TRAIL蛋白对卵巢癌COC1和COC1／DDP细胞生长及促凋亡作用研究

目的:为研究TRAIL对卵巢癌COC1和耐药COC1/DDP细胞生长及凋亡的影响。方法:用MTT法检测TRAIL蛋白单独(或与DDP联合用药)对COC1和耐药COC1/DDP细胞生长的影响,流式细胞仪检测TRAIL对肿瘤细胞凋亡情况和细胞周期分布改变的影响。结果:①TRAIL蛋白对COC1/DDP细胞生长有抑制作用,随着TRAIL蛋白浓度升高,细胞抑制率逐渐上升。②TRAIL对COC1和耐药COC1/DDP细胞均有抑制作用,分别为15.74%和30.84%,COC1/DDP细胞的抑制率明显高于前者(P<0.05)。两细胞株的TRAIL与DDP联合组细胞抑制率均比单纯TRAIL组明显升高(P<0.05)。③流式细胞仪检测COC1/DDP细胞的对照组、TRAIL组和TRAIL DDP组细胞凋亡率分别为4.6%、16.7%、23.6%,各组与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。TRAIL蛋白使细胞更多地停留在G0-G1期,有丝分裂期细胞减少,凋亡细胞增多。结论:TRAIL蛋白对COC1和COC1/DDP细胞生长均有抑制作用,DDP与TRAIL联合使用对细胞的生长抑制更明显,细胞凋亡率明显升高。TRAIL可克服COC1/DDP细胞对DDP的耐药性。     

TRAIL蛋白对卵巢癌COC1和COC1/DDP细胞生长及促凋亡作用研究

目的:为研究TRAIL对卵巢癌COC1和耐药COC1/DDP细胞生长及凋亡的影响.方法:用MTT法检测TRAIL蛋白单独(或与DDP联合用药)对COC1和耐药COC1/DDP细胞生长的影响,流式细胞仪检测TRAIL对肿瘤细胞凋亡情况和细胞周期分布改变的影响.结果:①TRAIL蛋白对COC1/DDP细胞生长有抑制作用,随着TRAIL蛋白浓度升高,细胞抑制率逐渐上升.②TRAIL对COC1和耐药COC1/DDP细胞均有抑制作用,分别为15.74%和30.84%,COC1/DDP细胞的抑制率明显高于前者(P＜0.05).两细胞株的TRAIL与DDP联合组细胞抑制率均比单纯TRAIL组明显升高(P＜0.05).③流式细胞仪检测COC1/DDP细胞的对照组、TRAIL组和TRAIL+DDP组细胞凋亡率分别为4.6%、16.7%、23.6%,各组与对照组比较有显著性差异(P＜0.05).TRAIL蛋白使细胞更多地停留在G0-G1期,有丝分裂期细胞减少,凋亡细胞增多.结论:TRAIL蛋白对COC1和COC1/DDP细胞生长均有抑制作用,DDP与TRAIL联合使用对细胞的生长抑制更明显,细胞凋亡率明显升高.TRAIL可克服COC1/DDP细胞对DDP的耐药性.     

大蒜素对子宫内膜癌Ishikawa细胞顺铂耐药株增殖和凋亡及侵袭与迁移的影响

目的 探讨大蒜素对子宫内膜癌顺铂(DDP)耐药细胞株Ishikawa/DDP生物学行为的影响。方法 建立子宫内膜癌DDP耐药细胞株,设对照组、DDP处理组、低剂量大蒜素+DDP处理组、中剂量大蒜素+DDP处理组和高剂量大蒜素+DDP处理组,通过细胞计数实验(CCK8)、Transwell实验、划痕实验、流式细胞术检测各组细胞的增殖、侵袭、迁移和凋亡,采用RT-qPCR实验、蛋白质印迹实验分别检测各组细胞中多药耐药基因1(MDR1) mRNA、P-gp蛋白表达水平。结果 低剂量大蒜素+DDP处理组、中剂量大蒜素+DDP处理组和高剂量大蒜素+DDP处理组细胞增殖抑制率分别为(20.92±3.28)%、(31.71±2.82)%和(47.34±3.43)%,随着大蒜素浓度增加,细胞增殖抑制率上升,差异有统计学意义,F=346.231,P=0.007。Transwell实验表明,对照组、DDP处理组、低剂量大蒜素+DDP处理组、中剂量大蒜素+DDP处理组和高剂量大蒜素+DDP处理组侵袭细胞数分别为(314.00±7.53)、(278.00±6.52)、(203.00±5.46)、(109.00...     

虎杖苷通过Hippo/YAP通路影响甲状腺癌8505C细胞的恶性生物学行为和顺铂敏感性

目的：探究虎杖苷通过Hippo/Yes相关蛋白（YAP）通路对人甲状腺癌8505C细胞的恶性生物学行为和顺铂（DDP）敏感性的影响。方法：体外培养8505C细胞,构建其DDP耐药细胞8505C/DDP,用CCK-8法检测0、25、50、75、100 nmol/L虎杖苷处理8505C和8505C/DDP细胞的增殖能力,以筛选虎杖苷的最佳作用浓度。将8505C细胞分为对照组、虎杖苷组、空载组、虎杖苷+YAP1过表达组;将8505C/DDP细胞分为对照组、DDP组、DDP+虎杖苷组、DDP+空载组、DDP+虎杖苷+YAP1过表达组。WB法检测各组8505C细胞中Hippo/YAP通路[YAP1、转录辅激活因子（TAZ）]和EMT(E-cadherin、N-cadherin)相关蛋白,8505C/DDP细胞中YAP1、TAZ、耐药相关蛋白[P-糖蛋白（P-gp）、多药耐药相关蛋白1(MRP1)]、凋亡相关蛋白（C-caspase-3、BAX、Bcl-2）的表达。Transwell小室和细胞划痕实验分别检测各组8505C、8505C/DDP细胞的侵袭、迁移能力。结果：虎杖苷可显著抑制8505C细...     

顺铂对人肺腺癌细胞作用与ERCC1表达的相关性研究

背景与目的核苷酸切除修复机制可修复顺铂(DDP)造成的DNA损伤,作为其中的关键酶之一,切除修复交叉互补基因1(ERCC1)表达可能与DDP耐药有关。本研究的目的是证实ERCC1表达与DDP作用的关系,推测ERCC1在DDP耐药中的作用。方法选择人肺腺癌细胞A549及其耐DDP细胞株A549/DDP为研究对象,RT-PCR及免疫细胞化学方法检测不同浓度、不同作用时间DDP干预后细胞中ERCC1的表达,采用MTT法检测A549/DDP细胞耐药指数。结果10μmol/LDDP作用12h,A549细胞中ERCC1 mRNA表达开始增高,随着作用时间的延长,ERCC1 mRNA的表达逐渐增高,在72h组ERCC1 mRNA表达最强,为66.69%±5.30%。浓度为5μmol/L的DDP即可刺激A549细胞中ERCC1基因水平上升,而随着DDP浓度的增加,ERCC1 mRNA水平逐渐上升,20μmol/L组达高峰(79.50%±5.46%),为对照组的3.9倍。蛋白表达的增高趋势与mRNA基本平行,但二者幅度不完全一致。与亲本细胞比较,经长期小剂量DDP诱导的耐药株A549/DDP中ERCC1表达明显增高。结论随着小剂量DDP作用时间的延长,A549细胞中ERCC1 mRNA和蛋白的表达量增加,推测ERCC1可能参与了继发耐药的形成。     

宫颈鳞状细胞癌对DDP和DDP+5-FU的体外药敏检测及与耐药蛋白表达的关系研究

目的通过对宫颈鳞状细胞癌进行顺铂(DDP)和DDP+5-氟尿嘧啶(5-FU)体外药敏检测,比较两种化疗方案的体外有效率。同时检测其耐药蛋白P糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽S-转移酶-π(GST-π)、DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)、胸苷酸合成酶(TS)的表达,探讨DDP和DDP+5-FU体外药敏与耐药蛋白表达的关系。方法收集35例宫颈鳞状细胞癌患者的新鲜肿瘤组织,采用三磷酸腺苷生物荧光法(ATP-TCA)对DDP和DDP+5-FU进行体外药敏检测,同时采用EnVision二步法检测宫颈鳞状细胞癌组织中耐药蛋白P-gp、GST-π、TopoⅡ、TS的表达,并分析DDP和DDP+5-FU的体外药敏与耐药蛋白P-gp、GST-π、TopoⅡ、TS表达的关系。结果 35例标本均进行药敏试验,DDP的体外有效率为37.14%,与DDP+5-FU的51.43%比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。经多因素分析发现,患者年龄、临床分期、分化程度均不为DDP、DDP+5-FU药物敏感性的影响因素(P> 0.05)。P-gp、GST-π、TopoⅡ、TS蛋白阳性表达率分别为57.14%(20/35)、51.43%(18/35)、71.43%(25/35)、57.14%(20/35)。GST-π蛋白阳性表达是宫颈鳞状细胞癌对DDP耐药的影响因素(P=0.002);TS蛋白阳性表达是宫颈鳞状细胞癌对DDP+5-FU耐药的影响因素(P=0.001)。结论 宫颈鳞状细胞癌ATP-TCA法检测DDP+5-FU与单药DDP相比,体外有效率无显著差异。GST-π、TS蛋白阳性表达可用于临床宫颈癌患者对DDP、5-FU化疗耐药的预测指标。     

细胞因子诱导的杀伤细胞逆转耐顺铂肺腺癌细胞系A549/DDP耐药性的研究

  目的  观察细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer, CIK)对耐顺铂(DDP)人肺腺癌细胞系A549/DDP的耐药逆转作用及其逆转A549/DDP耐药的可能机制。  方法  A549/DDP与CIK细胞采用Transwell非接触共培养。四氮甲唑兰比色法(MTT法)验证A549/DDP的DDP耐药性及检测共培养前后A549/DDP对DDP耐药性的变化。RT-PCR法筛选A549与A549/DDP有差异表达的基因作为检测耐药性变化的观察指标, 并检测共培养前后A549/DDP中基因表达水平的变化; Western blot检测A549及共培养前后A549/DDP中基因蛋白水平的变化。  结果  A549/DDP的耐药系数为14.5, 具有较强的DDP耐药性。RT-PCR筛选出A549与A549/DDP表达有差异的耐药相关基因为谷胱甘肽转移酶(glutathione-S-transferase, GST-π)基因、人类铜离子转运蛋白(human copper transporter1, hCTR1)基因, A549/DDP中GST-π表达量明显增加, hCTR1表达量明显降低。与CIK细胞共培养后, A549/DDP对DDP的耐药性明显下降, 共培养20h后耐药逆转倍数约为4.93倍, 细胞内GST-π基因及蛋白水平的表达明显降低(P < 0.05)。  结论  CIK细胞对A549/DDP有逆转DDP耐药的作用, 其机制可能与下调GST-π基因及蛋白水平的表达有关。      

菊苣酸通过FOXO3-FOXM1信号轴抑制肺癌细胞增殖和化疗敏感性并促进凋亡

目的:研究菊苣酸调节叉头框蛋白O3(FOXO3)-叉头蛋白M1(FOXM1)信号轴对肺癌细胞增殖、凋亡和化疗敏感性的影响。方法:构建人肺癌细胞顺铂(DDP)耐药细胞A549/DDP,用不同浓度菊苣酸处理后通过MTT法测定细胞活力,以不显著降低细胞活力的最大浓度作为菊苣酸的最佳作用浓度。将A549细胞随机分为对照组、空载组、菊苣酸组、菊苣酸+FOXO3敲低组,分组处理后分别采用MTT法、集落生成实验及流式细胞实验测定各组A549细胞增殖及凋亡;采用免疫印迹法检测各组A549细胞FOXO3-FOXM1通路、增殖(PCNA)与凋亡(Bcl-2、Bax)相关蛋白表达。将A549/DDP细胞随机分为对照组、DDP组、DDP+空载组、DDP+菊苣酸组、DDP+菊苣酸+FOXO3敲低组,分组处理后分别采用MTT法、集落生成实验及流式细胞实验测定各组A549/DDP细胞增殖及凋亡;采用免疫印迹法检测各组A549/DDP细胞FOXO3-FOXM1通路、增殖、耐药[P-糖蛋白(P-gp)]与凋亡相关蛋白表达。结果:与对照组相比,空载组A549细胞各指标无明显变化(P>0.05);菊苣酸组A549细胞...     

人肺腺癌细胞株A549和A549/DDP的比较蛋白质组学研究

目的:比较人肺癌细胞株A549和顺铂(cisplatin,DDP)耐药细胞株A549/DDP中的蛋白表达差异.方法:DDP诱导A549细胞建立DDP耐药细胞株A549/DDP.应用蛋白质组学技术分离鉴定A549和A549/DDP细胞中差异表达的蛋白质,通过real-time PCR、蛋白质印迹法和免疫细胞化学法对部分差异蛋白进行验证;应用生物学信息检索分析差异蛋白的功能.结果:A549和A549/DDP细胞中有8个蛋白质点的表达差异＞5倍,分别为POTE、FH (fumarate hydratase)、PDE (phosphodiesterase)、AKR1C1 (aldo-keto reductase family 1,member C1)、DDH2 (dihydrodiol dehydrogenase 2)、S100A10、prefoldin subunit 2和核内转运蛋白,这些蛋白与细胞代谢、凋亡、增殖、解毒和信号转导等有关.Real-time PCR、蛋白质印迹法和免疫细胞化学法验证结果与蛋白质组学研究结果一致.结论:鉴定得到的A549和A549/DDP细胞中的差异蛋白为研究肺癌细胞DDP耐药提供新依据.     

培美曲塞或吉西他滨联合顺铂治疗晚期NSCLC随机对照研究

目的:观察顺铂(DDP)+培美曲塞(PEM)与DDP+吉西他滨(GEM)联合化疗方案治疗晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的临床疗效和不良反应。方法:将2009-07-05-2011-12-16胜利油田中心医院收治的88例晚期NSCLC患者随机分为PC组45例和GC组43例。PC组:培美曲塞500 mg/m2,静脉滴入,d1;DDP75mg/m2,静脉滴入,d2~d4。GC组:吉西他滨1 000mg/m2,持续静脉滴入30min,d1、d8;DDP同PC组。比较两组的临床疗效和不良反应。结果:PC、GC组近期有效率分别为42.2%(19/45)和41.9%(18/43),差异无统计学意义,P=0.772;疾病控制率分别为84.4%(38/45)和81.40%(35/43),差异无统计学意义,P=0.857;中位生存期分别为11.1和10.7个月,差异无统计学意义,P=0.747;1年生存率分别为42.2%和39.5%,差异无统计学意义,P=0.807。不良反应均可耐受。PC和GC组白细胞减少分别为44.4%(20/45)和60.5%(26/43),差异有统计学意义,P=0.023;血小板减少分别为53.3%(24/45)和76.7%(33/43),差异有统计学意义,P=0.016。结论:培美曲塞或吉西他滨联合DDP治疗晚期NSCLC,疗效相似,但前者不良反应明显减少,可作为晚期NSCLC患者的一线治疗用药。     

miR-145靶向KLF5抑制膀胱癌BIU 87细胞#br# 增殖、侵袭、迁移的机制研究#br#

目的研究miR 145靶向调控锌指蛋白转录因子5(KLF5)抑制膀胱癌BIU 87细胞增殖、侵袭、迁移的机制。方法miR 145 mimics对BIU 87细胞进行转染,实验分为对照组、miR 145阴性对照组、miR 145 mimics组,SV HUC 1细胞作为SV HUC 1组。实时荧光定量法(RT qPCR)测定转染后BIU 87细胞中miR 145表达水平,蛋白印迹法(WB)测定KLF5、PI3K、AKT、p AKT、PCNA、MMP 9、MMP 2、E cadherin表达水平,MTT法测定转染后BIU 87细胞活性,Transwell小室实验测定转染后BIU 87细胞侵袭能力,划痕实验测定转染后BIU 87细胞体外迁移能力。TargetScan数据库预测miR 145的靶基因并采用荧光素酶报告实验进行验证。结果与SV HUC 1细胞组相比,BIU 87细胞对照组miR 145表达水平明显降低(P<005),KLF5、PI3K表达水平和AKT磷酸化水平显著升高(P<005);与对照组、miR 145阴性对照组相比,miR 145 mimic组BIU 87细胞活性、侵袭能力、迁移能力明显降低(P<005),miR 145、E cadherin表达水平显著升高(P<005),KLF5、PI3K、PCNA、MMP 9、MMP 2表达水平和AKT磷酸化水平明显降低(P<005)。TargetScan数据库预测显示KLF5是miR 145靶基因,双荧光素酶实验证实KLF5是miR 145作用靶点。结论miR 145靶向下调KLF5表达水平,阻断PI3K／AKT通路激活从而抑制膀胱癌BIU 87细胞增殖、侵袭、迁移。     

过表达miR-205对顺铂诱导的肾上腺皮质癌细胞株SW-13凋亡的影响及其机制

目的 研究过表达miR-205对顺铂（cisplantin,CDDP）诱导的肾上腺皮质癌细胞株SW-13凋 亡的影响及其机制。方法 设转染pcDNA3.1( + )-miR-205的SW-13细胞和转染 pcDNA3.1( + )的SW-13 细胞分别为实验组和对照组。在不同浓度顺铂作用下,采用CCK-8法比较两组细胞对CDDP敏感度; H33342及AnnexinV-FITC/PI荧光观察细胞凋亡,AnnexinV-PE/7AAD荧光流式细胞术检测细胞凋亡 率;用Western blot检测目的蛋白的表达水平;qPCR检测相关基因mRNA水平的变化。结果 不同浓度 顺铂作用下,实验组细胞生长抑制率、凋亡率明显高于对照组（P＜0.01,P＜0.05）;在0、20、30 μg/ml浓度的CDDP处理后,实验组促凋亡蛋白Bax、Caspase-9以及E2F1和VEGF-A mRNA水平较对照 组升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达则降低。结论 上调SW-13细胞miR-205可降低E2F1、VEGF-A的表 达水平,促进顺铂诱导细胞的凋亡,增强肾上腺皮质癌细胞对顺铂的敏感度。     

miR-490-3p逆转MCF-7／ADM细胞对阿霉素耐药性的影响

【摘 要】目的 探讨miR-490-3p在阿霉素（ADM）耐药乳腺癌细胞系MCF-7／ADM中的表达情况及其对MCF-7／ADM细胞增殖、凋亡和ADM耐药的影响。方法 以野生型人乳腺癌细胞系MCF-7及其耐药型细胞系MCF-7／ADM为研究对象,用实时荧光定量PCR（qPCR）比较两种细胞中miR-490-3p的表达水平,将miR-490-3p的过表达载体pcDNA1（+）miR-490-3p瞬时转染至MCF-7／ADM细胞（过表达组）后采用qPCR检测转染效果,同时设pcDNA3.1（-）空载体对照组和空白对照组;采用MTT法测定转染pcDNA3.1（+）miR-490-3p对各组MCF-7/ADM细胞增殖能力的影响,测定ADM对MCF-7／ADM细胞的增殖抑制率并计算半数抑制浓度（IC50）及逆转倍数以评价对ADM敏感性的变化;分别于瞬时转染48 h后用Annexin V／FITC流式细胞术检测各组MCF-7/ADM细胞的凋亡率,Western blotting检测耐药蛋白P-糖蛋白（P-gp）,乳腺癌耐药蛋白（BCRP）和多药耐药相关蛋白1（MRP1）的表达,荧光分光光度计检测胞内ADM药物浓度,流式细胞仪检测P-gp活性。结果 MCF-7／ADM细胞中miR-490-3p的表达水平为0.24±0.07,显著低于野生型MCF-7细胞的1.02±0.03（P＜0.05）;过表达组瞬时转染24～96 h的miR-490-3p水平持续升高,均高于空载体对照组和空白对照组（P＜0.05）;过表达组的增殖抑制率随转染时间的延长而增加,转染24、48、72和96 h的增殖抑制率依次为（17.52±1.87）％、（31.67±2.79）％、（45.09±1.88）％和（61.82±2.52）％,高于空载体对照组（P＜0.05）;ADM对过表达组的IC50值为（11.27±2.34）μg／ml,低于空白对照组的和空载体对照组（P＜0.05）,且过表达组相对于空白对照组和空载体对照组的逆转倍数分别为3.35倍和3.39倍;与其余两组相比,过表达组的MCF-7/ADM细胞早、晚期凋亡率和细胞内药物浓度均升高,P-gp、BCRP和MRP1表达及P-gp活性均降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 上调miR-490-3p可逆转MCF-7／ADM细胞对ADM的耐药性,可能通过降低耐药蛋白表达及抑制P-gp活性有关,且升高其水平可抑制细胞增殖并诱导凋亡。     

伊立替康联合顺铂对比伊立替康单药二线治疗晚期胃癌的临床研究

目的 探讨伊立替康（CPT-11）联合顺铂（DDP）方案与CPT-11单药治疗晚期胃癌的疗效、远期生存和毒副反应。方法 收集2012年6月至2014年1月复治晚期胃腺癌患者168例,随机分为CPT-11+DDP组（n=84）和CPT-11组（n=84）。CPT-11联合DDP方案：CPT-11 250 mg/m2静滴,d1;DDP 70 mg/m2静滴,d1,21天为1周期。CPT-11方案：CPT-11 250 mg/m2 d1静滴,21天为1周期。化疗2个周期后进行近期疗效评价,并比较两组的远期生存和不良反应。结果168例均可评价疗效。CPT-11+DDP组获CR 3例、PR 11例、SD 44例,有效率（RR）为167%,疾病控制率（DCR）为890%。CPT-11组获CR 1例、PR 12例、SD 41例,RR 为155%,DCR 为643%。两组RR和DCR的差异均无统计学意义（P=0834,P=0513）。CPT-11+DDP组和CPT-11组的无进展生存期分别为46个月和41个月（P=0522）,中位总生存期分别为138个月和125个月（P=0185）。亚组分析显示,在肠型腺癌中CPT-11+DDP组的中位总生存期优于CPT-11组（156个月vs. 136个月,P=0.016）。CPT-11+DDP组3～4级贫血、肝功能损害以及1～4级肾功能损害的发生率高于CPT-11组,而CPT-11组1～4级便秘和口腔黏膜炎的发生率均高于CPT-11+DDP组,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 CPT-11联合DDP方案较单药CPT-11方案二线治疗晚期胃癌并未带来生存获益,但对于晚期肠型胃癌具有优势,且安全性良好,值得进一步深入观察。     

miRNA-139-5p通过靶向调控CXCR4/CXCL12信号通路逆转非小细胞肺癌A549细胞顺铂耐药

目的:探讨miRNA-139-5p对非小细胞肺癌A549细胞顺铂（cisplatin,DDP）耐药的影响,及其可能的分子机制。方法:采用DDP浓度递增法诱导A549细胞建立DDP耐药细胞株A549/DDP,将miR-139-5p mimics、无义序列（mimics-NC）、CXCR4过表达质粒（pcDNA3.1-CXCR4）、pcDNA3.1空载质粒（Vector）转染至A549/DDP细胞中,将细胞分为mimics-NC组（转染无义序列）、mimics组（转染miR-139-5p mimics）、mimics+Vector组（共转染miR-139-5p mimics和空载质粒）和mimics+CXCR4组（共转染miR-139-5p mimics和CXCR4过表达质粒）,另设置空白对照组（blank）。不同浓度DDP处理,MTT法检测细胞增殖活性,并计算IC50值和耐药指数（resistance index,RI）;qRT-PCR法检测细胞中miR-139-5p和CXCR4 mRNA表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中耐药相关蛋白P-糖蛋白（P-gp）、多药耐药相关蛋白1（MRP1）及CXCR4/CXCL12信号通路相关蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-5p与CXCR4的靶向关系。结果:不同浓度DDP处理24 h后,耐药株A549/DDP及其亲本A549细胞IC50值分别为（208.87±27.89）μmol/L和（31.66±6.30）μmol/L,RI=6.59。与亲本A549细胞比较,耐药株A549/DDP中miR-139-5p的表达水平明显降低（P＜0.05）,而CXCR4 mRNA和蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）。与mimics-NC组比较,mimics组A549/DDP细胞增殖活性明显降低（P＜0.05）,细胞凋亡率明显升高（P＜0.05）,细胞中CXCR4 mRNA和蛋白以及P-gp、MRP1、PI3K（p110α）和p-AKT/AKT等蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。与mimics+Vector组比较,mimics+CXCR4组A549/DDP细胞增殖活性显著升高（P＜0.05）,细胞凋亡率显著降低（P＜0.05）,而细胞中CXCR4、P-gp、MRP1、PI3K（p110α）和p-AKT等蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-139-5p靶向负调控CXCR4表达。结论:miRNA-139-5p通过靶向下调CXCR4表达,提高非小细胞肺癌DDP耐药细胞株A549/DDP对DDP的药物敏感性。     

微小RNA 375通过靶向PAX6对宫颈癌HeLa细胞顺铂敏感性的影响#br# #br#

目的探讨微小RNA 375（miR 375）和人类配对盒基因6（PAX6）在宫颈癌顺铂耐药株HeLa cisR中的表达及耐药逆转作用并初步探讨可能机制。 方法采用实时定量PCR（QPCR）检测28例正常宫颈组织、30例宫颈癌组织（14例顺铂敏感和16例顺铂不敏感）和不同顺铂敏感性细胞HeLa、HeLa cisR中miR 375、PAX6 mRNA水平,采用脂质体法向HeLa和HeLa cisR细胞转染含miR 375模拟物（mimics）的寡核苷酸探针（过表达组）和阴性对照NC（阴性对照组）,以不行任何转染的为空白对照组。采用QPCR检测转染后HeLa和 HeLa cisR细胞中miR 375和PAX6 mRNA水平,采用MTT法检测不同浓度顺铂（1、3、10、30、100 μmol／L）处理后的增殖情况并计算半数抑制浓度（IC50）以评价顺铂敏感性,Western blotting检测PAX6蛋白水平,双荧光素酶报告基因试验评价miR 375对PAX6的靶向调控作用。 结果宫颈癌组织中的miR 375水平低于正常宫颈组织（0714±0341 vs. 1006±0299）,PAX6 mRNA水平高于正常宫颈组织（1855±0928 vs. 1011±0257）,miR 375水平与PAX6 mRNA水平呈负相关（r=-0416, P＜005）。与化疗敏感组相比,化疗不敏感组的miR 375水平降低,而PAX6 mRNA水平升高（P＜005）。HeLa cisR细胞的miR 375水平低于HeLa细胞（0365±0098 vs. 1032±0135）,而PAX6 mRNA水平高于HeLa 细胞（3154±0957 vs. 1067±0168）,差异均有统计学意义（P＜005）。与其余两组相比,过表达组转染后的miR 375水平升高,PAX6蛋白和mRNA水平均降低,差异有统计学意义（P＜005）。miR 375过表达可降低顺铂IC50（P＜005）,先转染 miR 375 mimics 24 h后再转染过表达PAX6的pCMV PAX6质粒后细胞的IC50与未转染细胞的差异无统计学意义（P＞005）。 结论miR 375通过靶向PAX6参与了宫颈癌细胞的顺铂耐药,miR 375有望成为逆转宫颈癌顺铂耐药的靶点。     

活性氧在顺铂诱导食管癌细胞EC-109凋亡中的作用

背景与目的:活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)是体内氧化代谢产物,是重要的信号分子,在细胞凋亡过程中担当着重要角色。本研究旨在探讨活性氧在顺铂(cisplatin,DDP)诱导食管癌细胞EC-109凋亡过程中的作用及其可能机制。方法:不同浓度DDP(0、1、5、10、15μg/ml)处理EC-109细胞,应用MTT法检测DDP对EC-109细胞增殖的影响;流式细胞仪检测活性氧、线粒体膜电位(Δψm)和细胞亚二倍体凋亡峰变化情况;并观察加入抗氧化剂-过氧化氢酶(CAT)后细胞凋亡的变化。结果:DDP可明显抑制EC-109细胞增殖;0、1、5、10、15μg/ml的DDP作用于EC-109细胞2h后,细胞内活性氧分别为(3.3±1.0)%、(21.6±2.0)%、(32.6±3.2)%、(44.7±2.2)%、(53.1±3.6)%,12h后Δψm分别为(97.2±1.9)%、(90.6±1.9)%、(85.5±1.4)%、(67.8±2.0)%、(62.4±3.0)%,24h后可见细胞凋亡率分别为(3.4±1.2)%、(16.2±2.3)%、(28.1±1.5)%、(33.2±3.9)%、(45.5±3.8)%;CAT能明显抑制DDP诱导的EC-109细胞凋亡。结论:DDP能够通过刺激EC-109细胞内活性氧的产生、损伤线粒体,使其膜电位下降,引起EC-109细胞凋亡。     

Panx1调控ATP/IP3通路促进顺铂诱导A549细胞的凋亡

目的 观察顺铂诱导肺腺癌细胞凋亡过程中Panx1对ATP/IP3信号通路的调控及作用机制。方法 以人肺腺癌A549细胞为研究对象,以甘珀酸（CBX）为药物干扰工具。将人肺腺癌A549细胞分为：空白组（Control组）、甘珀酸组（CBX组）、顺铂组（DDP组）、甘珀酸+顺铂组（CBX+DDP组）。MTT法和Annexin V/PI法分别检测A549细胞存活率和凋亡率的变化。化学发光法和ELISA法分别检测细胞外三磷酸腺苷（ATP）和细胞内三磷酸肌醇（IP3）的相对浓度。结果 与单用DDP组相比,CBX+DDP组的细胞存活率增加（P<0.01）、细胞早期凋亡率和晚期凋亡率下降（P<0.01）、细胞外ATP、细胞内IP3的释放浓度降低（P<0.01）。结论 Panx1可通过调控ATP/IP3信号通路增加肺腺癌细胞对顺铂的敏感度。     

Mitochondrial defects in cis-diamminedichloroplatinum(II)-resistant human ovarian carcinoma cells.

We have been studying the membranes of cisplatin (DDP)-resistant 2008 human ovarian carcinoma cells (C13* cells) for alterations that may account for their decreased DDP accumulation. We now report that C13* cells have significant changes in their mitochondrial and plasma membrane potentials and in their mitochondrial morphology. C13* cells accumulated 2.0 +/- 0.1-fold more of the membrane potential marker [3H]tetraphenylphosphonium cation (TPP+) than sensitive cells. In high K+ medium, which depolarizes the plasma membrane but not the mitochondrial membrane, [3H]TPP+ accumulation was still 2.3 +/- 0.1- fold greater in resistant cells, indicating that the mitochondrial membrane potential was higher. In the presence of carbonyl cyanide p-trifluoromethoxyphenyl hydrazone, which depolarizes the mitochondrial membrane but not the plasma membrane, [3H]TPP+ accumulation demonstrated that the plasma membrane potential in C13* cells was elevated as well. These elevations were also present in C8 cells with low-level DDP resistance. After ouabain treatment, exposure to nigericin stimulated [3H]TPP+ accumulation 3-fold in sensitive cells but had no effect in C13* cells, indicating either that: (a) the mitochondrial pH gradient was minimal; or (b) the mitochondrial electric potential was already at a maximal level in C13* cells. Fluorescence microscopy of living cells stained with the mitochondria-specific dye rhodamine 123 revealed that resistant cells had significant changes in their mitochondrial morphology. Electron microscopy also revealed major alterations in the cristae structure. The C13* cells, which were approximately 15-fold resistant to DDP, were 5-fold hypersensitive to the mitochondrial poison rhodamine 123. We conclude that these DDP-resistant 2008 cells have an elevated plasma membrane potential and alterations in their mitochondria as indicated by their membrane potential, morphology, and sensitivity to mitochondrial poisons. These results imply that mitochondria play an important role in the cellular pharmacology of DDP.