急性白血病患儿脱氧胞苷激酶和胞苷脱氨酶基因表达

目的通过测定急性白血病(AL)患儿脱氧胞苷激酶(DCK)和胞苷脱氨酶(CDA)基因的表达,探讨其与阿糖胞苷(Ara-C)耐药及临床疗效间的关系。方法应用RT-PCR方法检测32例AL患儿DCK和CDA基因mRNA表达水平,采用ANO VA比较初治与复发及不同亚型白血病患儿间DCK和CDA基因表达的差异。结果ALL患儿DCK表达水平(1.914±0.127)明显高于AML患儿(0.838±0.093 P=0),初治患儿DCK基因表达水平(1.474±0.547)为复发患儿(0.778±0.059)的2倍。AL患儿CDA基因表达水平为0.518±0.107,初治与复发以及各亚型间无显著性差异(P>0.05)。初治患儿CDA/DCK比值(0.422±0.049)明显低于复发患者(0.640±0.031 P=0.001),经DA或HA方案治疗1、2疗程缓解的AML患儿CDA/DCK比值低于未缓解患儿(0.561±0.053vs0.728±0.066 P=0)。结论DCK基因表达水平、CDA/DCK比值可作为监测AL儿童对Ara-C治疗反应一个指标。     

阿糖胞苷代谢关键酶基因在儿童恶性血液肿瘤中的表达

目的通过检测儿童急性白血病(AL)及非霍奇金淋巴瘤(NHL)骨髓细胞内阿糖胞苷(Ara-C)代谢关键酶———脱氧胞苷激酶(DCK)和胞苷脱氨酶(CDA)的基因表达及酶活性水平,探索DCK和CDA表达与临床疗效的关系。方法共计31例患儿,其中初诊27例(ALL20例,AML3例,NHL4例),复发4例(ALL2例,AML、NHL各1例),采集患儿骨髓细胞,采用荧光定量PCR检测细胞内DCK、CDA基因表达,核素液闪法检测细胞内DCK、CDA酶活性,统计分析各组患儿的检测结果。结果 (1)DCK:ALL和NHL患儿DCK mRNA与酶活性水平均明显高于AML患儿(P0.05);初治患儿均明显高于复发患儿(P0.05);(2)CDA:AML和复发患儿的CDA酶活性水平明显高于ALL、NHL和初治患儿(P0.05),但各组病例间的CDA mRNA表达差异无显著性(P0.05)。(3)DCK和CDAmRNA表达与酶活性水平呈高度正相关。结论 AML以及某些复发的血液肿瘤患儿,其总体DCK酶活性及基因表达水平降低,CDA酶活性水平增高。DCK和CDA酶活性可能与儿童恶性血液肿瘤疗效相关。     

PRDX6与阿糖胞苷联合作用于HL-60细胞的体外实验研究

目的研究过氧化氧化还原蛋白6(PRDX6)与阿糖胞苷(Ara-C)联合作用对HL-60细胞抑制率的影响,并进一步分析产生该影响的可能机制。方法以不同浓度Ara-C作用于HL-60细胞后,显微镜下观察细胞形态改变;与不同药物作用后,以MTT法检测各组细胞的生长抑制率,RT-PCR技术检测各组细胞PRDX 1～6 mRNA的表达。结果不同浓度Ara-C作用后各组细胞均发生明显的形态学变化,且随着Ara-C浓度的增加,HL-60细胞数目明显减少,细胞形态学变化愈加明显;与对照组比较,单用PRDX 6对HL-60细胞的抑制率为(2.6±0.005)%,差异无显著性(P>0.05),单用Ara-C及联合用药组对HL-60细胞的抑制率分别为(29.8±0.289)%、(33.7±0.222)%,差异有显著性(P<0.05);与单用Ara-C组比较,联合用药组对HL-60细胞的抑制率差异有显著性(P<0.05);与对照组比较,单用PRDX 6组PRDX 1～6 mRNA的表达量差异无显著性(P>0.05);与单用Ara-C组比较,联合用药组PRDX 1～2 mRNA、PRDX 4～5 mRNA表达量明显减少,差异有显著性(P<0.05);PRDX 3 mRNA与PRDX 6 mRNA在各组间的表达均无明显变化,差异无显著性(P>0.05)。结论 Ara-C对HL-60细胞的生长抑制作用具有浓度依赖性,联合应用PRDX 6可提高Ara-C对HL-60细胞的抑制率,其原因可能与PRDX 1～2 mRNA、PRDX4～5 mRNA表达量减少有关。     

刺五加对阿糖胞苷损伤的骨髓间充质干细胞的保护作用

目的探讨刺五加注射液对阿糖胞苷损伤的骨髓间充质干细胞(BMSCs)的保护作用。方法体外密度梯度法分离培养大鼠骨髓间质干细胞,设置对照组与不同浓度的阿糖胞苷组、刺五加注射液组和阿糖胞苷、刺五加注射液联合组。采用四甲基偶氮唑蓝(NTT)法检测各组细胞存活和生长情况。结果①5种浓度的阿糖胞苷对MSC的抑制作用与对照组比较有显著性差异(P<0.05),细胞抑制率随着浓度的增高而增高。②5种浓度的刺五加注射液对MSC的增值作用与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。③联合组与单独用药组对MSC的增值作用比较有显著性差异(P<0.05)。结论刺五加注射液对阿糖胞苷损伤的骨髓间充质干细胞有一定的保护作用。     

阿糖胞苷作用下白血病细胞膜人核苷转运体1基因表达变化研究

目的检测肿瘤细胞膜上人平衡型核苷转运体1(human equilibrative nucleoside trans-porter 1,hENT1)基因表达及其变化,探索影响阿糖胞苷(Ara-C)治疗急性白血病(AL)疗效的相关因素。方法根据目前临床采用的低剂量、中剂量和大剂量Ara-C(HD-AraC)治疗时所能达到的血浆药物浓度,分别采用0.5～100μmol/L中的6种不同剂量(0.5、1.0、5.0、15、50、100μmol/L)体外作用于白血病细胞株Jurkat和NB4,经4～48 h的5个时间段(4、8、12、24、48 h)作用后,采用定量RT-PCR方法测定hENT1 mRNA表达及其变化。结果 (1)Jurkat和NB4细胞的hENT1mRNA原始相对表达量(ΔCt值)分别为5.21±0.02和5.34±0.05,两者差异无显著性(P0.05)。(2)在较低剂量Ara-C(0.5～15μmol/L)作用下,hENT1 mRNA表达恒定,与阴性对照组差异无显著性(P0.05);但在高浓度Ara-C(50μmol/L和100μmol/L)作用48 h后,Jurkat和NB4细胞的hENT1 mRNA表达明显增强,ΔCt分别为2.02±0.17和2.19±0.02,与对照组(5.21±0.02)比较差异均有显著性(P0.05)。(3)同一种细胞在50μmol/L和100μmol/L两个剂量组的hENT1mRNA表达增高程度,差异无显著性(P0.05);分别来源于ALL和AML的Jurkat和NB4细胞的表达量间差异亦无显著性(P0.05)。结论 HD-AraC处理48 h后,Jurkat和NB4细胞的hENT1mRNA表达可明显提高,有利于药物进入细胞,以增强抗白血病效应,推测临床HD-AraC疗法采用48～72 h的疗程是必要的。     

组蛋白乙酰化/去乙酰化失衡对平面细胞极性途径关键基因影响的研究

目的观察组蛋白乙酰化/去乙酰化失衡对胎鼠心脏的致畸作用及对H9C2心肌细胞平面细胞极性(PCP)途径关键基因Vangl2、Scrib、Rac1表达的影响。方法将40只C57/B6孕小鼠随机分为空白对照组(n=10)、溶剂对照组(n=10)和丙戊酸(VPA)组(n=20);应用组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂VPA单次剂量700 mg/kg腹腔注射妊娠第10.5天(E10.5 d)VPA组孕鼠,溶剂对照组孕鼠腹腔注射等量生理盐水,空白对照组不做任何处理。于E15.5 d处死孕鼠,统计死胎率;取活胎鼠心脏行苏木精-伊红(HE)染色,观察VPA对胎鼠心脏的致畸作用。培养H9C2心肌细胞并将其分为空白对照组、溶剂对照组和VPA组,VPA组以不同浓度(2.0、4.0、8.0 mmol/L)作用于H9C2心肌细胞,溶剂对照组加入等量生理盐水,空白对照组不进行任何处理。实时荧光定量PCR和Western blot检测HDAC1~3及Vangl2、Scrib、Rac1基因在VPA干预后24、48、72 h mRNA及其蛋白表达水平;比色法测定总HDAC活性变化。结果 VPA组胎鼠死亡率为31.7%,心脏畸形发生率显著高于两对照组(P0.05)。与两对照组相比,不同浓度VPA干预后各时间点,HDAC1 mRNA表达水平均显著升高(P0.05),而蛋白表达水平于48 h及72 h显著降低(P0.05);不同浓度VPA干预后,HDAC2 mRNA仅在24 h表达显著下降(P0.05),而蛋白表达水平在各时间点均显著下调(P0.05);HDAC3 mRNA在VPA(4.0 mmol/L、8.0 mmol/L)干预的各时间点均表达增高(P0.05),而蛋白表达水平在不同浓度VPA干预后各时间点均下调(P0.05)。与两对照组相比,不同浓度VPA干预后,Vangl2、Scrib mRNA及其蛋白表达水平在48 h、72 h均显著下降(P0.05),Vangl2蛋白表达仅在72 h降低(P0.05)。与两对照组相比,VPA(4.0及8.0 mmol/L)干预后24 h,总HDAC活性显著降低(P0.05);干预后48 h、72 h,不同浓度VPA组总HDAC活性均明显降低(P0.05)。结论 VPA可能通过直接抑制HDAC1~3蛋白表达水平及总HDAC活性致乙酰化/去乙酰化失衡,从而导致PCP途径关键分子Vangl2、Scrib mRNA及蛋白表达水平下调,这可能是先天性心脏病发生的机制之一。     

盐酸吉西他滨对K562细胞增殖、凋亡及bcr/abl mRNA表达的影响

目的 观察盐酸吉西他滨对K562细胞增殖、凋亡及bcr/abl基因表达的影响,探讨盐酸吉西他滨用于慢性粒细胞白血病急变期治疗的可行性. 方法 采用水溶性四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测盐酸吉西他滨对K562细胞增殖的影响,采用凋亡的原位酶标记检测(TUNEL)法检测盐酸吉西他滨对K562细胞凋亡的影响,采用半定量RT-PCR技术检测盐酸吉西他滨作用于K562细胞后bcr/abl融合基因mRNA表达变化. 结果 0.1 mg/L、1.0 mg/L 、10.0 mg/L盐酸吉西他滨分别作用K562细胞12 h、24 h、48 h、72 h 后,K562细胞增殖受到抑制,抑制作用随质量浓度及时间增加而增强,但48 h和72 h比较无显著性差异,10.0 mg/L吉西他滨组作用K562细胞48 h抑制率达(29.3±0.008)%.吉西他滨组对K562细胞的抑制作用明显强于同质量浓度同时间的阿糖胞苷组,二者比较有显著性差异(P<0.01).TUNEL实验结果 显示10.0 mg/L吉西他滨作用于K562细胞48 h,凋亡率为15.3%,明显高于阿糖胞苷组 3.7%(P<0.05)和空白对照组2.0%(P<0.05).RT-PCR结果 显示10 mg/L吉西他滨作用48 h对K562细胞bcr/abl融合基因mRNA的表达有明显抑制作用,与同剂量阿糖胞苷组比较无显著性差异.结论 盐酸吉西他滨对K562细胞有一定的增殖抑制及促凋亡作用,且具有剂量和时间依赖性.10 mg/L吉西他滨能够明显下调慢性粒细胞白血病bcr/abl融合基因mRNA表达,有望联合应用于慢性粒细胞白血病急变期的治疗.     

GATA-3在支气管哮喘小鼠肺组织表达及地塞米松对其抑制作用

目的探讨转录因子GATA-3在支气管哮喘小鼠肺组织中表达及地塞米松（Dex）对其干预作用。方法采用卵清蛋白（OVA）致敏方法建立支气管哮喘小鼠模型;Balb/c小鼠24只随机分为对照组、哮喘组、Dex治疗组各8只。采用免疫组织化学方法检测肺组织GATA-3蛋白表达;反转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测肺组织GATA-3 mRNA相对水平;流式细胞技术检测小鼠脾CD4 T细胞白细胞介素-4（IL-4）水平;HE染色评价各组小鼠气管炎性反应变化。结果哮喘组小鼠肺组织GATA-3及mRNA水平、IL-4水平均明显高于对照组（P〈0.05）,Dex治疗组GATA-3阳性细胞数及mRNA水平、IL-4水平均明显低于哮喘组,具有显著性差异（P〈0.05）。HE染色结果表明Dex治疗组气管炎性反应明显缓解。结论GATA-3在支气管哮喘小鼠肺组织呈高表达。Dex可阻断哮喘鼠肺组织GATA-3表达,抑制Th2型细胞因子释放,减轻气管炎性反应。     

转录因子T-bet和GATA-3对婴幼儿喘息性支气管炎的免疫调控作用

目的探讨转录因子T-bet和GATA-3对小儿喘息性支气管炎的免疫调控作用。方法对32例喘息性支气管炎(喘支组)和30例正常儿童(对照组)抽取抗凝静脉血5 mL,Ficoll分离外周血淋巴细胞,以终质量浓度为100 mg/L的植物血凝素(PHA)刺激48 h,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清液干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)水平,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测淋巴细胞T-bet、GATA-3的mRNA表达水平。结果喘支组淋巴细胞培养上清液IFN-γ水平[(528±164)ng/L]低于对照组[(870±203)ng/L](P<0.05),而IL-4水平[(106±29)ng/L]明显高于对照组[(47±15)ng/L](P<0.01);喘支组和对照组淋巴细胞T-bet mRNA水平分别为(0.11±0.03)(、0.17±0.03),GATA-3 mRNA分别为(0.54±0.09)、(0.41±0.07),提示喘支组T-bet mRNA表达较对照组减少(P<0.05),而GATA-3 mRNA明显高于对照组(P<0.01);喘支组IFN-γ水平与T-bet mRNA表达I、L-4与GATA-3 mRNA表达均呈正相关(r=0.57,0.60 P均<0.01);IFN-γ与IL-4水平、T-bet mRNA与GATA-3 mRNA表达均呈负相关(r=-0.38,-0.46 P均<0.05)。结论1.喘支组患儿淋巴细胞合成IL-4水平增高,IFN-γ减少,存在以Th2细胞过度分化为特征的T辅助细胞分化失衡。2.喘支组患儿T细胞分化失衡受到核转录因子T-bet和GATA-3的调控,T-bet表达减少可能是一重要因素。     

不同抗癫癎药物治疗对癫癎患儿血脂的影响

目的 探讨癫癎患儿血脂水平的改变及应用抗癫癎药物对血脂水平的影响.方法 采用酶测定法分别测定2009年1月-2011年1月在小儿癫癎专科门诊随访治疗的55例癫癎患儿(全面性发作30例,单纯局限性发作18例,不能分类的发作7例)和30例健康体检儿童(健康对照组)血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白( HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)水平,分析癫癎患儿在单药或联合用药至少0.5a后与健康对照组比较血脂水平的变化.结果 癫癎患儿服用抗癫癎药物后引起其血脂水平的改变,与健康对照组血脂水平相比,血清TG、LDL-C显著升高(Pa＜0.01),HDL-C水平显著下降(P＜0.01);丙戊酸钠( VPA)单药治疗的癫癎患儿与健康对照组相比,TG、LDL-C升高及HDL-C降低,其差异有统计学意义(Pa＜0.05,0.01),而单用VPA与联合用药组之间及两个联合用药组间血脂水平改变的差异均无统计学意义(Pa＞0.05);联合用药组与健康对照组比较,其改变幅度VPA＞ VPA+拉莫三嗪＞VPA+左乙拉西坦,但差异均无统计学意义(Pa＞0.05).结论 癫癎患儿服用抗癫癎药物后存在血脂水平的改变,以单用VPA的改变最大.     

Fluctuation in the concentrations of vanillylmandelic acid and homovanillic acid in mass screening for neuroblastoma

Fluctuations in the amount of vanillylmandelic acid (VMA) and homovanillic acid (HVA) were studied in random urine samples from 13 infants with neuroblastoma. In patients with a small tumour, many samples contained amounts below the cut off values, suggesting that detection of a patient with neuroblastoma depended on mathematical probability. Using high performance liquid chromatography a patient with a tumour of about 10 g may well be overlooked, whereas a patient whose tumour weighs over 30 g would probably be detected. With qualitative screening, although more likely to miss a patient with low VMA excretion, a patient with a tumour weighing over 50 g would be detected. In a thorough hospital examination care should be exercised in interpreting borderline values of VMA and HVA; excretion information suggesting the existence of a tumour may aid localization by radiological imaging procedures.     

Erythrocyte fatty acid composition in term infants fed human milk or a formula enriched with a low eicosapentanoic acid fish oil for 4 months

When term infants are fed standard formula that does not contain long-chain polyunsaturated fatty acids (LC-PUFA), they still show lower levels of docosahexaenoic acid (DHA) in red blood cell (RBC) phospholipids by several weeks or months postnatally. This study was designed in order to evaluate a potential alternative for supplementing term infant formulas with DHA by adding a high-DHA/low-eicosapentanoic acid fish oil to levels similar to that in human milk (0.3%). A total of 37 term infants were included in the study at 3 days of life. DHA concentrations remained stable between inclusion and 4 months of life at around 8% of the RBC phospholipids in the LC-PUFA enriched formula-fed group whereas it decreased significantly in the standard formula-fed group. In the human milk-fed group, RBC DHA concentrations at 4 months of age were significantly lower than that at birth and were significantly correlated with the duration of breast feeding (r = 0.85; P = 0.0002). A significant decrease of arachidonic acid between inclusion and 4 months of age was observed in the enriched formula-fed group and reached a mean value at 4 months, which was significantly lower than that observed in the human milk or standard formula-fed groups (P < 0.0001). Conclusion Supplementing term formulas with a high-docosahexaenoic acid/low-eicosapentanoic acid fish oil up to 4 months of age is efficient in improving docosahexaenoic acid status, however it increases the risk of impaired n-6 fatty acid status. Received: 25 September 1998 / Accepted: 14 June 1999     

兴奋性氨基酸与儿童抽动障碍的关系

目的 探讨兴奋性氨基酸(EAAs)中谷氨酸(GLU)、天门冬氨酸(ASP)在儿童抽动障碍发病机制中的作用。方法 采用高效液相色谱法检测48例抽动障碍患儿血浆GLU、ASP水平,其中暂时性抽动13例,慢性多发性抽动20例,抽动-秽语综合征15例;单纯性抽动23例,抽动并多动障碍25例。结果1.抽动障碍患儿血浆GLU水平明显高于对照组(P<0.01)。2.慢性抽动组和抽动-秽语综合征组血浆GLU、ASP分别与对照组和暂时性抽动组比较,结果前两者血浆GLU水平明显高于对照组和暂时性抽动组(P<0.05,P<0.01)。各组血浆ASP水平比较,无显著性差异(P>0.05)。3.抽动并多动障碍组血浆GLU水平明显高于单纯性抽动组(P<0.01)。各组血浆ASP水平与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。结论 儿童抽动障碍存在EAAs水平变化,GLU可能参与抽动障碍的病理生理过程。     

危重症患儿血清脂肪酸构成的临床研究

目的 探讨危重症患儿血清游离脂肪酸构成及含量的变化.方法 采用气相色谱法测定27例危重症患儿和34例健康儿的血清游离脂肪酸谱,比较健康儿、危重症患儿恢复前后的血清游离脂肪酸谱的改变.结果 危重症阶段,血清中棕榈酸、棕榈油酸、油酸、山嵛酸、花生四烯酸及二十碳五烯酸的含量较健康者明显增高(P＜0.05);危重症抢救成功者恢复两周后,血清中豆蔻酸、棕榈酸、棕榈油酸、油酸、花生酸的含量较健康者明显增高(P＜0.05).结论 危重症阶段及危重症抢救成功者恢复后,患儿血清游离脂肪酸谱有变化;危重症的严重应激状态影响血清游离脂肪酸的构成及含量.     

上海地区人乳中脂肪酸成分的研究

目的对上海地区人乳脂肪酸成分再次进行调查,以获得上海地区人乳脂肪酸成分的最新数据。方法选择健康产妇31例,平均年龄(27±4)岁,平均孕期(39±1)周,婴儿平均出生体质量为(3 405±375)g。采集每位产妇产后1～7 d的初乳、14 d和28 d的过渡乳以及42 d的成熟乳,采用气相色谱法对人乳中的脂肪酸成分进行测定。结果人乳中的总脂肪酸含量从初乳、过渡乳到成熟乳逐渐增加;饱和脂肪酸的含量在1～7 d的初乳中逐渐增加,至过渡乳和成熟乳逐渐下降;单不饱和脂肪酸含量在1～7 d的初乳中逐渐降低,到过渡乳和成熟乳又逐渐升高;长链多不饱和脂肪酸、花生四烯酸(AA)和二十二碳六烯酸(DHA)的含量在初乳中很高,到成熟乳后明显降低,而必需脂肪酸、亚油酸(LA)和α-亚麻酸(ALA)则随哺乳期的延长逐渐增加。与10年前的上海人乳资料相比较,DHA含量有所增加,而ALA含量却有下降。结论人乳中的脂肪酸含量随哺乳期的延长不断发生变化。中国上海地区人乳中必需脂肪酸、LA的含量显著高于国外报道。     

碱性成纤维细胞生长因子对癫(癎)持续状态大鼠海马谷氨酸和γ-氨基丁酸的影响

目的 通过戊四氮癫(癎)持续状态大鼠模型,观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对海马组织内主要的兴奋性氨基酸与抑制性氨基酸--谷氨酸和γ-氨基丁酸动态变化的影响.方法 建立60 d大鼠戊四氮(PTZ)诱导癫(癎)持续状态模型,生理盐水(NS)注射作为对照,皮下注射bFGF进行干预,分4组:即NS组、NS+bFGF组、PTZ组、PTZ+bFGF组.选择处理后第3、7、14天三个时间点进行观察,采用高效液相法检测海马组织谷氨酸和γ-氨基丁酸含量.结果 发作后3、7、14 d PTZ组海马组织谷氨酸较NS组有显著升高(P<0.01),以发作后14 d升高更为明显,PTZ+bFGF组各时间点谷氨酸较PTZ组下降(P<0.05);γ-氨基丁酸含量在PTZ组各时间点亦大于NS组(P<0.05),以发作后14 d升高较为显著;PTZ+bFGF组发作后各时间点γ-氨基丁酸较PTZ组差异无统计学意义(P>0.05).结论 大鼠癫(癎)持续状态后一定时间内海马谷氨酸和γ-氨基丁酸增加,bFGF能够降低大鼠癫(癎)发作后异常增加的谷氨酸含量.     

Extrauterine fatty acid accretion in infant brain: implications for fatty acid requirements

Total fatty acid content of infant brain was determined to assess minimal fatty acid requirements for synthesis of structural lipids in brain tissue during the first 13 weeks of life. Fatty acid accretion rates were determined by regression analysis of tissue fat components at varying postnatal ages. Quantitative fatty acid analysis indicated that postnatal accretion of long-chain polyenoic fatty acids in cerebellum, frontal and occipital brain lobes initially appeared to lag behind the rate of increase in brain weight and brain fat content. After a 4-week period total long-chain fatty acids increased at a rate similar to the increase in brain weight. Accretion of individual fatty acids in cerebellum also reflected changes in tissue total fatty acid content. These developmental changes in fatty acid components of whole brain and cerebellum are quantitatively relevant to estimation of the minimal extrauterine fatty acid requirements of the human neonate.