一个新的微卫星多态标记(D14S1435)的FISH定位

目的将从人染色体１４ｑ２４．３显微切割制备的ＤＮＡ文库中分离得到的一个新的微卫星多态标记（Ｄ１４Ｓ１４３５，ＣＡ重复序列，人群中存在１１种等位形式，ＰＩＣ值为０．８５）进行染色体荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）返回定位。方法以此多态标记筛选人Ｌａｍｂｄａ／ＤＡＳＨ基因组文库，得到的阳性重组噬菌体ＤＮＡ，通过ＢａｍＨⅠ完全酶切，低熔点胶电泳回收插入片段，再经Ｓａｕ３ＡⅠ酶切，接头捕获ＰＣＲ（ｌｉｎｋｅｒ－ｃａｔｃｈＰＣＲ）法标记探针进行ＦＩＳＨ。结果将这一新的ＳＴＲ精确地定位于人染色体１４ｑ２４．３，证实了从染色体显微切割探针池分离染色体区带特异性遗传标记的可靠性。结论经染色体显微切割、ＰＣＲ及微克隆方法所得到的遗传标记，通过染色体荧光原位杂交证实其确实来自所切割区域，增加了这一区域可用于连锁分析的遗传标记，为定位在１４ｑ２４．３区带内若干遗传病的基因诊断和基因克隆，提供一个新的有价值的遗传标记。     

食管癌组织染色体位点特异性的杂合性丢失和微卫星DNA序列不稳定

为了寻找在食管癌中发生缺失的染色体位点，根据以往细胞遗传学的工作基础，选取２４个分别位于１、２、３、５、７、９、１１、１７号染色体的食管癌染色体畸变＂热点＂及已知基因的位点，以微卫星序列－ＰＣＲ法检测这些位点处的杂合性丢失和微卫星序列不稳定。对３６对来自北京和山西阳泉的散发食管癌标本和相应正常组织的检测结果显示：在对应于９ｐ２２－２３、３ｐ１４．２、２ｐ２２、３ｐ２４－２６、１１ｑ１３．１、３ｐ２３、３ｐ２１．３、７ｑ３５、３ｑ２１－２２等染色体位点处存在较高频率（＞２０％）的杂合性丢失。同时，发现了染色体位点特异的微卫星ＤＮＡ不稳定。杂合性丢失和微卫星ＤＮＡ序列不稳定可能与食管癌的发生、发展过程有关。     

食管癌组织染色体位点特异性的杂合性丢失和微卫星DNA序…

为了寻找在食管癌中发生缺失的染色体位点，根据以往细胞遗传学的工作基础，选取２４个分别位于１、２、３、５、７、９、１１、１７号染色体的食管癌染色体畸变“热点”及已知基因的位点，以微卫星序列－ＰＣＲ法检测这些位点处的杂合性丢失和微卫星序列不稳定。对３６对来自北京和山西阳泉的散发食管癌标本和相应正常组织的检测结果显示：在对应于９ｐ２２－２３、３ｐ１４．２、２ｐ２２、３ｐ２４－２６、１１ｑ１３．１、３ｐ２     

人核糖体磷酸蛋白P2基因的克隆及鉴定

利用聚合酶链式反应技术（ＰＣＲ），从人肺巨细胞癌ＰＬＡ－８０１母系细胞系统克隆化高转移细胞株Ｄ中特异性扩增Ｐ２ ｃＤＮＡ（Ｈｕｍａｎ ｒｉｂｏｓｏｍａｌ ｐｈｏｓｐｈｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｐ２ ｇｅｎｅ ｃＤＮＡ），并将扩增产物克隆入ｐＧＥＭ－３Ｚ载体，获得了重组质粒ｐＭＰ２，对其中两个克隆ｐＭＰ２－１、ｐＭＰ２－２的Ｐ２ ｃＤＮＡ进行了序列分析。结果表明：ｐＭＰ２－１的Ｐ２ｃＤＮＡ序列与文献报道基本     

人胰腺癌组织3、5、7、9和18号染色体部分位点的杂合性丢失

目的了解人胰腺癌组织３、５、７、９和１８号染色体部分位点的杂合性丢失的状况。方法选择来自３、５、７、９和１８号染色体不同位置的９对多态性引物，对４５例胰腺癌存档石蜡标本经显微镜下剥离后，以ＰＣＲ－ＳＳＬＰ－银染法检测胰腺癌中这些位点的杂合性丢失。结果胰腺癌组织在１８ｑ２１．１、３ｐ１４．２、３ｐ２１．１和９ｑ２２－３１等处存在较高频率的杂合性丢失。结论胰腺癌的发生和发展可能涉及这些部位基因的改变     

21号染色体特异性柯斯质粒DNA克隆区域定位

为提高检测２１号染色体数目和结构异常的精确性，应用ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－１１－ｄＵＴＰ通过缺口平移法标记Ｄ１３Ｚ１／Ｄ２１Ｚ１和６个柯斯质粒（Ｃｏｓｍｉｄ）ＤＮＡ克隆，将标记后的Ｄ１３Ｚ１／Ｄ２１Ｚ１和６个柯斯质粒ＤＮＡ克隆双探针与正常二倍体细胞系染色体进行荧光原位杂交（ＦＩＳＨ），结合Ｑ显带方法将６个柯斯质粒ＤＮＡ克隆定位于２１ｑ２２；用柯斯质粒ＤＮＡ克隆探针与两个已知的平衡易位细胞系ＧＭ９５４２和８３２７Ｌ的染色体进行荧光原位杂交，检测并分析杂交信号在两个平衡易位细胞系染色体上的分布，结果表明柯斯质粒ＤＮＡ克隆精确定位于２１ｑ２２．２，６个柯斯质粒ＤＮＡ克隆定位结果一致。     

PCR技术用于我国新疆皮肤利什曼病病原体SSUrDNA的扩增及其同源性研究

本文采用引物Ｒ２２２和Ｒ３３３，对来自我国新疆克拉玛依地区的１２份皮肤利什曼病（ＣＬ）患者的皮肤病变组织标本进行ＰＣＲ扩增。结果显示１２例ＣＬ患者病变组织均出现预期的３９７ｂｐ的阳性扩增区带。同时用地高辛标记的Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａＳＳＵｒＤＮＡ扩增产物探针进行斑点杂交及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交。斑点杂交结果显示：Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａＳＳＵｒＤＮＡ扩增产物探针只与１２例ＣＬ患者的ＣＬ－ＰＣＲ－ＡＰ出现阳性杂交信号，与Ｌ．ｔｕｒａｎｉｃａ、Ｌ．ｉｎｆａｎｔｕｍ无阳性杂交信号，上述探针与１２例ＣＬ患者的ＣＬ－ＰＣＲ－ＡＰＳｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交均出现阳性杂交区带。以上结果证实Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａ与我国新疆克拉玛依地区皮肤利氏曼病病原体ＳＳＵｒＤＮＡＰＣＲ扩增产物存在同源关系     

21号染色体特异性柯斯质粒DNA克隆克域定位

为提高检测２１号染色体数目和结构异常的精确性，应用ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－１１－ｄＵＴＰ通过缺口平移法标记Ｄ１３Ｚ１／Ｄ２１Ｚ１和６个柯斯质粒ＤＮＡ克隆，将标记后的Ｄ１３Ｚ１／Ｄ２１Ｚ１的６个柯斯质粒ＤＮＡ克隆双探针与正常二倍体细胞系染色体进行荧光原位杂交，结合Ｑ显方法将６个柯斯质粒ＤＮＡ克隆定位于２１ｑ２２。     

骨肉瘤的分子遗传学研究进展

近几年骨肉瘤的分子遗传专学研究表明，骨肉瘤更趋向是一种遗传病。其分子病理的基础主要是肿瘤抑制基因的失活与原癌．基因的激活。已发现与骨肉瘤发生、发展及预后有关的基因包括ＲＢ、Ｐ５３肿瘤抑制基因及ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｓｉｓ，ｃ－ｒａｆ－１、ＳＡＳ、ｇｌｉ和ＭＤＭ２原癌基因。ＲＢ基因第一次突变多来自父方。Ｐ５３基因突变集中在第一内含子。染色体３ｑ、１３ｑ、１７ｐ和１８ｑ的频发性等位基因缺失提示，除位于１３ｑ的ＲＢ基因及位于１７ｐ的Ｐ５３基因外，至少还有两个与骨肉瘤发生有关的抗肿瘤抑制基因分别位于３ｑ和１８ｑ。具有Ｐ５３基因的等位缺失和／或ＭＤＭ２基因扩增的骨肉瘤更易发生肺转移，是判断骨肉瘤预后的重要指标。     

人类染色体显微切割技术及其作用

人类染色体显微切割技术可从特定区域切以所需的染色体片段，结合ＰＣＲ、分子克隆 、ＤＮＡ测序和ＦＩＳＨ等方法，用于染色体特定区、带的ＤＮＡ文库构建、特异性探针的制备、疾病遗传学特征的分析和有关基因的鉴定、分离、克 隆和定位等。