；采用琼脂凝胶电泳法观察DNA片断化条带。结果低浓度乙醇可明显抑制细胞增殖；乙醇作用于细胞后2h内引起活性氧产生，24h后细胞出现典型的凋亡表现。结论乙醇能够通过诱导细胞内活性氧的产生引起细胞凋亡，呈明显的剂量依赖性。     

橙皮苷对高脂高糖诱导胰岛 β 细胞损伤的保护作用

目的探讨橙皮苷(hesperidin,HSD)对于高脂高糖诱导小鼠胰岛β细胞损伤的保护作用及机制。方法HSD预处理后,高脂高糖处理MIN6细胞。CCK-8法、Hoechst 33258荧光染色法检测MIN6细胞增殖与凋亡;Western blot检测Bax、Bcl-2的表达;RT-PCR检测炎症因子TNF-α、IL-1β的表达;ELISA检测小鼠胰岛的胰岛素分泌功能。结果高脂高糖培养抑制MIN6细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低Bcl-2/Bax比值,增加炎症因子TNF-α、IL-1β的表达并且抑制了小鼠胰岛的胰岛素分泌;当HSD预处理后,MIN6细胞活力增加,Bcl-2/Bax比值增加,炎症因子TNF-α、IL-1β的表达有不同程度的降低,小鼠胰岛的胰岛素分泌增加。结论HSD减少了高脂高糖诱导的小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞凋亡和炎症因子分泌,改善小鼠胰岛素分泌。     

双氢青蒿素诱导肿瘤细胞凋亡的信号通路研究进展

双氢青蒿素作为青蒿素的重要衍生物,是我国自行研制出的抗疟新药。近些年来,人们对双氢青蒿素进行了多方面的研究,在抗肿瘤研究方面有许多新进展,发现其诱导肿瘤细胞凋亡的机制与多条信号通路有关,例如PI3K/Akt、MAPK、STAT3、Wnt/β-catenin、NF-κB等信号通路。通过对作用机制的深入研究和阐述有望发现双氢青蒿素的新适应症,使其在临床上的应用更加广泛。     

舒芬太尼对体外培养HepG 2 细胞增殖及细胞凋亡的影响

目的了解阿片类镇痛药舒芬太尼对体外培养肝癌细胞株HepG2细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响。方法体外培养人肝癌HepG2细胞,实验组在RPMI-1640培养液中加入不同浓度舒芬太尼（0.0001,0.001,0.01,0.1,1,10,20μmol·L-）1,对照组RPMI-1640培养液中不加舒芬太尼,分别孵育48小时后,采用MTT比色法检测HepG2细胞增殖活性,采用流式细胞技术检测舒芬太尼对HepG2细胞周期的影响,用Hoechst33258染色方法分析鉴定舒芬太尼对HepG2细胞凋亡的影响。结果舒芬太尼浓度≥1μmol·L-1时,细胞增殖活性较对照组显著下降（P〈0.05）;随着舒芬太尼浓度增加,G1期细胞比例逐渐增高,S期细胞比例逐渐降低。用Hoechst33258方法染色后在表面荧光显微镜下发现实验组部分HepG2细胞发生凋亡,当舒芬太尼浓度≥0.1μmol·L-1时,荧光显微镜下一个视野内凋亡细胞占总细胞数的比例较对照组显著增加（P〈0.05）。结论舒芬太尼在临床常用剂量范围内对肝癌细胞株HepG2细胞增殖和凋亡无明显影响,当浓度≥1μmol·L-1时可以抑制人肝癌细胞株HepG2细胞增殖,主要将细胞周期阻滞在G1期,当舒芬太尼浓度≥0.1μmol·L-1时可引起肝癌HepG2细胞凋亡。