胰岛素受体底物在宫内发育迟缓大鼠肝脏组织中的表达

目的 研究胰岛素受体底物1( IRS-1)和胰岛素受体底物2(IRS-2)在宫内发育迟缓(IUGR)大鼠出生0周、3周和8周时肝脏组织中的表达,探讨IUGR个体易患代谢综合征(MS)的分子机制.方法 采用母孕期低蛋白饮食法建立IUGR大鼠模型,应用反转录( RT)-PCR技术检测仔鼠在出生0周、3周、8周肝脏组织中IRS-1、IRS-2 mRNA水平,凝胶电泳条带用成像系统照相定量分析结果,分别计算PCR产物条带与β-actin条带吸光度值的比值,作为目的基因相对表达量.采用Western blot杂交检测仔鼠在出生0周、3周、8周肝脏组织IRS-1蛋白、IRS-2蛋白的水平表达.母孕期得到正常饮食的仔鼠作为对照组.结果 IUGR鼠出生时体质量显著低于对照组,出生后出现生长追赶,至8周时IUGR组体质量超过对照组;IUGR组0周、3周、8周时其肝脏组织IRS-2 mRNA和蛋白表达水平均显著低于对照组(Pa＜0.05,0.01),肝脏组织IRS-1 mRNA和蛋白表达水平与对照组比较差异无统计学意义(Pa＞0.05).结论 IUGR大鼠0周、3周和8周肝脏组织中IRS-2 mRNA和蛋白水平显著下降,可能是IUGR个体易患MS的分子机制之一.     

宫内发育迟缓儿的免疫状态研究

宫内发育迟缓是围生期常见的并发症,对胎儿危害很大.近年来的研究发现免疫学机制在宫内发育迟缓的发病中占有重要地位.免疫机制的异常可能通过发育程序化途径影响胎儿宫内以及宫外的免疫机能.     

L-精氨酸对宫内发育迟缓大鼠肾脏Pax2表达的影响

目的：研究L-精氨酸（L-Arg）对宫内发育迟缓(IUGR)大鼠肾脏 Pax2表达的影响。方法：孕鼠随机分为 3 组：正常对照组、IUGR 组和干预组。正常对照组母鼠全程以普通饲料（含 21％ 蛋白）喂养。IUGR 组和干预组大鼠孕期均采用低蛋白饲料（含 10% 蛋白）喂养。仔鼠出生后,IUGR 组母鼠常规饲料喂养;干预组母鼠在常规饲料喂养的基础上,于部分饮水中每日添加 L-Arg 200 mg/kg。取 7 d、21 d、2月和 3月龄仔鼠肾脏组织,用免疫组化和 Western blot 法检测 Pax2 表达。结果：免疫组化显示正常对照组仔鼠在各时间点均未见明显 Pax2 表达。IUGR 组、干预组仔鼠2月龄和 3月龄时,两组大鼠在肾小球和肾小管区可见 Pax2 阳性细胞,且 3月龄鼠的 Pax2 表达比 2月龄的更显著（P<0.05）;干预组的 Pax2 表达低于同龄IUGR组（P<0.05）。Western blot 检测发现,3 组仔鼠肾脏在 7 d 和 21 d 均未见 Pax2 蛋白明显表达。到 2月龄和 3月龄时,干预组和 IUGR 组仔鼠肾组织 Pax2 蛋白表达均较正常对照组显著增多,但干预组的表达低于 IUGR 组（P＜0.01）。结论：IUGR 大鼠成年后肾脏 Pax2 基因有再表达现象;用L-Arg 干预后Pax2 表达明显减少。     

胰岛素受体底物在宫内发育迟缓大鼠胰腺组织中的表达

目的：研究胰岛素受体底物1（IRS-1）和胰岛素受体底物2(IRS-2)在宫内发育迟缓（IUGR）大鼠生后0周、3周和8周胰腺组织中的表达,探讨IUGR个体易患代谢综合征的分子机制。方法：采用母孕期低蛋白饮食法建立IUGR大鼠模型,应用RT-PCR技术检测子鼠在生后0周、3周、8周胰腺组织中IRS-1和IRS-2 mRNA水平。采用Western 杂交检测 IRS-1和IRS-2蛋白的表达。母孕期得到正常饮食的子鼠作为对照组。结果：IUGR 组0周、3周、8周胰腺组织IRS-2 mRNA和蛋白表达水平均显著低于对照组(P<0.05）,IRS-1 mRNA 和蛋白表达水平与对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：IUGR子鼠生后0周、3周和8周胰腺组织中IRS-2 mRNA和蛋白水平显著下降,可能是 IUGR 个体易患代谢综合征的分子机制之一。［中国当代儿科杂志,2010,12(12)：972-975］     

宫内发育迟缓大鼠胰腺肝脏骨骼肌中胰岛素受体底物的表达

目的 分析宫内发育迟缓(IUGR)大鼠胰腺、肝脏、骨骼肌中胰岛素受体底物1（IRS-1）和2(IRS-2) mRNA和蛋白水平的表达,探讨IUGR个体发生胰岛素抵抗的机制。方法 采用母孕期低蛋白饮食法建立IUGR大鼠模型,以模型鼠产下的仔鼠为IUGR组;以孕期予正常饮食母鼠产下的仔鼠为对照组。应用RT-PCR法检测各组仔鼠在出生后0、3和8周时点胰腺、肝脏和骨骼肌中IRS-1、IRS-2 mRNA表达水平,采用Western blot检测 IRS-1和IRS-2蛋白表达水平。检测3和8周时点仔鼠空腹血糖和血清胰岛素水平,计算胰岛素抵抗指数。结果 ①IUGR组出生后0和3周体重显著低于对照组;8周时点IUGR组体重显著高于对照组。②IUGR组出生后0、3和8周时点胰腺、肝脏IRS-2 mRNA和蛋白表达水平低于对照组;IRS-1 mRNA和蛋白表达水平与对照组差异无统计学意义;骨骼肌IRS-1 mRNA和蛋白表达水平均显著低于对照组;IRS-2蛋白表达水平与对照组差异无统计学意义。③至8周时点,骨骼肌IRS-1 mRNA和蛋白表达水平的下降幅度较胰腺和肝脏组织更为明显;肝脏IRS-2 mRNA和蛋白表达水平的下降幅度较胰腺和骨骼肌组织更为明显。④至8周时点,IUGR组空腹血糖水平与对照组差异无统计学意义,胰岛素水平和空腹胰岛素抵抗指数较对照组显著升高。结论 IUGR大鼠胰腺、肝脏和骨骼肌组织均存在IRS-1或IRS-2 mRNA和蛋白表达水平的下降,可能是发生胰岛素抵抗的机制之一。     

宫内发育迟缓对大鼠脑内NGF及TrkA表达影响的研究

目的：观察神经生长因子（NGF）及酪氨酸激酶受体A（TrkA）在宫内发育迟缓(IUGR)大鼠脑不同发育阶段的变化,探讨IUGR大鼠脑发育迟缓的机制。方法：32只孕鼠随机分成 IUGR 组和正常对照组。采用孕期全程低蛋白饮食的方法建立IUGR大鼠模型。各组仔鼠于生后 0 d、7 d、14 d、21 d断头取脑,免疫组织化学及 Western blot 方法检测脑中 NGF 和 TrkA 蛋白的表达情况。结果：免疫组化及Western blot结果均显示低蛋白饮食组0 d、7 d、14 d、21 d仔鼠脑内 NGF 及 TrkA 蛋白的表达均较正常组显著降低,差异有统计学意义（P<0.01）。结论：脑内NGF 及TrkA蛋白表达的降低可能是IUGR大鼠脑发育迟缓发生的机制之一。     

大麻素受体1及神经黏附分子L1在宫内发育迟缓大鼠脑组织的表达

目的 通过孕期低蛋白饮食的方法建立宫内发育迟缓(IUGR)动物模型,观察大麻素受体1(CB1)及神经黏附分子L1(NCAM-L1)在IUGR及正常大鼠脑不同发育阶段的表达,探讨IUGR大鼠脑发育迟缓的发生机制.方法 将32只孕鼠随机分成正常饮食组和低蛋白饮食组(每组16只),采用孕期全程低蛋白饮食方法建立IUGR大鼠模型.所有新生鼠按出生体质量分为IUGR组及正常对照组.随机于出生0、7、14、21d断头取脑,称取脑质量,免疫组织化学方法检测2组新生鼠脑组织中CB1及NCAM-L1的表达情况.采用Image-Pro Plus 5.1图像处理软件进行半定量分析,计算CB1及NCAM-L1阳性细胞的累积吸光度.结果 新生鼠脑内CB1及NCAM-L1的表达区域基本相同,二者表达量的变化与脑质量变化一致;与正常对照组比较IUGR组幼鼠0d、7d、14 d、21 d脑组织CB1的表达显著降低,NCAM-L1表达显著升高,差异均有统计学意义(P均＜0.05),且2组CB1表达与NCAM-L1表达均呈负相关(P=0.032,0.010).结论 CB1及NCAM-L1参与大鼠脑发育过程;CB1对大鼠脑发育的影响可能通过NCAM-L1实现.     

PTEN基因在宫内发育迟缓大鼠肝脏胰岛素敏感性变化中的作用

目的 通过检测PTEN基因在宫内发育迟缓(IUGR)大鼠肝脏中的表达,探讨PTEN基因在IUGR致胰岛素抵抗(IR)中的意义.方法 通过孕期低蛋白饮食法建立大鼠IUGR模型,检测90d雄性IUGR大鼠胰岛素敏感性,采用反转录(RT)-PCR技术检测90 d IUGR组及对照组仔鼠肝脏PTEN基因mRNA表达水平,Western blot检测肝脏组织中丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)蛋白及磷酸化AKT蛋白表达水平.采用SPSS 13.0软件进行统计学处理.结果 与对照组比较,IUGR雄性仔鼠平均出生体质量显著降低(t=14.73,P＜0.05),空腹血糖显著升高(t=-3.11,P=0.011),空腹胰岛素显著升高(t=-5.01,P=0.001),胰岛素抵抗指数显著升高(t=-3.06,P=0.013),胰岛素敏感指数显著降低(t=2.80,P=0.019),PTEN基因mRNA表达显著升高(t=-2.40,P =0.04),AKT蛋白表达虽然无统计学差异,但磷酸化AKT蛋白表达显著下降(t=3.02,P=0.01),PTEN与胰岛素抵抗指数呈正相关(r=0.928,P ＜0.05),与磷酸化AKT的表达呈负相关(r=-0.411,P＜0.05).结论 PTEN可能是IUGR致IR的重要调节分子之一.     

宫内发育迟缓发生胰岛素抵抗的机制

"慢性疾病胎儿起源学说"假说、"节俭表型假说"、"营养程序化"、"代谢程序化" 概念指出了早期营养与远期健康的关系问题,流行病学调查也已证实宫内发育迟缓与胰岛素抵抗密切相关,但宫内发育迟缓发生胰岛素抵抗的具体机制目前尚未明确.遗传信息的调控可能会不同程度改变胎儿组织器官的结构和功能,在基因水平上,胰十二指肠同源盒基因、Munc13-1、过氧化物酶体增殖物激活受体基因、胰岛素受体底物基因、线粒体DNA、ghrelin mRNA等的表达情况都对宫内发育迟缓发生胰岛素抵抗有影响.     

宫内生长受限大鼠肝脏组蛋白H3乙酰化的研究

目的：研究孕期营养不良造成的宫内生长受限(intrauterine growth retardation,IUGR)大鼠肝脏中组蛋白H3的乙酰化水平,以及组蛋白去乙酰化酶1 (histonedeacetyl-ases,HDAC1)的表达变化,探讨两者之间的相互联系。方法：采用孕期全程低蛋白饮食法建立大鼠IUGR模型,分离成年雄性子鼠（8周）的肝脏,采用荧光定量RT-PCR技术检测肝脏中HDAC1的mRNA表达,Western blot方法检测肝细胞核中HDAC1的蛋白含量,以及组蛋白H3/K9的乙酰化水平。结果：IUGR组HDAC1的mRNA水平仅是对照组的54%（t=2.042,P＜0.05）,肝细胞核中的HDAC1蛋白表达同样明显低于对照组(438±47 vs 1 128±110)（t=2.179,P＜0.05）。与之相反,与对照组（10.5±1.2）%相比,IUGR大鼠肝脏中乙酰化的H3/K9占总H3组蛋白的百分比（17.3±1.6）%明显增高（t=3.597,P＜0.01）,且核中的HDAC1蛋白水平与H3/K9乙酰化水平明显负相关（r=-0.781,P＜0.01）。结论：IUGR大鼠肝细胞核中HDAC1蛋白表达降低,引起组蛋白H3的乙酰化水平增高,染色质的表观遗传学变化可能是肝脏某些基因转录调控变化的分子基础。［中国当代儿科杂志,2009,11（9）：753-756］     

宫内生长受限大鼠胃黏膜nesfatin-1/NUCB2和ghrelin的表达及其意义

目的 探讨nesfantin-1、ghrelin 在宫内生长受限（IUGR）大鼠胃黏膜的表达及其意义。方法 采用母鼠妊娠期低蛋白饮食法,使其自然分娩建立IUGR 新生大鼠模型。根据有无追赶生长分为追赶生长组（RC 组）、无追赶生长组（RR 组）、对照组（CC 组）。应用实时荧光定量PCR 技术及Western blot 法测定不同日龄（12 d、21 d、28 d）及追赶生长情况的SD 大鼠胃黏膜的nesfantin-1/NUCB2、ghrelin mRNA 及蛋白的表达。结果 大鼠出生后胃黏膜即有nesfatin-1/NUCB2 mRNA 及蛋白的表达。随日龄增长,3 组仔鼠胃nesfatin-1/NUCB2 mRNA 及蛋白的表达均明显升高,断奶前（12 d、21 d）,RC 组均高于CC 组（均P<0.05）,而断奶后（28 d）RC 组与CC 组无差异;RR 组始终低于RC 组（均P<0.05）。生后12 d 开始RC 组ghrelin mRNA 及蛋白高于CC 组,断奶后两组无差异;RR 组于生后12 d 开始始终低于RC 组及CC 组。结论 Nesfatin-1 与ghrelin 共同表达于IUGR大鼠胃黏膜,参与长期的营养调控。     

广西三江县侗族新生儿UGT1A1基因变异分析北大核心CSCD

目的探讨广西柳州三江县侗族新生儿UGT1A1基因变异特点及其与侗族新生儿高胆红素血症发生的关系。方法前瞻性选取2021年1月至2022年1月于三江县人民医院新生儿科诊断不明原因高胆红素血症的新生儿84例为研究对象;另选取同期健康新生儿60例纳入健康对照组。提取两组新生儿外周血基因组DNA,对UGT1A1启动子区TATA盒和外显子1进行PCR扩增并进行基因测序。结果病例组检测出33例G71R错义突变,突变率为39%,A等位基因频率(21%)显著高于健康对照组(10%)(P<0.05)。携带G71R错义突变基因型的侗族新生儿发生高胆红素血症的风险是携带野生型的健康新生儿的2.588倍(P<0.05)。Hardy-Weinberg遗传平衡检验结果提示两组新生儿UGT1A1 G71R位点基因型符合遗传平衡(P>0.05)。结论UGT1A1 G71R突变是三江县侗族新生儿高频基因变异类型,且G71R错义突变与侗族新生儿发生高胆红素血症相关。     

生长追赶宫内发育迟缓大鼠早期糖脂代谢及脂肪细胞功能的改变

目的：探讨生长追赶宫内发育迟缓(IUGR)大鼠早期糖脂代谢及脂肪细胞功能的改变。方法：母孕期饥饿法建立IUGR大鼠模型。禁食组仔鼠作为生长追赶IUGR模型组（IUGR组）,正常喂养仔鼠作为对照组（AGA组）。12周龄时检测血浆甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、低密度脂蛋白-C（LDL-C）、高密度脂蛋白-C（HDL-C）以及脂联素、促酰化刺激蛋白（ASP）的水平。隔日行糖耐量试验（OGTT）,检测血浆葡萄糖和胰岛素水平,计算胰岛素抵抗指数（IRI）。随后仔鼠断头处死,共聚焦显微镜下观察免疫荧光染色的成熟脂肪细胞中葡萄糖转运体-4（GLUT-4)的表达。结果：12周末时IUGR组大鼠体重、BMI显著高于AGA组（均P<0.01）,血TG、TC、LDL-C水平显著高于AGA组,HDL-C水平明显低于AGA组（P<0.05）。OGTT中IUGR组注射葡萄糖后各时间点血糖水平均高于AGA组（P<0.05）,IRI值亦显著增高（P<0.05）。与AGA组比较,IUGR组ASP水平明显升高(P<0.05）,而脂联素水平显著降低（P<0.05）。IUGR大鼠成熟脂肪组织中GLUT-4在基础状态和不同浓度胰岛素刺激下的表达水平与AGA组相比均明显降低（P<0.05）。结论：IUGR大鼠生后发生明显的生长追赶,12周时即存在高血脂、高血糖及胰岛素抵抗。脂肪细胞分泌功能的异常和脂肪组织GLUT-4表达水平的降低可能参与了生长追赶IUGR大鼠胰岛素抵抗的形成。     

L-精氨酸对宫内发育迟缓胎鼠胰岛素样生长因子及其结合蛋白表达的影响

目的：宫内发育迟缓(IUGR)儿常有脑发育的异常,L精氨酸具有舒张血管、增加胎盘血流的作用,可用于改善胎盘缺氧状态,促进胎儿生长发育。用被动吸烟法制作孕鼠IUGR模型,孕8～20d给予不同剂量L精氨酸,了解其对宫内发育迟缓胎鼠脑内胰岛素样生长因子及其结合蛋白表达的影响,并探讨L精氨酸的作用机制。方法：孕鼠随机分为4组:对照组、模型组、L精氨酸小剂量和大剂量防治组,每组9只。孕21d剖宫取胎,应用酶联免疫吸附法检测各组胎鼠脑组织胰岛素样生长因子Ⅰ(IGFⅠ)、胰岛素样生长因子Ⅱ(IGFⅡ)、胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP3)含量,应用荧光定量RTPCR法检测各组胎鼠脑组织IGFⅠmRNA表达。结果：与对照组相比较,模型组胎鼠脑组织中IGFⅠ(0.789±0.062ng/mgvs0.947±0.042ng/mg)、IGFⅡ(0.270±0.020ng/mgvs0.374±0.015ng/mg)含量均比对照组明显降低,IGFBP3(0.253±0.011ng/mgvs0.089±0.015ng/mg)含量比对照组明显升高,IGFⅠmRNA表达量(13.12±1.39)×104cps/μgRNAvs(21.28±3.54)×104cps/μgRNA比对照组明显降低,差异均有显著性(P<0.01)。与模型组相比较,小剂量和大剂量L精氨酸防治组IGFⅠ含量明显增高,分别为0.937±0.067ng/mg和0.858±0.077ng/mg,IGFⅡ含量明显增高,分别为0.318±0.018ng/mg和0.354±0.021ng/mg,IGFBP3含量明显降低,分别为0.132±0.006ng/mg和0.146±0.009ng/mg差异有显著性(P<0.01或<0.05)。同时小剂量和大剂量L精氨酸防治组IGFⅠmRNA表达量也明显增高,分别为(19.24±2.48)×104cps/μgRNA和(17.35±2.30)×104cps/μgRNAvs(13.12±1.39)×104cps/μgRNA,差异均有显著性(P<0.01)。结论：L精氨酸可增加被动吸烟致宫内发育迟缓胎鼠脑内IGFⅠ、IGFⅡ含量和IGFⅠmRNA的表达,降低IGFBP3含量。L精氨酸防治IUGR的机制与其对胰岛素样生长因子及其结合蛋白表达的影响有关。     

儿童碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌感染的临床特征及分子流行研究北大核心CSCD

目的探讨儿童碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(carbapenem-resistant Enterobacterales,CRE)感染的临床特征与分离株的分子特征。方法回顾性分析广东省人民医院2018年1月至2021年6月住院患儿的相关临床资料及感染情况,共获得非重复肠杆菌目细菌菌株1098株。对所分离的66株CRE菌株进行药敏试验、PCR扩增和耐药相关基因测序,以研究分子流行情况。结果1098株肠杆菌目细菌中,CRE检出率为6.01%(66/1098)。66株CRE来自66例患儿,其中男37例(56%),女29例(44%);年龄2 d至14岁,其中<1月龄16例(24%),1月龄~28例(42%),12月龄~11例(17%),>36月龄11例(17%)。被检出CRE的患儿主要分布于新生儿科(38例,58%)、儿科重症监护室(17例,26%)等科室;呼吸道标本(48%)、中段尿标本(21%)、血液标本(17%)位于标本检出前3位。CRE菌株以肺炎克雷伯菌(45株,68%)、大肠埃希菌(12株,18%)、阴沟肠杆菌(6株,9%)为主,对亚胺培南和厄他培南等碳青霉烯类及青霉素头孢类高度耐药,对常见抗菌药物耐药性均普遍偏高,仅对阿米卡星(14%)、左旋氧氟沙星(23%)、妥布霉素(33%)等耐药率相对较低。肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶基因型以bla_(NDM)(20株,44%)、bla_(IMP)(10株,22%)及bla_(KPC)(5株,11%)为主;大肠埃希菌碳青霉烯酶基因型以bla_(NDM)为主(10株,83%);经测序,bla_(NDM-1)24株,bla_(NDM-5)6株,bla_(IMP-4)5株,bla_(KPC-2)3株,部分基因型尚未明确。结论儿童CRE感染发生率高,且集中于1~12月龄婴儿;CRE对抗菌药物的耐药性普遍偏高,儿童感染CRE菌株的碳青霉烯酶以金属酶为主。[中国当代儿科杂志,2022,24(8):881-886]